enfermedad de Crohn 22_nov_2016_CVB_EII

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Diagnóstico de laboratorio en 
Enfermedad Inflamatoria Intestinal
XIV Jornada de la Sociedad Médica de Laboratorio Clínico
22 de noviembre 2016
BQ. Carolina Valenzuela B
cvalenzu@ispch.cl
Jefe Sección Inmunología
Laboratorio Nacional y de Referencia Inmunología
Subdepto. Enfermedades No Transmisibles
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Enfermedad inflamatoria intestinal
• Es una alteración inflamatoria, 
recurrente y crónica del tracto 
digestivo
• Principales formas de EII son la CU y 
la EC 
• La CU y EC varían en la zona que 
afectan, la extensión de la 
inflamación, la lesión tisular 
resultante y los síntomas asociados
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Inflamación superficial 
continua y se limita al colon 
(intestino grueso)
Inflamación transmural (todas las 
capas del tejido intestinal), 
irregular (entremezcla con áreas 
de tejido sano) y se puede 
presentar en cualquier parte del 
tracto digestivo (desde la boca 
hasta el ano)
CU EC
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CUEC
Diarrea
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EII: Colitis ulcerosa y Enfermedad de Crohn
• Alternan brotes con períodos de remisión, 
lo que implica una sintomatología 
intermitente a lo largo del tiempo. Retraso 
en el diagnóstico
• Son de limitada eficacia terapéutica (control 
de la inflamación y efectos de brotes)
• Deterioro en la calidad de vida del paciente
• Asociada a un aumento de riesgo a cáncer 
colorrectal
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Patogénesis EII : multifactorial
Susceptibilidad 
genética del huésped
Factores
ambientales
Alteración de la 
regulación del SI
Disfunción de la barrera
intestinal
EII
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Bacterias penetran la 
barrera epitelial
Montaje de respuesta 
inflamatoria con un deterioro 
en la limpieza (“clearence”)
Quiebre de la homeostasis
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Susceptibilidad genética del huésped
- Genes asociados a EII, comunes e 
individuales a CU y EC. 
- Están asociados a la homeostasis 
intestinal:
-función de barrera intestinal
-restitución epitelial
-defensa microbiana
-regulación de la inmunidad innata
-generación de ROS
-autofagia
-regulación de la inmunidad adaptativa
-vías metabólicas 
- En general el riesgo de las variantes para 
desarrollar EII es pequeño
- EII podría ocurrir cuando múltiples variantes 
genéticas estén presentes
- EII podría ocurrir cuando se presenten 
factores ambientales en individuos 
genéticamente susceptibles
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factores ambientales
- Flora comensal (bacterias, virus, hongos)
- Patógenos
- Antibióticos
- Dieta
- Tabaco
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alteración de la regulación de la RI
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• Diagnóstico diferencial con otras patologías:
infecciones bacterianas, virales, parásitos,
e.celíaca, s.intestino irritable, etc
• Evaluar condición del paciente: estado
nutricional, anemia, alteraciones de la
absorción, etc
Laboratorio en EII 
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Laboratorio en EII 
• Orientación diagnóstica hacia CU ó EC:
anticuerpos que presentan solapamiento; no
son lo suficientemente sensibles y específicos
en una u otra condición
• Evaluar proceso inflamatorio
• Evaluar respuesta al tratamiento
ANCA en suero
ASCA en suero
PCR 
CALPROTECTINA fecal 
LACTOFERRINA fecal
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Anticuerpos dirigidos contra antígenos localizados 
en el citoplasma de los neutrófilos y monocitos
Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos
ANCA clase IgG
Granulos específicos:
-Lisozima
-Lactoferrina
Granulos azurofilos:
-Mieloperoxidasa (MPO)
-Proteinasa 3 (PR-3)
-Proteina bactericida incrementadora 
de la permeabilidad (BPI)
-Elastasa
-Catepsina G
Citoplasma:
-Calprotectina
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• Vasculitis de vasos pequeños (VAA)
• Enfermedades Inflamatorias Intestinales 
(Colitis ulcerosa y Enf. de Crohn)
• Hepatitis autoinmune
• Conectivopatías
ANCA clase IgG
relación con patologías
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ANCA clase IgG
relación con patologías
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C.Ulcerosa: 40 - 80%
E.Crohn : 5 - 42%
Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos 
ANCA clase IgG
Métodos: IFI en neutrófilos humanos (etanol-formalina)
ELISA placa recubierta con proteínas específicas de neutrófilos
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c-ANCA
Resultan del artefacto de la fijación con etanol:
El patron p-anca ocurre solo cuando los neutrofilos son
fijados en etanol, el cual permeabiliza la membrana de
los granulos citoplasmáticos y permite que la
mieloperoxidasa (ag. principal del p-anca; altamente
catiónica) se una a la membrana nuclear la cual tiene
carga negativa por el DNA.
p-ANCA
Reumatol Clin. 2010;6(3):173–177 
ANCA clase IgG
IFI : placa neutrófilos fijados en etanol
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• Cuando los neutrófilos 
son fijados en formalina, 
el patrón p-anca se 
observa como c-anca, ya 
que éste reduce la 
atracción de la 
mieloperoxidasa hacia el 
DNA, con lo que 
permanece en el 
citoplasma.
Reumatol Clin. 2010;6(3):173–177 
ANCA clase IgG
IFI : confirmación de p-ANCA en placa formalina
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Formato “panel ANCA” (detección de IgG anti-…)
1. PROTEINASA 3
2. LACTOFERRINA
3. MIELOPEROXIDASA
4. ELASTASA
5. CATEPSINA G
6. BPI (Proteina bactericida incrementadora de la permeabilidad)
ELISA
especificidades ANCA clase IgG
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• A fines de los años 80 se describe el hallazgo 
de anticuerpos contra S.cerevisiae en el 
suero de pacientes con EC
• El método ELISA, considera Acs. dirigidos 
contra el manano (tipo de carbohidrato 
derivado de la pared celular)
• Aproximadamente 2/3 de los pacientes EC 
con ASCA IgG+, también lo son para ASCA 
IgA
• Sólo hasta un 19% de los pacientes EC son 
ASCA IgA+
Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae
ASCA clase IgG-IgA
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Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae
ASCA clase IgG-IgA
E.Crohn : 29 - 80%
C.Ulcerosa: 0 – 29% 
Método : ELISA placa recubierta con mananos de S.cerevisiae
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• Proteína ubicada en el citoplasma principalmente en neutrófilos, 
con propiedades antimicrobianas, estable, resistente a la 
proteólisis bacteriana
• De secreción extracelular en células estimuladas ó liberada 
cuando hay daño o muerte celular inflamación en el intestino 
• Se detecta en heces
• El nivel de cuantificación se correlaciona directamente con la 
intensidad de la reacción inflamatoria
Calprotectina fecal
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• Almacenamiento muestra
• Mantener la muestra recolectada no más de 5 días a 2-8 ° C
Alternativamente, almacenar a -20 °C
• Extracción muestra (sistema estandarizado)
• Obtención sobrenadante
• Ensayar calprotectina inmediatamente
• Almacenar a 2-8 ° C hasta 5 días ó a -20 ° C hasta 4 meses.
Calprotectina fecal
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• Detección por método ELISA.
• Es inespecífica. Puede estar aumentada en muchas
situaciones: EII, gastroenteritis infecciosa, enterocolitis
necrosante, carcinoma colo-rectal.
• En desordenes funcionales como SII donde no hay daño en
mucosa, pero sí presenta diarrea y dolor abdominal, su nivel
es normal
Calprotectina fecal
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• En pacientes diagnosticados EII, es útil 
para evaluar la respuesta al tratamiento
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GRACIAS !