Biologia de los microorganismos (263)

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164 L O S F U N D A M E N T O S D E L A M I C R O B I O L O G Í A
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D
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id
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d
 ó
p
ti
c
a
(b)
Tiempo (h)
0 5 10 15 20 25 30 35
(c)
Número de células o peso seco
0,1
0,1
0,2
0,2
0,3
0,3
0,4
0,4
0,5
0,6
0,6
0,7
0,8
0,8
Real
Teórico Organismo A
Organismo B
utiliza un prisma o una rejilla de difracción para generar luz 
incidente de una longitud de onda específica (Figura 5.18a). Las 
longitudes de onda utilizadas normalmente para las medicio-
nes turbidimétricas bacterianas incluyen 480 nm (azul), 540 nm 
(verde), 600 nm (naranja) y 660 nm (rojo). La sensibilidad es 
mejor a longitudes de onda más cortas, pero las mediciones 
de suspensiones celulares densas son más precisas a longitu-
des más grandes. La unidad de turbidez es la densidad óptica 
(DO) a la longitud de onda especificada, por ejemplo DO
540
 para 
mediciones a 540 nm (Figura 5.18). El término absorbancia (A), 
por ejemplo A
540
, también se usa habitualmente, pero es impor-
tante saber que lo que mide un espectrofotómetro es la disper-
sión de la luz, y no la absorbancia.
Relación entre densidad óptica y número de células
Para organismos unicelulares, la densidad óptica es proporcio-
nal, dentro de ciertos límites, al número de células. Por tanto, las 
lecturas turbidimétricas se pueden usar como sustituto de los 
métodos de recuento total o recuento de viables. Sin embargo, 
para poder hacer esto hay que preparar una curva de calibra-
ción que relacione el número de células (recuento microscópico 
o recuento de viables), el peso seco o el contenido de proteínas
con la turbidez. En una representación de este tipo, la propor-
cionalidad solo se cumple dentro de unos límites (Figura 5.18c).
Cuando la densidad es muy alta, la luz de la fotocélula del espec-
trofotómetro dispersada por una célula puede ser dispersada de 
vuelta hacia la fotocélula por otra célula, de manera que para
la fotocélula es como si esta luz no se hubiera dispersado en
MINIRREVISIÓN
 ¿Por qué un recuento de viables es más sensible que un 
recuento microscópico? ¿Qué suposición se hace al relacionar 
los resultados del recuento en placa con la cantidad de 
células?
 Describa cómo obtener una dilución 10−7 de un cultivo 
bacteriano.
 ¿En qué consiste la «gran anomalía del recuento en placa»?
5.10 Espectrofotometría
Durante el crecimiento exponencial, todos los componentes 
celulares aumentan en proporción al aumento del número de 
células. Uno de estos componentes es la propia masa celular. 
Las células dispersan la luz, y un método rápido y práctico de 
estimación de la masa celular es la medición de la turbidez. Una 
suspensión de células tiene un aspecto nebuloso (túrbido) a la 
vista porque las células dispersan la luz que pasa a través de la 
suspensión. Cuantas más células hay, más se dispersa la luz y 
más túrbida es la suspensión. Como la masa celular es propor-
cional al número de células, se puede usar la turbidez para esti-
marlo y es una técnica muy utilizada en microbiología.
Densidad óptica
La turbidez se mide con un espectrofotómetro, un instrumento 
que hace pasar la luz a través de una suspensión celular y mide la 
luz no dispersada que emerge (Figura 5.18). Un espectrofotómetro 
Figura 5.18 Mediciones turbidimétricas del crecimiento microbiano. (a) La medición de
la turbidez se lleva a cabo en un espectrofotómetro. La fotocélula mide la luz incidente que no 
ha sido dispersada por las células en suspensión y da lecturas en unidades de densidad óptica. 
(b) Curva de crecimiento típica para dos organismos que crecen a diferente velocidad. 
Para practicar, calcule el tiempo de generación de los dos cultivos usando la fórmula
n = 3,3(log N − log N
0
), donde N y N
0
 son dos lecturas de DO diferentes tomadas con un
intervalo de tiempo t (Sección 5.5). ¿Qué organismo crece más rápidamente, A o B? (c) Relación
entre el número de células o el peso seco y las lecturas turbidimétricas. Obsérvese que la
correspondencia unívoca entre estas relaciones se pierde a valores altos de turbidez.
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