Microbiologia Medica (313)

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CAPÍTULO 23 Micobacterias 315
37 °C en CO2 al 5 a 10% incluso durante ocho semanas. Si los 
cultivos son negativos, después de ser positiva la tinción para 
acidorresistentes o si se sospecha la presencia de NTM de proli-
feración lenta (véase adelante), habrá que incubar un conjunto 
de medios inoculados, a menor temperatura (p. ej., 24 a 33 °C) 
y los dos conjuntos se incubarán durante 12 semanas.
Es importante agregar un anticoagulante a la sangre para 
cultivo de micobacterias (por lo común el complejo MAC); se 
le preparará por alguno de los tres métodos siguientes: 1) un 
sistema de centrifugación y lisis disponible comercialmente o 
2) inoculación en caldo comercial, preparado específi camente 
para cultivo de sangre. Desde el punto de vista médico es 
importante caracterizar y separar el complejo M. tuberculosis 
de las demás especies de micobacterias. Es necesario identifi car 
la especie de micobacteria aislada. Los métodos convenciona-
les para reconocer las micobacterias incluyen observación de la 
rapidez de proliferación, morfología de colonias, pigmenta-
ción y perfi les bioquímicos. Con los métodos convencionales 
suele ser necesario el transcurso de seis a ocho semanas para 
la identifi cación, y pronto se tornarán sólo de interés histórico, 
porque no son adecuados para identifi car el número cada vez 
más amplio de especies clínicamente importantes. Muchos 
de los laboratorios ya no confían ni practican estos métodos 
bioquímicos. La rapidez de proliferación permite diferenciar 
entre microorganismos de crecimiento rápido (siete días o 
CUADRO 232 Clasificación tradicional de Runyon 
de micobacterias
Clasificación Organismo
Complejo tuberculoso Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium africanum
Mycobacterium bovis
Otros
Fotocromógenos Mycobacterium asiaticum
Mycobacterium kansasii
Mycobacterium marinum
Mycobacterium simiae
Escotocromógenos Mycobacterium fl avescens
Mycobacterium gordonae
Mycobacterium scrofulaceum
Mycobacterium szulgai
No cromógenos Complejo de Mycobacterium avium
Mycobacterium celatum
Mycobacterium haemophilum
Mycobacterium gastri
Mycobacterium genavense
Mycobacterium malmoense
Mycobacterium nonchromogenicum
Mycobacterium shimoidei
Mycobacterium terrae
Mycobacterium trivale
Mycobacterium ulcerans
Mycobacterium xenopi 
Crecimiento rápido Mycobacterium abscessus
Grupo de Mycobacterium fortuitum
Grupo de Mycobacterium chelonae
Mycobacterium immunogenum
Mycobacterium mucogenicum
Mycobacterium phlei
Mycobacterium smegmatis
Mycobacterium vaccae
menos), de otras micobacterias (cuadro 23-2). Los fotocromó-
genos producen pigmento en la luz, pero no en la oscuridad; 
los escotocromógenos generan pigmento cuando proliferan 
en la oscuridad, y los no cromógenos (no fotocromógenos) no 
tienen pigmento y las colonias tienen un color claro o de piel 
de ante. Se cuenta con métodos moleculares para el estudio de 
cuatro especies (véase adelante); con ello los resultados se obtie-
nen con mayor rapidez que con los métodos comunes. Pueden 
utilizarse en micobacterias obtenidas al proliferar en medios 
sólidos o en caldos de cultivo. En técnicas de hibridación se uti-
lizan sondas de DNA que son específi cas para las secuencias de 
rRNA del microorganismo por identifi car. Cada micobacteria 
tiene unas 10 000 copias de rRNA y, de ese modo, se cuenta con 
un sistema natural de amplifi cación que mejora la detección. 
Los híbridos bicatenarios se separan de los monocatenarios no 
híbridos. Las sondas de DNA se unen a sustancias químicas que 
se activan en los híbridos, detectadas por quimioluminiscen-
cia. Se utilizan sondas para el complejo de M. tuberculosis (M. 
tuberculosis, M. bovis, Mycobacterium africanum, Mycobacte-
rium caprae, Mycobacterium microti, Mycobacterium canetti 
y Micobacterium pinnipedii), complejo de MAC (M. avium, 
M. intracellulare y micobacterias muy similares), M. kansasii 
y Mycobacterium gordonae. El uso de las sondas ha abreviado 
el lapso de identifi caciones de micobacterias químicamente 
infecciosas, de varias semanas incluso a un día.
En Estados Unidos, los cuatro grupos (complejo M. tu-
berculosis, MAC, M. kansasii y M. gordonae) constituyen 95% 
o más de las cepas clínicas aisladas de micobacterias.
En el caso de especies que no pueden ser identifi cadas 
por medio de sondas de DNA, muchos laboratorios cuentan 
con técnicas moleculares que realizan la secuenciación del 
gen de rRNA 16S para la identifi cación rápida de especies que 
son negativas con las sondas, o bien envían los microorganis-
mos a laboratorios especializados que realizan métodos de 
secuenciación.
Para defi nir la especie de micobacterias se ha aplicado 
la cromatografía líquida de alta efi cacia (HPLC, high-perfor-
mance liquid chromatography). Dicho método se basa en la 
creación de perfi les de ácidos micólicos, que varían de una 
especie a otra. En laboratorios especializados se practica HPLC 
para defi nir la especie de las micobacterias.
La espectrometría de masas de tiempo de vuelo con ioni-
zación desorción de matriz asistida con láser (MALDI-TOF 
MS, matrix-assisted laser desorption ionization-time of fl ight 
mass spectrometry) no ha sido autorizada por la FDA para la 
identifi cación de microorganismos del género Mycobacterium 
recuperados en cultivo, aunque se han realizado progresos. Se 
espera que este método esté disponible en un futuro cercano. 
Las pruebas de susceptibilidad de micobacterias son un método 
auxiliar importante en la selección de fármacos para un trata-
miento efi caz. Pueden utilizarse técnicas en medios de cultivo 
en caldo para realizar pruebas de susceptibilidad a fármacos 
de primera línea. Las técnicas convencionales en agar, que son 
más arduas y más complejas, se realizan en laboratorios espe-
cializados; pueden realizarse pruebas para fármacos de pri-
mera y segunda líneas con este método. Una modifi cación en 
los medios de cultivo líquidos involucra la inoculación de mico-
bacterias en placas con múltiples cavidades con y sin la adición 
de antibióticos (análisis MODS, Microscopic Observation Drug 
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