Practica 1-ZamudioSanchezAlicia

Vista previa del material en texto

Universidad Veracruzana 
Bioquímica Clínica Especializada – Periodo intersemestral 
Margarita Lozada Mendez 
 
Practica #1: Espermatobioscopía Directa. 
 
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez 
 
09 de julio de 2023 
 
PRÁCTICA #1: ESPERMATOBIOSCOPÍA DIRECTA. 
Introducción 
La espermatobioscopía directa (ESD) es un procedimiento clínico ampliamente 
utilizado para evaluar la calidad del semen en hombres y desempeña un papel 
fundamental en la evaluación de la fertilidad masculina. Durante esta práctica, se 
analiza minuciosamente el semen para determinar la cantidad, calidad y movilidad 
de los espermatozoides, así como para detectar posibles anormalidades que 
puedan afectar la capacidad reproductiva. 
El semen, un fluido biológico esencial en la reproducción, se produce en los órganos 
reproductores masculinos, como los testículos, conductos deferentes, vesículas 
seminales, próstata y glándulas bulbouretrales. Está compuesto por una mezcla de 
espermatozoides, líquido seminal y sustancias secretadas por las glándulas 
reproductoras. La producción y liberación de semen están reguladas por hormonas 
y complejos procesos fisiológicos. 
La función principal del semen es transportar los espermatozoides hacia el aparato 
reproductor femenino durante el acto sexual, permitiendo la fertilización del óvulo y 
la consecución de la reproducción. Además de su papel como medio de transporte, 
el semen contiene nutrientes y sustancias que favorecen la viabilidad y motilidad de 
los espermatozoides, protegiéndolos de las condiciones adversas del tracto 
reproductivo femenino. 
Existen diversas enfermedades y trastornos que pueden afectar la producción de 
semen y la calidad de los espermatozoides. Entre ellos se encuentran la 
oligozoospermia (baja cantidad de espermatozoides), la astenozoospermia 
(disminución de la movilidad de los espermatozoides), la teratozoospermia 
(presencia de espermatozoides anormales en forma y estructura), la 
criptozoospermia (ausencia de espermatozoides en el semen) y la azoospermia 
(ausencia de espermatozoides en el semen eyaculado). 
Estas condiciones pueden tener diversas causas, como desequilibrios hormonales, 
infecciones genitales, obstrucciones en los conductos deferentes, enfermedades 
genéticas, factores ambientales, estrés, hábitos de vida poco saludables y el uso de 
ciertos medicamentos. Es fundamental realizar una detección temprana y un 
diagnóstico preciso de estos trastornos para abordar los problemas de fertilidad 
masculina y brindar opciones de tratamiento adecuadas, como la inseminación 
artificial, la fertilización in vitro o la microcirugía reconstructiva. 
 
Determinaciones realizadas en líquido seminal (esperma) 
Examen macroscópico inicial 
Determinación de licuefacción: 
La determinación de la licuefacción es un parámetro importante que se evalúa en la 
espermatobioscopía directa (ESD). La licuefacción es el proceso en el cual el 
semen, que inicialmente se encuentra en un estado de coagulación, se vuelve 
líquido después de un período de tiempo determinado. 
El proceso de licuefacción es mediado por una enzima llamada plasmina, que se 
encuentra en el plasma seminal. La plasmina actúa sobre las proteínas coagulantes 
presentes en el semen, disolviendo la coagulación y convirtiendo el semen en un 
estado líquido. 
Las muestras de semen normal pueden contener gránulos gelatinosos que no se 
licuan y no parecen tener significación clínica alguna. 
1. Preparación de la muestra. 
2. Manipulación de la muestra. 
3. Observación del tiempo de licuefacción. 
4. Control visual de la licuefacción. 
5. Registro de los resultados. 
 
Determinación de aspecto: 
Una muestra normal tiene una apariencia homogénea gris-opalescente. Puede 
aparecer menos opaca cuando la concentración de espermatozoides es muy baja, 
marrón cuando contiene glóbulos rojos o amarillenta en el caso de un paciente 
ictérico o que consume algunas vitaminas. 
1. Preparación de la muestra. 
2. Observación del aspecto. 
3. Color. 
4. Consistencia. 
5. Transparencia. 
 
Determinación de volumen: 
Es medido usando un cilindro graduado. 
1. Preparación de la muestra. 
2. Medición del volumen. 
3. Registro de los resultados. 
 
Determinación de viscosidad: 
1. Es estimada aspirando la muestra en una pipeta de 5ml. 
2. Se permite la libre caída de las gotas, en las que se observa la longitud del 
filamento formado. 
3. En una muestra normal se observan gotas pequeñas y bien definidas, 
mientras que una muestra de viscosidad anormal se formará un filamento de 
2cm. 
 
Determinación de pH: 
1. Debe ser medido dentro de una hora de la eyaculación. 
2. Se distribuye una gota de semen sobre el papel de pH, al cabo de 30s el 
color de la zona impregnada debe ser uniforme y se compara con la cartilla 
de calibración para determinar el pH de la muestra. 
 
Investigación microscópica inicial 
Estimación preliminar de la concentración de los espermatozoides: 
Esta estimación es utilizada para decidir la dilución a utilizar en la determinación de 
la concentración. 
<15 espermatozoides: dilución 1:5. 
15-40 espermatozoides: dilución 1:10 
40-200 espermatozoides: dilución 1:20 
>200 espermatozoides: dilución 1:50 
Cuando el número de espermatozoides varia considerablemente entre campos 
visuales, significa que la muestra no es homogénea y que debe ser mezclado 
cuidadosamente. 
 
Graduación de la motilidad: 
Por lo menos 5 campos microscópicos son evaluados para clasificar 200 
espermatozoides. 
La motilidad es clasificada como “a”, “b”, “c”, “d”. 
De acuerdo a si muestra: 
a. Motilidad progresiva rápida. 
b. Motilidad progresiva lenta. 
c. Motilidad no progresiva. 
d. Inmóviles. 
 
Elementos celulares diferentes de los espermatozoides: 
El eyaculado contiene células diferentes de los espermatozoides a las que se refiere 
genéricamente como “células redondas”. 
Como referencia, un eyaculado normal no debe contener más de 5x106 células 
redondas/ml. 
El numero de leucocitos no debe ser superior a 1x106m/l. 
 
Aglutinación: 
La aglutinación de los espermatozoides significa que los espermatozoides móviles 
se adhieren entre ellos, cabeza con cabeza, cola con cola o de un modo mixto, por 
ejemplo, cabeza con cola. 
1. Preparación de la muestra. 
2. Preparación de una extensión de semen. 
3. Observación de la aglutinación. 
4. Identificación de aglutinación. 
5. Registro de los resultados 
 
Exámenes microscópicos adicionales 
Vitalidad espermática por exclusión de colorante: 
Se refleja en la proporción de los espermatozoides que están “vivos”. Esto debe ser 
determinado si el porcentaje de espermatozoides inmóviles supera el 50%. 
 
Evaluación de la concentración espermática: 
Puede determinarse aplicando el método del hemocitómetro en dos preparados de 
la muestra de semen, una para cada lado de la cámara de contaje. 
1. La dilución se determina (1:5, 1:10, 1:20, 1:50) de acuerdo a la estimación 
preliminar de la concentración espermática. 
2. Las cámaras no deben estar demasiado llenas ni demasiado vacías y el 
cubreobjetos no debe ser movido. 
3. Luego se dejará en reposo. 
4. En este tiempo las células se sedimentas y luego se cuentan con un 
microscopio. 
5. Los espermatozoides defectuosos (sin cabeza o cabezas sin cola) deben ser 
contadas también, pero con un registro separado. 
6. Para determinar la concentración de espermatozoides en la muestra de 
semen original, el promedio se divide por el factor de conversión apropiado. 
 
Clasificación morfológica: 
1. Preparación de las extensiones: se deben preparar por lo menos dos 
extensiones para realizar las evaluaciones por separado. 
2. Los portaobjetos deben ser limpiados y lavados con etanos al 70% y 
secados. 
3. La preparación es examinada para asegurarse que los espermatozoides 
estén distribuidos uniformemente y que haya 40 por campo. 
 
Técnicas para determinar vitalidad-Eosina sola primera opción: 
1. Se mezcla una gota de semen fresco con una gota de solución eosina al 
0.5% en un portaobjetos. 
2. Se cubre con un cubreobjeto y se analiza. 
3. Los espermatozoides vivos permanecen sin teñir (blancos). Los 
espermatozoides sin vida se tiñen de rojo. 
 
Técnicas para determinar vitalidad- Eosina sola segunda opción: 
1. Mezclar la eosina y el semen en un portaobjetos y después de un minuto se 
hace una extensión y se deja secar al aire. 
2. Luego se examinan con aceite de inmersión. 
3. Los espermatozoides vivos se tiñen de negro y los nuestros se tiñen de 
amarillo. 
 
Técnicas para determinar vitalidad- Eosina nigrosina: 
1. Se utiliza eosina 1% (dos gotas) 
2. Se mezcla con una gota de semen. 
3. A los 30s se añaden 3 gotas de nigrosina al 10% y se mezcla. 
4. Se hace una extensión en un portaobjetos, no debe ser tan grueso. 
5. Luego se examina con aceite de inmersión. 
6. Los espermatozoides vivos son blancos y los muertos se tiñen de rojo. 
 
 
Resultados obtenidos en cada determinación 
Examen macroscópico inicial 
Determinación de licuefacción: 
La muestra contenía gránulos. 
 
Determinación de aspecto: 
Muestra de aspecto normal: Color gris. 
 
Determinación de volumen: 
Resultado del volumen: 1 mL. 
El valor de referencia para el volumen del semen normalmente se encuentra entre 
1.5 y 5 mililitros (ml) por eyaculación. 
 
Determinación de viscosidad: 
Resultado de viscosidad normal. 
Como referencia, en una muestra normal se observan gotas pequeñas y bien 
definidas, mientras que una muestra de viscosidad anormal se formará un filamento 
de 2cm. 
 
Determinación de pH: 
Resultado de pH: 8. 
El valor de referencia para el pH del semen normalmente se encuentra en un rango 
ligeramente alcalino, que oscila entre 7.2 y 8.0. 
 
Investigación microscópica inicial 
Estimación preliminar de la concentración de los espermatozoides: 
Resultado: 167 espermatozoides: dilución 1:20. 
 
Referencias para las diluciones: 
<15 espermatozoides: dilución 1:5. 
15-40 espermatozoides: dilución 1:10 
40-200 espermatozoides: dilución 1:20 
>200 espermatozoides: dilución 1:50 
 
Graduación de la motilidad: 
Portaobjeto 1 (conteo de 200 espermatozoides): 
a) 36.5% b) 29.5% c) 10% d) 24% 
Portaobjeto 2 (conteo de 200 espermatozoides): 
a) 32% b)34% c)13% d) 21% 
 
Elementos celulares diferentes de los espermatozoides: 
Resultado: Existen menos de 3.7 células/unidad. 
Como referencia, el numero de leucocitos no debe superar 1x106m/l. 
 
Aglutinación: 
Resultado: +++ 
 
Referencia: Escala semicuantitativa desde: 
- (sin aglutinación) a +++ (agrupamiento masivo en el cual todos los 
espermatozoides móviles están aglutinados) 
 
 
Exámenes microscópicos adicionales 
Evaluación de la concentración espermática: 
 
201+223 = 424 Diferencia: 22 
Σ = 212 
Concentración = 212/2 = 106 x 106/mL 
 
Diferencias mayores sugieren un error de dilución. 
 
Clasificación morfológica: 
Se encontraron <2 espermatozoides amorfos (1 con la cola enrollada, 1 con cabeza 
pequeña) 
La evaluación es llevada a cabo en varias áreas del portaobjeto seleccionadas 
sistemáticamente. 
 
Técnicas para determinar vitalidad- Eosina sola primera opción: 
Resultados: 
281 vivos. 
88 muertos. 
Los espermatozoides vivos permanecen sin teñir (blancos). Los espermatozoides 
sin vida se tiñen de rojo. 
 
Técnicas para determinar vitalidad- Eosina sola segunda opción: 
Resultados: 
162 vivos. 
86 muertos. 
Los espermatozoides vivos se tiñen de negro y los nuestros se tiñen de amarillo. 
 
Técnicas para determinar vitalidad- Eosina nigrosina: 
Resultados: 
48 vivos. 
36 muertos. 
Los espermatozoides vivos son blancos y los muertos se tiñen de rojo. 
 
Conclusión 
En resumen, la espermatobioscopía directa es una técnica clínica fundamental para 
evaluar la calidad del semen y la salud reproductiva masculina. Durante esta 
práctica de laboratorio, hemos llevado a cabo diversos procedimientos, como la 
determinación de la licuefacción, el aspecto, la viscosidad, la vitalidad espermática 
por exclusión de colorante y la aglutinación. 
Los resultados obtenidos en esta práctica han mostrado valores dentro de los 
rangos de referencia establecidos, con algunas ligeras variaciones que pueden 
indicar aspectos a considerar. Es importante recordar que un solo resultado anormal 
no es concluyente y puede requerir una evaluación adicional para determinar su 
significado clínico. 
La espermatobioscopía directa nos proporciona información valiosa sobre la 
constitución del semen, su función y posibles enfermedades que pueden afectar su 
producción. Estos conocimientos son fundamentales para abordar los problemas de 
fertilidad masculina y ofrecer opciones de tratamiento adecuadas. 
Referencias 
➢ Centro Médico Clínico. (s.f.). Espermatobioscopia. Organización Mundial de 
la Salud 2010. Recuperado el 9 de julio de 2023, de 
https://centromedicoclinico.com/espermatobioscopia/ 
➢ Tua Saúde. (2021, 8 septiembre). Espermatobioscopía: qué es, cómo se 
realiza y para qué sirve. Recuperado el 9 de julio de 2023, de 
https://www.tuasaude.com/es/seminograma/ 
➢ Laboratorio Médico el Chopo. (s.f.). Espermatobioscopía directa. 
Recuperado el 9 de julio de 2023, de 
https://www.chopo.com.mx/espermatobioscopia-seminograma 
➢ Inmater. (2018, 16 abril). Espermatobioscopia directa. Recuperado el 9 de 
julio de 2023, de https://blogs.inmater.com/espermatobioscopia-directa/ 
➢ New Hope Fertility. (2021, 10 junio). Prueba de fertilidad masculina. 
Recuperado el 9 de julio de 2023, de https://nhfc.mx/que-es-
espermatobioscopia/.