Taller - Medios artesanales - microbiologia

Vista previa del material en texto

TAREA 4 O TALLER 4. GUÍA DIDÁCTICA 
MICROBIOLOGÍA EN CASA (MEDIOS DE CULTIVO ARTESANALES) 
LAURA MORENO – 201824412 – GRUPO 1-1 - MICROBIOLOGIA 
 
El objetivo de estas guías es proponer métodos alternativos de aprendizaje de la 
microbiología con los elementos que se encuentren en tu entorno. La microbiología 
se ha basado en el conocimiento de los microorganismos asociados a su muestreo, 
cultivo, aislamiento e identificación. Sin embargo, solo el 2% de la microdiversidad 
es susceptible de ser capturada con métodos asociados a cultivo. Este documento 
recoge tres posibilidades sencillas y de bajo costo para acercarte al micromundo. 
Otros objetivos: 
-Preparación de medios artesanales (agar extracto de carne: bacterias; agar papa 
zanahoria: hongos). 
-Análisis microbiológico de ambiente (UFC/tiempo exposición- recuento) de 
bacterias y de hongos (método de sedimentación o gravimétrico) 
-Descripción macroscópica de colonias bacterianas (borde, elevación, pigmento 
etc) 
-Descripción macroscópica de hongos 
 
Nota Bioseguridad a tener en cuenta: 
Lavado de mano y aplicación de alcohol en las manos y superficies para desinfectar. 
Todos los elementos de vidrio y metal pueden ser hervidos en agua por al menos 15 
minutos para su esterilización. 
Mantener las condiciones de asepsia durante todo el proceso para recipientes, 
utensilios y superficies. 
Tener cuidado de no acercar las manos a la llama de la vela o de la estufa, 
posterior a la aplicación de alcohol, podrían sufrir quemaduras. 
SITIO DE MUESTREO: PIEZA, BAÑO, PATIO 
 
PARTE 1. Preparación de medios de cultivo artesanales 
A. Medio o agar papa-zanahoria (APZ) (Para hongos) 
Universidad pedagógica y tecnológica de Colombia
Facultad de Ciencias Básicas – Escuela de Biología
TALLER - MICROBIOLOGIA
 
Para la preparación de 250 – 300 ml de medio papa-zanahoria casero necesitarás 
los siguientes materiales: 
Cant. Material 
1 Papa (pastusa, la que tengas disponible) pequeña aprox 50 g 
1 Zanahoria pequeña 25g 
1 ½ Paquetes de gelatina sin sabor (7,5g /cada sobre) 
450 ml Agua potable o de la llave 
1 Recipiente para hacer la mezcla del zumo y la gelatina sin sabor 
1 Colador 
1 Paquete de gasa estéril (opcional) 
1 Agitador (cuchara o tenedor estéril) 
5 Frascos de compota de vidrio o dulceras pequeñas, o vasos plásticos 
3 Velas y su soporte para evitar accidentes (si no la tienen no es 
necesario) 
1 Hipoclorito al 10% (una parte de hipoclorito comercial por 9 partes de 
agua) 
1 
1 
1 
1 
Alcohol en un spray (diluido) 
Toallas de papel 
Fósforos 
Papel vinipel 
 
 
METODOLOGÍA 
1. Picar en cuadritos la papa y la zanahoria, y cocinarlos en 350 mL de agua 
potable durante 20 min. (tapar la olla durante la cocción para evitar la 
pérdida de agua). Esta cocción se denomina ZUMO. 
2. Al mismo tiempo esterilizar los elementos: frascos de compota, tenedor o 
cuchara, colador introduciéndolos en el agua hervida por 5 - 10min a fuego 
constante. Sacar y dejar enfriar para utilizarlos en la práctica. 
3. Esterilizar el sitio de trabajo con hipoclorito al 10%. Secar con toallas de 
cocina y adecuar velas alrededor del punto de trabajo para mantener un 
ambiente estéril (Función que haría el mechero en el laboratorio). 
4. Pasados aproximadamente 20 minutos (Máx. 30 min) de cocinar la papa y 
la zanahoria. Licuar en licuadora y filtrar el zumo utilizando el colador 
previamente esterilizado. Si es posible ponga unas gasas estériles en el 
colador, para evitar que se vayan grumos. 
5. Prepare la gelatina sin sabor en 50 ml de agua caliente. Revuelva hasta que 
se disuelva completamente. 
6. Una vez filtrado el zumo (tomar 5mL de Zumo solamente), agregar la 
gelatina sin sabor previamente disuelta y mezcle evitando que se formen 
burbujas. 
7. Posteriormente agregue la mezcla a cada uno de los frascos de compota o 
en las dulceras, agregando aproximadamente medio hasta una altura de 2 
cm, evitando la formación de burbujas. 
 
 
 
 
 Ejemplo: métodos de asepsia por medio de calor 
 
Envase el medio de cultivo en cada frasco de compota cerca de la llama de las velas o de 
la estufa encendida, con mucha precaución para no quemarse las manos. 
 
8. Dejar enfriar los medios con la respectiva tapa medio abierta dentro del área 
limitada por las velas o cerca a la estufa (aprox. 20 min). 
9. Tapar completamente los frascos con tapa o las dulceras sin ejercer fuerza , y no 
mover hasta que la gelatina se solidifique (aprox. 20 min ). 
 
10. Guardar en la nevera para su uso posterior no debe superar los 15 días de 
almacenamiento. Verifique semanalmente condiciones. 
 
 
 
RESULTADO IDEAL de crecimiento de hongos en los recipientes 
 
Recomendaciones: Una vez sacados los frascos del agua hirviendo, escurrir exceso de 
agua y dejarlos sobre una servilleta impregnada con alcohol sobre el mesón estéril y a la 
llama de las velas. Antes de utilizar los frascos y las tapas, pasarlos lentamente por la 
llama de las velas o del fogón de la estufa. Luego servir el medio en cada frasco. 
A los medios de hongos se pueden volver selectivos agregando Amoxicilina para evitar el 
crecimiento de bacterias 
 
B. Medio agar extracto de carne (para bacterias) 
 
Para la preparación de 250 - 300 mL de medio extracto de carne prepara los siguientes 
materiales: 
Cant. Material 
½ Lb Carne de res (250g) 
1 ½ Paquetes de gelatina sin sabor (7,5g/cu) 
400ml Agua potable 
1 Recipiente para hacer la mezcla del zumo y la gelatina sin sabor 
1 Colador 
1 Paquete de gasa estéril (opcional) 
1 Agitador (cuchara o tenedor estéril) 
5 Frascos de compota de vidrio o dulceras 
3 velas 
1 Hipoclorito al 10% (una parte de hipoclorito por 9 partes de agua) 
1 Alcohol dentro de un spray 
1 
1 
1 
Toallas de papel 
Fósforos 
Papel vinipel 
 
 
Nota: Mantener las condiciones de bioseguridad establecidas para preparación del medio 
APZ 
METODOLOGÍA 
1. Picar la carne en pedazos medianos (3x3cm) sin desperdiciar la sangre 
2. Cocinar la carne en 400 ml de agua por 30 minutos 
3. Colar el zumo (o licuar la carne cocida y colarla) 
4. Aparte prepara la gelatina sin sabor en 50 ml de agua caliente 
5. Mezclar la gelatina con el zumo de carne, revolviendo suavemente para evitar la 
formación de burbujas 
6. Servir en los frascos de compota previamente esterilizados, manteniendo un 
ambiente aséptico con las velas 
7. Dejar enfriar los medios con la tapa medio abierta dentro del área limitada por las 
velas o cerca a la estufa (aprox. 20min). 
8. Tapar completamente los frascos y dejarlos por 20 minutos luego guardar en la 
nevera 
 
PARTE 2. Muestreo Gravimétrico o por Sedimentación 
En esta práctica se realizará un muestreo de los microorganismos (MO) del aire en casa. 
El fundamento de la práctica consiste en identificar diferencias en el componente 
microbiano de distintos lugares de nuestra casa, a partir de la técnica de muestreo 
gravimétrico o por sedimentación que consiste en exponer al aire el medio de cultivo en 
un tiempo dado previamente preparado, y registrar el crecimiento de los 
microorganismos. Para esto se debe: 
1. Escoger 4 sitios de la casa que se desean muestrear (preferiblemente lugares de 
mayor humedad donde no se vean expuestos a la luz del sol directa) 
2. Marcar cada medio con el nombre de la zona de la casa escogida. 
3. Poner el medio destapado en cada zona y dejarlo así por 30 min a 1 hora. 
4. Antes de tapar el medio (con vinilpel) se pude limpiar la cara interna de la tapa 
con gasa estéril impregnada con alcohol y luego pasarla suavemente por la llama 
de la vela con el fin de quitar las gotas de agua condensadas que pueden quedar 
(Si estas gotas se dejan en la tapa pueden caer al medio y licuarlo más 
tempranamente) 
5. Tapar el medio y guardar los medios inoculados en un lugar fresco (ej. cajón de 
mesa, encima de la nevera, en un sitio donde no le caiga luz directa, ni se vaya a 
romper o a deshidratar o licuar): 
o Los cultivosen medio APZ se deben mantener a 25°C, preferiblemente en un 
lugar húmedo 
o Los cultivos en medio agar extracto de carne se deben mantener a 37°C, 
preferiblemente en un lugar cálido libre de humedad 
6. Registrar con fotografías diariamente el crecimiento de microorganismos en el 
medio, contar y observar cambios en el medio (ver formato anexo) 
RESULTADOS. 
 
1) AGAR EXTRACTO DE CARNE 
ANEXO 1. MÉTODO POR SEDIMENTACIÓN EN EL MEDIO AGAR EXTRACTO DE CARNE 
Para este método contará cuantas colonias observa, diariamente (ejemplo: 20 colonias y 
por cuanto tiempo lo puso al ambiente, lo expresará así: 20UFC/30min, como se ve en el 
ejemplo de la tabla: 
DIAS DE 
OBSERVACIÓN 
Y SITIO: 
comedor 
Día 1 Día 2 Día 3 etc Día 4 Día 5…. Dia 6 
Recuento: 0 0 0 0 1 3 
FOTO 
 
 
 
 
DIAS DE 
OBSERVACIÓN 
Y SITIO: 
comedor 
Día 7 Día 8 Día 9 Día 10 
Recuento: 3 5 10 6 UFC/40 min 
FOTO 
 
 
 
 
ANEXO 2. DESCRIPCIÓN MACROSCÓPICA DE COLONIAS BACTERIANAS OBSERVADAS 
EN EL MEDIO AGAR EXTRACTO DE CARNE 
De acuerdo a lo visto en clase (descripción macroscópica de colonias bacterias) complete 
la siguiente tabla en su último día de observación. 
A partir de los cultivos bacterianos que preparó, coloque un círculo con un marcador para 
delimitar las colonias bacterianas y realizar la descripción macroscópica de las mismas en 
la siguiente tabla 
 
TABLA: DESCRIPCION MACROSCOPICA DE COLONIAS DE AGAR CARNE 
 
SITIO DE TOMA 
DE MUESTRA 
comedor comedor comedor 
CARACTERÍSTICA Colonia 1: Colonia 2: Colonia 3 etc: 
Elevación papilar Plana Plana 
Borde lobulado Regular Lobulado 
Consistencia Blanda blanda Dura 
Pigmento (Color) Blanco Verde oscuro Amarillo 
Aspecto Mate opaca Opaca 
 
SITIO DE TOMA 
DE MUESTRA 
comedor comedor sala 
CARACTERÍSTICA Colonia 4: Colonia 5: Colonia 6 etc: 
Elevación Plana Plana Plana 
Borde Regular Regular Regular 
Consistencia blanda Dura Mucoide 
Pigmento (Color) Verde oscuro Borde blanco con 
centro amarillo 
Borde negro interior 
color piel claro 
Aspecto opaca mate transparente 
Fuente: Torres et al., 2020. 
Incluir las fotos de su medio agar extracto de carne en su último día, colocando 
nombres a las figuras (fotos). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Foto #1: recipiente agar de carne Foto #2: colonias en el agar de carne dia 10 
 
2) AGAR EXTRACTO PAPA ZANAHORIA 
ANEXO 1. MÉTODO POR SEDIMENTACIÓN EN EL MEDIO AGAR PAPA ZANAHORIA 
Para este método contará cuantas colonias fúngicas observa, diariamente (ejemplo: 20 
colonias y por cuanto tiempo lo puso al ambiente, lo expresará así: 5 UFC/30min); para 
las conclusiones tener en cuenta sólo el último valor reportado en el último día, como se 
ve en el ejemplo de la siguiente tabla: 
DIAS DE 
OBSERVACIÓ
N Y 
SITIO:_sala__ 
Día 1 Día 2 Día 3 etc Día 4 Día 5…. 
Recuento 
Completar: 
3 3 6 8 10 
Foto 
 
 
 
DIAS DE 
OBSERVACIÓ
N Y 
SITIO:_sala__ 
Día 6 Día 7 Día 8 etc Día 9 Día 10…. 
Recuento 
Completar: 
13 18 21 24 24 UFC/45 
min 
foto 
 
 
 
 
 
ANEXO 2. DESCRIPCIÓN MACROSCÓPICA DE COLONIAS FÚNGICAS OBSERVADAS EN 
EL MEDIO AGAR PAPA ZANAHORIA 
De acuerdo a lo visto en clase (descripción macroscópica de hongos) complete la siguiente 
tabla en su último día de observación. 
A partir de los cultivos fúngicos que preparó, coloque un círculo con un marcador para 
delimitar las colonias fúngicas y realizar la descripción macroscópica de las mismas en la 
siguiente tabla 
 
TABLA: DESCRIPCION MACROSCOPICA DE COLONIAS FUNGICAS AGAR PAPA-ZANAHORIA 
 
SITIO DE TOMA DE 
MUESTRA 
 
CARACTERÍSTICA 
(Levaduras) 
Colonia 1: Colonia 2: Colonia 3 etc: 
Textura (cremoso, 
granular, 
polvoriento, 
aterciopelada o 
algodonosa) 
Cremosa aterciopelada polvorienta 
Color (brillantes: 
azul, verde, 
amarillo; 
dematiáceos: 
castaño, gris, 
negro; pigmentos 
difusibles al 
medio) 
Negro 
dermatiaceo 
Blanca brillante Blanca con gris 
CARACTERÍSTICA 
(Hongos 
filamentosos) 
Colonia 1: Colonia 2: Colonia 3: 
 Colonia micelial 
de aspecto: mate, 
algodonado, 
umbilicada. 
color: rojo con 
halo blancusco 
Colonia micelial de 
aspecto: opaco, 
atercipelado, plana, 
Color: amarillo con 
halo blancusco. 
Colonia micelial de 
aspecto:opaco, 
aterciopelado, plana 
color: verde oscuro con 
halo blancusco 
CARACTERÍSTICA 
(Hongos 
filamentosos) 
Colonia 4: Colonia 5: Colonia 6: 
 Colonia micelial 
de aspecto: 
opaco, 
atercipelada, 
plano, 
color: verde claro 
con halo 
blancusco 
Colonia micelial de 
aspecto: mate, 
atercipelado, plano 
Color: azul verdoso 
borde lobulado. 
Colonia micelial de 
aspecto:opaco, 
aterciopelado, plana 
color: verde claro con 
halo amarillento. 
Fuente: Torres et al., 2020. 
Incluir las fotos de su medio agar papa zanahoria en su último día, colocando 
nombres a las figuras (fotos). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Foto #1 colonias en agar papa-zanahoria Foto #2: recipiente agar de carne 
DISCUSIÓN: 
De acuerdo a las observaciones y resultados obtenidos en la realización de los medios de 
cultivo artesanales se podría decir que, aunque el medio de papa-zanahoria es más 
resistente a la licuefacción o a hacerse liquido debido a la acción de los microorganismos, 
es el medio en el cual se observó, aunque mayor cantidad de colonias menor diversidad de 
estas; en comparación con el medio de agar extracto carne, en el cual a pesar de que no 
tolero de buena manera la licuefacción por acción de los microrganismos cosa que 
pudimos en el 7 día en el cual dos de los agares de carne se hicieron líquidos, en el 9 y 10 
día ocurrió la misma situación en la cual se fueron haciendo líquidos uno por uno 2 gares 
de extracto carne por lo cual aunque al final solo resistió un agar de extracto carne de los 
5 expuestos este presento una gran diversidad de colonias y una cantidad significativa. El 
daño obtenido en los agares de carne se puede explicar teniendo en cuenta errores 
experimentales ya sea en las cantidades o en el lugar en el cual se ubicaron estos talvez 
no tenía la mejor temperatura para su crecimiento. 
CONCLUSIONES: 
- Se concluye que las colonias fúngicas representan una mayor adaptación y un 
menor daño a los agares. 
- Se concluye que las comunidades bacterianas consumen o licuan el medio a una 
mayor velocidad que las fúngicas por lo cual estos deben ser mas densos. 
CUESTIONARIO. 
Estas preguntas desarrollarlas con base a libros o información de internet: 
- Defina bacteria; mohos, y levaduras. 
-bacteria: Las bacterias son microorganismos procariotas que presentan un tamaño de 
entre 0,5 y 5 μm de longitud y diversas formas, incluyendo esferas (cocos), barras (bacilos), 
filamentos curvados (vibrios) y helicoidales (espirilos y espiroquetas). Las bacterias son 
células procariotas, por lo que, a diferencia de las células eucariotas (de animales, plantas, 
hongos, etc.), no tienen el núcleo definido ni presentan, en general, orgánulos 
membranosos internos. 
-mohos: El moho es un hongo que se encuentra tanto al aire libre como en lugares 
húmedos y con baja luminosidad. Existen muchas especies que crecen en formas de 
filamentos pluricelulares o unicelulares. El moho crece mejor en condiciones cálidas y 
húmedas; se reproducen y propagan mediante esporas. 
-levadura: Se denomina levadura o fermento a cualquiera de los hongos microscópicos 
clasificados como ascomicetos o basidiomicetos, predominantemente unicelulares en su 
ciclo de vida, generalmente caracterizados por dividirse asexualmente por gemación o 
bipartición y por tener estados sexuales que no están adjuntos a un esporocarpo (cuerpo 
fructífero). Específicamente las levaduras son hongos que no forman redes filamentosas 
(hifas). 
-Mencione 2 géneros o especies bacterianas que se pueden aislar a partir del aire, 
dibújelos macroscópicamente, y microscópicamente (GRAM) y mencione las 
características más importantes, si son benéficas o patógenas etc. 
R: En el aire se aislan frecuentementebacterias esporuladas de los géneros Bacillus como 
Bacillus subtilis, y bacterias del genero Clostridium como Clostridium Botulinum. 
 
FIG. 1. BACILUS SUBTITLIS MACROSCOPICAMENTE Y MICROSCOPICAMENTE TINCION 
DE GRAM. 
 
 
FIG. 2. CLOSTRIDIUM BOTULINUM MACROSCOPICAMENTE Y MICROSCOPICAMENTE 
TINCION DE GRAM. 
CARACTERISTICAS: 
- BACILLUS SUBTILIS: Bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva, Catalasa-positiva, 
aerobio1 comúnmente encontrada en el suelo. Miembro del Género Bacillus, B. subtilis 
tiene la habilidad para formar una resistente endospora protectora, permitiéndole tolerar 
condiciones ambientalmente extremas. No es considerado patógeno humano. 
- CLOSTRIDIUM BOTULINUM: es productora de la toxina botulínica, el agente causal del 
botulismo. 1 Estos microorganismos tienen forma de varilla y se desarrollan mejor en 
condiciones de poco oxígeno. Las bacterias forman esporas que les permiten sobrevivir en 
un estado latente hasta ser expuestas a condiciones que puedan sostener su crecimiento. 
Se considera patógeno para el ser humano. 
-Mencione 2 géneros o especies fúngicas que se pueden aislar a partir del aire, dibújelos 
macroscópicamente, microscópicamente (partes) y mencione las características más 
importantes, si es benéfico o patógeno etc. 
R: en el aire se suelen aislar agentes micoticos de los generos Aspergillus como Aspergillus 
Flavus, y Cladosporum como Cladoporum Herbarum. 
CARACTERISTICAS: 
-ASPERGILLUM FLAVUS: El Aspergillus es un hongo filamentoso (compuesto de cadenas 
de células, llamadas hifas), el tipo de hongos opuesto a las levaduras, estas últimas 
compuestas de una sola célula redondeada. El hábitat natural del Aspergillus son el heno 
y el compostaje. Dentro del tipo de hifas se encuentra en las no pigmentadas que reciben 
el nombre de hialohifomicetos. No se considera patógeno peligroso. 
 
FIG. 3 ASPERGILLUS FLAVUS MACROSCOPICAMENTE Y MICROSCOPICAMENTE CON 
PARTES. 
 
 
FIG. 4. CLADOSPORUM HERBARUM MACROSCOPICAMENTE Y MICROSCOPICAMENTE 
CON PARTES. 
-CLADOSPORUM HERBARUM: es un hongo común que se encuentra en todo el 
mundo en materia orgánica e inorgánica. Se distribuye eficientemente en el aire, 
donde existe como la especie de hongos más frecuente. Puede crecer en una amplia 
gama de temperaturas, incluidos ambientes muy fríos, lo que le da la capacidad de 
crecer en carne refrigerada y formar "puntos negros". No se considera patógeno. 
REPORTAR LA BIBLIOGRAFÍA UTILIZADA (NORMAS APA) 
 
- Smith, George (1969). Introducción a la micología industrial(6ª ed.). Londres: 
Edward Arnold Ltd. 
- https://www.ecured.cu/AspergilLus_flavus#Caracter.C3.ADsticas 
- Judicial Commission of the International Committee on Systematic Bacteriology 
(1999) Rejection of Clostridium putrificum and conservation of Clostridium 
botulinum and Clostridium sporogenes Opinion 69. International Journal of 
Systematic Bacteriology 
- Madigan M; Martinko J (editors). (2005). Brock Biology of Microorganisms, 11th 
ed., Prentice Hall. ISBN 0-13-144329-1 
- https://www.adiveter.com/ftp_public/articulo782.pdf 
 
BIBLIOGRAFÍA 
Torres, E., Lagos, M., & Pérez, C. (2020). Manual de prácticas de laboratorio de 
Ciencias Biológicas. Editorial Fundación Universitaria Juan de Castellanos. Tunja. 
184p. Ver capítulo 33 (mediciones y microscopía; células procariotas, células 
fúngicas). 
 
ANEXOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
https://www.ecured.cu/AspergilLus_flavus#Caracter.C3.ADsticas
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Material complementario 
VIDEO: https://www.youtube.com/watch?v=M5MoQfR8pQw 
MATERIAL PREPARADO POR DOCENTES ÁREA MICROBIOLOGIA Escuela de Ciencias 
Biológicas UPTC. Junio 2020. 
Claudia Pérez 
Paola Buitrago 
Adriana Espinosa 
https://www.youtube.com/watch?v=M5MoQfR8pQw