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Análisis químicos de los alimentos Conocer los principios de análisis composicional de los alimentos y su interpretación para su uso en la alimentación animal. Conocer e interpretar de forma comparada información nutricional de alimentos y dietas comerciales para animales Ejercicio de valoración etiquetas Informe Aplicar los resultados de análisis composicionales de recursos alimenticios para expresarlos en diferentes bases (Humeda y seca). Taller materia seca Informe Reconocer en el laboratorio los diferentes equipos y procesos para el análisis composicional de los recursos alimenticios. Visita Laboratorio de Nutrición Animal Informe Etiquetas • Gatos húmedo Taste of the wild Perro Ad. Pollo Gato Caballo • Proteína (Min.) 9,7 (38,8%) 27% 24 13 30 (34) 18 • Grasa-EE (Min.) 5,5 (22%) 15% 12 3,5 10 3 • Humedad (Max) 75 (MS25) 10% 9 13 12 13 • Fibra (Max.) 0,2 (8%) 5% 4 8 4 10 • Cenizas (Max.) 2,0 8% 9 10 10 • ELN 43% • Zn 150 mg/kg • Se 0,4 mg/kg • Omega 6 2,4% • Omega 0,3% • Ca 0,8-2,4 Temario • Introducción • Análisis proximal • Análisis de Van Soest • Fibra dietaria total • Espectroscopia de Infrarojo Cercano (NIRS) por • Amino ácidos (Cromatografía liquida de alto desempeño) (HPLC) • Acidos grasos (Gromatografía de gases) • Minerales (Absorción atómica – Espectroscopia de RX) • Análisis microbiológicos y toxicológicos •ORIGEN (Griego): • Bromus: Alimento • Logus: Estudio ANÁLISIS BROMATOLÓGICO Para que? • Acercarse al valor nutricional de un alimento o ingrediente • Aporte de nutrientes (PC, CHO, fibras, lípidos, Minerales) • Aporte energético • Digestibilidad • Preparación de dietas • Diagnostico? • Recomendación de dietas • Desempeño animal • Costos de los nutrientes • Tratamientos (obesidad, deficiencias apáticas, otras) • Disminución de desechos (ambiente, regulatorios, otros) ANÁLISIS PROXIMAL ANTECEDENTES • Einhof (1800): extracción con solventes (éter, alcohol, ácido y álcali) • 1840-1865: análisis en otros alimentos para humanos • 1859-1861: Hennengberg (estación Weende, Alemania) Muestra parcialmente seca y molida Extraído con éter EXTRACTO ETÉREO Ignición CENIZAS Kjeldahl NITRÓGENO * Cenizas Residuo desengrasado Hervido en ácido Residuo Hervido en álcali Cenizas + fibra bruta Ignición FIBRA BRUTA Filtrado Filtrado Desecada a 105oC Humedad MATERIA SECA * Análisis proximal • Materia Seca • Humedad • Extracto etereo • Proteína cruda (kjeldal) • Cenizas • Fibra Cruda • Materia organica (100-cenizas) • ENN (100-EE-PC-Cenizas-FC) Materia seca Secado en horno 105 C (Pf/Pi)*100 H20 Nutrientes diferentes a agua (MS) 20% Materia seca Agua (Humedad 80%) Materia seca - Importancia • Estimar valor de los alimentos libres de agua • Recursos “secos” • Recursos húmedos • Comparar recursos en aporte de nutrientes • Estabilidad de los alimentos • Granos • Henos Ejemplo Alimento MS (%) $ fresco $ seco Papa 20% MS $ 200 ? Arroz 87% MS $800 ? Proteína cruda(PC) (N*6,25) Digestor Destilador NITRÓGENO TOTAL (N*6,25) (NP + NNP) Nitrógeno proteico + no proteico • Método Kjeldahl • No diferencia entre NP y NNP • NNP: Compuestos que contienen nitrógeno: péptidos, amidas, aminas, aa’s no codificables para proteína, urea, bases nitrogenadas • Kjeldahl: • Recomendado: Ingredientes comunes (NNP) • No recomendado para: • proteínas microbianas unicelulares • Productos animales de desecho: gallinaza seca 28% PC, solamente 1/3 N y 2/3 urea Extracto etéreo Lípidos LÍPIDOS • Substancias insolubles en agua pero solubles en éter, cloroformo, benzeno o en otros solventes orgánicos llamados extractores • Grasas, aceites • Compuestos asociados como: esteroles (colesterol), clorofila, aceites volátiles, resinas, pigmentos EXTRACTO ETÉREO (Lípidos) • PRINCIPIO • Extracción de lípidos con solvente, con su posterior recuperación por evaporación y cálculo por pesaje del residuo • DEFINICIÓN EXTRACTO ETÉREO • Grasas, aceites, pigmentos y otras substancias lipídicas solubles contenidas en muestras secas que son extraídos con éter, el cuál es posteriormente evaporado de esta solución grasosa Cenizas Minerales MO CENIZAS O RESIDIUO MINERAL • PRINCIPIO • Producto inorgánico obtenido después de la calcinación de la materia orgánica, cuya composición varia según la naturaleza de la muestra • Si calentamiento > 600oC pérdida de cationes y aniones por volatilización: K, Na, S, Cl y P • Quema materia orgánica CO2 y agua • Componentes: Ca, K, Na, Mg, Fe, Cu, Co, Al, sulfatos, cloretos, silicatos, fosfatos Fibra cruda Celulosa y parte de lignina Porciòn poco digerible FIBRA BRUTA • PRINCIPIO • La muestra seca y desengrasada es digerida soluciones ácida (H2SO4 – 1,25%) y básica (NaOH – 1,25%) durante 30 minutos en cada digestión. FIBRA BRUTA • PRINCIPIO • El residuo orgánico es recibido en crisol de vidrio. • Se calcula la fibra por diferencia de peso del crisol antes y después de la quema del residuo en mufla a 500oC FIBRA BRUTA • FB: Índice de la porción FIBROSA (compuesto no susceptible a degradación enzimas digestivas) en los alimentos • Su determinación es un cálculo aproximado de la fracción indigerible, suponiendo que representa fundamentalmente componentes de pared celular • Celulosa 95%, hemicelulosa, lignina, pectina, quitina • Poco valor energético para monogástricos Análisis proximal • Materia Seca • Humedad • Extracto etereo • Proteína cruda (kjeldal) • Cenizas • Fibra Cruda • Materia organica (100-cenizas) • ENN (100-EE-PC-Cenizas-FC) LIMITANTES ANÁLISIS PROXIMAL • MATERIA SECA • Pérdida de substancias volátiles: ácidos orgánicos de ensilajes subestimación MS • CENIZAS • No identifica minerales individualmente, ni disponibilidad digestiva • Ej: Cascarilla de arroz 15% cenizas, 85% sílica que reduce digestibilidad de otros nutrientes LIMITANTES ANÁLISIS PROXIMAL • PROTEÍNA CRUDA • No identificación de NP (aminoácidos) o NNP (urea) • No todas las proteínas (leche y trigo) poseen 16 g N x 100 g proteína • EXTRACTO ETÉREO • Lípidos subestimados al perder ácidos grasos (ensilajes) al secar la muestra • Incluye ceras que son de baja digestibilidad LIMITANTES ANÁLISIS PROXIMAL • FIBRA BRUTA • Subestima la misma por pérdida de hemicelulosa, y algo de la lignina • No distingue entre CELULOSA (digestible para rumiantes) y LIGNINA (no se aprovecha) • EXTRACTO NO NITROGENADO • Sobreestima cantidades de azúcares y almidones • Pectinas: mejor digeridas por rumiantes • Contiene la hemicelulosa de poca disponibilidad para rumiantes Análisis de Van Soest - Fibras Análisis proximal no reflejaba la calidad de alimentos ricos en fibras (forrajes) Fibra cruda no contiene hemicelulosa Sobre estima el valor nutricional Sub estima nivel de fibra Paredes celulares Hemicelulosa MÉTODO DE FRACCIONES DE FIBRA – VAN SOEST • PRINCIPIOS • Contenido celular (Alta digestibilidad – 98%) • Proteínas, EE, azucares, almidónes, minerales • Completamente digestible y disponible para los animales • Cubre el 30% o más de la MS de forrajes y más del 90% de concentrados • Pared celular (Digestibilidad variable) • Hemicelulosa, celulosa y lignina. . Lignina MÉTODO DE FRACCIONES DE FIBRA – VAN SOEST 1. Tratamiento con DETERGENTE NEUTRO • Solubiliza contenidos celulares y pectinas • Residuo (Fibra en Detergente Neutro) – Cel, hem, lig 2. Tratamiento con DETERGENTE ÁCIDO • Solubiliza hemicelulosa • Residuo (FDA) MÉTODO DE FRACCIONES DE FIBRA – VAN SOEST (1965) 3. FDA es tratada con KMnO4 o H2SO4 72% • Disuelve la lignina • Queda CELULOSA como remanente: estimada por incineración El contenido de los nutrientesespecíficos se estima por DESAPARICIÓN, excepto Lignina SECUENCIA DE DETERMINACIONES QUE CONDUCEN AL CÁLCULO DE LAS FRACCIONES DE FIBRA Muestra Seca – Fibra Detergente Neutro = Contenido Celular Fibra Detergente Neutro – Fibra Detergente Ácido = Hemicelulosa Fibra Detergente Ácido – Lignina Detergente Ácido = Celulosa 100- PC-EE-FDN-cenizas = Carbohidratos no estructurales 10 14 18 22 26 30 20 30 40 50 60 70 FDA Y FDN (MS %) P c (M S % ) FDA FDN Lineal (FDA) Lineal (FDN) Relación entre las Concentraciones de FDA y FDN y la Concentración de Proteína Cruda Rodríguez, 1999 Datos en base seca Contenido de FDN (fibra detergente neutro) en praderas de uso común en Colombia. Grupo de Investigación en Nutrición Animal – Universidad Nacional de Colombia Datos en base seca Grupo de Investigación en Nutrición Animal – Universidad Nacional de Colombia Contenido de FDA (fibra detergente ácido) en praderas de uso común en Colombia. Otros análisis • Fibra dietaría total • Espectroscopia de Infrarrojo Cercano (NIRS) • Amino ácidos (Cromatografía liquida de alto desempeño) (HPLC) • Ácidos grasos (Cromatografía de gases) • Minerales (Absorción atómica – Espectroscopia de RX) • Análisis microbiológicos y toxicológicos Espectroscopía de Infrarrojo cercano (NIRS) (MS, PC, Fibras, otros) Esta técnica se basa en la identificación de los compuestos presentes en una muestra mediante el análisis del espectro que ella emite en el infrarrojo cercano Características • Es una técnica óptica que basa sus resultados en el análisis matemático del comportamiento (Espectro) de la los rayos de luz y en particular los del infrarrojo cercano (800 a 2500 nm) sobre el alimento. • Es una técnica rápida y no destructiva • Permite identificar una gran cantidad de nutrientes o compuestos en una muestra (Proteína, fibras, Extracto Etéreo, amino ácidos, otros) con una sola medición. • Sus resultados deben ser validados contra la química húmeda Esquema de las partes de un espectroscopio de infrarrojo cercano Los picos o valles se asocian a enlaces químicos particulares Espectro de una muestra Los espectros de muestras de un alimento se asocian con los resultados del análisis químicos de los mismos lo cual permite desarrollar ecuaciones de predicción de la composición química del alimento basada en los espectros Técnicas de cromatografía (CG, CL) . Características • La cromatografía incluye una serie de técnicas que permiten separar compuestos presentes en una muestra. Normalmente incluye una fase móvil (Gas, liquido) y una fase estacionaria (resinas, papel, gel,, otras). • La fase móvil transporta, a través de la fase estacionaria, la muestra donde se encuentran los compuestos. Estos se separan de acuerdo a sus propiedades químicas y/o físicas debido a la interacción que ellos tienen con la fase estacionaria. • Después de la separación se identifican los compuestos teniendo como referencia muestras con patrones conocidos Identificación de amino ácidos por Cromatografía Liquida de Alto Desempeño (HPLC) Características • La muestra de alimento se hidrolizan lo que permite tener los amino ácidos de la misma en forma libre y no como parte de la proteína. • La muestra hidrolizada se centrifuga para separar la porción liquida (sobre nadante) del residuo solido de la hidrolisis y se filtra. • Esta muestra liquida que contiene los aminoácidos es derivatizada y posteriormente se inyecta en el cromatógrafo. • Este equipo esta equipado de una fase móvil (liquido) y una estacionaria (Columna con resina C-18) que permite separar los aa. • Al eluir los amino ácidos al final de la columna son detectados por un sistema óptico. • El cromatograma (Grafica del tiempo vs la actividad del detector) permite identificar y cuantificar los amino ácidos en la muestra. Esquema con las partes de un cromatógrafo liquido de alto desempeño Contiene la fase estacionaria Cromatograma Cada pico corresponde a un aa El área de un pico esta asociada a la concentración del aa. Cromatografía de gases (AG) Características • A la muestra se le extrae la grasa. • La grasa de hidroliza y los AG se metílan (Adición de un grupo CH3). • La muestra que contienen los AG metilados se inyecta en el cromatógrafo. • Este equipo esta equipado de una fase móvil (gas) y una estacionaria (Columna) que permite separar los AG. • Al eluir los ácidos grasos (AG) al final de la columna son detectados por un sistema de detección de llama (FID). • El cromatograma (Gráfica del tiempo vs la actividad del detector) permite identificar y cuantificar los ácidos grasos de la muestra. Cromatograma de un cromatógrafo de gases Absorción atómica Minerales Características • La muestra se calcina quedan las cenizas (minerales) • Los minerales en la muestra se solubilizan en una solución acida y se filtra. • La solución filtrada que contiene los minerales se lleva al espectroscopio de absorción atómica. • Este aparato por succión toma parte de la solución y la lleva a un nebulizador que tiene una llama a alta temperatura. • Esta llama al entrar en contacto especifica con el mineral excita las partículas sub atómicas del mineral. • Un haz de luz proveniente de una lampara de cátodo hueco especifica para cada mineral atraviesa la llama . • Un detector identifica la variaciones en el paso del haz de luz por la llama. • Estas variaciones están asociadas a la concentración del mineral en la muestra. Muestra Nebulizador Haz de luz Otros análisis Toxicológicos (Principalmente micotoxinas cuando hay presencia de mohos en los granos) Microbiológicos (Principalmente en materias primas de origen animal para identificar si estas muestras contienen microorganismos patógenos) Ejercicios Otros análisis • Fibra dietaría total • Espectroscopia de Infrarrojo Cercano (NIRS) • Amino ácidos (Cromatografía liquida de alto desempeño) (HPLC) • Acidos grasos (Gromatografía de gases) • Minerales (Absorción atómica – Espectroscopia de RX) • Análisis microbiológicos y toxicológicos Infrarrojo cercano (NIRS) Amino ácidos (Cromatografía liquida de alto desempeño) (HPLC) Cromatografía de gases (AG) Absorción atómica Minerales Otros análisis Tòxicologìcos y microbiológicos Ejercicios Diapositiva 1: Análisis químicos de los alimentos Diapositiva 2 Diapositiva 3: Etiquetas Diapositiva 4: Temario Diapositiva 5: ANÁLISIS BROMATOLÓGICO Diapositiva 6: Para que? Diapositiva 7 Diapositiva 8: ANÁLISIS PROXIMAL Diapositiva 9 Diapositiva 10: Análisis proximal Diapositiva 11: Materia seca Diapositiva 12 Diapositiva 13 Diapositiva 14 Diapositiva 15: Materia seca - Importancia Diapositiva 16: Ejemplo Diapositiva 17 Diapositiva 18: Proteína cruda(PC) Diapositiva 19 Diapositiva 20 Diapositiva 22 Diapositiva 23 Diapositiva 24: NITRÓGENO TOTAL (N*6,25) (NP + NNP) Nitrógeno proteico + no proteico Diapositiva 25: Extracto etéreo Diapositiva 26 Diapositiva 27: LÍPIDOS Diapositiva 28: EXTRACTO ETÉREO (Lípidos) Diapositiva 29 Diapositiva 33: Cenizas Diapositiva 34 Diapositiva 35: CENIZAS O RESIDIUO MINERAL Diapositiva 38: Fibra cruda Diapositiva 39: FIBRA BRUTA Diapositiva 40: FIBRA BRUTA Diapositiva 41: FIBRA BRUTA Diapositiva 44: Análisis proximal Diapositiva 45: LIMITANTES ANÁLISIS PROXIMAL Diapositiva 46: LIMITANTES ANÁLISIS PROXIMAL Diapositiva 47: LIMITANTES ANÁLISIS PROXIMAL Diapositiva 48 Diapositiva 49: Análisis proximal no reflejaba la calidad de alimentos ricos en fibras (forrajes) Diapositiva 50: Fibra cruda no contiene hemicelulosa Diapositiva 51: Paredes celulares Diapositiva 52 Diapositiva 53 Diapositiva 54: MÉTODO DE FRACCIONES DE FIBRA – VAN SOEST Diapositiva 55: MÉTODO DE FRACCIONES DE FIBRA – VAN SOEST Diapositiva 56: MÉTODO DE FRACCIONES DE FIBRA – VAN SOEST (1965) Diapositiva 57: SECUENCIA DE DETERMINACIONES QUE CONDUCEN AL CÁLCULO DE LAS FRACCIONES DE FIBRADiapositiva 58 Diapositiva 59 Diapositiva 60 Diapositiva 64: Otros análisis Diapositiva 65: Espectroscopía de Infrarrojo cercano (NIRS) (MS, PC, Fibras, otros) Diapositiva 66: Características Diapositiva 67 Diapositiva 68 Diapositiva 69 Diapositiva 70 Diapositiva 71: Los espectros de muestras de un alimento se asocian con los resultados del análisis químicos de los mismos lo cual permite desarrollar ecuaciones de predicción de la composición química del alimento basada en los espectros Diapositiva 72: Técnicas de cromatografía (CG, CL) Diapositiva 73: Características Diapositiva 74: Identificación de amino ácidos por Cromatografía Liquida de Alto Desempeño (HPLC) Diapositiva 75: Características Diapositiva 76 Diapositiva 77 Diapositiva 78 Diapositiva 79: Cromatografía de gases (AG) Diapositiva 80: Características Diapositiva 81 Diapositiva 82 Diapositiva 83: Absorción atómica Diapositiva 84: Características Diapositiva 85 Diapositiva 86: Otros análisis Diapositiva 87: Ejercicios Diapositiva 88: Otros análisis Diapositiva 89: Infrarrojo cercano (NIRS) Diapositiva 90: Amino ácidos (Cromatografía liquida de alto desempeño) (HPLC) Diapositiva 91: Cromatografía de gases (AG) Diapositiva 92: Absorción atómica Diapositiva 93: Otros análisis Diapositiva 94: Ejercicios
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