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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA TRABAJO DE TITULACIÓN PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE: MÉDICA VETERINARIA ZOOTECNISTA TEMA “PARASITOSIS GASTROINTESTINAL EN ESPECIES ZOOTÉCNICAS, DIAGNOSTICADAS EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA Y MICROBIOLOGÍA ANIMAL (ESPOCH – RIOBAMBA)” AUTORA LAURA MERCEDES FREIRE BERMÚDEZ TUTOR ACADÉMICO M.V.Z. ROBERTO DARWIN COELLO PERALTA, MSc. Guayaquil, Febrero 2015 ii CERTIFICACIÓN DE TUTORES En calidad de tutores del trabajo de titulación: CERTIFICAMOS Que hemos analizado el trabajo de Titulación como requisito previo para optar por el Título de Tercer Nivel de Médico(a) Veterinario(a) Zootecnista. El trabajo de titulación se refiere a: “PARASITOSIS GASTROINTESTINAL EN ESPECIES ZOOTÉCNICAS, DIAGNOSTICADAS EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA Y MICROBIOLOGÍA ANIMAL (ESPOCH – RIOBAMBA)” Presentado por: Laura Mercedes Freire Bermúdez Cédula # 0930576558 TUTORES _________________________ ________________________ M.V.Z. Roberto Darwin Coello Peralta, Msc. Blgo. Cristóbal Antonio Freire Lascano TUTOR ACADÉMICO TUTOR METODOLÓGICO _______________________________ Dra. María de Lourdes Salazar Mazamba, PhD. TUTOR DE ESTADÍSTICA Guayaquil, Febrero 2015 iii La responsabilidad por las ideas, investigaciones, resultados y conclusiones sustentadas en éste trabajo de titulación corresponden exclusivamente a la autora. LAURA MERCEDES FREIRE BERMÚDEZ iv Dr. Roberto Cassís Martínez, PhD. RECTOR. Dra. María de Lourdes Salazar Mazamba, PhD. DECANA Abgdo. Evert Vidal Arteaga Ramírez SECRETARIO M.V.Z. Roberto Darwin Coello Peralta, Msc. TUTOR ACADÉMICO v “PARASITOSIS GASTROINTESTINAL EN ESPECIES ZOOTÉCNICAS, DIAGNOSTICADAS EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA Y MICROBIOLOGÍA ANIMAL (ESPOCH – RIOBAMBA)” LAURA MERCEDES FREIRE BERMÚDEZ TRABAJO DE TITULACIÓN PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE: MÉDICA VETERINARIA ZOOTECNISTA. Los miembros del Tribunal de Sustentación designados por la Comisión Interna de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, damos por Aprobada la presente investigación con la Nota de ---- ( ---- ), Equivalente a ----------------. Dra. Lucila Sylva Morán, Msc. PRESIDENTE Dra. Lidia Paredes Lozano Dr. Mauricio Valle Garay EXAMINADOR PRINCIPAL EXAMINADOR PRINCIPAL Dr. Agustín Cabrera Rodríguez EXAMINADOR SUPLENTE vi DEDICATORIA A Dios, por ser el dador de mi vida. Tu Santo Espíritu ha sabido guiarme hacia donde Tú me has llamado. Quiero cumplir siempre Tu voluntad y seguir siendo Tu instrumento en Tu perfecto plan. Soy Tu hija, hasta el final. A la Virgen María Auxiliadora, por ser siempre ese auxilio, mi amparo y protección en todo momento, y por siempre guiarme en mi caminar. A mi familia, mis papás: Luis y Mónica, mis hermanos: Lucho y Pochita, por ser simplemente la mejor familia del mundo y por haberme formado en la persona que soy. Mi hogar siempre ha sido un refugio y un ejemplo de amor y dedicación. A mis amigos, quienes han sabido ser un apoyo y con quienes he compartido tantos momentos inolvidables. Se han ganado mi amistad, la cual espero perdure a través del tiempo y la distancia. A la comunidad científica de la medicina veterinaria, zootecnia y demás ramas afines, que día a día se esfuerzan por realizar investigaciones innovadoras que ponen en auge el campo animal en nuestro país y el mundo. vii AGRADECIMIENTO A Dios, por sus infinitas bendiciones. Es tan hermoso ver como cada día recibo una nueva bendición Tuya. No hay palabras que describan mi gratitud. Sin Ti, no soy nada. Contigo, lo soy todo. A la Virgen María Auxiliadora, por mantenerme protegida y segura con su Santísimo manto, y por siempre permitirme hallar en Ella un consuelo. A mi familia, por haber sido mi apoyo constante y por haberme inculcado desde pequeña el amor y respeto por el mundo animal. A mis amigos, por las risas, locuras y todos los momentos compartidos, pero de igual forma, por sus sinceros consejos y por haberme escuchado cuando lo he necesitado. A mis tutores, por su paciencia, consejos, correcciones y ayuda constante durante la realización de mi trabajo de titulación. A todos mis queridos docentes, los cuales durante mis cinco años de estudios, supieron fomentar aún más en mí la pasión y amor por cada uno de los campos que abarca la medicina veterinaria. A las autoridades de la ESPOCH, en particular de la Facultad de Ciencias Pecuarias, por haberme permitido realizar mis pasantías y mi trabajo de titulación en dicha institución. Al Ing. René Carvajal Msc., Ing. Byron Díaz Msc., PhD., y a todo el equipo de trabajo del LABIMA, por haberme hecho sentir como en casa durante mi estadía en Riobamba, por impartirme sin egoísmo todos sus conocimientos y aportes científicos, y por haberme permitido crecer como profesional y futura docente, al brindarme todas esas grandes oportunidades. viii PENSAMIENTO El plan de Dios es siempre perfecto. ix ÍNDICE DEDICATORIA VI AGRADECIMIENTO VII PENSAMIENTO VIII ÍNDICE IX ÍNDICE DE TABLAS XIII ÍNDICE DE GRÁFICOS XIV INDICE DE ANEXOS XV INTRODUCCIÓN 1 1.1. PROBLEMA 3 1.2. OBJETO 3 1.3. CAMPO DE ACCIÓN 3 1.4. OBJETIVOS 4 1.4.1. Objetivo general. 4 1.4.2. Objetivos específicos. 4 1.5. VARIABLES 4 1.5.1. Variables independientes. 4 1.5.2. Variables dependientes. 4 1.6. HIPÓTESIS 5 1.6.1. Hi: 5 1.6.2. Ho: 5 II. MARCO TEÓRICO 6 2.1. GENERALIDADES DE LAS PARASITOSIS GASTROINTESTINALES 6 x 2.2. PROTOZOOS GASTROINTESTINALES 7 2.3. HELMINTOS GASTROINTESTINALES 8 2.3.1. Phylum PLATHELMINTHES. 8 2.3.1.1. Clase TREMATODES. 8 2.3.1.2. Clase CESTODES. 9 2.3.2. Phylum NEMATHELMINTHES. 9 2.4. HABITAT Y LOCALIZACIÓN GENERAL 10 2.5. CICLO BIOLÓGICO 11 2.6. PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA 13 2.7. INMUNIDAD 14 2.8. TRANSMISIÓN 17 2.9. SINTOMAS Y ALTERACIONES ANATOMOPATOLÓGICAS 18 2.10. EFECTOS SOBRE LA PRODUCCIÓN 19 2.11. IMPORTANCIA COMO ZOONOSIS PARASITARIA 19 2.12. DIAGNÓSTICO 20 2.12.1. Diagnóstico por examen coproparasitario. 20 2.12.2. Método de frotis directo. 21 2.12.3. Métodos de concentración. 21 2.12.3.1. Método de flotación. 21 2.12.3.2. Método de sedimentación. 22 2.13. TRATAMIENTO 23 2.14. PREVENCIÓN Y CONTROL 23 III. MATERIALES Y MÉTODOS 25 3.1. CARACTERÍSTICAS DEL ÁREA DE ESTUDIO 25 3.1.1. Localización de la investigación. 25 3.1.2. Características de la zona de trabajo. 25 3.1.2.1. Ubicación geográfica y política. 25 3.1.2.2. Condiciones climáticas. 26 xi 3.2. MATERIALES 26 3.2.1. De laboratorio. 26 3.2.1.1. Materiales y reactivos. 26 3.2.1.2. Equipos. 27 3.2.2. De oficina. 27 3.2.2.1. Materiales. 27 3.2.2.2. Equipos. 28 3.2.3. Semovientes. 28 3.2.4. Personal. 293.3. METODOLOGÍA DE TRABAJO 29 3.3.1. Duración del ensayo. 29 3.3.2. Tipo de investigación. 29 3.3.3. Diseño estadístico de la investigación. 29 3.3.3.1. Población. 29 3.3.3.2. Tamaño de la muestra. 30 3.3.3.3. Análisis estadístico. 31 3.3.4. Diagnóstico de laboratorio. 32 3.3.4.1. Técnicas coproparasitarias de concentración. 32 3.3.4.1.1. Método de flotación. 32 3.3.4.1.2. Método de sedimentación simple. 34 3.3.4.2. Interpretación e identificación. 35 IV. RESULTADOS 37 4.1. IDENTIFICACIÓN DE PARASITOSIS GASTROINTESTINALES EN ANIMALES DE ESPECIES ZOOTÉCNICAS, DIAGNOSTICADAS EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA Y MICROBIOLOGÍA ANIMAL (ESPOCH – RIOBAMBA). 37 4.2. DETERMINACIÓN DE PARÁSITOS GASTROINTESTINALES EN MUESTRAS DE HECES DE ANIMALES MEDIANTE EL MÉTODO DE FLOTACIÓN Y SEDIMENTACIÓN. 38 4.3. CORRELACIÓN DE LOS CASOS POSITIVOS. 39 Con respecto a la procedencia. 39 Con respecto al sexo 42 Con respecto a la edad 43 Con respecto a la especie zootécnica animal 44 Con respecto a la especie de parásito 46 Con respecto a las especies de parásitos de importancia zoonósica. 49 xii V. DISCUSIÓN 51 VI. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 55 6.1. CONCLUSIONES 55 6.2. RECOMENDACIONES 57 VII. RESUMEN 58 VIII. SUMMARY 59 IX. BIBLIOGRAFÍA 60 X. ANEXOS 65 xiii xiii ÍNDICE DE TABLAS TABLA # TÍTULO PÁGINA # 1 Identificación en porcentaje de parasitosis gastrointestinales en animales de especies zootécnicas, diagnosticadas en el Laboratorio de Biotecnología y Microbiología Animal (ESPOCH – Riobamba). 37 2 Determinación en porcentaje de parásitos gastrointestinales en muestras de heces de animales mediante el método de flotación y sedimentación. 38 3 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la procedencia. 40 4 Animales zootécnicos con respecto a la procedencia. 41 5 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto al sexo. 42 6 Animales zootécnicos con respecto al sexo. 43 7 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la edad. 44 8 Animales zootécnicos con respecto a la edad. 44 9 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto al animal zootécnico. 45 10 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la especie de parásito. 47 11 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la especie de parásito (grupo). 48 12 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a las especies de parásitos de importancia zoonósica. 50 xiv xiv ÍNDICE DE GRÁFICOS GRÁFICO # TÍTULO PÁGINA # 1 Identificación en porcentaje de parasitosis gastrointestinales en animales de especies zootécnicas, diagnosticadas en el Laboratorio De Biotecnología y Microbiología Animal (ESPOCH – Riobamba). 38 2 Determinación en porcentaje de parásitos gastrointestinales en muestras de heces de animales mediante el método de flotación y sedimentación. 39 3 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la procedencia. 41 4 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto al sexo. 42 5 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la edad. 44 6 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la especie zootécnica animal. 46 7 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la especie de parásito. 48 8 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la especie de parásito (grupo). 49 9 Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a las especies de parásitos de importancia zoonósica. 50 xv xv INDICE DE ANEXOS ANEXO # TÍTULO PÁGINA # I Clasificación taxonómica de los protozoos gastrointestinales. 65 II Protozoos gastrointestinales de importancia en especies zootécnicas. 65 III Ooquistes de protozoos gastrointestinales. 66 IV Clasificación taxonómica de los Nematelmintos y Platelmintos. 67 V Platelmintos gastrointestinales de importancia en especies zootécnicas. 68 VI Huevos de platelmintos gastrointestinales. 68 VII Nematelmintos gastrointestinales de importancia en especies zootécnicas. 69 VIII Huevos de nematelmintos gastrointestinales. 70 IX Ciclos biológicos de los endoparásitos. 71 X Ciclo biológico típico de parásitos estrongilados. 71 XI Dosis de fármacos antiparasitarios (Antiprotozoarios). 72 XII Dosis de fármacos antiparasitarios (Antihelmínticos). 73 XIII Información para determinar el tamaño de la muestra correspondiente a una población específica. 74 XIV Cálculo del tamaño de la muestra. 76 XV Análisis de sensibilidad. 77 xvi xvi XVI Tablas y gráficos del número de animales zootécnicos con respecto a la procedencia. 78 XVII Tablas y gráficos del número de animales zootécnicos con respecto al sexo. 84 XVIII Tablas y gráficos del número de animales zootécnicos con respecto a la edad. 90 XIX Tabla de X 2 (Chi Cuadrado). 96 XX Evaluación de casos positivos mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para el sexo. 97 XXI Evaluación de casos positivos mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para la edad. 98 XXII Evaluación de casos positivos mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para la procedencia. 99 XXIII Evaluación de casos positivos mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para la especie de parásito. 100 XXIV Evaluación de casos positivos mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para el animal zootécnico. 101 XXV Evaluación de casos positivos mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para la importancia zoonósica. 102 XXVI Hoja de registro de ingreso de muestras. 103 XXVII Hoja de registro de laboratorio. 104 xvii xvii XXVIII Hoja de registro de diagnóstico. 105 XXIX Tabla de registro de los animales muestreados. 106 XXX Cronograma de planificación para la realización del trabajo de titulación. 118 XXXI Ubicación en el mapa político de los distintos lugares de procedencia de las muestras receptadas. 119 XXXII Documento - certificado del Laboratorio de Microbiología y Biotecnología Animal (Facultad de Ciencias Pecuarias - ESPOCH). 120 XXXIII Fotografías de la recepción y registro de las muestras de heces en el laboratorio. 121 XXXIV Fotografías del diagnóstico realizado empleando el método de flotación. 122 XXXV Fotografías del diagnóstico realizado empleando el método de sedimentación. 124 XXXVI Fotografías de huevos y ooquistes de los parásitos gastrointestinales muestreados. 125 1 INTRODUCCIÓN Ecuador es un país de clima tropical, con una privilegiada ubicación geográfica, en la que cuenta con una gran variedad de clima en sus cuatro regiones: costa, sierra, oriente e insular. Dichas condiciones climáticas, de temperatura y humedad varían debido a la influencia de las corrientes: Fría de Humboldt y la cálida del Niño, así como también del páramo andino, lo que permite que se diferencien dos estaciones al año, como son el verano y el invierno. En esta gran variedad de clima se presenta una gran biodiversidad de especies tanto vegetales como animales que junto con el humano, interaccionan en un ecosistema muy complejo, sumado a esto la presencia de bacterias, hongos y parásitos, estos acontecimientos hacen que exista el riesgo deque se presenten enfermedades que afectan tanto a especies animales, como al hombre; una de ellas es el parasitismo gastrointestinal, en especial aquellos que tienen comportamiento zoonósico (Vallat, 2014). Los parásitos al igual que otros agentes patógenos, cuentan con extraordinaria variabilidad genética lo que les permite evadir el sistema inmunológico de su hospedero, provocando enfermedades que presentan síntomas y signos como pérdida del apetito, baja conversión alimenticia, diarrea, deshidratación, disminución en la producción, debilidad, pelo áspero, anemia, abdomen hinchado, entre otros, causando serios problemas económicos y de salud en los animales. 2 En la búsqueda por combatir estos efectos, existen programas preventivos que incluyen desparasitaciones y análisis parasitológicos constantes, los cuales permiten mantener un control de la parasitosis aplicando la profilaxis respectiva para la misma. Generalmente las parasitosis gastrointestinales en especies de animales de importancia zootécnicas, son producidas por helmintos, y protozoarios, siendo los más frecuentes Ostertagia sp., Strongyloides sp., Trichostrongylus sp., Cooperia sp., Haemonchus contortus, Trichuris sp., Nematodirus sp., Oesophagostomum sp., entre otros. Estudios realizados en bovinos existentes en distintas localidades de Perú, determinaron que la prevalencia global de parasitismo gastrointestinal, por uno o más géneros nemátodos, fue de 67.5% (Colina, Mendoza, & Jara, 2013). En Ecuador, estas enfermedades se mantienen presentes debido a las condiciones del ambiente, del parásito y del hospedero, facilitando su desarrollo y evolución constante, produciendo frecuentemente brotes en animales de diversas zonas del país. La presente investigación permitió reconocer la presencia de parásitos gastrointestinales en muestras de heces de especies animales que habitan en Riobamba y/o zonas aledañas, identificándose además la existencia de aquellos que son de importancia zoonótica. 3 1.1. PROBLEMA La parasitosis gastrointestinal es un problema que afecta a los animales a nivel mundial. Esto se debe a que los parásitos poseen una acción patógena, la cual provoca daños de forma indirecta y/o directa en los hospederos. Existen diversas especies de parásitos de importancia zoonótica, que pueden acarrear serios problemas a los seres humanos, por lo que existe el riesgo de que estas patologías se mantengan latentes o que por las constantes exposiciones, causen también epidemias, generando pérdidas económicas y perjuicios sanitarios tanto en personas como animales. 1.2. OBJETO Formas de dispersión de los parásitos gastrointestinales en las muestras de heces de especies zootécnicas receptadas en el laboratorio. 1.3. CAMPO DE ACCIÓN Laboratorio de Biotecnología y Microbiología Animal (LABIMA) de la Facultad de Ciencias Pecuarias de la Escuela Superior Politécnica de Chimborazo. Riobamba. 4 1.4. OBJETIVOS 1.4.1. Objetivo general. Identificar parasitosis gastrointestinales en animales de especies zootécnicas, diagnosticadas en el Laboratorio de Biotecnología y Microbiología Animal (ESPOCH – Riobamba). 1.4.2. Objetivos específicos. Determinar parásitos gastrointestinales en muestras de heces de animales mediante el método de flotación y sedimentación. Correlacionar los casos positivos con respecto a la procedencia, sexo, edad, animal zootécnico, especies de parásitos y especies de parásitos de importancia zoonósica. 1.5. VARIABLES 1.5.1. Variables independientes. Procedencia, sexo, edad, animal zootécnico. 1.5.2. Variables dependientes. Parásitos gastrointestinales. 5 1.6. HIPÓTESIS 1.6.1. Hi: Si existen casos de parasitosis gastrointestinal en muestras de heces de especies zootécnicas receptadas en el Laboratorio de Biotecnología y Microbiología Animal (ESPOCH – Riobamba). 1.6.2. Ho: No existen casos de parasitosis gastrointestinal en muestras de heces de especies zootécnicas receptadas en el Laboratorio de Biotecnología y Microbiología Animal (ESPOCH – Riobamba). 6 II. MARCO TEÓRICO 2.1. GENERALIDADES DE LAS PARASITOSIS GASTROINTESTINALES Las parasitosis gastrointestinales (también conocidas como PGI) son infestaciones producidas por enteroparásitos, los cuales son un grupo de endoparásitos localizados en el tracto digestivo o gastrointestinal, en donde encuentran las condiciones y el alimento necesarios para su subsistencia, es decir para su desarrollo y maduración (Gállego, 2007). Los PGI obligatoriamente necesitan de un hospedero para sobrevivir, así como también de un medio ambiente óptimo. Pueden afectar a todas las especies zootécnicas conocidas, como son bovinos, ovinos, caprinos, porcinos, camélidos, roedores, lagomorfos y aves de corral. Existen muchos casos en los que se presenta el multiparasitismo, o presencia de diferentes especies de parásitos alojados en un solo hospedero (United States Department of Agriculture [USDA], 2007); o el poliparasitismo, que se refiere a la existencia de una gran cantidad de parásitos de la misma especie, muchas veces ubicados en el mismo o en distintos órganos del hospedador. Algunas de estas infestaciones parasitarias pueden ocasionar enfermedades clínicas y sub-clínicas, pero es importante destacar que algunos parásitos son perjudiciales para el hospedero, en especial cuando se hallan en cantidades suficientes, lo que provoca una infestación que en ocasiones puede causar la muerte. 7 De los parásitos gastrointestinales que provocan perjuicios en estas especies animales, se conocen dos grandes grupos: los protozoos (unicelulares) y los metazoos o helmintos (pluricelulares). 2.2. PROTOZOOS GASTROINTESTINALES La mayoría de los protozoos suelen ser organismos de vida libre, y solo una pequeña parte de los que parasitan a los animales domésticos y silvestres producen enfermedades (Bowman, 2010). Por lo general las patologías provocadas por estos protozoarios son consecuentes a una infección masiva de estos parásitos o a una interacción entre la infección y el estrés que podrían tener los animales (Bowman, 2010). Algunos de estos protozoos son PGI de un gran número de hospedadores vertebrados, el ciclo vital de los mismos incluye la reproducción tanto sexual como asexual. La multiplicación sexual termina con el desarrollo de los ooquistes, los cuales son eliminados con las heces, y en la posterior formación de ocho formas infectantes (cuatro esporozoitos) en cada uno de estos ooquistes, las cuales diseminarán la infección (Bowman, 2010). Los géneros más importantes de protozoos gastrointestinales son Eimeria, Cryptosporidium e Isospora, pertenecientes a la subclase COCCIDIASINA, también conocidos como parásitos coccidios, los cuales abarcan varias especies que ocasionan enfermedades gastrointestinales a los animales y al hombre (Anexo II, II y III ). http://es.wikipedia.org/wiki/Coccidiasina 8 2.3. HELMINTOS GASTROINTESTINALES El término helminto (gusano), se emplea para referirse a aquellos parásitos que tienen su cuerpo blando y largo. Existen tres clases de helmintos de mayor importancia veterinaria: nemátodos (áscaris), céstodos (tenias) y tremátodos (dístomas); de los cuales, los dos primeros se detectan mayormente en estudios de parasitosis gastrointestinales. Por su parte, Bowman (2010) manifiesta que: ‘‘los helmintos incluyen los Platelmintos (vermes planos, tremátodos, y céstodos), Nematelmintos o nemátodos (vermes redondos), Acantocéfalos y Anélidos’’. De lo anteriormente expuesto, y previo al respectivo análisis, se considera a los parásitos que se describen a continuación, como los más importantes para elreferido estudio (Anexo IV). 2.3.1. Phylum PLATHELMINTHES. Estos parásitos son hermafroditas y tienen su cuerpo blando y aplanado dorso-ventralmente. Los tremátodos adultos se ubican en los vasos sanguíneos, intestino, pulmones, conductos biliares y otros órganos de sus hospederos vertebrados finales; mientras que los céstodos adultos se localizan en el intestino, y sus formas de larvas parasitan diversos invertebrados o vertebrados (Bowman, 2010) (Anexo V). 2.3.1.1. Clase TREMATODES. En esta clase se encuentran los parásitos de la familia PARAMPHISTOMIDAE, cuyo género más estudiado es el Paramphistomum, y la familia FASCIOLIDAE, cuya especie más representativa y una de las de mayor importancia zoonótica a nivel mundial es 9 la Fasciola hepática. La mayoría de huevos de tremátodos, son arrastrados a la luz intestinal para luego salir al exterior con las heces (Bowman, 2010) (Anexo VI). 2.3.1.2. Clase CESTODES. El ciclo evolutivo de estos parásitos es indirecto, y se cumple, en general, con participación de uno o dos hospedadores intermediarios. Según la especie de céstodo, las larvas quísticas pueden adquirir formas de: cisticerco, cenuro o quiste hidatídico. Los parásitos del género Moniezia son los más representativos (Vignau & et al, 2005) (Anexo VI). 2.3.2. Phylum NEMATHELMINTHES. Los nemátodos son parásitos de vida libre y parasitaria que carecen de segmentación, tienen forma cilíndrica con los extremos aguzados, y tamaño variable (muchos miden más de un metro, mientras que otros superan el milímetro). Su cuerpo está cubierto por una cutícula que les brinda el característico aspecto anillado. Los huevos se pueden identificar por su contenido de uno o más blastómeros, presencia de mórula o larva, estructura de las cáscaras, entre otros. La eclosión de los huevos tiene lugar dentro del hospedador o en el medio ambiente con las condiciones adecuadas (Vignau & et al, 2005). En su mayoría, los huevos de los nematelmintos son expulsados con las heces fecales de los animales, es por esto que en el diagnóstico coproparasitario la fase de huevos es la que está presente al momento de su observación al microscopio. Por este motivo, considero importante solo 10 describir las características de este estadio biológico, sin profundizar en el estudio y mención de las fases larvarias (Anexo VII). La mayoría de los parásitos nemátodos de importancia gastrointestinal pertenecen al orden STRONGYLIDA. Es importante recalcar lo que nos señala Bowman (2010) acerca de las hembras de las superfamilias STRONGYLOIDEA, TRICHOSTRONGYLOIDEA y ANCYLOSTOMATOIDEA: ‘‘poseen los típicos huevos estrongilados, huevos de superficie lisa y cápsula elipsoidal que contienen un embrión en fase de mórula cuando se depositan y se eliminan con las heces’’. Es correcto por lo tanto, referirse a estos huevos como estrongílidos o estrongilados al momento de su identificación. Entre los más importantes se encuentran los géneros: Strongylus, Oesophagostomum, Chabertia, Trichostrongylus, Ostertagia, Haemonchus, Cooperia, Nematodirus y Bunostomum (Quiroz, 1990). Por otra parte, el género más representativo del orden RHABDITIDA es el Strongyloides; del orden ASCARIDIDA se encuentran los géneros: Ascaris, Toxocara, Parascaris, Ascaridia y Heterakis, mientras que los géneros más relevantes del orden ENOPLIDA son Trichinella y Trichuris (Quiroz, 1990) (Anexo VIII). 2.4. HABITAT Y LOCALIZACIÓN GENERAL El tracto digestivo, desde la boca hasta el recto, es uno de los sitios más concurridos por los endoparásitos, los cuales pueden ubicarse tanto en el lumen como en las capas mucosa, submucosa, muscular y serosa de los órganos. La localización en los distintos tramos del aparato digestivo, está asociada a las 11 características fisicoquímicas del lumen, ambiente de aerobiosis y anaerobiosis, de inmunidad intestinal, del sistema linfoide, respuesta inmune, entre otros (Quiroz, 1990). Entre las ventajas que hallan los parásitos en este hábitat es la existencia del mismo medio que constituye su fuente principal de nutrientes, obteniéndolos a través de su tubo digestivo, a través de su revestimiento corporal, o usando la sangre del hospedador que obtienen provocando micro traumatismos en las paredes de los órganos, afectando a los vasos sanguíneos que los irrigan. De igual manera encuentran desventajas, como las constantes modificaciones del contenido gastrointestinal, la presencia de enzimas digestivas, los movimientos peristálticos y el tránsito intestinal ininterrumpido que ejerce una acción de arrastre la cual tiende a eliminarlos por vía anal, entre otros. Frente a esto, los parásitos han debido desarrollar tácticas para superarlos, como la presencia de estructuras de fijación (ganchos, ventosas), revestimientos cuticulares resistentes, secreción de antienzimas, entre otras (Gállego, 2007). El éxito de estas y otras estrategias por parte de estos microorganismos, es la razón de que el tracto gastrointestinal, sea el medio orgánico elegido como hábitat predilecto por la mayoría de endoparásitos. 2.5. CICLO BIOLÓGICO El ciclo vital de la mayoría de los PGI suele ser directo, y está divido en fases: una etapa externa o exógena, en las que las fases del parásito se hallan en el medio ambiente; así como una etapa interna o endógena, que inicia con la llegada 12 del hospedador (definitivo o intermediario), y continúa con las posibles migraciones hasta hallar una localización definitiva en el órgano donde consiguen su madurez reproductiva (Cordero del Campillo & et al, 2001). La etapa exógena empieza con la expulsión de los huevos en las heces del animal al exterior. En condiciones óptimas de oxígeno, humedad (80%) y temperatura (20ºC), los huevos eclosionan dando origen a larvas L1, lo cual se estima que dura alrededor de siete a diez días. Luego estas L1 pasan a ser larvas L2 desprendiéndose de su cubierta protectora, para luego sufrir una segunda muda para transformarse en larva L3 o estadio infestante. La L1 y L2, dependen de sus reservas alimenticias para sobrevivir, por lo que al agotarse las mismas, mueren (Soulsby, 1987). La L3 infestante es activa, por lo que migra de las heces hacia los tallos y hojas de los pastos, infestando a los animales que las consumen. Según Borchert (1968): ‘‘la migración de las larvas suele ser mínima durante el día y de máxima intensidad en la noche’’. La fase endógena empieza con la ingestión de la L3, y termina con el desarrollo de los parásitos, reproducción y producción de huevos. En el interior del sistema digestivo ocurre un incremento del pH por lo que la L3 muda y penetra la membrana mucosa o entran en las glándulas gástricas, donde se convierten en L4, permaneciendo aquí entre 10 y 14 días, pudiendo inhibir temporalmente su desarrollo debido a las condiciones fisiológicas adversas. Posteriormente las L4 dejan la mucosa y se alojan en el lumen de los distintos órganos, transformándose en L5, para luego volverse parásitos adultos hembras o machos (Vázquez, 2000). Soca, Roque & Soca (2005) afirman que algunas larvas pueden completar su ciclo hasta parásito adulto, y otras permanecen en la mucosa de sus órganos, 13 donde pueden formar nódulos, morir y calcificarse. Cuando las condiciones se vuelven favorables, los huevos salen, estableciendo así un nuevo ciclo evolutivo. (Anexos IX y X). El periodo prepatente es aquel que transcurre entre la entrada de la forma infestante hasta el inicio de la eliminación de huevos, el cual dependiendo del género, puede variar entre los 15 y 45 días (Angulo-Cubillán, 2005). 2.6. PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA Existen diversos factores de patogenicidad: intrínsecos o dependientes del parásito y factores extrínsecos o dependientes del hospedero (Gállego,2007). Los PGI pueden ejercer distintos tipos de acciones nocivas en los hospedadores, como son la mecánica, exfoliadora y tóxica. La acción mecánica se produce por el desarrollo que alcanzan y la cantidad de parásitos presentes, los cuales pueden causar fenómenos de obstrucción o comprensión de los órganos del hospedero al que atacan; de igual forma los endoparásitos traumatizan la mucosa de los órganos y tejidos de los hospederos con sus órganos de fijación (ganchos, ventosas, cápsula bucal) lo cual muchas veces ocasiona infestaciones secundarias, que en la mayoría de casos son más graves y peligrosas que las parasitosis que las originaron (Quiroz, 1990). Con la acción exfoliadora, los endoparásitos sustraen al hospedero, para su alimentación, una gran cantidad de sustancias nutritivas, que en la mayoría de los 14 casos, pueden provocar un grave desequilibrio en la salud de sus hospedadores (Quiroz, 1990). La acción tóxica, se deriva de los fenómenos de desasimilación y desintegración de los parásitos, e incluso de la segregación por parte de los mismos de verdaderas toxinas y metabolitos que producen graves daños al hospedador (Quiroz, 1990). Por otra parte la virulencia de un determinado PGI va a condicionar su capacidad para establecer una infestación. Esta depende de las cepas patógenas o de alguna mutación de la misma, así como de la colonización y de la capacidad invasiva para diseminarse y destruir los tejidos del hospedero (Gállego, 2007). 2.7. INMUNIDAD Algunas enfermedades parasitarias son capaces de alterar el estado inmunitario del hospedador y permitir la actividad y multiplicación del parásito que, en circunstancias normales para el hospedero, estaría controlada (Gállego, 2007). Los animales tardan en desarrollar defensas frente a los parásitos gastrointestinales, entre estos, los animales jóvenes, que poseen muy pocas posibilidades de contrarrestar el efecto perjudicial de los parásitos, siendo esta una de las categorías más afectadas (Montico, Rodríguez, & Iglesias, s.f.). 15 La acción patógena desarrollada por los parásitos puede ser en muchos casos frenada o anulada por las reacciones inmunes específicas e inespecíficas llevadas a cabo por el hospedador. Este desarrolla mecanismos de tipo defensivo e inmunitarios de hipersensibilidad frente a las substancias extrañas del parásito, los cuales se llevan a cabo a pesar de provocar muchas veces un daño tisular en el mismo (Gállego, 2007). Cuando un parásito entra a un organismo, este lo reconoce como agente extraño e intenta eliminarlo, por lo que el microorganismo pone en funcionamiento una serie de elementos para evadir el ataque y permanecer en los hospederos, entre los cuales Saredi (2002) menciona los siguientes: Producción de variaciones antigénicas en la membrana: En la superficie del parásito, existen glicoproteínas que funcionan como antígenos (Ag), los cuales son elaborados al penetrar en el organismo, ante esto, el hospedero responde elaborando anticuerpos, pero la mayoría de veces, cuando estos llegan al parásito, ya se produjo una variante en el código genético de las glicoproteínas, impidiendo que sean atacados. Reclusión: Los parásitos se localizan en zonas de difícil acceso para el sistema inmune: en el interior de las células, formando quistes, o en órganos que poseen baja respuesta inmune. Rapidez de multiplicación: algunos parásitos pueden cambiar rápidamente de un estadio a otro, con una velocidad mayor, que la del hospedero para elaborar anticuerpos, de manera que al atacar al microorganismo, no reconoce sus nuevos Ag. Liberación de factores bloqueantes: el hospedero elabora anticuerpos para eliminar al parásito, y este responde liberando al medio sustancias bloqueantes que los inactivan. 16 Existen también, factores propios del parásito que influyen en la respuesta inmune del hospedador, como son: tamaño, localización, migración y multiplicación del parásito, fecundidad, resistencia, adaptación y especificidad parasitaria. Una vez que el parásito entra en el hospedero, este desarrolla una respuesta inmunológica en la que participan anticuerpos, células efectoras y complemento. Existen por lo tanto distintos tipos de comportamientos del hospedador relacionados con la inmunidad: Inmunidad esterilizante: el parásito enferma al hospedero, luego este se recupera clínicamente y queda inmune frente ese microorganismo, evitando que se produzca una re-infestación. Inmunidad concomitante: se refiere al estado de inmunidad del hospedador a la re-infestación, inducida por la presencia de una población parasitaria tolerada por el hospedador, contra una sobrecarga de la misma población. Esto no destruye los organismos. La inmunidad desaparece cuando son eliminados los parásitos, permitiendo que nuevamente el hospedero sea susceptible. Inmunidad innata: presente en un organismo desde su nacimiento, comprende diversos factores como la edad, genética, y las barreras naturales como la piel y las mucosas. Inmunodepresión: La respuesta inmune se encuentra disminuida o inhibida en forma temporal, favoreciendo la permanencia y reproducción de los parásitos. De igual forma, existen mecanismos especializados por parte del hospedero, para contraatacar el daño de los parásitos. Es así como, en el caso de los protozoos, los anticuerpos séricos contra los Ag de superficie de los mismos 17 pueden: aglutinarlos o inmovilizarlos, inhibir su reproducción o en algunos casos eliminarlos en acción conjunta con células citotóxicas y el sistema de complemento. En caso de los helmintos parásitos es diferente, ya que estos se han adaptado evolutivamente al parasitismo, lo cual ha implicado enfrentarse y superar al sistema inmunitario del hospedador. Es por esto que debido a mayor exposición, menor resistencia y mayor susceptibilidad, la mayoría de los hospedero albergan pocos gusanos, los cuales casi siempre producen enfermedad leve o subclínica, u ocasionan morbilidad, muy rara vez mortalidad (Saredi, 2002). 2.8. TRANSMISIÓN El mecanismo de transmisión se da por contacto directo, siendo el más frecuente la vía oral-fecal. La vía de entrada predilecta para los enteroparásitos, es el contacto y penetración por vía oral, el cual se produce de forma accidental, cuando el hospedero ingiere agua, suelo o alimentos vegetales o animales, en los cuales están presentes las formas infestantes del parásito ya sea quistes y ooquistes de protozoos, huevos embrionados, larvas de helmintos, entre otros (Gállego, 2007). Por otro lado, para lograr el paso a un nuevo hospedero indispensable para la continuación de sus ciclos vitales y con ello su supervivencia, los parásitos desarrollan estadios o fases que son capaces de abandonar al hospedero, asegurando con esto una ruta de evacuación para las mismas. En el caso de los PGI, la vía de salida de elección es la rectal o anal. 18 2.9. SINTOMAS Y ALTERACIONES ANATOMOPATOLÓGICAS Las alteraciones que provocan estos parásitos, generan la aparición de múltiples signos, síntomas y lesiones, los cuales se detallan a continuación: Inapetencia, pérdida de peso, letargia, distensión abdominal, deshidratación, diarrea, pelo hirsuto (largo, quebradizo y seco), mucosas pálidas, edemas y aumento de la frecuencia cardiaca y respiratoria; todo esto acompañado de anemias. En fases terminales de la enfermedad se observa emaciación y muerte del animal. Al momento de la necropsia, en el cadáver se observa emaciación, palidez de mucosas y órganos, edema en cavidades corporales, ganglios linfáticos locales aumentados, mucosas edematosas con úlceras, presencia de nódulos y posible observación de parásitos adultos. En el estudio histopatológico se observa atrofia de las vellosidadesintestinales, incremento de eosinófilos y mastocitos y glándulas de la mucosa dilatadas con posible presencia de estadios parasitarios (Angulo-Cubillán, 2005). En el caso específico de las protozoosis gastroentéricas, el signo clínico más común es la diarrea, que puede ser intermitente o acuosa y profusa, con mucus y pocas veces con presencia de sangre; esto se da como resultado de la destrucción del epitelio gastrointestinal debido a la multiplicación de multitud de parásitos (Bowman, 2010). Esta diarrea, también puede estar acompañada de anorexia, fiebre, deshidratación, dolor abdominal, debilidad y pérdida de peso. En el caso de algunos protozoos y céstodos, se pueden observar la presencia de quistes o estadios larvarios calcificados (González, Madrid, & Soto, 2008). La aparición de estos síntomas puede variar de leve a grave, generando cursos agudos o crónicos. Esto depende de varios factores como: el tipo de 19 infestación (simple o mixta), predominancia de un género específico, presencia de enfermedades adicionales, carga parasitaria y respuesta del hospedero frente al parásito (Angulo-Cubillán, 2005). 2.10. EFECTOS SOBRE LA PRODUCCIÓN La disminución en la ganancia de peso de los animales adultos, así como la mortalidad en los jóvenes, son considerados los efectos más representativos que causan estos parásitos sobre la producción animal. Todos los tipos de producción de las especies zootécnicas, como son carne, leche, lana, entre otros, se ven afectados por estas enfermedades. El retardo en la ganancia de peso va a incrementar el tiempo de estadía del animal en la explotación, así como el retraso del inicio de la vida reproductiva del mismo, lo que provoca un aumento de los costos de producción, acarreando por lo tanto pérdidas significativas para los productores (Angulo- Cubillán, 2005). 2.11. IMPORTANCIA COMO ZOONOSIS PARASITARIA Algunos de los PGI son zoonóticos, es decir que se transmiten de los animales vertebrados al hombre y viceversa; esto es importante debido a sus repercusiones en la economía y en la salud humana y animal, en especial si las mismas involucran a los animales de abasto. Estas parasitosis se presentan en la mayoría de casos de forma mixta, en donde los géneros que predominan varían de acuerdo a diversos factores y condiciones de manejo en cada explotación animal (Comité mixto FAO/OMS de expertos en zoonosis, 1969) y (Naquira, 2010). 20 La prevalencia e intensidad de estas infestaciones parasitarias en el mundo presentan variaciones considerables de distribución y aparición estacional a causa de factores geográficos y climáticos y de actividades tanto animales como humanas, así como la posibilidad de erradicar o controlar las mismas (Organización Mundial de la Salud [OMS], 1981). Así mismo, las parasitosis gastrointestinales son una de las enfermedades transmisibles más difíciles de controlar, esto se debe no solo a su alta difusión, sino también a los factores varios que intervienen a lo largo de su cadena de propagación; siendo más común en las áreas tropicales y subtropicales de países subdesarrollados (Espinosa, Alazales, & García, 2011). 2.12. DIAGNÓSTICO 2.12.1. Diagnóstico por examen coproparasitario. Previamente es importante tener presente la historia clínica del animal junto con el examen físico y el análisis de todos los síntomas que se presentan (diagnóstico presuntivo) para posteriormente efectuar el diagnóstico de laboratorio. Para el análisis coproparasitario de laboratorio, las muestras de heces se deben tomar directamente del recto del animal, se las rotula correctamente y se las transporta en refrigeración hasta el momento de su debido proceso en el laboratorio. 21 Existen diversos métodos para el diagnóstico de las enfermedades parasitarias gastrointestinales. A continuación se describen las que se emplearon en la presente investigación. 2.12.2. Método de frotis directo. Es un método cualitativo utilizado en su mayoría, para el diagnóstico de protozoarios gastrointestinales, en sus formas de quistes y trofozoitos. En algunos casos también es de gran ayuda para identificar ciertos helmintos. Las heces examinadas se diluyen con agua, y se colocan en un portaobjeto para su observación directa e inmediata al microscopio. 2.12.3. Métodos de concentración. Existe una variedad de técnicas de enriquecimiento que se emplean con el propósito de conseguir una mayor concentración de parásitos aun cuando exista una mínima cantidad de los mismos. Para esto, se utilizan los distintos métodos basados en la flotación, sedimentación y migración larvaria. Con estas técnicas se obtienen resultados cualitativos o cuantitativos dependiendo del método empleado (Cardona, 2005). 2.12.3.1. Método de flotación. Este método tiene como fundamento, la flotación de los elementos parasitarios contenidos en las heces mediante una solución saturada con una densidad mayor a la de los parásitos. Los huevos son separados del material fecal y concentrados por medio de un fluido de flotación con una gravedad específica apropiada. Por lo general los huevos y quistes suelen tener https://www.rvc.ac.uk/Review/Parasitology_Spanish/Flotation/Flotation_fluids/General.htm 22 una densidad entre 1.05 y 1.15 y flotan a una temperatura de 20°C (Álvarez & et al, 2010). Entre las soluciones de concentración empleadas, están la solución salina saturada (Willis – Molloy), la solución azucarada (Sheather), la solución de sulfato de zinc (Faust), entre otras. Las dos primeras soluciones mencionadas son las más utilizadas, y tienen una densidad promedio de entre 1.20 – 1.27. Este método se emplea para observar huevos de céstodos, nemátodos y quistes de algunos protozoos. No es adecuado para huevos de tremátodos y suelen alterar los trofozoitos y/o quistes de algunos protozoos dificultando su identificación (Bowman, 2010). 2.12.3.2. Método de sedimentación. Se utiliza para detectar huevos de tremátodos de un peso mayor que la densidad del agua o de otras soluciones. El fundamento se basa en la capacidad de algunos huevos de sedimentar dentro de una solución de baja densidad como el agua. Los huevos tienen un color que facilita su identificación, más aún si se agrega un colorante de contraste que tiñe todo el material vegetal que se encuentra, con excepción de los huevos. Existen diversas modificaciones al método, siendo la más usada la técnica de sedimentación simple (Álvarez & et al, 2010). 23 2.13. TRATAMIENTO Existen diversas drogas antiparasitarias, usadas por sus propiedades para eliminar los distintos helmintos, céstodos y protozoos y empleadas de acuerdo a las necesidades presentes en la explotación animal. La dosis de estos medicamentos, varía dependiendo de la especie animal, peso y fin principal para el que se lo desee emplear. Al seleccionar el fármaco a emplear, se debe tener en cuenta su eficacia, grado de actividad, persistencia, precio y fácil administración, sin embargo el factor principal deberá ser la presencia de las distintas parasitosis en la explotación. De igual forma se debe evitar la resistencia a estos medicamentos, dosificando correctamente, alternando los tratamientos, y aplicando los mismos en los momentos adecuados de acuerdo al previo diagnóstico de laboratorio (González, Madrid, & Soto, 2008) (Anexos XI y XII). 2.14. PREVENCIÓN Y CONTROL El método de control más utilizado es el tratamiento preventivo realizando desparasitaciones periódicas cada 3-4 meses, logrando de esta manera cortar el ciclo vital de los parásitos. También se recomienda realizar una segunda desparasitación 21 días después de la primera dosis, posterior a esto se puede repetir el tratamiento según la frecuencia de las lluvias y la presencia de los distintosparásitos en la zona de explotación. Entre otras medidas de control y prevención están: 24 Evitar la sobre carga del pastizal realizando rotación de potreros y empleando el pastoreo alterno con diferentes especies animales y evitando el pastoreo conjunto de animales jóvenes y adultos. Mantener una carga animal adecuada y evitar el hacinamiento de los animales. Garantizar un buen nivel nutricional de los animales. Controlar los diferentes vectores mecánicos y biológicos que existan. Realizar una correcta limpieza y desinfección de comederos, bebederos y establos, manteniendo secos los mismos y evitando la acumulación de agua en lugares frecuentados por los animales. Efectuar periódicamente análisis de heces para obtener un diagnóstico seguro que permita aplicar el adecuado en caso de existir alguna enfermedad parasitaria en la explotación (Morales & et al, 2011). 25 III. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. CARACTERÍSTICAS DEL ÁREA DE ESTUDIO 3.1.1. Localización de la investigación. El trabajo de investigación se llevó a cabo en el Laboratorio de Biotecnología y Microbiología Animal (LABIMA) de la Facultad de Ciencias Pecuarias de la Escuela Superior Politécnica de Chimborazo (ESPOCH), ubicado en la ciudad de Riobamba, Panamericana Sur Km 1 ½. 3.1.2. Características de la zona de trabajo. 3.1.2.1. Ubicación geográfica y política. Región: Interandina Zona: Central Provincia: Chimborazo Cantón: Riobamba Superficie: 979,7 km2 Altitud: 2720 m.s.n.m Latitud: 9807000 UTM Longitud: 764600 UTM 26 3.1.2.2. Condiciones climáticas. Temperatura media anual: 13.4ºC Precipitación promedio anual: 200 - 500mm Humedad relativa media anual: 77.5% 3.2. MATERIALES 3.2.1. De laboratorio. 3.2.1.1. Materiales y reactivos. Guantes de exploración Muestras de heces Colador de metal Mandil Portaobjetos Cubreobjetos Pinzas anatómicas Espátula Vasos plásticos desechables Vasos de precipitación 100, 250 ml Mortero Toallas de papel absorbente Rollo de papel aluminio Varillas de agitación de vidrio Tubos de ensayo Asa de platino Pipeta Pasteur Pipetas volumétricas 1, 5, 10 ml 27 Probetas 100, 250, 500 ml Pera de succión Gradillas Termómetro Palillos de madera Cucharas plásticas Solución mixta de concentración Agua destilada Lugol Formol al 10% Alcohol al 70% 3.2.1.2. Equipos. Refrigeradora Microscopio binocular Cámara para microscopio Balanza electrónica Pipeteador electrónico Centrífuga Reverbero Estufa 3.2.2. De oficina. 3.2.2.1. Materiales. Hojas para impresora Cuaderno de apuntes 28 Fundas plásticas Marcador permanente Etiquetas autoadhesivas Esferográficos Lápiz Hojas de registro Memoria USB 3.2.2.2. Equipos. Cámara fotográfica Impresora Computadora portátil 3.2.3. Semovientes. 200 clasificados en: 10 alpacas (Vicugna pacos) 13 bovinos (Bos taurus) 46 caprinos (Capra hircus) 9 codornices (Coturnix coturnix) 17 conejos (Oryctolagus cuniculus) 17 cuyes (Cavia porcellus) 23 gallinas domésticas y 9 pollos (Gallus gallus) 17 llamas (Lama glama) 31 ovinos (Ovis aries) 29 6 porcinos (Sus domesticus) 2 vicuñas (Vicugna vicugna) 3.2.4. Personal. Egresada Técnico Docente encargado del laboratorio 3.3. METODOLOGÍA DE TRABAJO 3.3.1. Duración del ensayo. Se analizaron las muestras remitidas al laboratorio, durante los meses de marzo a junio, y de octubre a diciembre del 2014. 3.3.2. Tipo de investigación. Se realizó un estudio de tipo descriptivo transversal; con enfoque retro- prospectivo. 3.3.3. Diseño estadístico de la investigación. 3.3.3.1. Población. Conformada por especies zootécnicas (bovinos, ovinos, caprinos, camélidos, roedores, lagomorfos, aves de corral) de Riobamba y zonas aledañas pertenecientes a la provincia de Chimborazo, cuyas muestras de heces fueron remitidas al laboratorio donde se realizó la investigación. 30 Para estimar la población a estudiar, se consideró que en el laboratorio se receptaban entre un rango de 20-40 muestras de heces por mes, calculando que en un año se receptarían en promedio alrededor de 360 muestras, por lo que se consideró que este sería el tamaño de la población. 3.3.3.2. Tamaño de la muestra. Para calcular el tamaño de la muestra se aplicó la fórmula matemática para el cálculo del tamaño de la muestra correspondiente a una población específica, comparando luego el resultado obtenido con la tabla de información para determinar el tamaño de la muestra correspondiente a una población específica (Anexo XIII). n = ( ) [( ) ( ) ] En donde: N = Tamaño de la Población. n = Tamaño de la Muestra. α = Error tipo 1, 5 %, (0,05). Z = Es el valor del número de unidades de desviación estándar para una prueba de dos colas, con una zona de rechazo igual a alfa. Para el 95%, (0,95), Z = 1,959963985 0,25 = Es el valor de p2 que produce el máximo valor de error estándar, esto es p = 0,5. 31 Se estudió una muestra de 200 casos, que se receptaron en el laboratorio donde se realizó la presente investigación. Se estudió además la asociación de las variables sexo, edad, especie zootécnica, procedencia y zoonosis (Anexo XIV). 3.3.3.3. Análisis estadístico. Con los datos obtenidos se realizó un análisis estadístico descriptivo, en el cual se recolectó, organizó y presentó los datos obtenidos usando tablas, y gráficos. Para evaluar los datos, se utilizó el método porcentual para determinar en porcentaje cuantos animales son positivos o negativos empleando la fórmula: % = x 100 Los casos positivos fueron evaluados mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, cuya fórmula matemática es: 2 = (Fo – Fe)2/Fe En donde: 2 = Chi Cuadrado. Fo = Frecuencias observadas. 32 Fe = Frecuencias esperadas. g.l. = grados de libertad. El valor calculado de 2 se comparó con el valor tabulado de 2 con k – r grados de libertad. La regla de decisión, entonces, fue: rechazar Ho si 2 calculado es mayor o igual que el valor tabulado de 2 para el valor seleccionado de α (Wayne, 2002) (Anexos XIXI - XXV). Además se realizó el análisis de sensibilidad mediante la siguiente fórmula (Anexo XV): Resultados de la Prueba Resultados Verdaderos Positivos (A) Negativos (C) Total (A + C) 3.3.4. Diagnóstico de laboratorio. 3.3.4.1. Técnicas coproparasitarias de concentración. 3.3.4.1.1. Método de flotación. Para preparar la solución de concentración que se utilizó en los diagnósticos, se siguió los siguientes parámetros sugeridos por el Ing. Byron Díaz (Docente y director del LABIMA), el cual considera que esta 33 fórmula contiene además de la sal, azúcar, lo cual aumenta la densidad de la solución, y facilita la flotación de mayor cantidad de ooquistes o huevos de parásitos. -Solución mixta de concentración*: Cloruro de sodio (NaCl) ………………………. 331 g. Agua destilada ………………………….…... 1000 ml Azúcar …………………………………………. 200 g. *Calentar mezclando continuamente hasta disolver, evitando la ebullición. Se realizó el método de flotación utilizando el siguiente procedimiento descrito por el Cardona (2005): 1. Pesar de 2 a 5 gramos de la muestra de heces (usar el mortero si es necesario homogenizar la misma). 2. Diluir la muestra previamente pesada en 15 o 20 ml de la solución mixta de concentración. 3. Disolver las heces con una cuchara o varilla de vidrio.4. Diluir y filtrar entre 3 y 5 veces con un cedazo o colador, hasta observar la homogenización de la muestra. 5. Verter en un tubo de ensayo ubicado en una gradilla. 6. Llenar el resto del volumen del tubo, empleando la solución mixta de concentración usada previamente, hasta formar un menisco convexo en la boca del tubo de ensayo. 34 7. Eliminar con un palillo de madera las burbujas que flotan. 8. Colocar una lámina cubre objetos y dejar reposar por un mínimo de 15 minutos y un máximo de 30. Pasado este tiempo, los huevos se colapsan o se rompen debido a la acción osmótica. Al poseer los huevos una densidad menor que la solución, flotan a la superficie. 9. Retirar cuidadosamente el cubreobjetos del tubo de ensayo junto con la gota de fluido adherida. 10. Colocar el cubre objetos sobre un portaobjetos limpio. 11. Observar al microscopio con objetivos de 4x, 10x, y 40x. Bowman (2010), sugiere que ‘‘a fin de evitar la omisión o el solapamiento de algunos campos, iniciar el examen a lo largo de un borde del cubreobjetos desde una esquina a la contraria. Desplazarse después al ancho de un campo y continuar el examen’’. Se recomienda seguir esta sugerencia para todos los métodos que requieran de observación microscópica. 3.3.4.1.2. Método de sedimentación simple. Para realizar el diagnóstico coproparasitario según este método se siguió el siguiente procedimiento descrito por Thienpont, Rochette y Vanparij (1989), realizando ciertas modificaciones detalladas por Bowman (2010): 1. Mezclar en un vaso de precipitación, 10 g de heces con 10 ml agua destilada, usando una espátula. 2. Pasar la suspensión por el cedazo o colador. 35 3. Centrifugar durante 1 a 2 minutos a 1500 – 2000 rpm. 4. Desechar el sobrenadante. 5. Volver a suspender el sedimento en 10 ml de agua y repetir los pasos 4 y 5 hasta que el sobrenadante esté claro. 6. Agitar el sedimento con ayuda de una varilla de vidrio, o agitar la preparación vigorosamente por 30 segundos. 7. Centrifugar durante 1 minuto a 2000 rpm. 8. Decantar el sobrenadante y examinar esa porción del sedimento colocando unas gotas sobre un portaobjeto. 9. Agregar una gota de lugol. 10. Mezclar y extender ambas gotas. 11. Observar directamente al microscopio sin colocar una laminilla cubreobjeto. 3.3.4.2. Interpretación e identificación. Las fases que aparecen normalmente en las técnicas de diagnóstico son los huevos y larvas. Sin embargo, en la mayoría de infestaciones provocadas por gusanos, la identificación se basa en los huevos. Los datos y resultados obtenidos se escribieron en las hojas de registros, para luego realizar la respectiva correlación de las variables independientes del estudio (Anexos XXVI - XXIX). 36 En los casos positivos, se tomaron fotografías y se realizó la respectiva identificación con ayuda de las claves de identificación y a través de las características morfológicas según descripción de varios autores: (Foreyt, 2001); (Gibbons, Jacobs, Fox, & Hansen, s.f.); (López & et al, 2006); (Organización Mundial de la Salud [OMS], 1997); (Soulsby, 1987) y (Thienpont, Rochette, & Vanparijs, 1989). 37 IV. RESULTADOS En la presente investigación se obtuvieron los siguientes resultados: 4.1. IDENTIFICACIÓN DE PARASITOSIS GASTROINTESTINALES EN ANIMALES DE ESPECIES ZOOTÉCNICAS, DIAGNOSTICADAS EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA Y MICROBIOLOGÍA ANIMAL (ESPOCH – RIOBAMBA). De 200 animales muestreados entre los meses de marzo a junio, y de octubre a diciembre del 2014; se determinó un total de 155 animales que dieron un diagnóstico positivo como mínimo a una especie de parásito, lo que representó el 77,5% y un total de 45 negativos que representó el 22,5%. La prueba tuvo una sensibilidad del 77,5 % (Anexo XV). Tabla 1. Identificación en porcentaje de parasitosis gastrointestinales en animales de especies zootécnicas, diagnosticadas en el Laboratorio de Biotecnología y Microbiología Animal (ESPOCH – Riobamba). # ANIMALES MUESTREADOS # ANIMALES POSITIVOS % POSITIVOS # ANIMALES NEGATIVOS % NEGATIVOS 200 155 77,5 45 22,5 38 Gráfico 1. Identificación en porcentaje de parasitosis gastrointestinales en animales de especies zootécnicas, diagnosticadas en el Laboratorio De Biotecnología y Microbiología Animal (ESPOCH – Riobamba). 4.2. DETERMINACIÓN DE PARÁSITOS GASTROINTESTINALES EN MUESTRAS DE HECES DE ANIMALES MEDIANTE EL MÉTODO DE FLOTACIÓN Y SEDIMENTACIÓN. Los 155 animales que resultaron positivos mediante el método de flotación, representaron el 100%; a diferencia que por el método de sedimentación, no se presentaron casos positivos, siendo esto el 0%. Tabla 2. Determinación en porcentaje de parásitos gastrointestinales en muestras de heces de animales mediante el método de flotación y sedimentación. # ANIMALES POSITIVOS # ANIMALES POSITIVOS MÉTODO FLOTACIÓN % POSITIVOS MÉTODO FLOTACIÓN # ANIMALES POSITIVOS MÉTODO SEDIMENTACIÓN % POSITIVOS MÉTODO SEDIMENTACIÓN 155 155 100 0 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 % ANIMALES MUESTREADOS 77,5 22,5 % POSITIVOS % NEGATIVOS 39 Gráfico 2. Determinación en porcentaje de parásitos gastrointestinales en muestras de heces de animales mediante el método de flotación y sedimentación. 4.3. CORRELACIÓN DE LOS CASOS POSITIVOS. Con respecto a la procedencia. Se analizaron las muestras de animales provenientes de los siguientes lugares: Alausí, Chambo, Chazo Juan Alto, Colta, Estación Experimental Tunshi - ESPOCH, Facultad de Ciencias Pecuarias – ESPOCH, Granja Integral - Facultad de Recursos Naturales – ESPOCH, Guano, Programa de Especies Menores - Facultad de Ciencias Pecuarias –ESPOCH, Palacio Real, Parque Ricpamba, Pelileo, Riobamba y Urbina (Anexo XXXI). El mayor número de animales que dieron un diagnóstico positivo como mínimo a una especie de parásito se registró en animales que provenían de la Estación Experimental Tunshi - ESPOCH: 45 animales positivos con un 97,83%, seguido de 42 animales positivos de Riobamba con 79,25% y 25 animales de 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % ANIMALES MUESTREADOS 100 0 % POSITIVOS MÉTODO FLOTACIÓN % POSITIVOS MÉTODO SEDIMENTACIÓN 40 Palacio Real con 96,15%. Por otro lado se obtuvo un 100% de animales positivos pero con menor número de animales muestreados en Colta, Guano, Parque Ricpamba y Pelileo. Los datos positivos globales de este estudio fueron evaluados mediante la Prueba de Chi Cuadrado determinándose significancia estadística (Anexos XVI y XXII). Tabla 3. Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la procedencia. PROCEDENCIA # ANIMALES MUESTREADOS #ANIMALES POSITIVOS % POSITIVOS Alausí 3 2 66,67 Chambo 9 1 11,11 Chazo Juan Alto 12 0 0,00 Colta 11 11 100,00 E.E. Tunshi. 46 45 97,83 FCP 1 0 0,00 G. I. FRN 6 1 16,67 Guano 4 4 100,00 P. E. M. FCP 16 11 68,75 Palacio Real 26 25 96,15 Parque Ricpamba 4 4 100,00 Pelileo 8 8 100,00 Riobamba 53 42 79,25 Urbina 1 1 100,00 TOTAL 200 155 66,89 Nota: G. I. FRN: Granja Integral. Facultad de Recursos Naturales. ESPOCH P. E. M. FCP: Programa de Especies Menores. Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH E.E. Tunshi: Estación Experimental Tunshi. ESPOCH / FCP: Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH 41 Gráfico 3. Correlación de los casos positivos con respecto a la procedencia. Tabla 4. Animales zootécnicos con respecto a la procedencia. PROCEDENCIA A N I M A L Z O O T É C N I C O A B CA COD CON CU GD LL OV PO POR VI TOTAL Alausí - 1 - - - 1 - - - - 1 - 3 Chambo - - - - - - 9 - - - - - 9 Chazo Juan Alto - - - 9 - 1 1 - - - 1 - 12 Colta - - - - - - - - 11 - - - 11E.E. Tunshi. - - 40 - - - - - 6 - - - 46 FCP - - - - - - 1 - - - - - 1 G. I. FRN - - - - 6 - - - - - - - 6 Guano - 2 - - - - - - 2 - - - 4 P. E. M. FCP - - - - 11 5 - - - - - - 16 Palacio Real 9 - - - - - - 17 - - - - 26 Parque Ricpamba 1 3 - - - - - - - - - - 4 Pelileo - - - - - - 8 - - - - - 8 Riobamba - 6 6 - - 10 4 - 12 9 4 2 53 Urbina - 1 - - - - - - - - - - 1 TOTAL 10 13 46 9 17 17 23 17 31 9 6 2 200 Nota: G. I. FRN: Granja Integral. Facultad de Recursos Naturales. ESPOCH / P. E. M. FCP: Programa de Especies Menores. Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH / E.E. Tunshi: Estación Experimental Tunshi. ESPOCH / FCP: Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH / A: Alpaca - B: Bovino - CA: Caprino - COD: Codorniz - CON: Conejo - CU: Cuy – GD: Gallina doméstica - LL: Llama - OV: Ovino - PO: Pollo - POR: Porcino - VI: Vicuña 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 # CASOS POSITIVOS Alausí Chambo Chazo Juan Alto Colta E.E. Tunshi. FCP G. I. FRN Guano P. E. M. FCP Palacio Real Parque Ricpamba Pelileo Riobamba Urbina 42 Con respecto al sexo Del total de 200 muestras estudiadas: 118 machos y 82 hembras, dio como resultado que el mayor número de animales con diagnóstico positivo (como mínimo a una especie de parásito) se registró en los machos: 102 animales positivos con un 85,71; mientras que las hembras registraron 53 casos positivos con un 65,43%. Los datos positivos globales fueron evaluados mediante la Prueba de Chi Cuadrado determinándose significancia estadística de acuerdo al sexo (Anexos XVII y XX). Tabla 5. Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto al sexo. SEXO # ANIMALES MUESTREADOS #ANIMALES POSITIVOS % POSITIVOS MACHO 119 102 85,71 HEMBRA 81 53 65,43 TOTAL 200 155 75,57 Gráfico 4. Correlación de los casos positivos con respecto al sexo. 0 20 40 60 80 100 120 #ANIMALES POSITIVOS MACHO HEMBRA 43 Tabla 6. Animales zootécnicos con respecto al sexo. SEXO A N I M A L Z O O T É C N I C O A B CA COD CON CU GD LL OV PO POR VI TOTAL HEMBRAS 3 3 13 9 11 10 16 6 9 - 1 1 82 MACHOS 7 10 33 - 6 7 7 11 22 9 5 1 118 TOTAL 10 13 46 9 17 17 23 17 31 9 6 2 200 Nota: A: Alpaca - B: Bovino - CA: Caprino - COD: Codorniz - CON: Conejo - CU: Cuy – GD: Gallina doméstica - LL: Llama - OV: Ovino - PO: Pollo - POR: Porcino - VI: Vicuña Con respecto a la edad De 200 muestras estudiadas se presentó lo siguiente: 8 animales positivos de <1 mes con un porcentaje de 80%; 21 animales positivos de entre 1-6 meses con un 36,84%; 14 animales positivos de entre 7-11 meses con un 77,78%; 107 animales positivos de entre 1-4 años con un porcentaje de 97,27% y 5 animales positivos de >4 años representando un 100%. El grupo etario que presentó mayor número de animales con diagnóstico positivo (como mínimo a una especie de parásito) fue el de 1-4 años siendo 107 animales. Los datos positivos globales fueron evaluados mediante la Prueba de Chi Cuadrado determinándose significancia estadística con respecto a la edad (Anexos XVIII y XXI). 44 Tabla 7. Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la edad. EDAD # ANIMALES MUESTREADOS # ANIMALES POSITIVOS % POSITIVOS < 1 mes 10 8 80,00 1 - 6 meses 57 21 36,84 7 - 11 meses 18 14 77,78 1 - 4 años 110 107 97,27 > 4 años 5 5 100,00 TOTAL 200 155 78,38 Gráfico 5. Correlación de los casos positivos con respecto a la edad. Tabla 8. Animales zootécnicos con respecto a la edad. EDAD A B CA COD CON CU GD LL OV PO POR VI TOTAL < 1 mes - - - - - 2 8 - - - - - 10 1 - 6 meses - - 3 9 15 9 6 - - 9 6 - 57 7 - 11 meses - - 4 - - 3 - 6 5 - - - 18 1 - 4 años 10 13 37 - 2 3 9 11 23 - - 2 110 > 4 años - - 2 - - - - - 3 - - - 5 TOTAL 10 13 46 9 17 17 23 17 31 9 6 2 200 Nota: A: Alpaca - B: Bovino - CA: Caprino - COD: Codorniz - CON: Conejo - CU: Cuy – GD: Gallina doméstica - LL: Llama - OV: Ovino - PO: Pollo - POR: Porcino - VI: Vicuña 0 20 40 60 80 100 120 # ANIMALES POSITIVOS < 1 mes 1 - 6 meses 7 - 11 meses 1 - 4 años > 4 años 45 Con respecto al animal zootécnico Del total de 200 animales muestreados, se estudiaron las siguientes especies: alpacas, bovinos, caprinos, codornices, conejos, cuyes, gallinas, gallos, llamas, ovinos, pollos, porcinos y vicuñas. El mayor número de animales con diagnóstico positivo (como mínimo a una especie de parásito) se presentó en caprinos siendo 46 animales positivos con el 100%; seguido de los ovinos 28 animales positivos con el 90,32%; llamas 17 animales positivos con el 100%; bovinos 13 animales positivos con el 100%; conejos 12 animales positivos con el 70,59%; 9 alpacas positivas con el 90%; 9 cuyes positivos con el 52,94%; 6 gallos positivos con el 85,71%; 6 gallinas positivas con el 37,50%; 5 pollos positivos con el 55,56%; 2 vicuñas positivas con el 100%; 2 porcinos con el 33,33% y 0 codornices positivas con el 0%. Los datos positivos globales fueron evaluados mediante la Prueba de Chi Cuadrado determinándose significancia estadística (Anexo XXIV). Tabla 9. Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto al animal zootécnico. ANIMAL ZOOTÉCNICO # ANIMALES MUESTREADOS # ANIMALES POSITIVOS % POSITIVOS Alpaca 10 9 90,00 Bovino 13 13 100,00 Caprino 46 46 100,00 Codorniz 9 0 0,00 Conejo 17 12 70,59 Cuy 17 9 52,94 Gallina doméstica 23 12 52,17 Llama 17 17 100,00 Ovino 31 28 90,32 Pollo 9 5 55,56 Porcino 6 2 33,33 Vicuña 2 2 100,00 TOTAL 200 155 70,41 46 Gráfico 6. Correlación de los casos positivos con respecto al animal zootécnico. Con respecto a la especie de parásito Entre las distintas especies de parásitos encontradas estuvieron: Capillaria sp., Cooperia sp., Cryptosporidium sp., Eimeria sp., Nematodirus filicollis, estrongiloides digestivos (Orden STRONGYLIDA), Paramphistomum cervi, Strongyloides papillosus, Toxocara vitulorum y Trichuris sp. De los 200 animales muestreados, el mayor número de animales con diagnóstico positivo (como mínimo a una especie de parásito) se presentó en animales que poseían estrongiloides digestivos (orden STRONGYLIDA) siendo 90 animales positivos representando el 45%, mientras que el menor número de animales positivos se observó en animales parasitados con Paramphistomum cervi, siendo 3 casos positivos con el 1,50%. Por otro lado no se presenció ningún parásito de Fasciola hepática. 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 # ANIMALES POSITIVOS Alpaca Bovino Caprino Codorniz Conejo Cuy Gallina doméstica Llama Ovino Pollo Porcino Vicuña 47 De igual forma, de las 10 especies de parásitos encontradas, el 84% pertenecían al grupo de los helmintos, mientras que el 48,5% eran del grupo de los protozoos. Los datos positivos globales fueron evaluados mediante la Prueba de Chi Cuadrado determinándose significancia estadística (Anexo XXIII). Tabla 10. Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a la especie de parásito. ESPECIE DE PARÁSITO # A N IM A L E S M U E S T R E A D O S # A N IM A L E S P O S IT IV O S % P O S IT IV O S Capillaria sp. 200 7 3,50 Cooperia sp. 200 9 4,50 Cryptosporidium sp. 200 21 10,50 Eimeria sp. 200 76 38,00 Fasciola hepática 200 0 0,00 Nematodirus filicollis 200 26 13,00 Orden STRONGYLIDA (Estrongiloides digestivos) 200 90 45,00 Paramphistomum cervi 200 3 1,50 Strongyloides papillosus 200 25 12,50 Toxocara vitulorum 200 4 2,00 Trichuris sp. 200 4 2,00 TOTAL 200 12,05 48 Gráfico 7. Correlación de los casos positivos con respecto a la especie de parásito. Tabla 11. Correlación en porcentaje de los casos positivoscon respecto a la especie de parásito (grupo). ESPECIE DE PARÁSITO #ANIMALES MUESTREADOS #ANIMALES POSITIVOS % POSITIVOS PROTOZOOS 200 97 48,5 HELMINTOS 200 168 84 TOTAL 200 66,25 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 #ANIMALES POSITIVOS Capillaria sp. Cooperia sp. Cryptosporidium sp. Eimeria sp. Fasciola hepática Nematodirus filicollis Estrongiloides digestivos Paramphistomum cervi Strongyloides papillosus Toxocara vitulorum Trichuris sp. 49 Gráfico 8. Correlación de los casos positivos con respecto a la especie de parásito (grupo). Con respecto a las especies de parásitos de importancia zoonósica. De las 10 especies de parásitos que se encontraron, solo el parásito Cryptosporidium sp. es de importancia zoonósica representando el 10%. Las demás especies de parásitos encontrados no son de importancia zoonósica, siendo 9 parásitos con el 90%. Los datos positivos globales fueron evaluados mediante la Prueba de Chi Cuadrado determinándose significancia estadística (Anexo XXV). 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 #ANIMALES POSITIVOS PROTOZOOS HELMINTOS 50 Tabla 12. Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a las especies de parásitos de importancia zoonósica. ESPECIE DE PARÁSITO ZOONOSIS Capillaria sp. NO Cooperia sp. NO Cryptosporidium sp. SI Eimeria sp. NO Nematodirus filicollis NO Estrongiloides digestivos NO Paramphistomum cervi NO Strongyloides papillosus NO Toxocara vitulorum NO Trichuris sp. NO # PARÁSITOS % PARÁSITOS ESPECIES DE PARÁSITOS ENCONTRADOS 10 100 ESPECIES DE PARÁSITOS DE IMPORTANCIA ZOONÓSICA 1 10 ESPECIES DE PARÁSITOS SIN IMPORTANCIA ZOONÓSICA 9 90 Gráfico 9. Correlación en porcentaje de los casos positivos con respecto a las especies de parásitos de importancia zoonósica. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 ESPECIES DE PARÁSITOS DE IMPORTANCIA ZOONÓSICA ESPECIES DE PARÁSITOS SIN IMPORTANCIA ZOONÓSICA 51 V. DISCUSIÓN En la investigación realizada se determinó que los animales zootécnicos con mayor número de casos positivos fueron los caprinos (46) seguidos de los ovinos (28) y las llamas (17). Acerca de esto Nieto & Isakovich (2005) señalan que: ‘‘Los endoparásitos que atacan a los caprinos son principalmente helmintos y protozoos. Los caprinos son animales muy susceptibles a la infestación de múltiples especies de parásitos’’, también mencionan que el 90% de las cabras hospedan lombrices en sus intestinos, de tal manera que se sustenta el resultado obtenido. Por otro lado, estudios realizados por Fierro, O. Fuente especificada no válida. en llamas y alpacas de la provincia de Imbabura, señalan la presencia de protozoos gastrointestinales en un 67.5%. En mis observaciones, considero que el alto parasitismo en cabras y ovinos se debe a que son animales de alta rusticidad, por lo que generalmente los productores descuidan su alimentación y sanidad, ocurriendo lo mismo en llamas y vicuñas, que al ser animales en su mayoría de vida silvestre, es poco probable que reciban las atenciones y tratamientos preventivos adecuados. En el presente estudio se empleó una solución mixta para realizar el diagnóstico por el método de flotación. En varias investigaciones realizadas acerca de la identificación de parásitos en distintas especies animales, se emplea la solución salina saturada, la cual no contiene azúcar (Armijos, 2013) (Lema, 2013), (Fierro, 2010) y (Sampedro, 2013). De acuerdo a mis experiencias previas empleando ambas soluciones, considero que al haber usado en mi investigación la solución mixta que contenía azúcar y sal, se logró aumentar la concentración de los huevos y/o ooquistes que se encontraban en las muestras de heces receptadas, lo que me permitió identificar una mayor cantidad de parásitos. 52 En el presente estudio, todos los animales positivos fueron diagnosticados empleando ambos métodos: flotación y sedimentación, sin embargo el método de sedimentación no presento ningún caso positivo. Acerca de esto, se han realizado estudios comparativos como los de Navone, y otros (2005), quienes obtuvieron mejores resultados empleando el método de flotación, sobre el cual indican que es más fácil de realizar y presenta baja probabilidad de errores técnicos recuperando un amplio rango de parásitos. Opino que esto se debe a que en mi estudio, la mayoría de parásitos encontrados fueron helmintos, cuyos huevos poseen una densidad menor a la solución empleada en el método de flotación, por lo que se detectan con facilidad; mientras que al no existir presencia de parásitos tremátodos en las muestras, no fueron detectados al emplearse el método de sedimentación, el cual se utiliza para observar dichos microorganismos. En la presente investigación, se determinó que de las 10 especies de parásitos encontrados en el muestreo, solo el Cryptosporidium sp. se considera como especie de importancia zoonósica, de igual manera, este parásito fue encontrado mayormente en rumiantes. Esto se confirma con lo mencionado por Rojas Cruz (2012): ‘‘La especie de Cryptosporidium que infecta a humanos y mamíferos es Cryptosporidium parvum. A esta enfermedad se la conoce como criptosporidiosis, la cual es una zoonosis, de hospedero no específico’’. Por lo tanto considero importante describir este resultado, ya que este parásito es un agente patógeno que en un futuro podría convertirse en causante de algún brote o epidemia, acarreando un grave problema de importancia tanto en salud pública como animal. 53 Con respecto al sexo, el presente estudio determinó un total de 102 machos positivos y 53 hembras, de los cuales fueron 10 bovinos machos, 3 bovinos hembras, y 22 ovinos machos y 9 ovinos hembras. Por otra parte, en estudios realizados en ovinos de la provincia de Chimborazo por Cabrera M. (2007), se registró parasitosis gastrointestinal por nemátodos en un porcentaje de 28% en machos y 23% en hembras; mientras que el trabajo realizado en el cantón Guamote por Sampedro (2013), indicó que el porcentaje de protozoarios gastrointestinales en bovinos machos fue de 93,33% y en las hembras de 94.29%. En mi opinión, estos resultados pueden variar dependiendo del sistema endócrino de cada género animal, pudiendo ciertas hormonas, como la testosterona en machos, y la progesterona y estrógeno en hembras, ser capaces de influir sobre la respuesta inmune ante los parásitos que afectan a los animales. Colina, Mendoza, & Jara (2013) en su investigación concluyen que se parasitan con mayor frecuencia los vacunos de entre 1 y 3 años. En este trabajo, se encontró que los animales de entre 1-4 años fueron los más parasitados, de los cuales 13 fueron bovinos; por lo que se está de acuerdo con lo expuesto por estos autores. Considero que la causa de esto se debe a que por lo general esta es la categoría del hato a la que se le suele prestar menos atención y la cual recibe menos cuidados, debido a que el productor suele considerar que son animales que poseen una inmunidad adquirida, olvidando que al igual que los animales jóvenes, necesitan recibir los tratamientos profilácticos necesarios. Alcaino & Gorman (1999) realizaron un estudio en el que detallan la lista de parásitos que han sido identificados en distintas especies animales en Chile, mencionando dentro de estas especies, a los estrongiloides digestivos y coccidias. Por otro lado, en una investigación similar realizada en animales 54 domésticos en Yucatán, México, por Rodríguez-Vivas, Cob-Galera, & Domínguez-Alpizar (2001), se determinó el orden COCCIDIA como el más frecuente con 93.40%, seguido del orden STRONGYLIDA con el 75.41%. Concuerdo con estos autores, ya
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