Practica_8_Div_I_Bacterias_Protistas

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Diversidad I (Procariotas y Protistas) 
Introducción a la microscopía de luz 
 
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UNIVERSIDAD DE COSTA RICA 
Soley-Guardia M. & Romero Vásquez A. Manual de Laboratorio de Biología General 
 
I. OBJETIVOS 
Al final del laboratorio el estudiante debe ser capaz de: 
* Aprender a distinguir las principales formas de vida del grupo de bacterias y protistas, así como 
algunas de sus características diagnósticas. 
* Identificar las diferentes partes de un microscopio compuesto. 
* Realizar cálculos importantes para el uso del microscopio. 
II. INTRODUCCIÓN 
Durante este laboratorio, te familiarizarás con las principales formas de vida unicelular, así como con el 
instrumento utilizado para estudiarlas, el microscopio. En específico, verás los grupos de procariotas y al 
grupo de “protistas” (un conjunto de eucariotas pertenecientes a varios filos). Comenzaremos por un 
vistazo de las generalidades de estos grupos y los distintos subgrupos en que se clasifican. Luego 
terminaremos con la explicación de varios conceptos necesarios para el uso del microscopio. 
 
DOMINIOS BACTERIA Y ARCHAEA 
En los dominios Bacteria y Archaea se agrupan todos los organismos 
procariontes (o procariotas), es decir, que carecen de organelas, así 
como de un núcleo rodeado de membrana. Fíjate que el nombre 
procariota no corresponde a un clado, ya que las arqueas están más 
emparentadas con los eucariotas (Fig. 1). Desde un punto de vista 
evolutivo, los procariotas representan las formas de vida más 
ancestrales, ya que estos fueron los primeras organismos en aparecer en 
nuestro planeta. Son organismos microscópicos unicelulares que poseen 
una molécula circular de ADN formando una estructura denominada 
nucleoide, utilizan flagelos para locomoción o fimbrinas para adhesión a 
superficies. Existen especies de vida libre, parasíticas, fotosintéticas o 
quimiosintéticas, y su reproducción es asexual, o por fisión binaria. Pese a 
que ambos dominios se consideran como procariotas por sus 
características, las arqueas están más emparentadas con los eucariotas. 
En el laboratorio vamos a observar únicamente representantes del domino 
Bacteria, que son las formas más abundantes y comunes. Las bacterias se 
pueden clasificar de varias formas, por ejemplo: morfológicamente (bacilos, cocos, espirilos y vibriones), 
presencia de flagelos (monótricas, lofótricas, anfítricas y perítricas), de acuerdo al medio en que crecen 
(halófilos, metanógenas, termo-acidófilas), a sus requerimientos nutricionales (fototrofos, heterótrofos), o 
por su metabolismo (aeróbica, anaeróbica, anaeróbica facultativa). Estas clasificaciones no suelen 
decirnos mucho de sus relaciones evolutivas, ya que pueden estar basadas en convergencias, más que en 
un origen en común. Es hasta en décadas recientes que, con la utilización de técnicas de biología 
molecular, ha sido posible clasificar las bacterias con base en las similitudes de su ADN, teniendo un 
mejor panorama de su origen y parentezco evolutivo. 
Figura. 1. Relaciones evolutivas 
entre los tres dominios de vida. 
http://www.biologia.edu.ar/biodiversidad/6reinos.htm#organelas
 
 
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No obstante, los métodos de clasificación tradicionales son todavía muy útiles para fines prácticos, y por 
esto se siguen utilizando. Muchos de estos métodos se basan en pruebas físicas y bioquímicas de 
separación, y necesitan de la realización de cultivos a partir de muestras obtenidas. Dentro de las 
principales pruebas que se utiliza para la clasificación de las bacterias está la Tinción de Gram 
(desarrollada por el microbiólogo danés Hanz Christian Gram). Esta consiste en la tinción diferencial que 
presentan las especies de bacterias en presencia del colorante violeta de genciana, debido a las diferencias 
en complejidad y composición química de sus paredes celulares. 
Las bactarias Gram+ poseen una pared celular de 
peptidoglicano gruesa como estructura fundamental mientras las 
Gram– poseen paredes celulares más delgadas, además de una 
membrana externa de lipopolisacáridos-lipoproteínas (Fig. 2). 
Esta distinción es muy importante desde el punto de vista 
médico, ya que los antibióticos que se deben utilizar para 
combatir una bacteria dependen de si ésta presenta o no una 
membrana recubriendo su pared celular (i.e., si es Gram – o +). 
Un grupo importante de bacterias que cabe la pena mencionar 
es el de las cianobacterias (conocidas anteriormente con el 
nombre incorrecto de “algas azul-verdosas”). Estas tienen un 
tipo especial de fotosíntesis que es fundamentalmente igual a la 
de las plantas (contienen incluso clorofila a, y pigmentos 
accesorios como -caroteno, ficocianina, y ficoeritrina). 
Además, tienen la capacidad de fijar nitrógeno en forma de 
nitrato (NO3), por lo que juegan un papel importante en la 
fertilización de suelos y aguas. Muchas cianobacterias forman 
asociaciones con hongos, llamadas líquenes que estudiarás más 
adelante. Algunas de ellas, forman colonias que pueden verse a 
simple vista (e.g., Nostoc, Anabaena y Oscillatoria, que suelen 
producir las masas verdes gelatinosas en piedras de ríos, o 
caños urbanos). Dado que estas especies pueden presentar 
reproducción explosiva en aguas contaminadas, pueden servir 
como organismos para monitorear la contaminación del agua. 
 
DOMINIO EUKARYA 
Los organismos que usted estudiará de ahora en adelante son 
eucariontes (o eucariotas). La característica principal de las 
células eucariotas es la presencia de un núcleo y otros organelos 
(e.g., mitocondria, cloroplastos) rodeados de membrana; 
además, su ADN se encuentra en múltiples cromosomas, los cuales se asocian con proteínas para formar 
un complejo llamado cromatina. Si bien muchos organismos de este dominio se reproducen asexualmente, 
la reproducción sexual es una característica exclusiva de los eucariotas. Existen 3 reinos definidos de 
eucariotas (hongos, animales y plantas), así como un cuarto grupo artificial, que básicamente incluye a 
todos los demás organismos que no calzan claramente en alguno de los anteriores. Este es el grupo de los 
protistas. La gran mayoría de los protistas son unicelulares, y su gran diversidad de formas y estilos de 
vida tradicionalmente dificultó el entendimiento de sus relaciones evolutivas. No es sino hasta el 
advenimiento de las técnicas moleculares que hemos empezado a comprender que este “grupo” contiene 
Gram+ 
Gram- 
Figura. 2. Diferencias en la cobertura externa 
de bacterias Gram + y Gram–. 
 
 
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varios linajes evolutivos que divergieron muy temprano en la historia de los eucariotas, y que algunos de 
ellos están más emparetados con los otros reinos que entre sí. 
 
Protistas 
Los protistas constituyen una colección diversa y compleja de linajes con distintos orígenes evolutivos 
(Fig. 3). Además, las especies pueden mostrar gran variación, habiendo formas unicelulares, coloniales, 
filamentosas o multicelulares, y poseyendo distintas formas de nutrición, locomoción y reproducción. 
Todo esto ha hecho que, históricamente, la clasificación de los protistas sea bastante retadora, sufriendo 
importantes cambios a medida que aprendemos más sobre estos organismos. En efecto, muchos de los 
nombres se han actualizado en las últimas décadas, 
sobre todo a medida que descubrimos que grupos 
de protistas con pocas características en común en 
realidad comparten un ancestro. Así, se han creado 
nuevas agrupaciones que antes hubieran parecido 
tener poco sentido. A pesar de que no es fácil 
establecer un cuadro de característicasgenerales 
para cada grupo, se pueden mencionar algunas. 
 
Los miembros del grupo de los EXCAVADOS 
(diplomonados y parabasálidos) son organismos 
unicelulares flagelados que carecen de varias 
organelas presentes en el resto de eucariotas (i.e., 
mitocondrias, cloroplastos o sistema de Golgi). Se 
postula que son parecidos a los eucariontes 
ancestrales que no tenían o perdieron las 
mitocondrias. Su principal característica derivada 
es la posesión de uno o dos núcleos rodeados por 
un sistema de microtúbulos asociados con dos 
pares de flagelos. Son heterótrofos, y hay especies 
parásitas, de vida libre, o simbiontes. Se reproducen 
asexualmente. 
El grupo de los EUGLENOZOOS agrupa a 
organismos unicelulares flagelados, con nutrición 
fotoautótrofa (euglénidos), heterótrofa 
(kinetoplástidos) o mixotrófa. La Euglena, por 
ejemplo, es de vida libre (muy comunes en el agua 
dulce), posee cloroplastos (clorofila a y b, 
xantófilos y -carotenos) y granos de una sustancia 
similar al almidón llamada paramilo. Una 
característica representativa en éste grupo es la 
presencia de una mancha ocular que le sirve al organismo para guiarse hacia los sitios mejor iluminados 
para realizar la fotosíntesis. Los kinetoplástidos son en su mayoría parásitos. Tienen una sola gran 
mitocondria tubular que contiene ADN y proteínas asociadas dentro de estructuras denominadas 
cinetoplastos. Tienen uno o más flagelos. Se multiplican en forma asexual, pero algunas formas presentan 
también reproducción sexual. En este grupo se encuentran las especies que producen la leishmaniasis, la 
enfermedad del sueño y la enfermedad de Chagas en los humanos. 
Figura 3. Relaciones evolutivas dentro del clado polifilético 
Protista. 
http://www.curtisbiologia.com/glossary/term/700
 
 
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La principal característica de todos los representantes del grupo de los AMEBOZOOS, es la presencia de 
prolongaciones citoplasmáticas (pseudópodos) que surgieron por evolución convergente en varios grupos. 
Estos organismos pueden habitar una diversidad de ambientes, incluyendo el suelo, agua dulce, océanos o 
incluso el interior de organismos. Poseen una vacuola pulsátil, otra nutritiva y algunos producen flagelos 
durante estadios determinados de su ciclo vital o en condiciones ambientales particulares. La reproducción 
es asexual y sexual. Algunos son parásitos de los humanos. Dentro de este grupo, se encuentran especies 
de gran importancia médica como la Entamoeba histolytica responsable de la disentería amebiana y de 
algunos casos de encefalitis amebiana. Aunque la gran mayoría son unicelulares, existen especies 
multicelulares, comunmente llamadas “mohos acuáticos” por su apariencia. 
A diferencia de los amebozoos, los miembros del grupo RHIZARIA 
(foraminíferos y radiolarios) agrupan organismos fundamentalmente 
marinos cuyos pseudópodos son delgados y se prolongan a través una 
cubierta externa dura (teca) de carbonato de calcio (foraminíferos) o 
sílica (radiolarios). 
Entre las características que agrupan a los ALVEOLADOS (ciliados, 
apicomplexa, dinoflagelados) lo más resaltante es la presencia de 
vesículas aplanadas que almacenan calcio localizadas justo debajo de 
la membrana plasmática (alveolos). Los ciliados son organismos 
unicelulares acuáticos que poseen múltiples especializaciones tales 
como cilios que cubren la superficie del organismo, utilizados 
fundamentalmente para la locomoción y alimentación. Poseen dos tipos de núcleo, un macronúcleo para 
las funciones vegetativas y un micronúcleo involucrado en la reproducción sexual por medio de 
conjugación. Todos son heterótrofos y solo el género Balantidium se ha reportado como parásito 
intestinal. Los apicomplexos son todos organismos parásitos que forman esporas, algunos de los cuales 
causan enfermedades al humano. Carecen de aparato específico de locomoción y en su lugar se desplazan 
por flexión. Dentro de este grupo se encuentran especies de importancia médica como el Plasmodium 
vivax responsable de la mayoría de casos de malaria en Costa Rica y el Toxoplasma gondii, que produce 
la toxoplasmosis. Los dinoflagelados son fotosintéticos en su mayoría (clorofila a y c, además de 
carotenoides como las fucoxantinas) y presentan dos flagelos que van en surcos aproximadamente 
perpendiculares. Cada uno se mueve en su canal y hacen que la célula gire sobre sí misma al moverse por 
el agua. Son casi todos marinos formando parte del plancton y algunos de ellos como Symbiodinium 
forman endosimbiosis con los corales (cuando se les conoce como zooxantelas). Algunos presentan 
bioluminiscencia. A veces, bajo ciertas condiciones, pueden reproducirse explosivamente de manera 
asexual y formar las mareas rojas. Los dinoflagelados poseen varios tipos de sustancias que resultan 
altamente tóxicas para los vertebrados, por ello es peligroso ingerir moluscos filtradores y ciertos otros 
organismos que consumen a los dinoflagelados cuando se dan las mareas rojas. 
Finalmente, el grupo de los ESTRAMINÓPILOS surge a partir de estudios a nivel molecular que 
confirmaron la relación existente entre organismos fotosintéticos como las algas pardas (multicelulares) y 
algas doradas (unicelulares, coloniales o filamentosas) con protistas “no algas” como los mohos 
acuáticos (filamentosos). En este grupo se incluye también a las diatomeas microalgas unicelulares con 
una cobertura de sílice (frústrula) dividida en dos “tapas”. Las diatomeas forman una gran parte de la 
biomasa de nuestro planeta, constituyendo casi la mitad del material orgánico de los océanos y 
produciendo alrededor de la tercera parte del oxígeno mundial. Son tan abundantes que sus restos se 
acumulan en los fondos marinos, llegando a formar rocas sedimentarias como la diatomita (utilizada en 
los laboratorios químicos para absorber desechos). A simple vista, estos grupos no poseen muchas 
características en común, pero suelen poseer células móviles con dos flagelos, uno de ellos con 
http://www.curtisbiologia.com/glossary/term/1105
http://www.curtisbiologia.com/glossary/term/211
 
 
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proyecciones finas a modo de pelos (en algunos estraminópilos, los flagelos se presentan sólo en ciertas 
etapas del ciclo de vida). 
 
EL MICROSCOPIO 
El microscopio es un instrumento diseñado para hacer posible la observación y el examen de objetos muy 
pequeños, los cuales no podrían ser vistos sin la ayuda de lentes amplificadores. Hay dos tipos de 
microscopio según la fuente utilizada para su funcionamiento: el microscopio de luz (desarrollado durante 
el renacimiento) y el microscopio electrónico (desarrollado hasta los 1930’s). Dentro de los microscopios 
de luz existen variaciones; los más usados y conocidos son los microscopios simples o de lupa (un solo 
lente), el microscopio compuesto (dos o más lentes) y el microscopio binocular estereoscopio. Podemos 
encontrar otros tipos de microscopios de uso más especializado en determinados campos de la biología y 
otras ciencias, tales como el microscopio de contraste de fase, de fluorescencia, UV, de luz polarizada, y 
el confocal. En esta práctica estudiaremos el microscopio compuesto y el estereoscopio (también llamado 
microscopio de disección). 
Los microscopios están conformados por tres sistemas: (a) sistema mecánico, constituido por una serie de 
piezas en las que van instaladas las lentes, y que permiten el movimiento para el enfoque, (b) sistema 
óptico que comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las 
imágenes que se observan a través de ellas, y (c) sistema de iluminación que comprende las partes del 
microscopioque reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a 
través del microscopio. 
 
Para la formación de la imagen, el 
microscopio compuesto dispone de 
una distribución específica de 
grupos de lentes que permiten una 
gran amplificación. La fuente 
luminosa es un filamento de 
tungsteno cuya luz es dirigida hacia 
un sólo punto mediante la lente 
condensadora. El haz luminoso 
incide por debajo de la preparación 
que debe ser lo bastante fina como 
para que la luz la atraviese. Al 
pasar por la muestra, parte de la luz 
es absorbida por ésta y la diferencia 
de absorción de la luz en diferentes 
partes del espécimen produce 
contrastes que revelan detalles de su estructura. El diafragma te permite ajustar la cantidad de luz que 
pasa a través de la preparación, y así causar distintos contrastes. 
 
Tras atravesar la muestra, la luz pasa a través de los lentes objetivos localizados por encima de la 
preparación. Existen diferentes lentes objetivos con diferentes capacidades de amplificación de la muestra 
y resolución de la imagen que pueden intercambiarse a medida que se observa el especímen: 
 
 
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4X – Este objetivo magnifica la imagen 4 veces su tamaño real. Este objetivo es 
utilizado para localizar el objeto que se va a estudiar, antes de observarlo con 
mayor magnificación. 
 10X – Este es un objetivo de poder intermedio que magnifica 10 veces la imagen 
 40X – Este es un objetivo de alto poder que magnifica 40 veces la imagen (debe tener 
cuidado al utilizarlo, ya que se acerca tanto a la muestra ¡que puede quebrarla!) 
100X– Este lente es el más potente, y ¡llega a tocar la muestra!, por lo que requiere añadir 
una gota de aceite de inmersión. (Su uso está usualmente restringido a los 
investigadores y técnicos de laboratorio). 
Finalmente, la luz pasa a través de los lentes oculares a través de los cuales, el investigador observará la 
preparación. Los oculares amplían en 10 veces (10X) más la imagen que reciben de los lentes objetivo. 
Por lo tanto, la magnificación total de cualquier preparación que se observa a través del ocular será el 
producto de la magnificación del lente ocular y la del objetivo. 
Dado que la imagen de la muestra es invertida y ampliada muchas veces, cualquier movimiento que se 
haga debe ser muy fino. Para esto se utilizan los tornillitos conectados a la plataforma (uno la mueve en 
sentido Oeste-Este, y el otro en sentido Norte-Sur). Para enfocar la muestra, la plataforma se debe mover 
hacia arriba y hacia abajo (tal y como cuando acercas un libro a la distancia óptima para poder leer). El 
macrométrico hace movimientos más abruptos, mientras que el micrométrico se utiliza para hacer 
movimientos más finos. 
En cuanto a las muestras a observar, estas deben ser finamente cortadas (para que las atraviese la luz) y 
puestas sobre vidrios o plásticos especiales denominados portaobjetos. También se suelen cubrir con 
otros vidrios o plásticos más delgados y pequeños llamados cubreobjetos (mantienen la preparación fija y 
previene el contacto accidental con los objetivos). Para obtener una imagen clara y nítida es importante 
que tanto el portaobjeto como el cubreobjeto estén limpios y secos. Para limpiar el portaobjetos, tómelo 
con los dedos por el borde, frótelo con un pañuelo limpio y seco o con una toalla absorbente. Los 
cubreobjetos son muy frágiles y deben ser tratados con mucho cuidado. 
 
Conceptos importantes para utilizar el microscopio 
Cuando se trabaja con el microscopio, es importante conocer los siguientes conceptos. El poder o grado 
de aumento es la magnificación total que sufre la imagen de la muestra debido al efecto de los lentes 
oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que aumenta el lente ocular por el 
número de veces que aumenta el lente objetivo. Por ejemplo, si el ocular es de 10X, y la muestra se 
observa con el objetivo de 40X, la magnificación total será de: 10X x 40X = 400X. Esta magnitud te 
permite saber cuántas veces más grande estás viendo la muestra (relativo a su tamaño real). 
El grado de aumento está relacionado al poder de resolución, que es la posibilidad de distinguir dos 
puntos muy cercanos entre sí. Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos 
puntos que puedan distinguirse como tales. El poder de resolución de un microscopio depende de la 
longitud de onda de la luz y de una propiedad de las lentes conocidas como la apertura numérica (AN). 
AN a su vez depende del índice de refracción del medio que llena el espacio entre el objeto y la parte 
frontal del objetivo, y del ángulo que forman los rayos de luz más oblicuos que puedan entrar al objetivo. 
Cualquier objeto cuyo diámetro sea menor que 0.1 mm es demasiado pequeño para poder ser observado a 
simple vista. La mayor utilidad del microscopio es la capacidad de ampliar el poder de resolución de la 
vista humana para objetos cuyo diámetro es menor que 0.1mm. El límite del poder de resolución de un 
microscopio es aproximadamente igual a 0.61/AN que para un microscopio óptico es de alrededor de 200 
nm (nanómetros). Por tanto, un microscopio sirve fundamentalmente para dos cosas: primero provee 
 
 
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aumento y, segundo, permite ver detalles de objetos tan pequeños que no podrían ser vistos normalmente. 
De esta forma, el poder de resolución es quizá la característica más importante de un buen microscopio ya 
que de nada sirve una imagen muy grande del objeto, si ésta se ve borrosa y no pueden distinguirse sus 
detalles. 
Se conoce como distancia de trabajo a la distancia entre la 
muestra observada y el lente objetivo bajo la cual se obtiene un 
enfoque óptimo. Debido a que cada objetivo varía en longitud, 
la distancia de trabajo será diferente al cambiar de un objetivo 
al siguiente. Esta distancia es inversamente proporcional al 
aumento; es decir, cuanto mayor sea el aumento del lente 
objetivo menor será la distancia de trabajo. 
 El siguiente cuadro te muestra esta información para cada objetivo. 
Objetivo 4X 10X 40X 100X 
Distancia de 
trabajo (mm) 
27.8 8.0 0.6 0.13 
 
La distancia de trabajo suele estar grabada en el barril del objetivo junto con otras especificaciones como 
la AN. 
 
 
 
 
 
 
Finalmente, el campo óptico se refiere al área iluminada de observación bajo cada lente, es decir, el 
campo que puedes observar al asomarte por el lente. Como este es un círculo, suele describirse en 
términos de su diámetro. El tamaño del campo óptico es inversamente proporcional al aumento total. 
Piénsalo así, entre más te acerques, más te enfocas en un área más pequeña. 
Magnificación Tamaño del campo óptico 
4X 
10X 
40X 
 
Para medir el diámetro del campo óptico se puede utilizar un papel milimetrado. Este se monta sobre un 
portaobjetos y simplemente cuentas cuantos cuadritos (de 1 mm) caben en el campo. 
 
magnificación 
distancia de 
trabajo 
lente de inmersión AN 
 
 
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No obstante, esto solo es posible para los lentes de bajo poder, ya que en los de alto poder solo caben 
fragmentos del cuadrito, es decir, no puedes ver los bordes del milímetro para medir el campo. Como los 
lentes de alto y bajo poder están relacionados por su tamaño, todavía puedes calcular los campos ópticos 
de lentes de alto poder de manera proporcional (multiplicando el diámetro que hayas medido bajo un lente 
de bajo poder, por la relación entre los poderes). Esto se te demuestraen la siguiente fórmula: 
 
Diámetro (AP) = Diámetro (BP) * Aumento (BP)/ Aumento (AP) 
donde AP = alto poder; BP = bajo poder 
 
Así, si el diámetro del campo óptico es de 4.5 mm con el objetivo de 4X, sabes que en el de 10X el campo 
óptico va a medir 1.8 mm (4.5 mm * 4X/10X). 
 
Cálculos importantes al utilizar el microscopio 
Tamaño Real 
Un aspecto que con frecuencia desearás saber, es el tamaño real de tu muestra (e.g., un microorganismo o 
parte de este). Como en la microscopía trabajamos con objetos tan pequeños, la unidad de medición que 
utilizamos es la micra o micrón (), una milésima de un milímetro (0.001 mm). 
En esencia, hay dos maneras de obtener el tamaño real de un objeto observado bajo el microscopio: 
1) La primera involucra la utilización de dos escalas impresas conocidas como micrómetros (Fig. 4). 
Una escala va impresa en un pequeño disco de vidrio que se añade al lente ocular (micrómetro 
ocular). Esta escala no tiene unidades particulares, ya que el tamaño entre las rayitas cambiará según 
el aumento del objetivo. Por esto, el micrómetro ocular viene acompañado de un portaobjetos con 
escalas finísimas impresas (micrómetro de platina), donde cada división representa 0.1 ó hasta 0.01 
mm según la escala (divisiones que no puedes ver a simple vista). Para saber cuánto mide cada rayita 
del micrómetro ocular bajo cada objetivo, basta con que montes el portaobjetos y alinees ambas 
escalas. Una vez sabes cuánto mide cada rayita del micrómetro ocular, entonces puedes montar tu 
muestra y medirla directamente. 
 
 
 
 
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Figura 4. Método del micrómetro para obtener 
medidas al microscopio. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2) La segunda manera de obtener el tamaño real de un objeto no necesita un micrómetro, pero es menos 
precisa. Le podemos llamar como el método de estimación, ya que lo que hacemos es calcular el 
tamaño del objeto con base en la proporción del campo óptico que ocupa. 
Supongamos que observamos un organismo al microscopio (imagen mostrada a la 
derecha). Una vez calculado el campo visual, se puede obtener el tamaño 
aproximado del objeto observado dividiendo el valor del diámetro del campo visual 
entre el número de veces que el objeto cabe en ese campo. Por ejemplo, si sabemos 
que el diámetro del campo óptico mide 360 m, es posible visualizar que: 
 
Aproximadamente 4 especímenes de igual longitud cubrirían el campo óptico 
en sentido horizontal y; 
Aproximadamente 10 especímenes del mismo grosor cubrirían el campo óptico 
en sentido vertical 
 
En este caso, se estima así que el tamaño de este espécimen es de 90 m de longitud por 36 m de ancho. 
Pese a que quizás no sea muy preciso, la utilidad de este método radica en la rapidez con que puede 
darnos el tamaño aproximado de un organismo. 
 
Tamaño aparente 
Por último, también puede resultar de interés conocer el tamaño aparente del objeto observado, es decir, 
qué tan grande aparece el objeto una vez es amplificado por los lentes del microscopio. Recuerda que el 
aumento total de un objeto observado al microscopio corresponde al producto del aumento del objetivo 
por el aumento del lente ocular. Así, para obtener el tamaño aparente de un objeto observado al 
microscopio, basta con que multipliques su tamaño real por el aumento total: 
 
 
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Por ejemplo, para el caso anterior, puedes decir que si el organismo tiene un tamaño aproximado de 90 
m, ante tu vista, este organismo parece medir 45,000 m (90m * 500X), ó 4.5 cm. 
Nota: Fíjate que despejando la fórmula también puedes calcular el tamaño real de un organismo a partir 
de su tamaño aparente si fuese necesario. 
 
Preparaciones de la muestra 
Según la muestra que se desea observar al microscopio, podemos recurrir a los siguientes tipos de 
preparación: 
 
Seca: para este tipo de preparación, se requiere de una sección muy delgada de la muestra que se coloca 
en el centro del portaobjeto. En caso de tener una muestra opaca, es importante obtener cortes muy 
delgados de la preparación. 
 
Húmeda: Se coloca la muestra en una suspensión 
(generalmente agua, glicerina, agua salada o aceite de 
inmersión). Esto se hace añadiendo una gota al 
portaobjetos, colocando luego el cubreobjetos en ángulo, y 
dejándolo caer lentamente para evitar la formación de 
burbujas. 
 
Fija: Es como la húmeda, pero luego se procede a fijar mediante calor o agentes químicos. 
Frecuentemente una vez fijada la preparación, se utilizan distintas técnicas de tinción para aumentar el 
contraste en la imagen microscópica. Una preparación fija puede ser guardada para su uso durante años. 
Al preparar una muestra, también es importante tener en cuenta si se necesita la adición de tintes para 
observarla o realizar un contraste (e.g., para discriminar entre los diferentes componentes celulares o 
tisulares). Por ejemplo, en las plantas existe una gran variedad de pigmentos naturales (clorofila, 
carotenos, antocianinas, etc.) que, sumado a la presencia de una pared celular, facilita la delimitación 
celular y la discriminación entre diferentes tejidos sin necesidad de añadir ningún tinte. Sin embargo, los 
tejidos animales son en su gran mayoría incoloros, requiriendo así la adición de uno o varios compuestos 
para poder observarlos (esto se hace según la afinidad que tengan para determinados colorantes). De esta 
manera, el tinte puede funcionar también como la suspensión bajo la cual se preparan muestras húmedas 
(i.e., sirve de medio de suspensión y tinte a la vez). 
 
 
cubreobjeto 
portaobjeto suspensión con la muestra 
Tamaño aparente = Tamaño real * Aumento Total 
 
 
 
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III. PROCEDIMIENTO 
En este laboratorio se utilizarán imágenes representativas del dominio Bacteria y del grupo de los protistas 
para que te familiarices con estos grupos y su observación al microscopio. La mayoría de estas imágenes 
fueron producidas mediante el uso de microscopios de luz compuestos como los que se utilizan en la 
universidad, así que tendrás el chance de observar estos organismos ¡casi como si lo hicieras de manera 
presencial! Algunas otras imágenes fueron obtenidas con un microscopio electrónico; se te muestran para 
darte más detalle sobre algunas características importantes de estos grupos. 
 
Durante la práctica también realizarás algunos cálculos importantes que te serán de gran utilidad una vez 
utilices un microscopio de manera presencial. Estos incluyen la medición de campos ópticos, y el cálculo 
del tamaño real y aparente de algunos de los organismos que se observan. 
Esta práctica tiene como objetivo principal el desarrollar destrezas y habilidades en los participantes del 
curso. Por lo tanto, no se requiere el diseño de hipótesis y predicciones, únicamente, seguir detenidamente 
las indicaciones de la práctica.