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La célula obtiene, transforma y utiliza la energía a partir de diferentes procesos metabólicos Estos procesos metabólicos son reacciones químicas que están relacionadas con las leyes de la termodinámica 1er ley: un sistema aislado significa que no intercambia materia y energía con su exterior es Por eso que se le suministra un trabajo que la transformara a energía térmica. En los seres vivos la energía transformada en un sistema aislado es cte. pero estos son sistemas abiertos entonces ¿Cómo permanecen cte.? Esto se debe a que parte de la energía que se pierde o se disipa en forma de calor (energía total) es igual a la ganada por su entorno. No toda la energía es utilizada 100% para producir un efecto (trabajo) sino que parte se pierde en forma de calor que dependerá de su eficiencia (el tipo de transformación). E total liberada = E útil + calor 2da ley: todo sistema tiende a un estado de equilibrio y al hacerlo se disipa energía completamente hasta no poder realizar mas procesos. A la energía disipada se la relaciona con la temperatura y con un factor denominado entropía. En un sistema aislado los procesos internos que son espontáneos ocurren por la heterogeneidad por ej.: si una porción esta mas caliente que el resto esa porción se va a enfriar hasta que todo el sistema sea uniforme y así lograr el equilibrio donde toda la energía se habrá disipado y la entropía habrá llegado a su máximo. mayor energía disipada=mayor entropía los seres vivos ganan orden interno a expensas de generar desorden en su ambiente en conclusión: para que la célula pueda realizar todas sus actividades es necesario que ABSORBAN energía y que la LIBEREN de forma disipada para lograr así un estado estacionario. Las reacciones químicas en seres vivos (R→p) se encuentran llevadas a cabo: a) por el ATP (moneda energética): la energía se encuentra contenida entre los enlaces/uniones de los átomos de la molécula donde se transforma en energía química. Adenosina trifosfato (nucleótido) Se rompe (hidroliza) por la ATP asa provocando la liberación de Energía formando ADP que se comporta como una batería descargada y reingresa a la mitondria para unirse a un fosfato y convertirse en ATP. Con la energía proveniente del entorno se forma su molécula Con la ayuda de la ATPsintetasa. b) catalizadas por enzimas que son catalizadores biológicos y permite llevar a cabo las reacciones endergónicas y exergónicas. Si al producirse la reacción se libera energía, la energía de los productos (entalpia) es exotérmica porque parte de esa energía útil se está liberando en forma de calor y otra parte puede aprovecharse para realizar un trabajo. En este proceso se lo denomina como “energía libre de Gibbs” que permite estimar la máxima cantidad de energía liberada en una reacción la cual podría ser transformada en trabajo por el organismo. Estructuras de las enzimas: pueden ser proteínas o ribozimas (ARN con actividad enzimática) Composición química: Sistema aislado entorno ATP ♥pueden ser simples La interacción entre el sitio activo de la enzima y el sustrato se debe a un reconocimiento especifico y hay 2 tipos: a) llave-cerradura: sitio activo de la enzima y el sustrato se complementan b) ajuste inducido: luego de la interacción del sustrato y enzima se altera la conformación de la enzima creando un íntimo ajuste entre el sitio activo y el sustrato creando tensión en las moléculas reactivas para facilitar la reacción. ♥Pueden ser complejas: proteína asociada a porción no proteica Características de enzimas: ✔especificidad: solo actúan para un solo sustrato ✔ eficientes: se requiere baja concentración para cumplir su funcion ✔reutilizables: al no sufrir modificaciones permanentes están listas para volver a actuar luego de una reacción ✔ al disminuir actividad enzimática no modifican la energía de reacción ya que solo crean mecanismos de reacción con compuestos intermediarios que poseen estados energéticos bajos debilitando enlaces químicos existentes y facilitando la formación de nuevos. (mantienen variación G) ✔ son moduladas o reguladas lo cual provoca que aumente o disminuya su actividad enzimática. Hay 3 mecanismos de regulación a) síntesis de la enzima: moléculas que actúan en el sitio de regulación del gen en el ADN b) degradación: ubiquitina marca para la destrucción de la enzima en el proteosoma c) actividad catalítica sin modificar la cantidad de enzima sintetizada puede aumentar o disminuir dependiendo de: E+S= P+E Apoenzima + porción no proteica = Holoenzima -Iones: sustancia adicional llamada COFACTOR - macromoléculas NAD O FAD denominadas COENZIMAS. Se unen en forma temporal o permanente Porción proteica (inactivo) Toda la enzima (activa) 1) Temperatura: cada enzima tiene una temperatura optima si se sobre pasa disminuye su actividad provocando cambios conformacionales 2) PH: cada enzima tiene un pH optimo (ocurre lo mismo que en la temperatura) 3) Cantidad de sustrato 4) Modificaciones covalentes Inhibidores competitivos: compuestos reguladores que ocupan el sitio activo de la enzima y comienzan una especie de competencia con el sustrato para así unirse al sitio activo. esta inhibición esta llevada a cabo por un aumento en la concentración de sustrato Ej.: fosforilación de enzimas en aminoácidos donde el ATP+QUINASA(CINASA) activan la enzima junto con su fosfato, pero luego la FOSFATASA escinde el fosfato y vuelve a la inactividad. Este proceso es postraduccional Inhibidores no competitivos: compuesto inhibitorio se une a la enzima en un sitio diferente al sitio activo. No es llevada a cabo por un aumento en la concentración de sustrato Inhibidores irreversibles: desnaturalización de la enzima en su estructura terciaria de modo que no puede reestablecerse porque sus cadenas polipeptídicas quedan inactivadas. Ej.: el zimógeno que se encuentra de forma inactiva por la ayuda de una enzima por una parte se activa y por otro genera un fragmento no proteico inactivo: enzimas digestivas. 5) Interacciones alostéricas: una enzima puede activarse o inactivarse de forma temporal. Estas interacciones ocurren en enzimas que tienen al menos 2 sitios de unión: un sitio activo y un sitio de regulación al que se une en este un efector alostérico que va a modificar la conformación de la enzima y su sitio activo, de esta manera activándola o inactivándola. Estrategias de las enzimas alostéricas: a) Transcripcional: primer paso en la producción de una proteína formando ARN a partir de ADN b) Postraduccional: último paso en la síntesis de la proteína, si ocurre modificación en la estructura de las proteínas ya sintetizadas se conoce como modificación postraduccional. La suma de todas las reacciones provocadas por las enzimas se llaman vías metabólicas (red de redes) dividiéndose en: ♢Anabólicas: reacciones involucradas en la biosíntesis de la estructura y funciones de célula (se construye a si misma) ♢Catabólicas: degradan moléculas para obtener energía y los materiales necesarios para impulsar las reacciones anabólicas. Vimos que la energía es provista por el ATP, pero también es tomada por los alimentos que se clasifican en: . hidratos de carbono . grasas . proteínas . minerales y H2o reversible irreversible + O2 Ingresa por sistema respiratorio Ingresan Por Sistema digestivo Cuando los alimentos ingresan se degradan de forma gradual (sucesivas oxidaciones) por medio de enzimas que llevanesa energía extraída a ADP y permitiendo que se forme ATP con mínima generación de calor quedando como productos de desecho el Co2 y H2o. En el proceso de degradación de alimentos ocurren reacciones de oxidación-reducción donde intervienen dos moléculas: NAD (NAD+ cuando se oxida y NADH cuando se reduce) y FAD (FAD Y FADH2). 1er etapa: degradación de alimentos en el tubo digestivo Hidratos de carbono lípidos proteínas Monosacáridos (glucosa) ácidos grasos y glicerol aminoácidos Cuando son absorbidas finalmente por el epitelio intestinal estas moléculas ingresan a la sangre y por ella llegan a las células. 2da etapa: células guardan en el citosol parte de la glucosa y ácidos grasos bajo la forma de glucógeno y triacilgliceroles. Glucolisis Ubicación: citoplasma celular (citosol) sin requerir O2 Pasos del glucolisis: Paso 1 y 3: se consume un solo ATP generando compuestos de alta energía a la cual se une la glucosa. reacción catalizada por enzima hexocinasa En el paso 3 se encuentra una enzima fosfotructocinasa en la que su actividad es inhibida por el ATP (si esta en alta concentración). Esta interacción alostérica regula la glucolisis La formación de piruvato se lleva a cabo por el piruvato quinasa. Paso 6 y 9: se obtienen 2ATP (en realidad son 4 ATP, pero se consumen 2) por cada piruvato (acordarse de que se forman 2 piruvato). una parte de la energía liberada promueve la reducción de 2 NAD+ Resultado final: 2 PIRUVATO, 2 NADH Y 2 ATP Dependiendo de la presencia o ausencia del oxígeno el piruvato puede seguir 2 vías 1) Entrar al ciclo de Krebs, es decir, respiración celular (vía aeróbica) 2) Realizar fermentación dando como producto ácido láctico (vía anaeróbica) denominada fermentación láctica como en las células musculares durante ejercicios intensos afectando su contracción y provocando la “fatiga muscular”. También esta la fermentación alcohólica llevada a cabo en levaduras para la formación de vino. Paso previo antes de ingresar al ciclo: El piruvato para ingresar a la mitocondria debe atravesar la membrana externa por difusión y luego a la membrana interna por cotransporte acoplado a protones. Cuando finalmente llega a la matriz mitocondrial el ácido pirúvico derivado del glucolisis pierde un átomo de carbono por su oxidación y se elimina en forma de CO2 generando NADH reducido y por otro lado acetilo que se acopla a una coenzima A para dar acetil-CoA. Ciclo de Krebs: Comienza con la unión de acetil-CoA con ácido oxalacetico formando ácido cítrico (6 carbonos) en lo cual 2 de estos carbonos se oxidan a Co2 regenerando el ácido axalacetico con la cual finaliza el ciclo (este acido no es el mismo que el inicial). Parte de la energía liberada por la oxidación es utilizada para la conversión de ATP y NADH e reducción de FADH2 (electrones almacenados con alto nivel energético). Enzimas que regulan glucolisis Interviene piruvato Deshidrog enasa en esta reacción Por cada molécula de glucosa que entre a la glucolisis genera dos vueltas en el ciclo de Krebs obteniendo como resultado 2 ATP, 6 NADH Y 2 FADH2 Transporte de electrones: Los electrones ganados durante la glucolisis, la oxidación del ácido pirúvico y el ciclo de Krebs son conducidos a un nivel energético inferior a través de una reacción redox que constituyen la cadena respiratoria. Los componentes de la cadena respiratoria (se encuentran en la membrana interna) generan un complejo multienzimatico: citocromo c reductasa, citocromo citocromo oxidasa,NADH- Q reductasa y ubiquinona. Una vez ya finalizado el pasaje de electrones se forma H2o Fosforilación oxidativa Durante este transporte se liberó energía que se utilizó para la formación de ATP (interviene enzima ATPsintetasa) por un proceso llamado fosforilación oxidativa conocido como acoplamiento quimiostatico en la que a medida que se produce la transferencia de electrones parte de la energía liberada es utilizada para bombear protones desde la matriz hacia la intermembrana generando un gradiente electroquímico conocido como fuerza Protón-Matriz. Estos protones pueden volver a la matriz mediante un canal formado por la ATPsintetasa que aprovecha la energía del transporte para sintetizar ATP. Cantidad de ATP formados por conversión final durante la glucolisis, formación de piruvato acetil-coA, el ciclo de Krebs y transporte de electrones es de 38 ATP (rendimiento máximo, pero depende de la necesidad de la célula) Degradación de proteínas y lípidos los ácidos grasos a diferencia de la glucosa no se degradan en el citosol, sino que pasan directamente a las mitocondrias donde una serie de enzimas los degrada en un proceso llamado b-oxidación donde forman acetilos que son cedidos a la CoA e ingresan al ciclo de Krebs. Las grasas aportan mas energía que los hidratos de carbono (glucosa) por la cantidad de NADH y FADH2 generados en la b-oxidación de los ácidos grasos Los aminoácidos se convierten por intervención de enzimas especificas en piruvato, acetilos o compuestos de la vía del ciclo de Krebs o glucolisis (en estas últimas 3 el aminoácido es desaminado=eliminación de grupo amino y el esqueleto de carbono residual es lo que se convierte) - se hallan en todos los tipos celulares - Glóbulos rojos carecen de mitocondrias - forman ATP - tamaño: largo de 3 um y diámetro de 0,5 um → forma cilíndrica (experimentan cambios sutiles) - numero de mitocondrias depende según tipo celular - ubicación: depende de la demanda energética . móvil: se desplazan de un lado a otro debido a microtúbulos y proteínas motoras (citoesqueleto) hacia zonas que requieren energía . fijo: como espermatozoides,adipocitos y celula muscular estriada (citoplasma) Posee membranas: interna y externa que contienen compartimientos de intermembrana y matriz mitocondrial. - Funciones: - Respiración celular: Glucolisis (citoplasma/citosol) Ciclo de Krebs (matriz) Fosforilación oxidativa o transporte de e (crestas) - Apoptosis o muerte celular programada que consiste en la eliminación de células tumorales o infectadas por un virus mediante la desactivación de la proteína BCL2 incerta en la membrana ext. - Remoción del calcio citoplasmático (aumento de calcio logrando que sea toxico): ingresa a través de la permeabilidad de la membrana ext quedando en el espacio intramembrana que es removido por la proteína calcio TPasa llevándolo hacia la matriz - Síntesis de aminoácidos y esteroides La matriz mitocondrial - gel denso que posee proteínas solubles con ribosomas y ADN mitocondrial Componentes: . piruvato hidrogenasa → descarboxilación oxidativa .enzimas que intervienen en B-oxidacion de acidos grasos . enzimas del ciclo de krebs ( NO succinato) . CoA, NAD, ADP,fosfato,O2 etc . granulos compuestos por Ca+ . varias copias de ADN circular . 13 ARNm , 2 ARNr y 22 ARNt Membrana interna - Impermeable - Posee mas cantidad de proteínas que de lipidos - Crestas mitocondriales formadas por plegamientos - 2 caras de bicapa lipídica → ASIMETRIA : a) Moléculas de cadena de transporte de e (respiratoria) . NADH deshidrogenasa I .succito deshidrogenasa II . B- C1 III .citocromo oxidasa IV : compuesto por un complejo proteico que son pequeños transportadores de electrones desplegado en ubiquinona (no proteico) y citocromo c (proteína periférica). b) ATPsintasa (ubicado en crestas) posee 2 sectores: . transmembrana (F0) que atraviesa la bicapa y forma un túnel para pasaje de H+ . orientado hacia matriz (F1) donde se produce catálisis de ATP a partir de ADP+P (fosforilación oxidativa) c) Fosfolípido doble: puede ser difosfatoglicerol o cardiolipina que solo permite el pasaje de O2, H2o,Co2,NH3,acidos grasos a la bicapa d) Canales ionicos y permeasasque permite pasaje selectivo de iones y moléculas desde intermembrana a matriz o viceversa Membrana externa - Tiene mayor cantidad de lípidos que de proteinas - Permeable a solutos citosólicos, pero no macromoléculas - En la bicapa hay proteínas transmembranosas de tipo multipaso que se las denomina porinas con hélice beta formando canales acuosos para el pasaje de iones y moléculas Membrana Externa permeable a solutos del citosol, pero no a las macromoléculas presenta colesterol, fosfolípidos y proteínas relacionadas a la supervivencia celular Membrana Interna impermeable a electrolitos (inclusos a protones), al agua y solutos pequeños presenta proteínas de la respiración celular - Espacio intermembrana - Elevada concentración H+ - -solutos (cantidad similar al de citosol) ingresan por porinas en la membrana externa Funciones en cada estructura Matriz mitocondrial ❣ Descarboxilacion oxidativa de piruvato y B-oxidacion de Acidos grasos El piruvato se convierte en acetil CoA por la piruvato deshidrogenasa al que se le suma derivados de la B-oxidacion de acidos grasos y de aminoácidos. El Acetil CoA se combina con acido oxolacetico formando al acido cítrico y dando origen al ↓ ❣ciclo de krebs - Reacciones mediadas por enzimas especificas → producto: acido oxolacetico - Acido cítrico liberado en forma de Co2 al citosol ,extracelular, sangre-pulmon (eliminación) genera gran energía para asi formar ATP (1), 3 NADH, 1 FADH2 (se le incorpora el hidrogeno por la succinato hidrogenasa). ATPsintasa Membrana interna ❣Fosforilación oxidativa Energía contenida en los NADH y FADH2 (ciclo de krebs) se transfiere a ATP por oxidacion de esas coenzimas que hacen liberar los hidrogenos disociándose en H+ y e- Para e- de NADH para e- FADH La energía de los electrones van disminyendo a medida que ceden electrones que son utilizados para transportar H+ desde matriz a intermembrana mediante bombas H pero la protonicomotora hace que H+ retornen a matriz por el túnel ATpsintasa donde en: -sector F0 regresa H+ a matriz - sector F1: cataliza ATP a partir de ADP+P en proceso de fosforilación . esa catalizacion es producida debido a la energía de la protonicomotora que se transforma en energía química de ATP que sale al citosol por ATP-ADP Translocasa (contratransporte) Excepción al ingreso de mitocondria ❣ la glucolisis: Un caso son los globulos rojos que se mantienen vivos por este proceso a pesar de no tener mitocondrias Sus NADH no ingresan a la mitocondria por la impermeabilidad de la membrana interna pero si ingresan los e- y H+ por las lanzaderas (moléculas citosólicas) Las lanzaderas son - Glicerol 3-fosfato que es glicerol 3 -fosfato + FAD= FADH2 - Malato-aspartato donde la reduccion NADH da lugar al oxalacetato que se genera a partir de malato que reduce NAD+ a NADH produciendo 3 ATP (acordarse que cuando ingresa a la matriz se reoxida volviendo a lo inicial) En células musculares el piruvato puede convertirse en lactato por la falta de 02 en vez de convertirse en Acetil CoA formando asi la fermentación láctica (omite ciclo y fosforilación). El lactato pasa a la sangre y llega al hígado-hepatocito convirtiéndose en glucosa NADH → NAD+ + 1 H+ + 2 e- FADH2 → FAD + 2H+ + 2 e- Gran energía contenida en electrones que ingresan a cadena respiratoria (transporte de e-)↓ Entrada: NADH deshidrogenasa ↓ Ubiquinona ↓ B-C1 ↓ Citocromo c ↓ Almacenado: citocromo oxidasa ↓ Retorna: a matriz Entrada: succinato hidrogenasa ↓ Ubiquinona ↓ B-C1 ↓ Citocromo c ↓ Almacenado: citocromo oxidasa ↓ Retorna: a matriz En las células adiposas de la grasa parda la energía protónicomotora de H+ se transfiere a ATP y su energía se convierte a energía térmica por la termogenina (transportador de H+) que no poseen porción F1 pero igual se forma H2o que se combina con los H+ y asi disipa calor. Reproducción de las mitocondrias En las células que no se multiplicas sus respectivas mitocondrias son degradadas por fago lisosomas. Las mitocondrias se producen por la división de ya pre existentes mediante la fisión binaria pero antes duplican su tamaño. Esta división tiene lugar en todo el ciclo celular, pero cabe destacar que no todas se multiplican y por eso se dividen muchas veces. Para el origen de nuevas mitocondrias se duplica la membrana interna y externa provocando que se incremente mas fosfolípidos aportados de la membrana del RE. Este incremento se produce con la ayuda de proteínas citosólicas: intercambiadoras que extraen los fosfolípidos del RE depositando una parte a la membrana externa de la mitocondria como en la interna por movimiento Flip-flop donde experimentan modificaciones (algunos). El ADN circular de las mitocondrias son varias copias donde se transcriben 13 ARNm (síntesis de 13 proteínas pertenecientes a la cadena respiratoria en los ribosomas mitocondriales), 22 ARNt y 2 ARNr.Todos estos se encuentran en la matriz y el ADN esta adosado a la membrana interna. Como las 13 proteínas que se sintetizan son muy pocas se incorporan las del citosol que tienen un péptido señal que es reconocido por un receptor TOM y son sintetizadas en ribosomas citosólicos libres. Las proteínas mitocondriales producidas en el citosol se asocian a chaperonas que las mantienen desplegadas hasta llegar a la mitocondria. Las proteínas asociadas a chaperonas citosólicas se desprende de ella al llegar a la membrana externa de la mitocondria para luego asociarse a chaperonas ligadas a la membrana interna. Una vez ahí la proteína se plega con ayuda o sin ayuda. Las proteínas se incorporan a la mitocondria porque la membrana externa tiene su translocon TOM y la membrana interna su translocon TIM (ambos tienen que estar juntos para permitir el ingreso de la proteína). ADN mitocondrial diferente al nuclear - Circular no asociado a histonas - Una de las hijas se sintetiza antes que la otra - Tamaño pequeño - Pocas secuencias génicas - Genera 22 ARNt cuando en el nuclear se generan 31 - 2 ARNr dan lugar a ribosomas de 55S - 4 codones en diferente orden - Transcriben sus 2 cadenas - Remoción de partes de ARN - Varias copias cuando en el nuclear solo hay 2 ADN Lo que tienen en común las mitocondrias con las procariotas es que se reproducen por fision binaria,las formas,medidas,componentes y son aerobicas. - Son un tipo de plastidos que se encuentran en células vegetales. Los plastidos se generan a partir de estructuras precursoras llamadas proplastidos que pueden ser: a) Cromoplastos con pigmento: menor clorofila,menor actividad fotosintética b) Leucoplastos incoloros:tienen amiloplastos que producen y acumulan granulos de almidon. los proplastidos en presencia de luz aumentan su membrana interna y emiten vesículas en dirección al estroma que luego se transforman en sacos aplanados,es decir, los tilacoides hasta formar las granas . - Se lo puede denominar etioplasto si se coloca planta en poca iluminación lo que hace que las hojas pierdan su color verde y que las membranas de los tilacoides se desorganicen (proceso llamado etiolación) . - Atrapan energía solar y lo convierten en energía química (fotosíntesis) . Utilizan la energía junto con el CO2 para sintetizar moléculas que sirven como alimento, además poseen pigmentos donde ahí se produce la fotosíntesis con la producción de O2 y energía química. - Ubicación : tejidos de las hojas de las plantas y algas Tamaño : forma esférica de 4-6 um de diámetro. Estas 2 caracteristicas dependen del tipo celular - Deriva de una simbiosis: es elresultado de una relacion entre una bacteria y una eucariota - Estructura: a) Envoltura (intermembrana): externa y interna (no presentan plegamientos) b) Estroma: . se encuentran inmersos los tilacoides . compuesta por proteínas .contiene ADN Y ARN . fijación de Co2: producción de hidratos de carbono,síntesis de acidos grasos y proteínas. c) Tilacoide: . son sacos aplanados en la que cada pila se denomina “grana” . pueden atravesar el estroma conectando 2 granas : tilacoide de la estroma . pared de tilacoides (membrana) : es una bicapa lipídica con proteínas y moléculas que intervienen en la fotosíntesis . Las membranas tilacoidales se repliegan entre si formando estructuras llamadas tilacoides y a su vez estos se repliegan formando granas. La comuniacion entre tilacoide-grana se da por unas laminillas. Estas membranas forman un espacio llamado intra tilacoide. Membrana Externa permeable a los iones, algunos solutos pequeños y el agua sin plegamientos Membrana Interna más impermeable y posee los transportadores para facilitar el traspaso de sustancias Es lisa y sin plegamientos Membrana Tilacoidal impermeable a los iones y a los protones presenta tilacoides (plegamientos) se encuentra la clorofila, la ATP sintasa, los citocromos y la plastoquinona. presenta proteínas de la respiración celular. presenta los fotosistemas I y II Proceso de fotosíntesis: Características: -fundamental para celula vegetal - transforma enegia solar (fotones) a energía química La luz contiene energía que se transmite mediante fotones donde la clorofila absorbe esos fotones adquiriendo mayor energía que se va a disipar en forma de calor o radiación lumínica,llevar de una molecula a otra o convertirse en energía quimica - reacción: Co2 + H2o =hidratos de carbono + O2. Los hidratos de carbono son solubles que circulan en tejidos de la planta o se acumulan como granos de almidon . El o2 se libera. -Su rendimiento depende de : . intensidad de la luz .disponibilidad de agua en el suelo .concentracion de co2 .temperatura ambiental Fotosíntesis fotoquímica (presencia de luz) Se lleva a cabo en las granas, mas precisamente en las membranas tilacoidales se encuentran complejos macromoleculares llamados fotosistema I(membrana externa de la grana) y fotisistema II (membrana interior de la grana). Dentro de estos complejos se pueden distinguir 2 zonas: la antena y el centro de reacción. La antena esta compuesto de pigmentos fotosintéticos y clorofila que son las que capturan la energía lumínica y la llevan al centro de reacción en modo de “reacciones en cascada”. El centro de reacción esta formado por clorofila unida a combinaciones de proteínas y donde se produce la síntesis de ATP( fotofosforilación) y NADPH reducido. En esta etapa fotoquímica también se produce el transporte de electrones donde interviene la ATP sintasa cuando la clorofila del fotosistema II recibe energía de un pigmento de la antena se oxida y se va a unir a electrones libres de la fotolisis del agua y la transferirá a la cadena de electrones donde la va a aceptar la plastoquinona desplazándola hacia el citocromo B6 F pasando finalmente al fotosistema I con la ayuda de la plastocianina En el fotosistema I ocurre el transporte con la diferencia que aceptador es la ferrodocxima y el secundario en NADPH reductasa. Gracias a la utilización de energía lumínica y la fotolisis de agua porque interactúan con los fotones se produce como subproducto iones o2 que se unen entre si y se liberan Fotosíntesis bioquímica (fase oscura: sin presencia de luz) Se produce en el estroma la síntesis de hidratos de carbono (glucosa) y acidos grasos a partir de Co2 mediante una serie de reacciones en un proceso llamado “ciclo de calvin” en las que intervienen varias enzimas del estroma. Apara que esto ocurra es necesaria la energía almacenada en ATP Y NADPH reducido en la etapa fotoquímica Ciclo de calvin: El co2 ingresa al cloroplasto/estroma( fijación de carbono o carboxilacion) incorporándose en la ribola 1,5 bifosfato gracias a la enzima rubisco transformándose en 3-fosfoglicerido que es fosforilada por el ATP de la etapa fotoquímica convirtiéndose asi en 1,3- difosfoglicerido que a su vez reducido por el NADPH a gliceraldehído 3-fosfato (reducción) que va a formar recién la molecula de glucosa cuando se completen 6 vueltas del ciclo (regeneración para comenzar nuevo ciclo). La enzima rubisco puede incorporar oxigeno para generar CO2 mediante el proceso de Fotorespiracion (presencia de luz). Reproducción Los proplastidos y cloroplastos se multiplican por fision binaria lo cual obliga al aumento de tamaño de ambos. Para que suceda ese aumento se requiere la síntesis de los componentes proteicos donde intervienen sistemas genéticos: uno del cloroplasto y del nuclear (por eso se dice que es semiautónomo porque la mayoría de sus componentes dependen de genes nucleares = simbiosis). La mayoría de las proteínas de los cloroplastos provienen del citosol de modo que son codificadas por genes nucleares . La enzima ribulosa 1,5 difosfato carboxilasa es la proteína soluble mas abundante del cloroplasto y posee dos subunidades: Subunidad mayor: codificada por genes del ADN cloroplasmatico Subunidad menor: codificada por genes nucleares , es sintetizada en el citosol y llevada al estroma del cloroplasto para su maduración la ayuda de una molecula precursora. ¿Cómo llega al estroma? : la proteasa escinde el péptido señal de esta subunidad y asi la subunidad es liberada en el estroma. mitocondrias Cloroplastos similitudes Diferencias -Ambas son responsables de procesos metabólicos para obtener energía -Se encuentran en el citoplasma -Recubiertos por doble membrana con espacio intermembrana -Poseen adn circular,ribosomas y proteínas solubles -Se originaron a partir de células procariontes : teoría endosimbiótica -Sintetizan sus propias proteínas y reproducirse/dividirse por fusión binaria -Tamaño: cloroplasto mayor que mitocondria -Ubicación: mitocondria en celula vegetal y animal e los cloroplastos solo en células vegetales -Membrana: cloroplastos poseen 3 y mitocondrias solo 2 -Funciones: mitocondrias obtienen energía a partir de respiración celular mientras que los cloroplastos a partir de la fotosíntesis -Transporte de e: en mitocondrias en la membrana interna y en cloroplastos en membrana tilacoidal Los cloroplastos poseen pigmentos fotosintéticos mientras mitocondrias no COMUNICACIÓN CELULAR En unicelulares: reciben señales del medio Pluricelulares: se comunican para coordinar el trabajo en conjunto La supervivencia y actividad de una celula dependen de estimulos externos provenientes de otras y asi realizar tareas como : -diferenciacion -movimiento -metabolismo -proliferacion -muerte celular -supervivencia Para que una comunicación celular se realice debe haber Los estimulos externos se llaman inducciones y se dividen en : a) Endocrinas b) Paracrina c) Sinapsis nerviosa d) Autocrina e) contacto celula-celula Célula emisora ligando Célula diana receptor Respuesta celular sangre hormona Corto trecho de matriz extracelular Terminal axónico Neurotransmisor -Muscular -Secretoria -Membrana plasmática de otra neurona Célula diana Célula emisora Ligando retenido en membrana plasmática de la celula emisora Desplazamiento directo ingresa Camino por Ej: secreciones neuro endocrinas Ej: respuestas inmunológicas oSinapsis electrica: la transmision de informacion se da por el paso de iones de una celula a la otra a traves de unionesde tipo GAP en celulas estrechamente adheridas. oSinapsis quimica: la union se produce por la liberacion de una sustancia llamada neurotransmisor, la cual se encuentra almacenada en vesiculas en el citoplasma de la neurona secretora y, frente a la llegada de un potencial de accion, es liberada en un espacio denominado hendidura sinaptica en el cual puede actuar sobre receptores ubicados en la membrana de la celula diana. generalmente ocurren por medio de glucoproteinas de las superficies de las membranas de las celulas. Por medio de contacto las celulas pueden recibir señales, tanto estructurales como funcionales. Señales químicas Las etapas en el proceso de comunicacion son: 1. La sintesis de una señal por la celula emisora. 2. La secrecion de la señal por parte de esta tambien. 3. Transporte de la señal a la celula diana. 4. Reconocimiento de señal por un receptor de la celula diana. 5. Transmision intracelular de la señal (transduccion de la señal) 6. Elaboracion de una respuesta 7. Terminacion de la respuesta Reconocimiento de señal por un receptor de la celula diana. El ligando actua con especificidad (actua sobre ciertas células) complementándose con la especificidad del receptor. Esta union provoca una adaptación conformacional que general un complejo que puede ser: - Inducido: similar a complejo “ES” genera una especie de encaje inducido - Saturabilidad: el numero de receptores es limitado por lo que al unirse al ligando genera saturabilidad en el sistema - Reversible: el complejo se disocia después de formarse Este complejo es el eslabon de las reacciones quimicas que genera una respuesta celular que puede producirse en segundos (citoplasma) o en horas (nucleo-activacion de genes). Durante este proceso se forma una proteína que va a desencadenar la respuesta Receptores A) Localizados en el citosol : tienen 4 dominios Un ejemplo: NO(oxido nítrico) es secretado por células del vaso sanguíneo que interactua con el receptor del musculo liso del propio vaso sanguíneo generando como respuesta la vaso dilatación( ejemplo: la erección del pene). c) Localizados en la membrana plasmática : 1) Actividad enzimática: Hormonas: esteroideas y tiroideas Vitamina D Acido retinoico endocrina paracrina El mecanismo de accion consiste en que estas señales, de naturaleza hidrofobica , pueden atravesar la membrana por difusion e ingresar a la celula donde el Complejo adquiere forma que le permite ingresar al nucleo y asi unirse a la secuencia generadora de un gen activándolo o suprimiendo la actividad de diversos genes que luego entonces modificaran la transcripcion de ARNm Los receptores siempre están unidos a chaperonas hsp90 pero al unirse al ligando este se desprende de su chaperona 1 mensajero Dan lugar a vías de señales intracelulares 3 dominios Externo : receptor se activa transmembrana Citosólicos: 1) Adquieren actividad enzimática o activan enzima 2) activa proteína G Las señales fluyen por el interior de la celula a través de diferentes moléculas (transducción de la señal) El complejo genera cambios que se van a transmitir a la siguiente molecula ( 2do mensajero) y de esta a la siguiente sucesivamente hasta lograr una respuesta, generando asi una serie de reacciones con distintas vías de señales en la que intervienen moléculas quinasas •Receptores ionotropicos o receptores acoplados a un canal: contienen un canal ionico que se abre cuando se une un neurotrasmisor o un ligando. Estos receptores atraviesan la membrana 4 veces; son receptores de moleculas que actuan como neurotrasmisores a nivel del sistema nervioso, Son transductores rapidos de la señal y generan corrientes ionicas que pueden ser conducidas a traves del axon de una neurona •Receptores enzimáticos: a) Guanilato ciclasa : la celula muscular de auricula cardiaca secreta un ligando ANP que se va a unir con un receptor que adquiere actividad enzimática de guanilato ciclasa que tiene como función transformar GTP a GMPc y que este a su vez activa a la quinasa G que fosforila proteínas citosólicas especificas para generar una respuesta celular. b) El ligando TGF-B que tiene como función la regulación de la proliferación y diferenciación celular se une a un receptor que adquiere actividad enzimática de serina y trionina quinasa que reúne los dominios: los 2 primeros fosforilan serinas y treoninas del otro dominio activándolo y allí se fosforila serinas de las proteínas SMAD que ingresan al nucleo. c) El ligando que es un factor de crecimiento se une a un receptor que tiene actividad enzimática de tirosina quinasa (inducción paracrina). Entre unos de los factores de crecimiento mas importantes se encuentra la insulina que estimula el crecimiento de células. Estos factores fosforilan dominios con la ayuda del ATP al unirse con el receptor y originan asi 3 tipos de vías de transmisión de señales: 1mer via: intervienen proteínas RAS que se relaciona con proteína GEF para activarse (GDP a GTP) y a su vez activa a una proteína MAP (cadena) que activan a quinasa o ingresan al nucleo. 2da via: a) Fosfolipasa C-Y se une a receptor con actividad tirosina quinasa b) Fosfolipasa C-B se une a receptor acoplado a proteína G 3er via: fosfatidilinositol 3-quinasa se activa por la union al receptor con actividad tirosina quinasa o acoplado a proteína G. Recordar: La tirosina quinasa es una molecula que es activada por ligando de hormonas de crecimiento o antigenos. Al activarse se producen enzima JAK que se autofosforila y a su vez fosforila a STAT que ingresan al nucleo para combinarse con proteínas y asi activar genes . 2 ) Activación de la proteína G La proteína G es: - Proteína integral multipaso - Atraviesa 7 veces la bicapa lipídica - Contiene 3 subunidades: a) Alfa b) Beta c) Gamma Hay diferentes tipos de proteínas G La subunidad alfa se comporta como GTPasa y cuando posee un GDP la proteína G se inactiva. Solo se activa cuando el GDP pasa GTP ♥Proteína Gs : activa la enzima AC conduciendo al aumento de concentración citoplasmática de AMPc que es regulado por la fosfodiesterasa y proteína Gi, activando a la PKA (quinasa A). ♥Proteína Gi : inhibe a la AC haciendo caer la concentración de AMPc y inactiva PKA y asi deteniendo finalmente la respuesta celular ♥Proteína Gq : activa la fosfolipasa C-B o C-Y que cataliza PIP2 que forma : -IP3: abre canales de calcio que activa a la quinasa CAM (calmodulina) -DAG: activa quinasa c (proliferación de tumores) ♥Proteína GK: activa canales de potasio Las diferentes proteínas G se pueden unir a diferentes enzimas: a) Enzima AC a partir de ATP forma AMPc b) Enzima fosfolipasa C-B catalizan PIP2 queforma IP3 y DAG c) Enzima fosfatidilinositol 3-quinasa convierte PIP2 a PIP3 Cuando la proteína G se activa el complejo B-Y se separa del dominio A y entran en contacto con las diferentes enzimas activándolas o inhibiendolas generando asi una amplificación de señales por la formación de segundos mensajeros. MUERTE CELULAR La muerte de células es un fenómeno común durante el desarrollo embrionario o durante la vida postnatal en la renovación de tejidos o remoción de células dañadas,no necesarias,envejecidas o peligrosas. Vimos que la comunicación celular es un proceso homeostático ya que permite que la celula se adapte o equilibre frente a los cambios externos. Cuando esto no ocurre se genera una lesión celular que puede ser : Reversible Proceso de autofagia: organelas dañadas son eliminadas por este proceso en el que consiste la digestión de sus propias organelas y macromoléculas como la degradación. La autofagia forma autofagosomas que se fusionan con los lisosomas formando los autolisosomas que son los encargados de este proceso. Irreversible: a) apoptosis constituye unmecanismo intrinseco de muerte celular, el cual es regulado por una variedad de caminos de señalizacion intracelular. Existen dos vias: la via intrinseca o mitocondrial o la via extrinseca o de los receptores de muerte. En ambas vias esta involucrada una familia de proteinas denominadas caspasas, estas son una familia de proteasas En el caso de la via intrinseca, el daño es detectado por una familia de proteinas llamadas BCL-2 que promueve la liberacion de proteinas apoptoticas que activan a una caspasa iniciadora llamada caspasa 9, la cual finalmente activa una caspasa ejecutora (caspasa 3). En el caso de la via extrinseca, miembros de la familia del factor de necrosis tumoral o TNF se unen a un receptor denominado receptor de muerte iniciando una cascada de señalizacion intracelular que activa una caspasa iniciadora llamada caspasa 8, la cual finalmente activa a la caspasa ejecutora que es la caspasa 3. Las caspasas ejecutoras son las que activan a enzimas tales como proteasa y nucleasas las cuales se encargan de la degradacion del citoesqueleto y del material genetico que llevan a la conformacion de pequeñas vesiculas conteniendo organelas y fragmentos de material genetico que son reconocidos y degradados por el sistema inmune del organismo. 2dos mensajeros b) La necrosis comprende un estado de lesion irreversible de la celula que se caracteriza por la disminución total de ATP que le impide a la celula mantener el correcto funcionamiento de las bombas e intercambiadores de iones de su membrana plasmatica, con ruptura de la misma y escapatoria de los elementos citoplasmaticos al exterior, esto genera un proceso de inflamacion local. Tambien ocurre la degradacion del material genetico por la activacion de nucleasas, degradacion de las membranas plasmaticas por activacion de las lipasas y, tambien, de proteinas por accion de proteasas. NUCLEO El nucleo es un compartimiento rodeado por una envoltura nuclear o carioteca (continuación del REG). Esta compuesta por 2 membranas que se unen a nivel de los poros y al espacio entre las membranas se lo llama “ espacio perinuclear”. La carioteca posee poros que se combinan con proteínas formando el “complejo poro nuclear” que regula el transporte de sustancias entre nucleo y citoplasma. Los poros son canales entre el nucleoplasma y el citosol. En ellos existen conjunto de proteínas llamadas nucleoporinas los cuales componen el “complejo del poro”. Permite regular que cosas entran y salen del nucleo . ♥Moléculas pequeñas: forma pasiva y sin gasto de energía (entran y salen libremente) ♥Moléculas grandes (proteínas y ARN): Antes de pasar fuerzan el acortamiento de las proteínas radiales . estas moléculas poseen un péptido señal denominado NSL (señal de localización nuclear) que se unen a proteínas denominadas “transportinas”. Los pasos para el ingreso de proteínas son: 1) Proteína se une a transportina por la NSL colocándose cerca del complejo 2) La transportina es guiada por filamentos externos y internos 3) Durante el pasaje se gasta un GTP que es hidrolizado por una proteína ran a GDP 4) Complejo proteína -transportina y RAN-GDP ingresan al nucleo 5) En el nucleo RAN-GDP pasa a RAN-GTP y se une al complejo proteína- transportina haciendo que esta se separe y que la proteína quede en el nucleo mientras que la RAN-GTP y transportina vuelven al citosol donde allí la GAP hace que la RAN pase su GTP a GDP y la separe de la transportina para asi ambas vuelvan a ser reutilizadas para el ingreso de nuevas proteínas. Si las moléculas grandes quieren salir van a necesitar una señal de exportación nuclear En el interior nuclear el ADN y nucléolo se encuentran inmersos en un medio gelatinoso que contiene multiples moléculas disueltas denominado “nucleoplasma”. ♥ El Nucléolo -estructura del nucleo(región) donde ocurren los procesos de transcripción y procesamiento de ARNr -formado por ADN denominado “organizador nuclear” que sintetiza los ARNr - posee 3 regiones -es una zona densa y oscura Ademas se encuentra estabilizada por la lamina nuclear que es una red de proteínas del citoesqueleto donde la proteína principal es la laminina que es un filamento intermedio que puede estar apoyada en la parte interna como en la parte externa actuando como fibras para darle forma al nucleo. La función del nucleo es la de contener y proteger el ADN que se encuentra en un nucleo definido y su posición o cantidad va a variar dependiendo de la función de la celula. ADN eucariota ADN procariota múltiple Único Ubicado en el núcleo libres Asociado a histonas No asociado a histonas lineal circular Cromatina: El ADN esta asociado a histonas que le permiten acomodarse adecuadamente dentro del nucleo. Esta asociación se logra porque el ADN tiene carga negativa y las histonas carga negativa formando estructuras llamadas nucleosomas donde cada uno es un octamero formado por 4 tipos de histonas que están enrollados por el ADN y a su vez estos nucleosomas se encuentran separados por tramos de ADN espaciador. Las colas del nucleosoma pueden ser acetiladas como en la eucromatina y desacetilados como heterocromatina por la agregación del H1. Eucromatina: contiene la información utilizada por la celula por eso se encuentra menos compacto y de forma relajada (laxo) .Se encuentra ubicada en la zona central del nucleo además pueden ser constitutivas (forma igual y menos compacta) o facultativas (eucromatina o heterocromatina). heterocromátina :contiene información que no es utilizada por la celula por eso es mas condensado y se encuentran en la zona mas periférica del nucleo . constitutivas: cromatina altamente condensada ej: ,centrómeros y telomeros facultativa: eucromatina o heterocromatina ej: cuerpo de barr El ADN con los nucleosomas se pliegan sobre si mismo y forman otra estructura llamada solenoide que a su vez forma lazos que vuelven a plegarse muchas veces para dar la forma mas condensada del ADN:cromosoma Cromosomas: Los cromosomas están formados por 2 moleculas de ADN compactadas denominadas “cromátides” que son idénticas, un centrómero que es una secuencia repetitiva de ADN y 4 telomeros que son los extremos de cada hebra.De acuerdo a la ubicación del centrómero puede ser : -Metacéntricos: un centrometro en posición central determina brazos de igual longitud. - Submetacentricos: el centrometro se encuentra alejado del centro y un par de brazos es mas largo que el otro. - Acrocentricos: el centrometro se encuentra cerca a uno de los extremos, y uno de los brazos es casi inexistente. Estos poseen una masa de cromatina llamada satélite en el extremo del brazo corto. Tipos de células por número de cromosomas ♢ Haploides los espermatozoides, por ejemplo, son haploides y tienen 23 cromosomas decimos que las células contienen un número “N” de cromosomas. En el caso de las haploides, N=23. ♢ Diploides los cromosomas que forman un par son llamados homólogos, pues poseen los mismos genes. A las variantes informativas de cada gen se las denomina alelo. las células somáticas, por ejemplo, contienen dos juegos, es decir, 46 cromosomas Contienen 2N (N+N=46) de cromosomas. Función de la cromatina: almacenar la información genética de un individuo y transmitirla de generación en generación. Los cromosomas poseen secuencias de ADN únicas(copia única) y repetidas G rad o D e C o m p actacio n ☻ADN repetitivo en tandas -ADN satélite: localizado en los centrómeros que incluye una secuencia repetida denominada “secuencia alfoide”y por eso se encuentran en todos los cromosomas. -Microsatélite: secuencias de ADN mas cortas que las de satélite y también se hallan en todos los cromosomas. -Minisatelites: secuencias de ADN cortas que se encuentran en telomeros o en proximidades de los centrómeros (hipervariable) ☻ADN repetitivo disperso -SINE: constituyen el 13% del genoma humano y esta repartida en todos los cromosomas -LINE: secuencia larga que contiene 2 tipos de genes : uno que codifica a una proteína de union y otro a una proteína enzimática. Constituyen el 21% del genoma humano Cariotipo Es el conjunto de cromosomas presentes en las celulas humanas (46 en total) que consisten 23 pares homologos en la que 22 estan presentes en la mujer y el hombre denominándose “autosomas”. El par restante se conoce como par sexual: en la mujer se hayan 2 cromosomas x (idénticos) y en el varon un cromosoma x y otro Y. Gen -Cada gen contiene la información requerida para fabricar una molécula de ARN para construir finalmente una proteína. - Genoma es el conjunto de genes contenidos en los cromosomas. Es decir, la totalidad de información genética del organismo. -Las secuencias de ADN contenidas en un gen son llamadas exon e intrón ❁Los intrones son secuencias no codificantes que se eliminan después de la transcripción ❁ Los exones son secuencias codificantes Los intrones son removidos haciendo que se empalmen los exones entre si dando lugar a un ARNm con información genética continua apto para dirigir la síntesis de una proteína. -La información que esta contenida dentro del gen esta en un lenguaje denominado “código genético” que esta conformado por 4 nucleotidos ( bases nitrogenadas) que se combinan de a tres (tripletes) formando codones (64 codones posibles )que van a codificar a cada aminoácido (para 20 aminoacidos). Ej: Nucleótido ACA→ codón → informa para aminoácido treonina Nucleótido CAC →codon → informa para un aminoácido histidina Los codones existen tanto en ADN: A, G, C, T y ARN: A, G, C, U Hay 3 codones STOP o de terminación: UAA, UAG Y UGA no codifican aminoácidos quedando así 61 codones Características del código genético S E G M E N T O C O D I F I C A D O R •Universal es lo mismo para todos los seres vivos •Degenerado muchos codones diferentes que informan para el mismo aminoácido denominandose"sinónimos” Solamente la metionina y el triptófano, que son los aminoácidos menos comunes en las proteínas, son especificados por un solo codón. •No es ambiguo cada condón informa para uno sólo aminoácido •No es solapado cada nucleótido pertenece a sólo un condón - Componentes del gen: a) Promotor b) Secuencias reguladoras: combinación de amplificadores y inhibidores corriente arriba. c) Tramo de ADN denominado “secuencia de terminación” eucariotas 1) Replicación o duplicación del ADN Características: - Son semi conservativos : celulas hijas tienen un fragmento original y uno nuevo copiado proveniente de la duplicacion - Bi direccional: el adn se duplica en sentidos opuestos hace que la replicación sea rápido. - Discontinuo: nuevas cadenas se sintetizan en forma fragmentada Objetivo: 2 copias de ADN para sus celulas hijas (transmisión de información genética). Las hijas van a tener una cadena vieja y una cadena nueva por eso se dice que el proceso de replicación o duplicación es semi conservativo. Definición: síntesis de un nuevo juego del ADN tomando como molde al ADN ya existente Lugar: en el nucleo durante el ciclo celular en la interfase o mejor dicho fase s. Proceso 1 2 3 se desenrolla la doble hélice en ambos sentidos (bidireccionalmente) separándose ambas cadenas provocado por la enzima helicasa en la que se consume energía portada por el ATP. Una vez separadas cada cadena va a servir como molde para la síntesis de la nueva cadena complementaria en la que este proceso además del desenrollamiento ocurren en varios sitios ORI. Durante el desenrollamiento los enlaces de las bases nitrogenadas se rompieron y la proteína BSBP interviene para mantener las cadenas bien separadas. Ademas este proceso da origen a las burbujas de replicación que van aumentando a medida que se van separando las cadenas en los extremos de la burbuja y teniendo asi las orquillas de replicación que avanzan en direcciones opuestas . Estas orquillas van a sufrir un super enrollamiento de cromatina en su extremo en la que va a intervenir la enzima topoisomerasa I y II (girasa) para disminuir esa tensión acumulada. Cabe destacar que estas enzimas actúan como nucleasas porque cortan ADN de forma diferente ya que la I solo corta una cadena mientras que la otra ambas y como ligasas porque van a unir todo ese ADN. La principal enzima en el proceso de replicación es la ADNpol o ADN polimerasa pero cabe destacar que en eucariontes hay 3 tipos de ADN pol. La ADN pol solo puede leer la cadena de 3´a 5´ por lo que va a sintetiza una nueva cadena de 5´a 3´ . Para sintetizar la cadena es necesario que tenga la ayuda de un primer o cebador que es un fragmento de ARN sintetizado por la enzima primasa. A este primer se le va a unir el agregado de nucleótidos complementarios a la cadena molde(colocados en el extremo 3´) formando asi la nueva cadena complementaria. Una vez que se formo la ADN ligasa interviene uniendo los ADN y provocando la remoción de los primers. Esta remoción de primers provoca que queden espacios vacios que rápidamente van a ser rellenados con ADN colocados por la ADN pol y nucleasas reparadoras. A este proceso de cadena continua le va a proceder un proceso de cadena discontinua porque las 2 cadenas nuevas de ADN que se forman no surgen simultáneamente ya que la primera era una cadena temprana y esta una cadena tardia o retardada En la cadena discontinua para su formación primero se tienen que sintetizar nuevos primers por la ADN primasa para cada unos de los fragmentos de okasaki que se van formando (pequeños tramos de ADN). Una vez que se sintetizaron los primers la ADN pol alfa puede intervenir y sintetizar esos fragmentos con sus respectivos primers pero para esto va a necesitar la ayuda de la telomerasa que es un segmento de ARN y proteínas que enlongan el extremo del adn para la síntesis de la nueva cadena. Cuando finaliza la nucleasa va a retirar esos primers dejando asi espacios vacios que son cubiertos con nucleótidos por la ADN pol beta y finalmente asi la ADN ligasa va a unir esos fragmentos formando la nueva cadena . En ambas cadenas : continua y discontinua la ADN pol mientras hacen su trabajo se mantienen unidas al ADN por una abrazadera deslizante(conjunto proteico PCNA) ,cuando se rellena los espacios vacios de los primers eliminados las enzimas se desprenden del ADN porque la abrazadera se desarma. Desventajas del agregado de nucleótidos para la síntesis de la nueva cadena a) Cuando se sintetizan las cadenas hijas pueden insentarse nucleótidos incorrectos Solución 1: Esto ocurre cuando la ADN polimerasa incerta un nucleótido incorrecto pero esta misma percibe el error evitando agregar mas nucleótidos y asi deteniendo el crecimiento de la cadena. El error es resuelto por la propia enzima mediante el mecanismo “lectura de pruebas”. Solución 2: los nucleótidos erróneos son removidos por una nucleasa reparadora (la misma que elimina primers). La nucleasa corta la union fosfodiéster entre el nucleótido erróneo y el correcto pero para esto esta nucleasa solo distingue el nucleótido incorrecto por una señal. b) Desaminación de bases de los nucleótidos ej: cuando la citosina se desanima se convierte en uracilo que se aparea con la adenina y no con la guanina Solución: Mecanismo de reparación guiado por la enzima ADN glicosidasa que reconoce y corta la conexión errónea dejando al nucleótido sin su base c) Apurinizacion: cuando una purina se desprende de la desoxirribosa del nucleótido Para cada tipo de alteración del adn existe un mecanismo de reparación especial guiado por enzimas especificas Solución: Desoxirribosa es removida por AP endonucleasa y una fosfodiesterasa para que luego la ADN polimerasa coloque el nucleótidocorrecto. Replicación en procariotas: -Las procariotas poseen un solo sitio de origen -Presentan polimerasas (1) diferente al de eucariotas -Ausencia de la telomerasa porque no es necesaria. 2) Transcripcion del ADN La transcripcion es la síntesis de ARN sobre la base de ADN Se establece por la union de los nucleótidos complementarios de ARN a los de ADN formando una union fosfodiéster de sus bases que es dirigida por la principal enzima de este proceso: la ARN pol Esta enzima toma(lee) como molde a la hebra de ADN que va de 3´a 5´ y sintetiza el ARN de 5´a 3´. Cabe destacar que en eucariotas solo hay 3 tipos de ARN pol a) ARN pol II: sintetiza ARNm b) ARNpol I: sintetiza ARNr 45S c) ARNpol III: sintetiza ARNr 5S, ARNt y ARN nucleares Proceso Inicio: ARNpol reconoce al promotor que es el que marca el punto o sitio de inicio para comenzar la transcripcion de un gen y le permite a la ARNpol interactuar con el ADN. El ARN pol reconoce al promotor por la ayuda de los “factores de transcripcion” que son proteínas especificas necesarios para iniciar también la síntesis de un ARNm. Se clasifican en: -especificos: antes de los basales se unen a la secuencia reguladora del gen y pueden actuar como inhibidores o activadores. -basal: un factor se une a la caja TATA del promotor formando el complejo “iniciación de la transcripcion”. Una vez que se unen la ARN pol es fosforilada por otro factor basal y así se empieza a separar las cadenas de ADN formando una burbuja de transcripción y dejando expuesto el primer desoxirribonucleótido al cual se le va a unir un primer y segundo ribonucleótido para formar el dinucleotido que es el iniciante de la síntesis del ARN La ARNpol luego se disocia de ese complejo para comenzar la etapa de: Elongación: La ARN pol avanza sobre la hebra de ADN agregando ribonucleótidos al ARN naciente y ayudándolo a que se alargue hasta llegar a su extremo 3´y asi formando el complejo “elongación de la transcripcion”. Para que la ARN pol ayude a alargar al ARN necesita de factores de elongación : SII o SIII(elonguina). Terminación: una vez sintetizado el ARN o transcripto primario una secuencia de terminación del ADN molde le señala a la ARNpol el lugar donde va a finalizar la transcripcion. El conjunto de transcriptos primarios de los ARNm están combinados con proteínas (ribonucleoproteina) que actúan como chaperonas ayudando a esos ARNm a mantenerse desplegados. Control de la actividad transcripcional (reguladores de la expresión génica) 1) Factores de transcripcion : los específicos son los que van a frenar o desencadenar activando las secuencias reguladoras que hacen que el gen se encurve y de origen a la horquilla.Esto es posible porque este factor de transcripcion especifico posee 2 dominios: uno que conecta al ADN regulador y otro al factor basal. Los factores específicos indican el numero de polimerasas que van a hacer el trabajo lo cual regula la cantidad de ARNm que se fabricara. 2) Heterocromatizacion: cuando la cromatina esta en un grado sumamente condensado su información no es utilizada por la celula es decir que no se transcribe. 3) Una modificación química va a impedir o permitir la transcripcion . ej: la metilación de bases dirigida por la metilasa de mantenimiento Epigenetica Mecanismos que estudia los cambios heredables en la expresión de los genes que no pueden ser atribuidos a cambios en la secuencia del ADN Mecanismos: -metilacion del ADN: agregado de grupos metilos a las bases hace que se reduzca la transcripcion del gen (en algunos casos no afecta). Un caso de esto es la impronta genómica donde uno de los alelos no se expresa porque ocurre el proceso de “genes marcados” que no supone cambios en la secuencia de nucleótidos del ADN. -modificaciones de histonas: la acetilación,la metilación y fosforilación Los factores de transcripcion se unen a las histonas y las modifican químicamente mediante el agregado de acetilo,metilo o fosfato en las colitas de los nucleosomas. Ej: la acetilación de lisina disminuye enrollamiento de la cromatina favoreciendo a la transcripcion. En cambio la metilación o fosforilación de serinas y treoninas producen el efecto contrario. -silenciamiento génico mediado por ARN no codificantes Procesamiento de ARNm Modificaciones que reciben los transcriptos primarios para convertirse en ARN funcionales 1- Capping: proceso por el cual se adiciona al extremo 5’ una molecula llamada Cap (metil- guanosina), que le sirve para evitar la degradación de ARNm inmaduro por nucleasas y fosfatasas. 2- Poliadenilacion: consiste en el agregado de adenosinas en el extremo 3’ llamado Cola Poli A, que protegen al extremo de la degradación y ayuda al ARNm a salir del núcleo. 3- Splicing o empalme: eliminación de los intrones, quedando como producto final los exones empalmados en secuencia continua producida por ribonucleoproteinas. El complejo que se encarga de reconocer las secuencias señalizadoras de corte, escindir a los intrones y empalmar los exones se llama espliceosoma. Luego produce una molécula de ARNm maduro. Transcripción en procariotas El proceso tiene lugar en el citoplasma donde se encuentra ubicado el cromosoma bacteriano. Participa una sola ARNpol que no requiere de factores de trasncripcion para el inicio de la transcripción. El el promotor y secuencias de terminación de la transcripción bacteriana posee información diferente al de eucariotas y el ARNm producido no pasa por un procesamiento sino que actúa directamente para la síntesis de una proteína. A diferencia de las eucariotas el transcripto primario es procesado para formar moléculas de ARNm(no sufre ningún proceso de maduración) ,ARNt y ARNr por enzimas llamadas ARNasas. El ARNm es poli cistronico: contiene info para diferentes proteínas en cistrones (regiones codificantes) que contienen segmentos espaciadores. Regulación de la expresión génica en procariontes En bacterias, los genes que codifican para la síntesis de enzimas que participan en las vías metabólicas, se agrupan en el cromosoma en un complejo llamado Operón, el cual consta de: -Genes estructurales: genes que codifican para las enzimas. -Promotor: secuencia donde se une la polimerasa. -Operador: secuencia de nucleótidos que se interpone entre el promotor y los genes estructurales, en donde se inserta una proteína reguladora llamada Proteína Represora. .Operón LAC: es un conjunto de genes que intervienen en la utilización de lactosa como fuente de energía. El operón está formado por tres genes estructurales, en los cuales su transcripción da origen a una molécula de ARNm que codifica para las enzimas que participan en la degradación de lactosa. En ausencia de lactosa, el represor se enlaza al operador e impide a la polimerasa insertarse en el promotor, lo cual interrumpe la transcripción. En presencia de lactosa, la lactosa se une a la proteína represora, provocándole un cambio conformacional e incapacitándola de unirse al operador. De esta forma, se transcriben los genes estructurales, fabricándose las enzimas que degradaran la lactosa. .Operón triptófano: es un conjunto de genes estructurales que codifican para las enzimas involucradas en la fabricación del aminoácido triptófano. Un gen regulador se ubica fuera del operón y codifica para la síntesis de una proteína represora, la cual se encuentra inactiva por lo que no puede unirse al operón. En ausencia de triptófano, la ARN polimerasa se une al promotor y transcribe los genes estructurales. Esto es posible ya que el represor inactivo no logra unirse por sí solo al operador. Cuando hay triptófano, el triptófano se une a la proteína represora, activándola e impidiendo que la polimerasa pueda transcribir los genes estructurales. De esta forma, la bacteria ahora energía, sintetizando triptófano solamentecuando esta sustancia está ausente. Operon LACTOSA Operon TRIPTOFANO Sus enzimas participan en una vía catabólica Sus enzimas participan en una vía anabólica Inducible (se expresa en presencia de lactosa) Reprimible (se expresa en ausencia de triptófano) La lactosa es un inductor El triptófano es co-represor El represor se sintetiza en forma activa El represor se sintetiza inactivo El represor actúa solo El represor actúa en presencia del co-represor TRADUCCION -El ARNm tiene la información (secuencia de bases) que determina la secuencia de aminoácidos de la proteína. Los nucleótidos se leen agrupándolos en tripletes llamados Codones. Determinados grupos de codones corresponden a determinados aminoácidos para asi sintetizar a la proteína - La síntesis de proteínas consiste en la traducción de la información codificada en la secuencia de nucleótidos del ARNm que ocurre en los ribosomas. Se empieza con un codón de inicio AUG y termina con 3 codón stop: UAA, UAG, UGA -involucra a otros tipos de ARN: ♥ARNt -Son intermediarios entre los codones del ARNm y los aminoácidos -Están plegados (por la formación de uniones intracatenarias) -Tienen algunas bases nitrogenadas modificadas -Poseen un anticodón (3 nucleótidos consecutivos que se complementarán con un codón del ARNm) ♥ARNr -Hay varios tipos que se combinan con proteínas ribosomales para formar los ribosomas -Subunidad mayor: con la enzima que unirá los aminoácidos entre sí -Subunidad menor: sitio de unión del ARN Activación de los aminoácidos o aminoacilación Cada ARNt se une a un aminoácido específico mediante la enzima aminoacil ARNt sintetasa utilizando un ATP. Primer paso antes de comenzar el proceso: Activación de los aminoácidos o aminoacilación Consiste en cargar al ARNt con un aminoácido especifico, esto es llevado a cabo por la enzima Aminoacil ARNt sintetasa que realizan esto con consumo de ATP El aminoácido queda pegado a un nucleótido AMP formando aminoacil AMP Durante esa formación de aminoacil AMP se produce energía que va a ser utilizada por aminoacil ARNT sintetasa para transferir el aminoácido del aminoacil AMP al extremo 3´del ARNt formando aminoacil ARNt que va a reconocer al codón complementario en el ARNm 1. Iniciación: Se reúnen los componentes que constituyen el complejo de iniciación que comienza la síntesis proteica, compuesto por una molécula de ARNm, una subunidad mayor, una menor, el ARNt iniciador y factores proteicos de iniciación. El complejo comienza a formarse cuando el ARNt iniciador y la subunidad menor del ribosoma se asocian al ARNm. Luego, la subunidad menor se desplaza por el ARNm hacia el extremo 3´ hasta que el ARNt iniciador reconoce al codón inicio AUG. Se liberan los factores de iniciación y se acopla la subunidad mayor del ribosoma, quedando el ARNt iniciador en el sitio P del ribosoma. Todas las proteínas recién sintetizadas tienen metionina. Regulación de la traducción .control inespecífico de la traducción : depende de un factor de iniciación que al ser fosforilado impide el inicio de la traducción .control especifico: depende de sustancias reguladoras que modifican nucleótidos no traducibles haciendo que el ARNm forme un bucle que impide el inicio de la traducción .control de degradación del ARNm: mecanismos que involucran secuencias entre el codón de terminación y región poli A .control de degradación de las proteínas : señales de degradación reconocidas por la ubiquitina que es importante para la degradación de proteínas. Traducción en procariotas El proceso de traducción ocurre en simultaneo con el de transcripción ya que ambos ocurren en el citoplasma. EL ARNm se asocia a un ribosoma y el ARNt iniciador comienza la traducción . el arnm de procariotas tiene una secuencia que ayuda en la ubicación correcta de ribosomas sobre el ARNm. El codón de inicio codifica para un aminoácido modificado : formil metionina Elongación: regulado por factores de elongacion . en el sitio A ingresa un ARNt (cuyo anticodón es complementario al codón siguiente), requiere de factores de elongación. El ARNt del sitio P se separa del aminoácido iniciador que transporta, liberando energía y el aminoácido se une al que está en el ARNt del sitio A formando la primera unión peptídica. El ARNt iniciador del sitio P queda descargado sin aminoácido, sale del ribosoma y vuelve al principio para activarse de nuevo. El ribosoma se desplaza tres nucleótidos sobre el ARNm, y lo que estaba en el sitio A pasa al sitio P. Terminación: ocurre cuando un codón stop de terminación es reconocido por un factor de terminación en el sitio A. El polipéptido es liberado del ARNt hacia el citoplasma, y el ARNt descargado sale del ribosoma. El ARNm y el factor de disociación se disocian del ribosoma y se desacoplan sus dos subunidades las cuales pueden volver a ensamblarse luego.
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