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UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES - U.D.C.A FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA OPCIÓN DE GRADO DE LA PASANTÍA EN AFRICAM SAFARI, PUEBLA - MEXICO REPORTE DE CASO NECROPSIA EN UN EMBRIÓN DE Crocodylus moreletii EN PROCESO DE ECLOSIÓN Estudiante: Paula Gisselle Calderón Giraldo Bogotá, Colombia Mayo de 2020 ~ 2 ~ UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES - U.D.C.A FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA OPCIÓN DE GRADO DE LA PASANTÍA EN AFRICAM SAFARI, PUEBLA - MEXICO REPORTE DE CASO NECROPSIA EN UN EMBRIÓN DE Crocodylus moreletii EN PROCESO DE ECLOSIÓN Estudiante: Paula Gisselle Calderón Giraldo Tutora: Dra. María del Carmen Carmona Muciño Jefa de patología anatómica y clínica Bogotá, Colombia Mayo de 2020 ~ 3 ~ NECROPSIA EN UN EMBRIÓN DE Crocodylus moreletii EN PROCESO DE ECLOSIÓN: REPORTE DE CASO. CALDERON–GIRALDO, P. G.* *Estudiante de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales, U.D.C.A, paucalderon@udca.edu.co; pgcalderonmvz@gmail.com RECONOCIMIENTOS: Agradecimientos a la doctora María del Carmen Carmona por sus orientaciones, acompañamiento y apoyo en el desarrollo del caso, al zoológico Africam Safari, Puebla – México por facilitar la información, los espacios y recursos para el estudio de este y a la Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A por mi formación profesional y permitirme ser parte de su alumnado. mailto:paucalderon@udca.edu.co ~ 4 ~ TABLA DE CONTENIDO Resumen………………………………………………………………………….... 6 Introducción……………………………………………………………………….. 7 Examen del paciente…………………………………………………………….. 8 Anamnesis………………………………………………………………... 8 Necropsia…………………………………………………………………. 8 Hallazgos de necropsia………………………………………………... 8 Hallazgos de histopatología…………………………………………… 11 Pruebas complementarias……………………………………………… 12 Discusión………………………………………………………………………….. 13 Conclusiones……………………………………………………………………... 15 Referencias………………………………………………………………………... 16 ~ 5 ~ TABLA DE IMÁGENES Imagen 1……………………………………………………………………… 9 Imagen 2……………………………………………………………………… 9 Imagen 3……………………………………………………………………… 9 Imagen 4………………………………………………………………………. 10 Imagen 5………………………………………………………………………. 10 Imagen 6………………………………….…………………………………... 11 Imagen 7………………………………………………….…………………… 12 Imagen 8……………………………………………………………………… 12 ~ 6 ~ RESUMEN Un embrión muerto de cocodrilo de pantano (Crocodylus moreletii), mantenido 95 días en incubación artificial procedente de Africam Safari, Puebla – México fue sometido a necropsia. Anamnesis: Aparente proceso eclosional tres días antes y emisión de llamados eclosionales dos días antes. Hallazgos de necropsia: El cascaron presentó un patrón punteado de áreas café y negro, moderadas y generalizadas, abundante contenido semisólido incoloro, levemente turbio dentro del huevo, el embrión mostró abundante saco vitelino externo, ausencia de carúncula en la punta de la nariz y el ombligo sin evidencia de cicatrización. Hallazgos de histopatología: El cordón umbilical se observó con aumento de células inflamatorias asociado al proceso de absorción fisiológico del saco vitelino en cavidad celómica. Los cultivos microbiológicos fueron negativos. Conclusiones: Según los hallazgos macroscópicos a la necropsia, los resultados del estudio histopatológico y las pruebas complementarias, el embrión presento anormalidades en su desarrollo resultante en el retraso de este. A lo que varios factores pudieron influir, relacionados con elementos de especie y manejo. PALABRAS CLAVES: Diagnóstico post mortem, Eclosión, Embrión, Incubación. ABSTRACT A dead swamp crocodile embryo (Crocodylus moreletii), kept 95 days in artificial incubation arrives at the pathology department of Africam Safari, in Puebla - Mexico for necropsy. Anamnesis: Apparent hatching process three days before and issuance of hatching calls two days before. Necropsy findings: The shell presented moderate and generalized dotted pattern of brown and black areas, abundant semi-solid, slightly cloudy, colourless content inside the egg, the embryo showed notoriously exteriorized yolk sac, absence of the egg tooth, and the navel without evidence of scarring. Histopathology findings: The umbilical cord was observed with increase of inflammatory cells associated with the process of physiological absorption of the yolk sac in the celomic cavity. Microbiological cultures were negative. Conclusions: According to the macroscopic findings obtained from the necropsy added to the results of the histopathological study and complementary tests, several factors influenced the death of the embryo, which can be attributed to causes of species and management. KEYWORDS: Post-mortem diagnosis, Hatching, Embryo, Incubation. ~ 7 ~ INTRODUCCIÓN La eclosión es el proceso que lleva a cabo la cría para salir de la membrana calcárea (cascarón del huevo) que lo contiene (Cedillo et al., 2007). Este proceso ocurre en las últimas etapas del desarrollo para cocodrilianos entre los 65 y 98 días después de la puesta (Casas et al., 2017), cuando el embrión termina su desarrollo y realiza la absorción completa o en algunas ocasiones parcial de su saco vitelino a nivel ventral en la cavidad celómica (Hutton et al., 1992). Crocodylus moreletii es una especie que se encuentra ampliamente distribuida en Guatemala, Belice y México, y en estado de menor preocupación de especies con la población estable (Cedeño et al., 2012). Las hembras inician su etapa reproductiva cuando miden alrededor de 126 cm y ovopositan entre 6 y 54 huevos, seleccionan el sitio de anidación cerca de cuerpos de agua (Barrios et al., 2018) y construyen sus nidos guardando distancia entre ellos con basura orgánica (hojas, palos) donde realizan su postura (Sánchez et al., 2011). El proceso de eclosión en esta especie se caracteriza por llamados eclosiónales, sonidos que emiten los embriones dentro del huevo durante este proceso (Camacho et al., 2014) y por la presencia de una carúncula (diente de huevo) en la porción más rostral y dorsal del maxilar que le ayudará a romper el cascarón (Hutton et al., 1992). El proceso de eclosión es un momento clave tanto en la transición de embrión a neonato que requiere de todas las habilidades del embrión para salir y sobrevivir al medio, como en el éxito de las nidadas. Las mayores pérdidas, ocurren en la etapa de huevo y eclosión (Bolton et al., 1982). De lo que se infiere, que la naturaleza podría sostener la mayor cosecha de huevos y crías si se pudieran evitar estas pérdidas. Por consiguiente, el análisis de las muertes embrionarias durante esta etapa es necesario para optimizar los procesos de conservación o aprovechamiento productivo de los cocodrilianos (Bolton et al., 1982). La necropsia es una herramienta diagnóstica que brinda amplia información sobre la muerte de un animal y/o procesos de enfermedad en el mismo, sin discriminar edad o tamaño, se realiza con el objetivo no solo de exponer lesiones, sino de tomar muestras e instaurar relaciones estructurales y funcionales de los cambios encontrados en el cadáver (Morales et al., 2017; Rideout, 2012) y, en especies silvestres también para identificar factores que ~ 8 ~ estén alterando la sobrevivencia y el hábitat, útiles para la toma de decisiones sobre medidas preventivas y correctivas (Martínez et al., 2012). El presente reporte de caso buscó ofrecer información útil mediante la práctica del examende necropsia realizado a un embrión de Crocodylus moreletii mantenido bajo condiciones de incubación artificial, sobre los posibles factores relacionados con la mortalidad en esta etapa de desarrollo. EXAMEN DEL PACIENTE Anamnesis Un embrión muerto de cocodrilo de pantano (Crocodylus moreletii), mantenido 95 días en incubación artificial a temperatura monitoreada entre 32ºC y 34ºC, con tres miembros más de la misma nidada que tuvieron un proceso de eclosión con una pequeña yema residual, fue enviado aún dentro del cascarón al departamento de patología de Africam Safari, en Puebla – México, para necropsia con aparente proceso eclosional tres días antes. Se reportó que el embrión fue el segundo de la nidada en emitir llamados eclosionales durante dos días, los cuales posteriormente cesaron. Necropsia El procedimiento de necropsia se realizó de acuerdo con el protocolo de necropsia para reptiles y para huevos de Africam Safari, Puebla – México. Estudiando el desarrollo embrionario para cocodrilianos instaurado (Ferguson, 1985). Hallazgos de necropsia El huevo de 48 gramos, 72,24 milímetros y 38,46 milímetros de diámetro para el eje mayor menor, respectivamente, con un cascarón de 0,57 milímetros de grosor, presentó un patrón punteado de áreas cafés y negro, moderadas y generalizadas (Imagen 1), y además abundante contenido semisólido incoloro, levemente turbio en su interior (Imagen 2). ~ 9 ~ Al examen macroscópico, el embrión pesó 38 gramos, mostró abundante saco vitelino externo sin evidencia de absorción en cavidad celómica, presencia de moderados uratos focalizados entre la cloaca y el saco vitelino y ausencia de carúncula en la punta de la nariz (Imagen 3). Imagen tomada por: Calderón, 2019 Imagen 1. Patrón punteado del cascaron, áreas cafés (A), áreas negras (B). A B Imagen tomada por: Calderón, 2019 Imagen 2. Contenido semisólido incoloro turbio al interior del cascaron. A B C Imagen tomada por: Calderón, 2019. Imagen 3. Ausencia del diente de huevo (A), Saco vitelino externo (B), Uratos (C). ~ 10 ~ Los pulmones se mostraron de congestión moderada y generalizada sin flotación en formol bufferado. El hígado se observó de palidez generalizada y moderada, con áreas circulares blancas de aproximadamente 0.5 centímetros en su eje mayor, y la vesícula biliar se mostró plétora, el ombligo no tenía evidencia de cicatrización (Imagen 4 y 5). Imagen tomada por: Calderón, 2019. A B C Imagen tomada por: Calderón, 2019. Imagen 4. Pulmones con congestión moderada y generalizada (A), Hígado de palidez generalizada y moderada (B), Impresión de vesícula biliar plétora en el saco vitelino (C). Imagen 5. Áreas blancas circulares en hígado (Ovalo), ombligo sin evidencia de cicatrización (Flecha). De izquierda a derecha (Parte craneal y parte caudal del paciente). ~ 11 ~ Hallazgos de histopatología En general los tejidos se observaron con celularidad sin alteraciones, sin embargo, a nivel del cordón umbilical mostraba aumento de células inflamatorias asociado al proceso de absorción fisiológico del saco vitelino en cavidad celómica (Imagen 6), en hígado se apreció el citoplasma de la mayoría de los hepatocitos con vacuolas claras que desplazaban el núcleo (Imagen 7) y en algunas secciones revisadas del pulmón se observaron las paredes alveolares moderadamente engrosadas por la acumulación de abundantes eritrocitos intravasculares (Imagen 8). Imagen 6. Histopatología de dos porciones del cordón umbilical (A y B) en 40X con presencia de células inflamatorias (Flechas). Tinción H&E (Hematoxilina – Eosina). Imágenes tomadas por Calderón, 2019. ~ 12 ~ Imagen 7. Histopatología de hígado en 40X con vacuolas claras en el citoplasma que desplazan el núcleo (Flechas). Tinción H&E (Hematoxilina – Eosina). Imagen tomada por Calderón, 2019. Imagen 8. Histopatología de pulmón en 10X con algunos eritrocitos intravasculares (Flechas). Tinción H&E (Hematoxilina – Eosina). Imagen tomada por Calderón, 2019. Pruebas complementarias En el cultivo bacteriano y micológico del saco vitelino, y cara interna y externa del cascarón no se evidenció crecimiento de colonias bacterianas o fúngicas para ninguna de las muestras analizadas. ~ 13 ~ DISCUSIÓN La mortalidad en embriones de C. moreletii en etapa de eclosión o en incubación avanzada se genera por individuos de menor tamaño y que evidencian un grado de crecimiento pobre como consecuencia de retrasos en el desarrollo y anormalidades en el mismo (Trujillo et al. 2011). La presencia en el embrión examinado de abundante saco vitelino por fuera de la cavidad celómica, sumado, al peso inferior del embrión acorde con el rango de peso reportado para la especie en esta etapa de desarrollo durante la incubación y el tiempo de incubación indican un retraso en el desarrollo del embrión. Según la embriogénesis, entre el día 84 y 92 después de la puesta, el embrión presenta la organogénesis completa, la yema acumulada a nivel ventral siendo absorbida por la cavidad celómica y los dientes endurecidos, listo para la eclosión (Barrios et al., 2018). Sin embargo, el embrión de más de 90 días no se encontraba en este nivel de desarrollo y su retraso pudo deberse a posibles incidentes e interacciones estresantes durante la puesta (como temperatura del agua o disminución en los escondites) o durante el transporte de los huevos (como movimientos inadecuados o fuertes) (Huchzermeyer, 2003). El embrión incubado con sus congéneres, aunque emitió llamados eclosionales presentó ausencia de carúncula o diente de huevo (pequeño recrecimiento calcáreo en la punta del hocico) que es usado para cortar la cáscara y perforarla, lo cual, sino ocurre en algunos individuos conlleva a dificultades en la eclosión, llegando a morir si no son ayudados (Hutton et al., 1992). Esta anormalidad pudo deberse a temperaturas tempranas de incubación inadecuadas, menor desarrollo en la ovoposición, sacudidas durante el transporte o anormalidades congénitas cromosómicas (Wilson, 2004). Adicionalmente los llamados eclosionales emitidos por el embrión pudieron ser estimulados por sus congéneres, debido a que la eclosión en grupo de los cocodrilos es la primera interacción gregaria siendo una estrategia conductual para eclosionar al tiempo con el fin de reducir el riesgo de depredación (Camacho et al. 2018). En vida libre los embriones raramente emiten estos llamados de forma espontánea, entre tanto, en condiciones de incubación artificial se ha observado que el inicio de los llamados eclosionales es espontáneo (Casas et al., 2017) y posiblemente los embriones vecinos que no han llegado a término de incubación los escuchen y eventualmente salgan del cascarón (Camacho et al., 2014). ~ 14 ~ Respecto a la temperatura de incubación, esta es crítica para el desarrollo embrionario y eclosión, siendo necesaria una temperatura cálida y estable entre 28ºC y 32ºC promedio, pues su variación afecta el tiempo de incubación y la tasa de mortalidad embrionaria, además, influye en la tasa de desarrollo embrionario y en el crecimiento (Casas et al., 2017). El embrión se encontraba en el rango superior de la temperatura de incubación para esta especie, a lo que puede atribuirse su retraso en el desarrollo y falta de adaptación a las condiciones de incubación. Trujillo et al. (2011) menciona que la temperatura de incubación influye en las características y grado de desarrollo en cada estadio embrionario. Las lesiones (grietas, áreas de pigmentación) que presentó el cascarón, pueden corresponder con infecciones oportunistasde la cloaca materna o del medio de incubación, pese a que la cáscara y las membranas embrionarias son en cierta medida una barrera para la penetración de agentes infecciosos, que al igual que la albúmina, tienen acción antibacteriana conocida en los huevos de aves que podría también estar presente en los huevos de cocodrilo (Huchzermeyer, 2003). En este caso, aunque los resultados microbiológicos fueron negativos, las lesiones del cascarón y la turbidez de la albúmina no descartan una infección oportunista, que no presento evidencia patológica en el embrión. Finalmente, Brien et al. (2014) describe el síndrome de incapacidad para desarrollarse en Crocodylus porosus, generando el 49% de mortalidad en embriones y neonatos bajo cuidado humano, cuya causa se asigna a elementos de incubación, genéticos, niveles de estrés, interacciones sociales de los embriones y entorno, donde pueden identificarse individuos con crecimiento pobre hasta 300 días después de la eclosión. Queda en evidencia que la similitud de los hallazgos encontrados en el embrión examinado y la eclosión con yema residual de sus congéneres se debe a un retraso en el desarrollo embrionario que podría estar asociado a esta condición. ~ 15 ~ CONCLUSIONES Según los hallazgos macroscópicos a la necropsia, los resultados del estudio histopatológico y las pruebas complementarias, el embrión presentó anormalidades en su desarrollo resultante en el retraso de este. A lo que varios factores pudieron influir, relacionados con elementos de especie y manejo. Los incidentes de estrés tanto en la hembra reproductora como en el embrión favorecen anormalidades en el desarrollo embrionario. Además, el ambiente de incubación o postura pudieron favorecer las lesiones en el cascarón y albúmina sin compromiso patológico aparente en el embrión, aunque sería conveniente ampliar las pruebas diagnósticas. El presente caso evidencia la aplicación de la patología como una herramienta de aproximación sistemática tanto al comportamiento de las enfermedades, como a la identificación de fallas en el proceso reproductivo y cuidado neonatal, determinante para la toma de medidas profilácticas y terapéuticas en la conservación de especies silvestres, para este caso, adecuación de la condición térmica, reconocimiento comportamental de la hembra reproductora e inspección en el ambiente de incubación y postura, así como en el método de transporte de los huevos. ~ 16 ~ REFERENCIAS ACOPAZOA. (2006). Reptiles. 101 especies representativas de Colombia. 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