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Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 GUIA Nº 9 "E X T R A C C I O N D E S E M E N " C o l e c t a de S e m e n La recolección del esperma constituye la primera operación que hay que realizar en la técnica de la Inseminación Artificial. Desde muy antiguo los investigadores se ocuparon de cumplir con este cometido y han desarrollado diversas técnicas con más o menos éxito, algunas de las cuales perfeccionadas son utilizadas actualmente en la rutina de los centros de I.A. o como parte de la evaluación de un reproductor. De todos los métodos probados prácticamente los únicos que han tenido progresos y que se podría decir que solucionaron el problema de la extracción de semen son el electroeyaculador y la vagina artificial. Para que un método de extracción pueda ofrecer ventajas debe reunir las siguientes condiciones: 1-Obtención del máximo volumen de eyaculado. 2-No constituir peligro para el animal dador. 3-No significar riesgos para el operador. 4-Obtener el material seminal en estado de máxima pureza. 5-No deben desencadenar reflejos inhibitorios capaces de alterar el deseo sexual. Podemos clasificar a los métodos de extracción de la siguiente forma. Vagina directa (Jeringa – Cateter). I) Post-coito Aspiración con esponja. Colectores Vaginales. Eyaculación Espontánea Condón o Preservativo. Vagina Artificial. Masaje Eyaculatorio. Eyaculación Inducida Masaje Ampolla Henle. II) Obtención Directa Electroeyaculación. del Macho Fístula Espermática. Métodos Cruentos Centesis Genital. Recolección Post-mortem. 1 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 Dentro de las especies domésticas, en las que más éxito se ha logrado es en el bovino desarrollándose las siguientes técnicas: NO SE USAN 1-Toma de la vagina (con cuchara o jeringa) POCOS USADOS 2-Fístula quirúrgica de uretra 3-Masaje de ampolla 4-Masaje del glande MAS USADOS 5-VAGINA ARTIFICIAL 6-ELECTRO EYACULACION VAGINA ARTIFICIAL El principio de la Vagina Artificial, puesto a punto por Milovanov, consiste en reunir en un aparato simple y práctico todas las condiciones naturales presentadas por las vías genitales femeninas en el momento del coito y en recoger rápidamente un eyaculado total y limpio. El uso de la vagina artificial requiere como premisa fundamental el empleo de personal idóneo para ese trabajo y para el manejo correcto de los reproductores de manera de formar en ellos un perfecto reflejo condicionado que facilite la tarea. Desde el empleo por primera vez de un equipo de esta naturaleza en Rusia han surgido diferentes modelos, que tienden a mejorar el sistema, es así que surgieron los modelos Danés (más usado), inglés, americano, alemán e italiano, todos con objetivos de poder lograr un salto lo mas parecido al normal y al mismo tiempo proteger al eyaculado. La vagina artificial clásica está compuesta por un tubo rígido de caucho de aproximadamente 35-40 cm de largo y un diámetro interno de 6 cm presentando un orificio hacia uno de sus extremos para el llenado con agua caliente. En el interior de la misma se coloca un tubo o camisa de látex (Blanda) y sus extremidades se vuelcan sobre la vagina de caucho de manera de formar una cámara entre estas dos porciones. Estas camisas pueden ser lisas o rugosas, prefiriendo la mayoría de los toros esta última ya que generalmente provoca un mejor estímulo. Hacia uno de sus extremos se coloca un cono (embudo) de látex de manera que el orificio mayor se une a la vagina y el menor al tubo de colecta. Este cono lleva un orificio muy pequeño en su pared que sirve para la salida del aire cuando el pene se introduce en la vagina, ya que la presión puede provocar el desarmado de todo el equipo malogrando el salto o provocando lesiones. En el extremo del cono del látex se ubica el tubo colector, que generalmente son tubos de centrífugas graduados, aunque algunos centros de I.A. prefieren utilizar tubos comunes. El tubo de centrifugo tiene la ventaja de que luego de reposado un momento la suciedad que puede venir en el semen sedimenta y al pasar a otro tubo esta queda en el fondo. Los tubos comunes tienen la ventaja de que el diluyente (en caso de usarse el semen para conservación) se mezcla mejor aprovechando la totalidad del eyaculado. 2 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 También existen tubos para ser utilizados durante épocas frías y consiste del tubo colector y que está rodeado de otra pared de vidrio, de manera que el semen no queda en contacto directo con la Tº ambiente. Utilizando tubos comunes o de centrífuga durante épocas frías es conveniente protegerlos de la Tº de manera que esta no provoque "shock" térmico en los espermatozoides al tomar contacto con las paredes frías del tubo. Para esto se puede colocar un tubo plástico alrededor del colector y entre ambos agua caliente a 35º C aproximadamente, o colocando un forro de lana directamente sobre el colector. Algunos prefieren además colocar un estuche que cubra toda la vagina y el colector, que se cierra con un cierre relámpago. Una vez armada la vagina se coloca el agua caliente y se la tapa correctamente.- La cantidad de agua que se coloca varía con cada vagina y con cada toro ya que algunos prefieren mas presión que otro, pero como guía podemos establecer que llenando la vagina y luego poniéndola en posición vertical con el orificio de llenado hacia arriba se derrama el excedente y queda con la cantidad aproximada. La temperatura del agua es uno de los puntos mas importantes ya que se debe tener en cuenta que entre el momento del armado de la vagina y el salto existen pérdidas de temperaturas de manera que siempre se prefiere colocar el agua con 2 a 3º C más de lo necesario, dependiendo de la Tº, sin descuidar el factor tiempo que tarda un toro en efectuar el salto. Una Tº inadecuada puede traer consecuencias mas o menos graves, si la Tº es insuficiente el toro no recibe un buen estímulo y muchas veces introduce el pene y luego lo saca o no llega a realizar un buen salto, es decir que no se produce el "golpe", "riñonada" o “estocada”. Por el contrario cuando la Temperatura es muy elevada puede quemar al toro trayendo como consecuencia una inhibición para saltar, costando mucho tiempo y esfuerzo para que se trabajen nuevamente y en muchos casos irrecuperables y se los debe destinar únicamente a servicio natural.- Como guía de trabajo se puede decir que la Tº que se coloca el agua es de 43 - 48º C de manera que en el momento del salto esté entre 40-42º C. Es beneficioso colocar (después de armada) en la entrada de la vagina un lubricante que puede ser vaselina en pasta, algunos centros de I.A. prefieren usar determinadas cremas de ordeñe que dañe menos los látex, ya que la vaselina paulatinamente va resquebrajando el material de la camisa. Una vez preparada la vagina y con su Tº adecuada se procede a realizar la extracción. Para esto se cuenta con potros de salto que pueden ser de diferentes modelos, fijos o móviles. Lo importante es que sea lo suficientemente seguro para el toro dador y para el técnico. También existen modelos móviles a motor con maniquí, pero lo más comunes son potros de metal o potros de madera dura, colocados de manera que el animal súcubo se mueva lo menos posible, para que no lastime al torodador y de que no inhiba a este, ya que muchas veces un movimiento del súcubo en el momento del salto malogra la extracción o por lo menos la retarda. El piso del "saltadero" puede ser de cemento, teniendo en cuenta de que no sea resbaladizo para lo cual se le puede agregar molduras transversales de madera, de forma que el toro trabe allí sus pezuñas. También existen pisos de goma (que son más limpios) en los que se puede hacer correr una película de agua en forma constante. 3 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 Pero en condiciones normales también se puede hacer saltar sobre piso de tierra, prefiriendo un lugar alto con pasto para que no se levante polvo. Los toros antes de efectuar el salto reciben un tratamiento de limpieza, que generalmente consiste en un cepillado y un lavaje de prepucio. Este tratamiento debe realizarse con suficiente antelación de manera que en el momento del salto no le quede resto de agua en el prepucio, ya que es esta es espermicida. Algunos centros realizan este trabajo el día antes del salto y bañan al toro y recortan el pelo del prepucio, luego lo hacen dormir en un lugar limpio para poder empezar temprano el trabajo de extracción. Cuando se va a realizar la colecta es conveniente que a los toros se los traiga con suficiente tiempo de manera que vayan mirando toda escena de extracción. Para esto se los sujeta a todos mirando hacia el potro de salto y se comienza la extracción con los más hábiles de manera que los más "lentos" vayan estimulándose. Los toros pueden estar sujetos con bozal o con anillo nasal y son arrimados al potro de salto mientras el técnico se coloca al lado del súcubo (a la derecha) a aprox. 1-1,5 mts con la vagina artificial en la mano y tapando la entrada de la misma. Cuando el toro efectúa el salto, el técnico desvía el pene tomando el mismo (con la mano izquierda) del prepucio a unos 5-10 cm por detrás del anillo prepucial. Conviene que esta mano tenga guante de polietileno descartable y nunca se debe tomar el pene del glande ya que puede provocar la retracción del pene y la inhibición del dador. Cuando realiza el primer salto se desvía el pene y entonces el toro se baja y se lo aleja unos 10 a 12 mts y se vuelve a efectuar el salto. Esto sirve siempre como estímulo y en la mayoría de los centros lo practican generalmente una o dos veces antes de la extracción. Lógicamente siempre hay toros que no necesitan este estímulo previo y si se lo realiza generalmente eyaculan fuera de la vagina. Cuando va a efectuar el salto definitivo, se lo acerca nuevamente y cuando salta y apoya sus miembros delanteros sobre el anca del súcubo el técnico coloca la vagina al costado del mismo orientando la entrada de la vagina hacia el pene dejando que el toro "busque" la misma, acercándola e introduciendo una pequeña parte del glande, en este momento el toro empuja y efectúa el " golpe" o "riñonada", al bajar hay que acompañar el movimiento del toro con la vagina hasta que retraiga el pene, en este momento hay que tener precaución de que al bajarse el toro no pise con sus manos el tubo de colecta. Inmediatamente se cubre con la mano el tubo y se lo lleva al laboratorio, esto se hace para que no sufra cambios de Tº y para que la luz solar no actúe sobre el semen ya que es espermicida. En general se acepta que tres personas son suficiente para el manejo de los toros y para la extracción. Una persona encargada del manejo del toro y su acercamiento al súcubo mientras otra se encarga del desvío del pene mientras el tercero se encarga propiamente de la extracción y generalmente el responsable de todo el trabajo. La frecuencia con que se hacen los saltos varían de acuerdo a los toros, Tº ambiente, grado de entrenamiento, etc., pero por lo común se pueden realizar 4 saltos semanales en dos días de trabajo. Algunos centros realizan 3 saltos en tres días diferentes y también hay casos en que saltan 6 veces por semana en tres días de trabajo pero como norma la primer alternativa es perfectamente practicable. 4 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 Hay que tener en cuenta que cuando se realizan varios saltos (2 ó 3) en un mismo día hay que esperar un tiempo prudencial entre uno y otro, ya que después se produce un período refractario (efecto Coolidge) sobre todo si el súcubo es hembra. Si este efecto es muy prolongado se puede volver a buscar estímulo cambiando de lugar al súcubo sustituyéndolo por otro. Todas estas alternativas hay que tenerlas en cuenta, sobre todo, cuando se está entrenando a un individuo nuevo. También en muchos casos los toros prefieren determinados súcubos, ya sean vacas, novillos u otros toros, teniendo que adaptarse a estas circunstancias. En el caso de usar vacas es importante que estas no estén en celo ya que puede producir acostumbramiento y luego se niegan a saltar con hembras en diestro. Vagina artificial ELECTRO EYACULACION Constituye una técnica de especial interés ya que su uso encuentra indicaciones precisas en animales inadaptados a la recolección vaginal, salvajes o imposibilitados por cualquier circunstancia para llevar a cabo la monta natural. No es raro que toros a consecuencia de lesiones articulares, por su edad avanzada, o simplemente se rehúsan a "saltar" sobre la vagina, no pueden suministrar semen por la vagina artificial, es en estos casos cuando la electroeyaculación está plenamente justificada. El método debe ser desechado en aquellos animales que demuestren falta de libido ya que puede trasmitirse a la descendencia. Los primeros intentos para inducir eyaculación 5 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 mediante estímulo eléctrico fueron realizados por Batelli (1922) con una descarga eléctrica en la base del cerebro de un cobayo adulto. La técnica en toros fue utilizada en Francia en 1948, utilizando un vástago con electrodos bipolares anulares con una corriente alterna de 30 voltios y 700 Ma (Miliampers), posteriormente la técnica fue ampliamente difundida y los equipos perfeccionados. El aparato comprende un transformador, un reóstato y un voltímetro, con perillas de regulación de tensión e intensidad. Además una cánula con electrodos bipolares (para introducción en el recto que cuenta con una perilla interruptora.) Procedimiento : Debemos tener en cuenta el tiempo que el toro necesita para eyacular. Debemos simular lo mejor posible el tiempo que tarda la reacción natural. Si apresuramos la secuencia “tiempo-efecto”, el resultado es una falla “involuntaria” por parte del toro. Las reacciones fisiológicas y bioquímicas que deben sucederse en un orden definido son alteradas en su secuencia. Puede ocurrir que: 1. Los músculos retractores no se relajen antes de la erección del pene 2. Se llena de sangre la porción anterior del cuerpo cavernoso, antes que la flexura sigmoidea se enderece 3. Sobre-estimulación de los músculos retractores antes que desaparezca la flexura sigmoidea 4. Liberación prematura de la fracción espermática, que resulta en una mezcla incompleta de espermatozoides y el producto de las glándulas sexuales accesorias 5. Estimulación del sistema urinario antes que los mecanismos eyaculatorios. Para realizar la electroeyaculación se debe sujetar perfectamente al toro para lo cual se lo introduce en el cepo pudiendo en algunos casos pasar una cincha alrededor del pecho paraevitar movimientos laterales, aunque esto último raramente se necesita. Se debe impedir el movimiento excesivo del toro para evitarle traumas o heridas, pero nunca se debe apretar demasiado que impida que el toro se pare naturalmente, y se altere la posición normal de los órganos internos. Para preparar el toro para la recolección, se debe estimular el reflejo de orinar mediante masajes en la zona del prepucio. Luego es conveniente lavar perfectamente el prepucio para "barrer" restos celulares y orina, utilizando agua destilada haciendo dos o tres lavajes con 100 ml cada uno. Es conveniente lavar el recto para extraer restos de materia fecal, se prefiere utilizar para esto soluciones salinas (3 a 5% de cloruro de sodio) que aumenta la conductibilidad eléctrica. Se debe cortar sólo el exceso de pelos demasiado largos y muy contaminados del prepucio. Para colocar el electrodo, primero que nada debemos asegurarnos que las tres líneas metálicas o electrodos propiamente dichos, ubicados ventralmente, estén bien limpios y completamente libres de corrosión. El recto se debe liberar del exceso de heces. Se levanta la cola del toro, hasta hacerla horizontal. Se lubrica el electrodo (con agua o vaselina) y luego se introduce la cánula y se la deja por espacio de 5 minutos (antes de iniciar la tarea) para que el animal se adapte a la cánula, se lo introduce dirigiéndolo ligeramente hacia abajo y haciendo movimientos rotatorios. El electrodo debe tratar de colocarse sobre la Ampolla de Henle y las glándulas vesiculares, para inducir la emisión de semen de los conductos deferentes. El electrodo se debe ajustar contra el ano y se 6 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 debe mover para adelante y hacia atrás, haciendo ligera presión hacia abajo. Así se pretende aplicar el estímulo eléctrico sobre los nervios que promueven la erección y la eyaculación, que se encuentran caudalmente, e igualmente se trata de evitar los nervios motores (como el ciático y el obturador). En una fase de preparación (excitación) se comienza a pasar corriente de bajo voltaje (1 a 2 volts) y aproximadamente 100 Ma durante dos o tres segundos alternados con periodos de descanso de igual duración, repitiendo la operación unas 5 a 10 veces (variando según el toro) controlando la excitación mirando la contracción del músculo cremaster y los movimientos de "sacudida" del prepucio. El primer estímulo se logra girando, muy levemente, el botón de “Power”. El botón se regresa a la posición inicial y se continúa girando hacia la derecha, cuidadosa y rítmicamente, incrementado progresivamente la intensidad del estímulo hasta lograr la primera reacción del toro, la cual generalmente se manifiesta por una contracción del esfínter del ano que trata de empujar hacia adentro el electrodo. Al continuar aumentando los estímulos (rítmicamente) el toro puede asustarse, hacer movimientos bruscos y hasta bramar. En esos casos es necesario que el operador del electroeyaculador continúe su trabajo calmadamente. No debe detenerse. Se debe continuar incrementando el ritmo de estimulación. Esto es imprescindible para lograr un buen eyaculado. La erección completa debe ocurrir entre 3 a 5 minutos luego de iniciado el proceso. Por erección completa se entiende el total enderezamiento de la flexura sigmoidea (o “S” peneana), y protrusión del pene. Algunas veces el pene no se visualiza, a pesar del estímulo eléctrico y del esfuerzo físico sobre la flexura sigmoidea. Es muy importante tratar de lograr la protrusión del pene ya que facilita la recolección de semen, y nos permite evaluar ese importante órgano. Cuando se llega a un buen nivel de excitación empiezan a fluir secreciones de las glándulas accesorias recogiéndolas por separado. Llegado a este punto de excitación, se aumenta la corriente a 5 ó 6 volts y 800 a 1000 Ma haciendo los pasajes durante 5 a 6 segundos con períodos de descanso de igual tiempo. La duración de la operación es de entre 5 a 10 minutos. La recolección del esperma se realiza mediante un embudo de vidrio o de plástico, pudiéndose agregar un mango de 0,5 mts de longitud entonces se puede ver al mismo tiempo las reacciones del animal con los pasos de la corriente. Seguidamente debe comenzar la secreción de semen, por lo que se deben mantener el ritmo y el incremento de estimulación eléctrica. En este momento el incremento de estimulación es muy importante para lograr la secreción de semen, por lo que si el toro no eyacula prontamente se debe incrementar la estimulación más rápido que al inicio del proceso. Si el toro no eyacula, se debe intentar de nuevo después de 15 minutos. La mayoría de los toros (más del 90%), bien trabajados, deben dar una buena muestra de semen en alrededor de 6 minutos, Para el manejo del semen, el esperma se puede recoger pura o en un recipiente con diluyentes especiales a temperatura adecuada. Cada superficie que entre en contacto con el semen debe estar a una temperatura mínima de 35°C y máxima de 38°C. Se debe evitar la exposición directa de la muestra de semen al sol. La frecuencia de extracción es de 2 veces por semana como máximo, pues el animal sufre un estrés muy importante. Existen otros modelos de electroeyaculadores, algunos bastantes usados como el modelo de Rowson que tiene dos anillos de cobre unidos por cable al equipo regulador. El operador con la mano enguantada pasa un anillo por el índice y el otro por el anular apoyando los mismos sobre ambas vesículas seminales. Es importante destacar que extrayendo semen por electroeyaculación aumenta considerablemente el volumen del mismo obteniendo eyaculados de entre 5 y 15 ml. Pero 7 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 como la mayor parte del eyaculado está compuesto por líquido de las glándulas accesorias, la concentración de espermatozoides por mm3 disminuye considerablemente. También hay variaciones en el pH del mismo por la gran alcalinidad de las glándulas bulbouretrales. COLECTA DE SEMEN EN OTRAS ESPECIES. EQUINO: 1- COLECTOR VAGINAL: son tubos de vidrio o plástico que se adaptan a la vagina de la hembra, de 5 cm de diámetro y 70 de longitud 2- TOMAR DE ÚTERO: usado antiguamente por los arabes. 3- VAGINA ARTIFICIAL: (lo mas usados) 4- SACO COLECTOR. Condón o preservativo. (no se usan) OVINO: 1- ELECTROEYACULACIÓN: mas pequeños que en el bovino. Similar éxito que en el toro. El estímulo es con corriente de 30 – 40 volts y 160 – 190 mA. 2- VAGINA ARTIFICIAL: lo mas usado. CERDO; 1- VAGINA ARTIFICIAL: distintos modelos 2- MASAJE DEL GLANDE CANINO: 1- MASAJE DE PENE: Previo a la toma de muestra se recomienda limpiar la zona prepucial y abdominal, siendo adecuado en perros de pelo largo cortar el pelo de la región. En los caninos usualmente el semen es recolectado por masturbación sobre un piso no resbaladizo. A fin de facilitar la eyaculación resulta de utilidad contar con la presencia de una hembra en celo, o en su defecto, una perra a la cual se le aplica tópicamente en la región perineal feromonas sintéticas (metil-p-hidrobenzoato) o un hisopo impregnado de descargas vulvares de una perra en celo. Es importante la presencia del menor número de personas posibles a fin de reducir el estrés y distracciones externas del macho al momento de la extracción. Si el Profesional es diestro, se colocará a la izquierda del reproductor. Luego de realizar una estimulación leve del bulbo del pene mediante masaje suave a través del prepucio, procederárápidamente, y antes que se produzca una erección total, a correr el prepucio por detrás del bulbo del pene. Si esto no fuera posible, la presión del bulbo ingurgitado presionaría contra el prepucio ocasionando dolor e impidiendo la total erección y posterior eyaculación del animal. Una vez retirado el prepucio se realiza una presión sostenida en caudal del bulbo. La primer fracción que el animal eyacula es la preespermática, carente de espermatozoides y de muy escaso volumen. Le sigue la fracción espermática, rica en espermatozoides y fracción que se colecta en su totalidad cuando se desea realizar la inseminación artificial. En ocasiones es de utilidad realizar presión pulsátil sobre proceso uretral para facilitar la eyaculación en animales no entrenados. Luego de la fracción espermática comienzan movimientos pulsátiles de la uretra. En este momento comienza a eyacular la tercera fracción o fracción prostática, nuevamente carente de espermatozoides. En este momento el pene se gira 180 º hacia atrás, simulando la posición tomada en el servicio natural (abotonamiento). De la fracción prostática se colecta solo la cantidad suficiente para asegurar la recogida de toda la segunda fracción o fracción espermática. Una vez concluida la colección del semen, se controla la reintroducción normal del pene en el prepucio. 2- VAGINA ARTIFICIAL: 3- ELECTROEYACULACION: 8 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 GATO: 1- VAGINA ARTIFICIAL: Puede fabricarse una vagina artificial, seccionando y adaptando una pera de goma pequeña (como las que acoplamos a las pipetas de 1 o 2 mililitros) a un ependorf o a un tubo de pequeño calibre. La vagina debe precalentarse a 36ºC, colocarse cuando el macho realiza la monta de la hembra en celo y colectar así el eyaculado. La colecta puede realizarse sin utilizar una hembra en celo, previo entrenamiento del macho a la eyaculación mediante manipulación. Sin embargo es preciso recordar que cualquiera sea el método elegido, el animal requiere un entrenamiento previo y solo un pequeño porcentaje de los animales logra eyacular mediante la utilización de vagina artificial . 2- ELECTROEYACULACION: L a electroeyaculación permite obtener semen de todos los animales que posean la vía neurológica implicada intacta. Sin embargo, una limitante es la necesidad de someter al animal a una anestesia general a fin de evitar las molestias que este método produce sobre el mismo. Para la realización de esta técnica debe utilizarse un electroeyaculador, el cual consta de un vástago (fuente de electrodos) y una fuente de voltaje . El vástago es introducido entre 7 y 9 centímetros en el recto con los electrodos ubicados hacia ventral. El pene es exteriorizado y se lo coloca dentro de un tubo. Se necesitan unos 80 estímulos de entre 2 y 5 voltios para lograr un eyaculado. Los estímulos se dividen en tres series con un descanso de 2 a 3 minutos, entre cada serie. Con cada estímulo ocurre una extensión rígida de los miembros posteriores, la cual indica que el estímulo ha sido adecuado. Este método se reserva solo para animales sanos, para los cuales el procedimiento implica un riesgo mínimo. 3- LAVAJE VAGINAL: Si bien este no es el método ideal para realizar una evaluación seminal, puede utilizarse cuando no es posible realizar una extracción de semen mediante vagina artificial y es riesgoso someter al animal a un protocolo anestésico o el propietario no accede al mismo. Es preciso considerar que esta práctica es engorrosa ya que el macho debe realizar un servicio e inmediatamente después la hembra debe ser sedada para implementar un lavaje vaginal, el cual se realizará con solución salina fisiológica a 37ºC . Debe considerarse que los espermatozoides recolectados por este método pueden sufrir alteraciones relacionadas con la técnica de toma de muestra utilizada. El lavaje vaginal con 1 ml de solución fisiológica permite obtener entre 40 X 104 y 10 X106 espermatozoides. 4- RECUPERACIÓN DE VEJIGA: Se ha reportado que el gato eyacula entre 15 y 90 % de semen en forma retrógrada en la vejiga urinaria. Es así que la recuperación de espermatozoides de la vejiga es usado para determinar si el gato produce espermatozoides. 5- COLECCIÓN DEL EPIDÍDIMO: Pueden obtenerse espermatozoides de la cola del epidídimo luego de la castración o pos mortem. El epidídimo debe lavarse con un diluyente de semen para obtener los espermatozoides que serán posteriormente criopreservados. Este es un método útil y eficaz en la preservación de semen de especies silvestres cuando los animales mueren en zoológicos o reservas. 9 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 BIBLIOGRAFIA 1- AXNER, E Linde-Fosberg, C. (1998). Mating and artificial insemination in Small animal reproduction and neonatology (eds. G. Simpson, G. C. England and M. Harvey), 105-111. Cheltenham: BSAVA. 2- FARSTAD, W., 1996. Semen criopreservation in dogs and foxes. Animal Reprod. Sci. 42: 251-26. 3- HOLY,L. "Bases biológicas de la reproducción bovina" Pag: 395-406 (1983). Editorial Diana (México). 4- HAFEZ, E. ; (1984) "Reproducción e I.A. en animales ". Editorial Interamericana. 5- JHONSTON, D.J.; KUZTRITZ, M.V.R.; OLSON, P. (2001) Canine and feline theriogenology. Ed. Saunders. 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Si bien es de suma importancia llevar a cabo todas las pruebas necesarias, hay que destacar que todas (de laboratorio)no son mas que pruebas de CALIDAD, haciendo solamente una predicción sobre su fertilidad. Las pruebas de FERTILIDAD de un semen son las de campo, es decir que se puede estar seguro solamentecuando se tiene cifras de N.R. o preñez a primo-inseminación. Existen pruebas de fertilidad hechas en laboratorio (fertilización in Vitro) pero al no estar perfectamente "a punto" no la consideramos. Hay que tener en cuenta que la mayor parte de las pruebas que se realizan para evaluar un semen son de tipo subjetivas, por lo tanto es de importancia el entrenamiento y habilidad del técnico que las realiza. Existen en la práctica corriente varias técnicas para evaluar la calidad de un eyaculado pudiendo clasificarlas en: 1- Examen macroscópico. 2- Examen microscópico. 3- Pruebas bioquímicas. 4- Pruebas de sobrevivencia. EXAMEN MACROSCOPICO: El examen macroscópico se realiza inmediatamente después de la recogida, en el tubo colector. Dicho examen comprende la observación del volumen del eyaculado, color, aspecto, pH y motilidad en masa microscópica. Volumen: El volumen del eyaculado se toma directamente del tubo graduado. El volumen del eyaculado está en directa relación con la edad del toro, estado nutricional, frecuencia de saltos, raza, tamaño de los testículos, estimulación sexual, etc. Es bien conocido que toros jóvenes cuando recién empiezan su etapa de extracción comúnmente eyaculan 1 ó 2 ml. También toros viejos frecuentemente disminuyen su volumen espermático. Es conocido que el volumen eyaculado por toros lecheros es bastante mayor que el eyaculado de toros carniceros. También en casos de toros que no reciben suficiente estímulo eyaculan poco volumen. Como término medio eyaculado normal de toros carniceros va de 4 a 6 ml variando de 2 a 12 ml. Los toros que habitualmente producen 1 ó 2 ml generalmente no son utilizados para I.A. no solo por el aspecto económico si no porque puede ser transmisible. 11 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 Color: El color normal de un eyaculado bovino es blanco, pudiendo variar de blanco lechoso a blanco grisáceo. Si bien estos son los colores de semen que habitualmente se encuentran existen variaciones como blanco amarillento o blanco verdoso que en general depende de características individuales. Existen patologías de semen que pueden hacer variar el color y tornarlo como los mencionados anteriormente. La presencia de pus en el semen da un color amarillo verdoso, variando a rojizo ante la presencia de sangre en el eyaculado. De estos se desprende que existen colores normales que pueden aparecer como patológicos y viceversa, por lo tanto para un diagnóstico correcto es necesario hacer exámenes sucesivos. Aspecto: El aspecto del semen está básicamente dado por la concentración de células espermáticas, pero básicamente se puede clasificar en tres tipos: a) Aspecto acuoso con baja concentración de esp. xmm3 (menos de 500.000 xmm3). b) Aspecto lechoso: con 500.000 a 1.000.000 de esp. xmm3. c) Aspecto cremoso: con mas de 1.000.000 de esp. xmm3. Dentro de esta clasificación, lógicamente, existen grados intermedios. pH: La evaluación del pH se realiza correctamente con un medidor con microelectrodos, pero habitualmente, por razones de sencillez y economía se toma con cinta de papeles indicadores. El pH del semen de toro es ligeramente ácido variando entre 6,6 a 7(6,8) dependiendo en general de la concentración y del porcentaje de vivos. Hay que tener en cuenta que por el metabolismo después de extraído puede disminuir el pH por lo que se aconseja medirlo inmediatamente. Los distintos componentes del eyaculado tienen pH diferente siendo el del semen alrededor de 6, líquido de la rete testis 7,1 a 7,8 vesículas seminales 6 a 6,4 y el líquido de las glándulas bulbouretrales mas de 8. Hay que tener en cuenta también la forma de extracción ya que cuando se utiliza electroeyaculador al aumentar el líquido de las glándulas uretrales el pH se hace alcalino. Motilidad en Masa: Esto no es mas que la observación delos movimientos que existen en el semen y que son observados a través de las paredes del tubo de extracción, como humo de cigarrillo, y que son masa de esp. que en el movimiento originan esta apariencia. La intensidad depende de la concentración y del porcentaje de vivos aptos así como de la energía de los espermatozoides. 12 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 GRAFICO: EZPS. CARACT. BOVINO EQUINO OVINO PORCINO CANINO FELINO Volumen .ml 1-2 10-12 4-6 40 - 300 75-150 0,5 - 2 0,8 - 1 100 - 500 200 2 – 5 10-15 0,01- 0,12 PH 6,6 6,8 7,2 - 7,8 6,2 6,8 7,3 7,9 6,7 7,4 Aspecto Acuoso Lechoso Cremoso Opaco blanco- grisáceo Acuoso 3part clara viscosa Cremoso Gelatinoso Lechoso Opaco blanco- grisáceo Color Blanco lechoso Blanco opaco Blanco nacarado Turbio Blanco perlado Blanco lechoso Concentra .mm3 500.000 800.000 1.000.000 2.000.000 50.000 150.000 1.000.000 2.300.000 2.500.000 50.000 150.000 1.000.000 1.500.000 2.000.000 200.000 1.700.000 3.500.000 P.especific. 1035 1.010 -1.085 1038 1011 1.011 Viscosidad 3,74 BIBLIOGRAFIA 13 Cátedra de Fisiopatología de la Reproducción y Obstetricia Facultad de Ciencias Veterinarias – UNNE. Guía Nº 9 15- HOLY,L. "Bases biológicas de la reproducción bovina" Pag: 395-406 (1983). Editorial Diana (México). 16- HAFEZ, E. ; (1984) "Reproducción e I.A. en animales ". 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Breeders) Pag. 51-55. 25- SAACKE,R (1984) "Semen Quality" Importance and Influencing Factors. 10 Conf. Inter. Repr. (NAAB) Pag. 30-36. 14 GUIA Nº 9 Centesis Genital. POCOS USADOS MAS USADOS 5-VAGINA ARTIFICIAL VAGINA ARTIFICIAL Por el contrario cuando la Temperatura es muy elevada puede quemar al toro trayendo como consecuencia una inhibición para saltar, costando mucho tiempo y esfuerzo para que se trabajen nuevamente y en muchos casos irrecuperables y se los debe destinar únicamente a servicio natural.- ELECTRO EYACULACION Procedimiento : COLECTA DE SEMEN EN OTRAS ESPECIES. BIBLIOGRAFIA EVALUACION DEL SEMEN EXAMEN MACROSCOPICO: Volumen: Color: Aspecto: Motilidad en Masa: GRAFICO: BIBLIOGRAFIA
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