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3° U.A. Departamento de Histología, Embriología, Biología Celular y Genética - FMED - UBA Histología - Trabajo Práctico 1: Microscopía, técnica histológica, tipos celulares 1) Señale en el siguiente esquema las partes del microscopio óptico de luz clara, similar a 1 los disponibles en el aula de Histología. 1. ____________________ 2. ____________________ 3. ____________________ 4. ____________________ 5. ____________________ 6. ____________________ 7. ____________________ 8. ____________________ 9. ____________________ 10. ____________________ 11. ____________________ 12. ____________________ 1 1 3° U.A. Departamento de Histología, Embriología, Biología Celular y Genética - FMED - UBA 2) Complete la siguiente tabla. En la última columna las opciones son estructura/ultraestructura. 3) Señale si cada una de las siguientes afirmaciones es verdadera o falsa. Justifique las falsas. a) (_) Los microscopios fotónicos, en particular el microscopio óptico, nos permiten visualizar células. b) (_) En la microscopía electrónica de transmisión pueden observarse células vivas. c) (_) Un micrómetro (µm) corresponde a 10-3 milímetros (mm). d) (_) La ultraestructura celular puede ser evidenciada, en una muestra preparada con la técnica de rutina (hematoxilina-eosina), con el uso del microscopio óptico, que permite visualizar, por ejemplo, las membranas plasmáticas y mitocondrias. e) (_) Un milímetro (mm) corresponde a 106 micrómetros (µm). f) (_) El núcleo de una célula, por ejemplo, el de un fibroblasto, puede ser visualizado con el microscopio óptico. 4) Con respecto al límite de resolución (LR) y el poder de resolución (PR). a) Defínalos. b) ¿Cómo se relacionan entre sí? c) ¿De qué depende el PR? ¿Cómo puede modificarse? 2 3° U.A. Departamento de Histología, Embriología, Biología Celular y Genética - FMED - UBA 5) Complete las siguientes frases. a) El límite de resolución del __________ es de 0,2 µm. b) El límite de resolución y el poder de resolución son __________ proporcionales. c) El microscopio electrónico de transmisión (MET) posee mayor __________ y por lo tanto menor __________ que el microscopio óptico (MO). d) El límite de resolución del __________ es 0,2 mm. e) El __________ utiliza una fuente que emite un rayo de electrones y el __________ emplea luz (fotones). 6) ¿Cuáles de las siguientes palabras definen la imagen final en microscopía óptica con respecto a la imagen inicial? 2 A. Invertida C. Derecha E. Virtual G. Igual B. Real D. Mayor F. Menor La imagen final, resultante de ambas lentes, objetivo y ocular, será en la microscopía óptica __________, __________ y __________ respecto al objeto observado. 7) Completar los textos asociados a cada imagen con las opciones correspondientes. 1. A. Microscopio Óptico (MO) C. Microscopio Electrónico de Barrido (MEB) B. Microscopio Electrónico de Transmisión (MET) 2. A. Superficie B. Ultraestructura C. Estructura 3. A. Electrones B. Luz 4. A. Atraviesa B. Choca contra la superficie de 5. A. Colores B. Blanco y negro 6. A. Muertos B. Vivos y muertos 7. A. 0,2 µm B. 0,2 nm C. 0,1 nm 2 Imagen 2 - Tomado de Brusco 1a ed, figura 2-14 3 3° U.A. Departamento de Histología, Embriología, Biología Celular y Genética - FMED - UBA I) Imagen 3 : 3 Esta imagen fue tomada con un (1) __________. En ella se puede visualizar la (2) __________ celular, es decir, sus organelas, citoesqueleto, membranas celulares. Utiliza un haz de (3) __________ que (4) __________ la muestra. La imagen obtenida es en (5) __________. Permite visualizar tejidos (6) __________. Su poder de resolución es (7) __________. II) Imagen 4 4 Esta imagen fue tomada con un (1) __________. En ella se puede visualizar la (2) __________ celular. Utiliza un haz de (3) __________ que (4) __________ la muestra. La imagen obtenida es en (5) __________ debido a las técnicas de preparación histológica aplicadas. Permite visualizar tejidos (6) __________. Su poder de resolución es (7) __________. III) Imagen 5 : 5 Esta imagen fue tomada con un (1) __________. En ella se puede visualizar la (2) __________ celular. Utiliza un haz de (3) __________ que (4) __________ la muestra. La imagen obtenida es en (5) __________. Permite visualizar tejidos (6) __________. Su poder de resolución es (7) __________. 3 Imagen 3, Neutrófilo - Tomado de Ross, 7ma ed, Figura 10-8 4 Imagen 4, Hígado - Tomado de Ross, 7ma ed, Lámina 65, figura inferior 5 Imagen 5, Eritrocitos - Tomado de Ross, 7ma ed, Figura 10-4 4 3° U.A. Departamento de Histología, Embriología, Biología Celular y Genética - FMED - UBA 8) Ordene los pasos de la técnica histológica de rutina y describa brevemente los objetivos de cada uno de ellos. A. Inclusión D. Montaje final G. Coloración J. Aclaración B. Fijación E. Corte y montaje H. Rehidratación C. Obtención de la muestra F. Deshidratación (1) I. Deshidratación (2) 1. __________ 2. __________ 3. __________ 4. __________ 5. __________ 6. __________ 7. __________ 8. __________ 9. __________ 10. __________ 9) Señale si cada una de las siguientes afirmaciones es verdadera o falsa. Justifique las falsas. a) (_) Los colorantes ácidos tiñen estructuras con carga negativa. b) (_) La hematoxilina es un ejemplo de colorante básico y tiñe fielmente las mitocondrias. c) (_) Todos los colorantes básicos son metacromáticos. d) (_) La hematoxilina necesita de un mordiente para poder transmitir su color a los tejidos. e) (_) Los componentes celulares necesarios para sintetizar proteínas son basófilos. f) (_) Al usar aclarantes como el xilol se pierde la capacidad de observar lípidos con la técnica de rutina. g) (_) Al momento de deshidratar la muestra se utiliza alcohol al 100% directamente, ya que no existe riesgo de dañar al tejido. h) (_) Los lípidos pueden ser observados por coloración con Sudanes, previa congelación y corte con crióstato. i) (_) Los cortes del micrótomo arrojan piezas de 1 a 10 mm de grosor. 5 3° U.A. Departamento de Histología, Embriología, Biología Celular y Genética - FMED - UBA 10) Explique brevemente los fundamentos de la inmunohistoquímica. 11) Explique el fundamento y los objetivos de las siguientes tinciones: a) PAS b) Feulgen 12) En la tinción de rutina (hematoxilina-eosina), ¿qué componentes celulares y extracelulares son basófilos y cuáles acidófilos? ¿Cómo espera que se tiña una célula productora de proteinas de secreción y por qué? 6 3° U.A. Departamento de Histología, Embriología, Biología Celular y Genética - FMED - UBA 13) La siguiente microfotografía corresponde a un corte de riñón, con tinción de rutina 6 (hematoxilina-eosina), con un aumento de 240X. El riñón posee múltiples estructuras tubulares que estudiaremos en detalle el TP7. En la imagen, las luces de dichos túbulos están marcadas con letras (distintas para los distintos tipos de túbulos). Alrededor de la luz, se observan células conformando la pared del túbulo. a) Señale los núcelos de las células de la pared de los túbulos. ¿Cómo los describiría? b) Cada célula de la pared de los túbulos posee un núcleo. i) ¿Puede reconocer los límites entre las células adyacentes? ii) En el túbulo marcado con azul sólo se observan dos núcleos. ¿Quiereesto decir que sólo dos células forman la pared de ese túbulo particular? ¿Cómo explicaría esta situación? c) En verde se encuentra marcada una estructura. ¿Puede corresponderse a un túbulo? ¿Cómo explicaría su forma particular? 6 Imagen 6, Riñón - Tomado de Ross, 7ma ed, Lámina 76, figura superior derecha 7
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