MICROBIOLOGIA

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Generalidades 
• Ciencia que comprende el estudio de la biología 
de los microorganismos y sus relaciones con el 
medio ambiente. 
• Estudia formas de vida microscópicas como son: 
bacterias, virus y hongos. 
Clasificación de los MO 
• Eucariotas: poseen núcleo delimitado por 
membra (hongos, algas y protozoarios) 
• Procariotas: el ADN no tiene separación física del 
citoplasma (bacterias) 
Anatomía y estructura bacteriana: 
Bacteria 
• Microorganismo Unicelular sencillo. 
• No contiene organelas. 
• Sus funciones se llevan a cabo en el citoplasma o 
en la membrana citoplasmática. 
Procariotas 
• A este grupo pertenecen las bacterias. 
• No poseen núcleo definido con membrana 
nuclear. ADN disperso en el citoplasma. 
• No poseen organelas (mitocondrias, R.E., 
lisosomas) 
• Se dividen por fisión binaria. 
• Un sol cromosoma. 
• Pared celular compuesta por peptidoglucano. 
Clasificación 
• Características morfológicas (cocos, bacilos, 
espirilios, vibrios) 
• Características de cultivo. 
• Composición química. 
• Actividad bioquímica. 
• Características antigénicas. 
• Características Genéticas. 
Nomenclatura 
• Es la denominación de las unidades, definidas 
por sus características, existiendo reglas 
internacionales 
Identificación 
• Es la comparación que se realiza entre las 
unidades “desconocidas” con las “conocidas” y 
de esta forma incluirlas dentro de la clasificación 
existente 
Morfología bacteriana 
Tamaño: variable de 0.25µm a 1.0 µm de ancho, 1 
µm a 3 µm de longitud (solo con Microscopio Óptico) 
Formas: 
✓ Bastoncillos (bacilos) 
✓ Esferas (cocos) 
✓ Ovoides (cocobacilos) 
✓ Espiral (espiroquetas) 
✓ Coma (vibrios) 
Microbiología 
Nombre del microorganismo de dos palabras: 
- Primera palabra corresponde al Género 
Siempre con mayúscula. Ej: Clostridium 
- Segunda palabra corresponde a la especie 
Siempre con minúscula. Ej: tetani 
Morfología bacteriana 
Agrupaciones: 
✓ Strepto (cadenas) 
✓ Staphylo (racimos) 
✓ Diplo (pares) 
✓ Sarcinas (tretadas) 
Componentes bacterianos: 
Pared Celular. 
• Está formada por peptidoglicano o mureína, 
polímero compuesto de subunidades de N-
acetilglucosamina y N-acetilmuramico 
Funciones de la pared celular. 
• Saco que rodea la célula = Sáculo de Mureina 
• Polisacárido único = PEPTIDOGLICANO 
• Otorga rigidez y forma a la bacteria 
• Protección de lisis 
• Es blanco ideal para acción de agentes 
antimicrobianos 
Bacterias Gram + y Gram - 
1. DIFERENCIAS ESTRUCTURALES: 
Cubiertas Celulares (capas que la rodean) Membranas 
 Pared 
Grampositivas 2 capas: Memebrana 
ccitoplasmatica interna. Pared celular GRUESA 
 Peptidoglicano 
 Membrana plasmática 
 
Gramnegativas 3 capas: Membrana 
citoplasmática interna. Pared celular DELGADA. 
Membrana externa (lipopolisacárido) 
 
 
 Tinción de Gram 
 
 
1. Portaobjetos limpia 
2. Se seca y se agrega el colorante primario 1min 
3. Se lava y se coloca Iodo 1min 
4. Se lava decolorante 
5. Lava y se colora safranina colorante secundario 
6. Se seca al mechero 
7. Objetivo de 100x con aceite de inmersion 
Cuando el colorante primario va a penetrar en la pared 
gruesa permite que través del fijador se haga un 
complejo y quede retenido, cuando se aplica la 
decoloración el colorante no es arrastrado y queda 
morado que es color primario. 
 Disacárido N- acetilglucosamina 
PEPTIDOGLICANO Disacárido N- acetilmuramico 
 
Azucares alternados entrelazados por puentes 
peptídicos 
 
Hojas de peptidoglicano 
 
Enlazadas entre si = Estructura entretejida 
 
Baciloscopia 
Toma de muestras: 
• Esputo debe provenir del pulmón 
• Enjuagar la boca e inspirar profundamente para 
la toma de la muestra. 
• Se toman 3 muestras: 
1. Momento de la consulta 
2. Al despertar del día siguiente 
3. Tercer día (mañana) 
 
Informe de resultados 
NSO-BAR No 
1 a 9 Reportar el numero de BAR x 100cp 
Positivo 1 + Menos de un BAR promedio x 100cp 
Positivo 2 + 1 a 10 BAR promedio x 50cp 
Positivo 3 + Mas de 10 BAR promedio x 20cp 
Fisiología bacteriana 
Composición química: 
Agua 
 
Sustancias inorgánicas 
 
 
 
 
Sustancias orgánicas 
Crecimiento bacteriano 
Se dividen por fisión binaria: 
• Proceso por el cual la célula madre se tabica 
para formar dos células hijas. 
• Posteriormente cada una de estas células hijas 
se divide en dos más y así sucesivamente. 
Crecimiento es logarítmico o exponencial: 
• Tarda tiempos distintos para cada bacteria, y 
varia también de acuerdo con las 
concentraciones de nutrientes, temperatura, pH 
y otros factores ambientales. 
Fase de crecimiento: latencia, logarítmico o exponencial, 
estacionaria, muerte. 
 
Medios de cultivo 
• Son mezclas complejas de sustancias químicas 
y/o productos biológicos (proteínas, sangre, 
suero) donde la bacteria obtiene los elementos 
necesarios para su crecimiento en el laboratorio 
(in vitro) 
Medios especiales para 
Enterobacterias 
DIFERENCIADORES SELECTIVOS ENRIQUECIDOS 
Se preparan con 
lactosa, sales 
biliares y un 
indicador que haga 
manifiesta la 
Inhiben 
crecimiento de 
los 
enterosaprobios 
y favorecen 
Tienen mayor 
variedad de 
nutrientes para 
favorecer 
Lavado gástrico, expectoración, liquido 
pleural, LCR, orina y en tejido de biopsia. 
Principal componente celular 
Libre o ligada (75%-85%) 
Varia entre 2 y 14% 
Fosforo, sodio, azufre, calcio, 
magnesio, potasio, hierro, 
zinc, manganeso, cobre 
Proteínas: 50-80% materia seca 
Carbohidratos: forman parte de polisacáridos. 
Dan especificidad de antígenos bacterianos. 
Lípidos: varía entre 10 y 50% compuestos por 
AGL (palmítico, esteárico) 
Ac. Nucleicos: 10-30% de materia seca 
RNA (síntesis de proteínas) y DNA (herencia) 
hidrolisis de esta 
azúcar. 
Indicadores: 
eosina, azul de 
metileno, rojo 
neutro, verde 
brillante, rojo fenol, 
cristal violeta o 
purpura de 
bromocresol. 
Además, tiene 
nutrientes. 
Ej.: medio agar 
eosina y azul de 
metileno, Agar 
Macconkey, agar 
desoxicolato. 
desarrollo de los 
enteropatógeno
s debido al alto 
contenido de 
sales biliares. 
Ej.: Agar 
Salmonella-
Shigella, Agar 
desoxicolato- 
citrato, agar 
xilosa-lisina-
desoxicolato. 
 
crecimiento de 
cepas difíciles. 
Ej.: Agar 
tetrationato de 
Müller, Agar 
verde brillante, 
rojo fenol y agar 
selenita. 
 
 
Poblaciones Microbianas naturales 
Cultivos Mixtos. 
• Cultivos puros: representa las condiciones 
artificiales para el desarrollo de las bacterias y 
otros MO, así como las condiciones impuestas a 
los mismos mediante el manejo en el 
laboratorio. 
Métodos para aislar Cultivos Puros 
• Técnica de siembra por estrías en placa y técnica 
de siembra por difusión en placa 
• Técnica de la placa vertida 
• Técnica del enriquecimiento del cultivo 
• Técnica de las diluciones en serie 
• Técnica de aislamiento de una sola célula 
Mantenimiento y preservación de 
Cultivos Puros 
• Resiembra periódica a medios frescos 
• Preservación de cultivos con una capa de aceite 
mineral 
• Preservación de cultivos por secado rápido en 
congelación (liofilización) 
• Almacenamiento a temperaturas muy bajas 
Técnicas de siembra: 
Por estrías en placa: 
 
Por dilución: 
 
Por difusión en superficie del agar: 
 
Por estrías o punción en tubos de ensayo: 
 
Vertido de agar en placa: 
 
Pruebas bioquímicas 
 
Kligler Hierro Agar 
• Medio de cultivo frecuentemente usado en 
microbiología de alimentos para la 
diferenciación de enterobacterias, en base a la 
fermentación de glucosa y lactosa, y a la 
producción de ácido sulfhídrico. 
Formula (en gramos por litro) Instrucciones 
Peptona de 
carne 
13.0 Suspender 54.8g del 
polvo por litro de agua 
destilada. Mezclarbien y calentar con 
agitación frecuente, 
hervir 1 o 2 minutos 
hasta disolución total. 
Llenar hasta la 3era 
parte de los tubos de 
ensayo. Esterilizar a 
121C por 15min. 
Enfriar en pico de 
flauta profundo. 
Cloruro de sodio 5.0 
Lactosa 10.0 
Tripteina 10.0 
Glucosa 1.0 
Citrato de hierro 
y amonio 
0.5 
Tiosulfato de 
sodio 
0.3 
Rojo de fenol 0.025 
Agar 15.0 
pH final: 7.3 ± 0.2 
Fundamento: 
• En el medio de cultivo, la peptona de carne y la 
tripteina, aportan los nutrientes adecuados para 
el desarrollo bacteriano. 
• La lactosa y la glucosa son los hidratos de 
carbono fermentables. 
• El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario 
para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato 
de hierro y amonio es la fuente de iones Fe 3+, 
los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y 
producen sulfuro de hierro, de color negro 
• El rojo de fenol es el indicador de pH, y el 
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. 
El agar es el agente solidificante. 
• Por fermentación de azucares, se producen 
ácidos, que se detectan por medio del indicador 
rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en 
medio acido. 
• El tiosulfato de sodio se educe a sulfuro de 
hidrogeno el que reacciona luego con una sal de 
hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro 
de color negro. 
Resultados 
1. Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo 
amarillo): el MO solamente fermenta glucosa 
2. Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo 
amarillo): el MO fermenta glucosa y lactosa. 
3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo 
rojo): el MO es no fermentador de azucares. 
4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio 
de cultivo, indica que el MO produce gas. 
5. El ennegrecimiento del medio indica que el MO 
produce ácido sulfhídrico. 
 
TSI Agar 
• Medio universalmente empleado para la 
diferenciación de enterobacterias, en base a la 
fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la 
producción de ácido sulfhídrico. 
Formula (en gramos por litro) Instrucciones 
Extracto de 
carne 
3.0 Suspender 62,5g del 
polvo por litro de agua 
destilada. Mezclar 
bien y calentar con 
agitación frecuente, 
hervir 1 o 2 minutos 
hasta disolución total. 
Llenar hasta la tercera 
parte de los tubos de 
ensayo. Esterilizar a 
121C por 15 minutos. 
Enfriar en pico de 
flauta profundo. 
Pluripeptona 20.0 
Cloruro de sodio 5.0 
Lactosa 10.0 
Sacarosa 10.0 
Glucosa 1.0 
Sulfato de 
hierro y amonio 
0.2 
Tiosulfato de 
sodio 
0.2 
Rojo de fenol 0.025 
Agar 13.0 
pH final: 7.3 ± 0.2 
Fundamento 
• En el medio de cultivo, el extracto de carne y la 
pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados 
para el desarrollo bacteriano. 
• La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de 
carbono fermentables. 
• El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario 
para la producción de ácido sulfhídrico, el 
sulfato de hierro y amonio es la fuente de iones 
Fe3+, los cuales se combinan con el ácido 
sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color 
negro. 
• El rojo de fenol es el indicador de pH, y el 
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. 
• Por fermentación de azucares, se producen 
ácidos, que se detectan por medio del indicador 
rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en 
medio ácido. 
• El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de 
hidrogeno el que reacciona luego con una sal de 
hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro 
de color negro. 
Medio preparado: rojo 
Resultados: 
 
Lisina Hierro Agar 
• Medio de cultivo utilizado para diferenciar MO, 
especialmente Salmonella spp., basado en la 
descarboxilación/desaminación de la lisina y en 
la producción de ácido sulfhídrico. 
Formula (en gramos por litro) Instrucciones 
Peptona de 
gelatina 
5.0 Suspender 35g del 
medio deshidratado 
en un litro de agua 
destilada. Dejar 
embeber unos 15 
minutos. Calentar 
cuidadosamente, 
agitando con 
frecuencia y hervir 
durante un minuto 
hasta la disolución 
completa. Distribuir y 
esterilizar a 121C 
durante 15 minuto. 
Enfriar en pico de 
flauta dejando un 
fondo vertical apto 
para la punción. 
Extracto de 
levadura 
3.0 
Glucosa 1.0 
Lisina 10.0 
Citrato de hierro 
y amonio 
0.5 
Tiosulfato de 
sodio 
0.04 
Purpura de 
bromocresol 
0.02 
Agar 15.0 
pH final: 6.7 ± 0.2 
Fundamento 
• En el medio de cultivo, la peptona y el extracto 
de levadura aportan los nutrientes para l 
desarrollo bacteriano. 
• La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, 
y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la 
presencia de las enzimas descarboxilasa y 
desaminasa. 
• El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de 
sodio, son los indicadores de la producción de 
ácido sulfhídrico. 
• El purpura de bromocresol, es el indicador de 
pH, el cual es de color amarillo a pH igual o 
menor a 5.2 y de color violeta a pH igual o 
mayor a 6.8. 
• Por descarboxilación de la lisina, se produce la 
amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto 
produce el viraje del indicador al color violeta. 
• La descarboxilación de la lisina tiene lugar en 
medio acido, por lo que es necesario que la 
glucosa sea previamente fermentada. 
• Los 
MO 
que no producen lisina descarboxilasa, pero que 
son fermentadores de la glucosa, producen un 
viraje de la totalidad del medio de cultivo 
amarillo, pero a las 24h de incubación se 
observa el pico de color violeta debido al 
consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. 
• La producción de sulfuro de hidrógeno se 
visualiza por el ennegrecimiento del medio 
debió a la formación de sulfuro de hierro. 
• Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y 
algunas cepas de Morganella, desaminan la 
lisina, esto produce un ácido alfa-ceto-
carbónico, el cual, con la sal de hierro y bajo la 
influencia del oxigeno forma un color rojizo en la 
superficie del medio. 
Resultados 
1. Descarboxilación de la Lisina: 
- Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta. 
- Prueba negativa: Pico violeta/fondo amarillo 
2. Desaminación de la Lisina: 
- Pico rojizo/fondo amarillo: esto sucede con cepas 
del género Proteus, Providencia y algunas cepas 
de Morganella spp. 
3. Producción de ácido sulfhídrico: 
- Prueba positiva: ennegrecimiento del medio 
(especialmente en el limite del pico y fondo) 
Característica del medio: 
Medio preparado: color violeta 
MO Color en 
pico de 
flauta 
Color en 
base del 
tubo 
Ennegrecimiento 
del medio 
Proteus 
mirabilis 
Rojo Amarillo Negativo 
Salmonella 
typhimuium 
Púrpura Púrpura Positivo 
Salmonella 
enteritidis 
Púrpura Púrpura Positivo 
Providencia 
spp. 
Rojo Amarillo Negativo 
Citrobacter 
freundii 
Púrpura Amarillo Positivo 
Edwardsiella 
spp. 
Rojo Amarillo Negativo 
Morganella 
spp. 
Púrpura Púrpura Positivo 
Klebsiella 
pneumoniae 
Púrpura Púrpura Negativo 
Escherichia 
coli 
Púrpura Púrpura Negativo 
 
MIO medio 
• Medio usado para la identificación de 
Enterobacteriaceae en base a su movilidad, 
actividad de ornitina descarboxilasa y producción 
de indol. 
Formula (en gramos por litro) Instrucciones 
Dextrosa 1.0 Suspender 31g del 
polvo en un litro de 
agua destilada. 
Calentar a ebullición 
hasta completa 
disolución. Distribuir 
en tubos y esterilizar 
15 minutos a 121C. 
Extracto de 
levadura 
3.0 
Peptona 10.0 
Tripteina 10.0 
Clorhidrato de 
L-ornitina 
5.0 
Agar 2.0 
Purpura de 
bromocresol 
0.02 
pH final: 6.5 ± 0.2 
Fundamento 
• Medio de cultivo semisólido, altamente nutritivo 
debido a la presencia de extracto de levadura, 
peptona y tripteina. 
• Además, la tripteina aporta grandes cantidades 
de triptófano, sustrato de la enzima triptofanasa, 
para la realización de la prueba de indol. 
• La dextrosa es el hidrato de carbono 
fermentable, la ornitina es el sustrato para la 
detección de la enzima ornitina descarboxilasa, el 
purpura de bromocresol es el indicador de pH, 
que en medio alcalino es de color purpura y en 
medio acido es amarillo. 
• Por su composición, es posible detectar 3 
reacciones enun mismo tubo: movilidad, 
presencia de ornitina descarboxilasa e indol. 
• La movilidad se demuestra por un 
enturbiamiento del medio o por crecimiento que 
difunde más allá de la línea de inoculación. 
• La reacción positiva a la ornitina está dada por un 
color purpura del medio. Debido a la 
fermentación de la glucosa se reduce el pH 
produciendo una condición acida y originando 
que el indicador de pH purpura de bromocresol 
vire al amarillo. 
• La presencia de acidez otorga condiciones 
óptimas para la actividad de la enzima ornitina 
descarboxilasa, la cual descarboxila la ornitina 
presente. 
• Por descarboxilación, se alcaliniza el medio, con 
el consecuente viraje del indicador hacia el color 
purpura. 
• El indol, es producido a partir del triptófano por 
los MO que contienen la enzima triptofanasa. El 
desarrollo de un color rojo luego de agregar unas 
gotas de reactivo Kovac´s o de Erlich, indica un 
resultado positivo. 
Resultados 
1. Movilidad: 
- Resultado positivo: presencia de turbidez o 
crecimiento más allá de la línea de siembra. 
- Resultado negativo: crecimiento solamente en la 
línea de siembra. 
2. Ornitina descarboxilasa: 
- Resultado positivo: color purpura 
- Resultado negativo: color amarillo. A veces se 
puede desarrollar un color violáceo en la 
superficie del medio. 
3. Prueba de indol: 
- La prueba de indol se realiza una ves que se ha 
determinado la movilidad y la prueba de ornitina. 
- Resultado positivo: color rojo al agregar el 
reactivo revelador. 
- Resultado negativo: el color del reactivo 
revelador permanece incoloro-amarillento. 
Características del medio: 
Medio preparado: purpura transparente a ligeramente 
opalescente. 
SIM medio 
• Es un medio semisólido destinado para verificar 
la movilidad, producción de indol y de sulfuro de 
hidrogeno en un mismo tubo. Es útil para 
diferenciar miembros de la familia 
Enterobacteriaceae. 
Formula (en gramos por litro) Instrucciones 
Tripteina 20.0 Suspender 30g del 
polvo por litro de agua 
destilada. Mezclar 
hasta disolver, 
calentar agitando y 
hervir durante un 
minuto. Distribuir 
unos 4ml en tubos de 
hemolisis y esterilizar 
en autoclave a 121C 
durante 15 minutos. 
Solidificar en posición 
vertical. 
Peptona 6.1 
Sulfato de 
hierro y amonio 
0.2 
Tiosulfato de 
sodio 
0.2 
Agar 3.5 
pH final: 7.3 ± 0.2 
Fundamento 
• El triptófano es un aminoácido constituyente de 
muchas peptonas, y particularmente de la 
tripteina, que puede ser oxidado por algunas 
bacterias para formar indol. 
• En el proceso interviene un conjunto de enzimas 
llamadas triptofanasa. 
• El indol producido se combina con el aldehído del 
reactivo de Kovac´s o de Erlich, para originar un 
compuesto de color rojo. 
• Las cepas móviles pueden apreciarse en este 
medio, por la turbidez que producen alrededor 
de la punción de siembra, mientras que aquellas 
cepas productoras de sulfhídrico se distinguen 
por la formación de un precipitado negro de 
sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre 
que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2. 
Resultados 
• Cepas móviles: producen turbidez del medio, 
que se extiende más allá de la línea de siembra. 
• Cepas inmóviles: el crecimiento se observa 
solamente en la línea de siembra. 
• Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo 
de la línea de siembra o en todo el medio. 
• Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin 
cambio de color. 
• Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo 
luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de 
Erlich. 
• Cepas indol negativas: sin cambio de color. 
Urea 
• Medio utilizado para la identificación de MO, en 
base a la actividad ureásica. Es particularmente 
útil para diferenciar Proteus spp. De otros 
miembros de la familia Enterobacteriaceae. 
Formula (en gramos por litro) Instrucciones 
Urea 20.0 Suspender 3,87g del 
medio deshidratado 
por cada 100ml de 
agua destilada. 
Disolver sin calentar y 
esterilizar por 
filtración. Distribuir en 
tubos pequeños 
estériles, entre 0.5 y 
2ml. 
Fosfato 
monopotásico 
9.1 
Fosfato disódico 9.5 
Extracto de 
levadura 
0.1 
Rojo fenol 0.01 
pH final: 6.8 ± 0.2 
Fundamento 
• Este medio de cultivo, formulado por Rustigian y 
Stuart, presenta ajo contenido en nutrientes y 
alta capacidad buffer. 
• El extracto de levadura es la única fuente de 
carbono, nitrógeno, vitaminas y cofactores, y 
aporta los nutrientes esenciales para el 
desarrollo bacteriano. Las sales de fosfatos 
constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es 
el indicador de pH y la urea es el sustrato de la 
enzima ureasa. 
• Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa 
pueden utilizar el nitrógeno proveniente de la 
urea, la hidrolizan, liberando amoniaco y dióxido 
de carbono. Estos productos metabólicos 
alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador 
rojo de fenol del amarillo al rojo. Su uso, se 
recomienda ara diferenciar Proteus spp. De 
otros géneros. 
Características del medio 
Medio preparado: anaranjado 
 
 
 
 
Urea: 
1. Control no inoculado 
2. Proteus Vulgaris 
3. E. coli 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Simmons Citrato Agar 
• Medio utilizado para la diferenciación de 
enterobacterias, en base a la capacidad de usar 
citrato como única fuente de carbono y energía. 
Formula (en gramos por litro) Instrucciones 
Citrato de sodio 2.0 
Cloruro de sodio 5.0 Suspender 24,2g del 
medio deshidratado 
por litro de agua 
destilada. Dejar 
reposar 5 minutos y 
mezclar calentando a 
ebullición durante 1 o 
2 minutos. Distribuir 
en tubos y esterilizar 
en autoclave a 121C 
durante 15 minutos. 
Enfriar en posición 
inclinada. 
Fosfato 
dipotasico 
1.0 
Fosfato 
monoamonico 
1.0 
Sulfato de 
magnesio 
0.2 
Azul de 
bromotimol 
0.08 
Agar 15.0 
pH final: 6.9 ± 0.2 
 
Fundamento 
• En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico 
es la única fuente de nitrógeno y el citrato de 
sodio es la única fuente de carbono. Ambos 
componentes son necesarios para el desarrollo 
bacteriano. 
• Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el 
magnesio es cofactor enzimático. 
• El cloruro de sodio mantiene el balance 
osmótico, y el azul de bromotimol es el 
indicador de pH, que vira a color azul en medio 
alcalino. 
• El medio de cultivo es diferencial en base a que 
los microorganismos capaces de utilizar citrato 
como única fuente de carbono, usan sales de 
amonio como única fuente de nitrógeno, con la 
consiguiente producción de alcalinidad. 
• El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas 
bacterias poseedoras de citrato permeasa, a 
través del ciclo del ácido tricarboxilico. El 
desdoblamiento del citrato da progresivamente, 
oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia 
de un medio alcalino, da origen a ácidos 
orgánicos que, al ser utilizados como fuentes de 
carbono, producen carbonatos y bicarbonatos 
alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es 
indicativo de la producción de citrato permeasa. 
Resultados 
- Positivo: crecimiento y color azul en el pico, 
alcalinidad. 
- Negativo: el medio permanece de color verde 
debido a que no hay desarrollo bacteriano y no 
hay cambio de color. 
Microorganismo Citrato 
permeasa 
Color del medio 
Klebsiella 
pneumoniae 
Positivo Azul 
S. typhimurium Positivo Azul 
E. coli Negativo Verde 
S. flexneri Negativo Verde 
Características del medio 
Medio preparado: verde. 
 
Producción de ácidos y acetil metil 
carbinol 
a. Prueba del rojo de metilo 
Esta prueba es cuantitativa para la producción de ácidos 
formados por MO que utilizan principalmente la vía de 
fermentación mixta, con producción de ácido láctico, 
fórmico, acético y mantiene el pH por debajo de 4,4, 
luego de una incubación prolongada (48-72 horas) 
contrarrestando el sistema estabilizador del medio MR-
VP. 
Algunos MO que degradan glucosa, tienen la capacidad 
de formar ACETIL METIL CARBINOL (acetoína). 
La acetoína es un subproducto neutro de la vía del 
butilenglicol. 
En la practica se detecta la acetoínautilizando hidróxido 
de potasio al 40%, el cual en presencia de oxígeno 
atmosférico se convierte en Diacetilo y el alfa naftol 
actúa como catalizador para revelar un complejo rojo. 
Materiales: 
- Cultivo de bacterias sembradas en tubo con 
medio MR-VP. 
- Reactivo de rojo de metilo. 
- Reactivos de hidróxido de potasio y alfa naftol. 
Procedimiento y resultados: 
a. Para la prueba de rojo de metilo, añadir en el 
cultivo de 48-72 horas, unas gotas del indicador 
de pH 4,4 (ROJO) y pH 6,0 (AMARILLO). Prueba 
positiva: color rojo estable en la superficie del 
medio. Prueba negativa: incoloro, amarillo o 
naranja. 
b. Para la prueba de Voges-Proskauer, añadir al 
cultivo de 18-24 horas, 0,6ml (12 gotas) de alfa 
naftol al 5% y 0,2ml (4 gotas) de KOH al 40%. 
Agitar el tubo por un minuto y dejarlo en reposo 
por 15 minutos. Es esencial añadir los reactivos 
en el orden señalado. Prueba positiva: color rojo 
dentro de los 15 minutos (colocados en la mitad 
superior o en todo el tubo). Prueba negativa: 
ausencia del color rojo. 
En la figura aparecen 
de izquierda a 
derecha: tubo sin 
inoculación de 
bacterias, resultado 
negativo y resultado 
positivo a la derecha. 
 Producción de ácidos a partir de la glucosa 
 
Prueba de Voges-Proskauer 
En la figura aparecen de izquierda a derecha: tubo sin 
inoculación de bacterias, resultado negativo y resultado 
positivo a la derecha. 
 
Producción del acetil-metilcarbinol o acetoína. 
Complejo rojo con alfa naftol y creatina 
 
Producción de ácidos y acetil metil 
carbinol 
• Permite determinar la capacidad de un MO de 
oxidar o fermentar un determinado hidrato de 
carbono. 
• La fermentación es un proceso metabólico que 
no requiere O2. Se caracteriza por la fosforilación 
inicial del hidrato de carbono y requiere de un 
compuesto orgánico como aceptor final de 
electrones. 
• Los procesos oxidativos son estrictamente 
aeróbicos. El proceso de oxidación directa del 
hidrato de carbono, que se da en el grupo 
fluorescente del genero Pseudomonas, no 
requiere de la fosforilación del azúcar. La glucosa 
se oxida a acido glucónico o 2-cetogluconico y 
posteriormente se fosforila y degrada a acido 
pirúvico. 
• El medio utilizado es un agar semiblando, que 
permite evidenciar movilidad y reducir la difusión 
y dilución de los ácidos permitiendo su detección 
aun en pequeñas cantidades. 
• A partir del cultivo puro de 24h se inoculan con 
asa recta 2 tubos del medio OF. 
• Un tubo se inocula directamente “tubo abierto”. 
El segundo tubo es purgado previamente para 
eliminar el O2 mediante el calentamiento a baño 
de maría durante 15 minutos. Luego se enfría 
bajo canilla sin agitar y se siembra por punción. 
Inmediatamente se cubre con 1cm de parafina o 
vaselina liquida estéril, “tubo sellado”. Ambos 
tubos se incuban a 35°C durante 48h. algunos 
MO requieren hasta 2 semanas de incubación. 
Tipo de 
metabolismo 
“Tubo abierto” “Tubo cerrado” 
Oxidativo Acidez (amarillo)* Neutro (verde) 
Fermentativo Acidez (amarillo) Acidez (amarillo) 
Fermentativo Neutro (verde) Acidez (amarillo) 
Inerte** Neutro (verde) Neutro (verde) 
Interpretación: 
*Como se produce una pequeña cantidad de ácido, 
suele aparecer amarillo solo la superficie del agar. 
**El MO no metaboliza el carbohidrato. 
 
 
Funciones importantes del 
laboratorio de Bacteriología 
1. Examinar y cultivar muestras en busca de MO 
2. Identificar con certeza las especies involucradas 
en aislamientos importantes. 
3. Llevar a cabo las pruebas de susceptibilidad a 
antibióticos en caso de ser indicadas.