TECNOLOGÍAS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDA PARTE 2

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TRANSFERENCIA DE EMBRIONES IN 
VITRO
DEFINICIÓN
• Es una técnica de reproducción asistida que permite desarrollar un
embrión a partir de la unión de un óvulo con un espermatozoide, en
medios especiales de laboratorio que imitan las condiciones
fisiológicas de fecundación.
• Se utiliza en hembras que por distintas causas no pueden dejar
descendencia a través de las técnicas reproductivas convencionales
(Inseminación artificial y/o transferencia de embriones).
¿EN QUE OPORTUNIDADES SE REALIZARÍA?
• Hembras que no responden a tratamientos superovulatorios.
• Hembras que no dan embriones transferibles en programas de
superovulación y transferencia de embriones.
• Hembras con alteraciones anatómicas que impiden una correcta
fecundación o anidación del embrión.
• Hembras terminales por enfermedad o accidente.
• Hembras en primer tercio de gestación
• Hembras pre-púberes.
ETAPAS DE LA FIV
• Recuperación de ovocitos:
• Ovocitos de hembras vivas: OVUM PICK UP (OPU)
• Ovocitos de camal
• Selección de ovocitos
• Maduración de ovocitos (MIV)
• Capacitación de espermatozoides
• Fertilización in vitro propiamente dicha
COLECCIÓN TRANSVAGINAL DE OVOCITOS 
(TVR - OPU)
Allen, 2014
Allen, 2014
SELECCIÓN DE OVOCITOS
Ovocitos con muchas 
capas en el cúmulus
(>4) 
Con 3 ó 4 capas 
compactas Con menos de 3
capas. Ovocito algo
descubierto
Ovocitos desnudos Con cúmulo expandido
Rodríguez, 2013
MADURACION IN VITRO DE OVOCITOS
• La finalidad es simular en el laboratorio las condiciones que se
producen en el folículo antes de la ovulación.
• La maduración del ovocito comprende el reinicio de la meiosis hasta
que el núcleo alcanza el estadío de metafase II. Es importante para a
penetración del espermatozoide y la formación de los pronúcleos.
• Los factores que van a influir sobre el éxito de la MIV serán:
• El origen de los ovocitos: la recuperación de ovocitos que puede
ser en hembras vivas a través de Ovum pick-up o con ovarios
recogidos de camal.
• La técnica de recogida de ovocitos: como la disección de los
folículos, la aspiración del ovocito con jeringa hipodérmica y los
cortes seriados del ovario para liberar los ovocitos.
• La selección de los ovocitos: los criterios de selección de los ovocitos
se basan en aspectos morfológicos como la presencia y tamaño del
cumulus, el diámetro del ovocito, aspecto del vitelo.
• La edad de las hembras y su estado fisiológico y hormonal.
METODOLOGIA DE LA MIV
1. Medios de cultivo: Existe gran variedad de medios de cultivos
comerciales. Estos medios se basan en soluciones salinas más una
fuente de energía. Los más utilizados son el TCM 199, Ham,s F12,
TALP, KRB.
2. Suplementos del medio de cultivo: Los más utilizados son las
hormonas y los sueros. Las hormonas como FSH, LH, Estradiol, con
concentraciones variables. Los sueros son añadidos como fuente de
proteínas y de macromoléculas. Se utiliza el Suero Fetal Bovino.
Puede variar del 10 al 20%.
3. Condiciones de cultivo:
• Temperatura: 38.5 a 39 °C
• pH : de 7.2 a 7.4
• Osmolaridad: 285 a 320 mOsM
• Atmósfera : 5% CO2 
• Duración : 72 horas (varía de acuerdo a la especie)
CAPACITACION DE ESPERMATOZOIDES
• Proceso que se desarrolla en el tracto genital de la hembra y que
prepara al espermatozoide para fecundar al ovocito.
• Se producen una serie de cambios fisiológicos que se manifiestan por
la hiperactivación de la cola y la reacción acrosómica de la cabeza del
espermatozoide
METODOLOGIA
• Eliminación del plasma seminal, para lo cual se realiza un centrifugado
del eyaculado, con pocas revoluciones para no dañar a los
espermatozoides.
• Selección de los espermatozoides más mótiles. Técnicas de Swim-up y
centrifugación en gradientes Percoll, que seleccionan a los
espermatozoides según su densidad.
SWIN - UP
GRADIENTE DE PERCOLL
Rodrigo y col., 2020
CONDICIONES DE CULTIVO
• Medios: Sueros, TALP
• Temperatura: 37 °C
• pH: 7.4
• Tiempo: 45 minutos
• Concentarción de heparina: 100mg/ml
FERTILIZACION IN VITRO
• Medición del volumen en que se encuentran los espermatozoides
• Cálculo de la concentración espermática
FERTILIZACION IN VITRO
• Dilución del semen a una concentración de fertilización de 1.5 millones de 
espermatozoides por ml. (vacunos)
• Reunir los espermatozoides y el o los ovocitos en una gota de un medio específico
• 5 % de CO2
• Temperatura: 38 C
• Tiempo: de 18 a 20 horas
• Denudar los ovocitos fecundados (desprender las células de la granulossa)
• Etapa de CULTIVO, por 6 a 7 días, en que se llevará a cabo la división celular hasta 
el estado de mórula o blastocisto
CULTIVO DE EMBRIONES
Mosquera, 2015
Mosquera, 2015
INYECCIÓN INTRACITOPLASMÁTICA DE 
ESPERMATOZOIDES (ICSI)
INYECCIÓN INTRACITOPLASMÁTICA DE 
ESPERMATOZOIDES (ICSI)
• Consiste en la fecundación de los ovocitos por inyección de un espermatozoide en su
citoplasma.
• Westhusin y colaboradores, en 1984, fueron los primeros en realizar estudios en la
aplicación de esta técnica en bovinos. Ellos reportaron la formación de pronúcleos
masculinos y femeninos después de la inyección de espermatozoides en ovocitos
vacunos madurados in vitro.
• Goto y colaboradores, en 1990 mostraron que ovocitos bovinos, madurados in vitro,
luego que fueron fecundados por ICSI, continuaron su desarrollo normal
(blastocisto), obteniéndose crías normales.
PROTOCOLO ICSI
• Manejo del gameto femenino:
• Los ovocitos que serán microinyectados pueden ser obtenidos de
hembras vivas a través de la técnica de ovum pick-up o
provenientes de matadero.
• Los ovocitos deben ser madurados in vitro por un periodo de 22 a
24 horas antes del proceso de microinyección
• Preparación de los ovocitos:
• Después de la maduración in vitro son colocados en un medio con 1
mg/ml de Hialuronidasa (enzima que modifica la permeabilidad
del tejido conjuntivo) para proceder a retirar el cumulus.
• Luego lavar por lo menos 4 veces con una gota de medio fresco
para eliminar los restos de hialuronidasa
Una vez que los ovocitos
son denudados, se
guardan en la incubadora
antes de la inyección por
un periodo de 1.5 a 2
horas.
Los ovocitos que presenten
el primer corpúsculo polar
son seleccionados para
proceder al ICSI
Corpúsculo polar
Preparación de los espermatozoides del epidídimo y eyaculado 
para la microinyección:
• Las pajillas de semen del eyaculado y epidídimo son descongeladas
en agua a una temperatura de 35 °C por 30 segundos.
• Los espermatozoides osn seleccionados a través de centrifugación a
700 g por 20 minutos.
• Los espermatozoides seleccionados son capacitados a través de
incubación con heparina (200 µg/ml) durante 15 minutos antes de que
sean utilizados en el ICSI.
Microinyección:
• El ovocito es fijado horizontalmente en la pipeta usando leve succión.
• El corpúsculo polar debe ser orientado en la parte posterior del ovocito
• La pipeta de inyección que contiene un único espermatozoide es transferida de la
gota de gametos masculino a la gota que contiene el ovocito.
• La pipeta de inyección es empujada firmemente hasta perforar el ovocito (A)
• Para garantizar que la membrana plasmática esté rota y que el espermatozoide sea
depositado correctamente, una pequeña cantidad del citoplasma del ovocito es
aspirada a la pipeta para indicar que la membrana se rompió. (B)
• El citoplasma aspirado debe ser empujado suavemente dentro del ovocito en
conjunto con el espermatozoide. (C)
• La pipeta de inyección es retirada del ovocito. (D)
• La perforación de la membrana plasmática cierra lentamente ( 1 – 5 minutos) y
vuelve a su configuración original.
• El procedimiento sigue los mismos pasos que la FIV
• Se transfiere uno o dos embriones en el útero a través del cuello
uterino usando un catéter delgado
• Esta técnica tiene una tasa de fecundación de 75%
SEMEN SEXADO
CLONACIÓN
CLONACIÓN
• Se denomina clon a una serie de organismos idénticos genéticamenteque provienen de un mismo ascendiente.
• Clonación consiste en crear seres con la misma dotación genética
• Cuando se habla de clones, se habla de muchos individuos
genéticamente iguales resultado de una reproducción no sexual.
CLONACIÓN ANIMAL
• El principal objetivo de esta técnica es económico:
• Mejora la productividad y calidad de la ganadería
• Producción de proteínas de interés médico mediante la explotación 
de animales transgénicos.
CLONACIÓN ANIMAL
• La clonación animal es aceptada con optimismo por muchos sectores a los que
beneficiaría:
• Para el criador: ganado idéntico de alto rendimiento
• Para el industrial: fabricación de productos más homogéneos
• Para el consumidor: compra de productos de calidad garantizada
• El sector médico-farmacéutico será el más beneficiado: producción de proteínas,
utilización de animales clonados como donantes de órganos, eliminación del riesgo de
rechazo por productos derivados de la sangre humana.
CLONACIÓN ANIMAL
• La clonación masiva aún está muy lejos y, por lo tanto, su rentabilidad también.
• Su aplicación masiva puede provocar una reducción de la diversidad genética y una
mayor probabilidad de epidemias en rebaños de clones.
• Estos dos últimos inconvenientes podrían llegar a tener solución reduciendo el
tamaño de las poblaciones o preservando la biodiversidad con clones congelados y
almacenados.
Novoa, 2015
PRIMEROS ANIMALES CLONADOS
TIPOS DE CLONACIÓN
En función de lo que se quiera clonar y para qué fin esté destinado existen distintos tipos
de clonación:
• Clonación molecular: mediante este tipo de clonación se consegue hacer copias de
genes o fragmentos de ADN idénticas para investigación genética.
• Clonación celular: en este tipo de clonación se obtiene células genéticamente idénticas
también con fines en investigación médica.
• Clonación terapéutica: la clonación terapéutica sería una variante de la clonación celular
con la que se consigue reproducir órganos o tejidos mediante la clonación de sus células.
Este tipo de clonación es con fines médicos, se clonan órganos o tejidos a partir de los
del paciente para evitar rechazos en trasplantes.
TIPOS DE CLONACIÓN
• Clonación reproductiva: mediante esta se consigue clonar dos individuos idénticos
genéticamente. La clonación reproductiva más conocida es la de la famosa oveja
Dolly.
• Clonación natural: En la propia naturaleza se producen clonaciones de manera
constante como ocurre en bacterias o en individuos gemelos.
Animales clonados
2017 Monos (Zhong
Zhong y Hua 
Hua)
Academia de Ciencias China en Shanghái Primeros monos clonados a partir de células adultas
TRANSGÉNESIS
La transgénesis es el proceso de introducir un
gen (denominado transgén) de un organismo en
el genoma de otro organismo. El objetivo es que
el organismo transgénico resultante exprese el
gen y exhiba alguna propiedad o característica
nueva. Esto es posible por el hecho de que el
código genético es universal para todos los
seres vivos.