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2 3 Carta al lector ÁLVARO J. ABISAMBRA ABISMBRA Gerente General F inalizado el 2003 vemos que el momento por el que atraviesa el sector agropecuario colombiano es bueno y todavía promete muchas cosas. El desarrollo de la política de Gobierno para el sector, denominada Manejo Social del Campo, ha permitido avanzar en varios aspectos, entre ellos los relacionados con las negociaciones internacionales para fortalecer nuestro comercio de bienes y servicios agropecuarios. A pasos agigantados Colombia ha trabajado con los Estados Unidos en las negociaciones bilaterales que nos permitirán ingresar a ese mercado con nuevos productos. En el caso de la carne de bovino, la leche y los derivados lácteos, a partir del primer año de operación del Tratado de Libre Comercio, TLC, se ha solicitado la adopción del principio de regio- nalización de las zonas libres de aftosa con vacunación, así como de otras enfermedades, de manera que mediante la fijación de una cuota significativa con incremento gradual y sin aranceles a lo largo del período de transición hasta su liberación total, Colombia pueda comenzar a efectuar sus exportaciones de carne y leche al mercado norteamericano, previo el diligenciamiento de los protocolos sanita- rios y la acreditación de los frigoríficos y las plantas de pulverización de Colombia por parte de las autoridades estadounidenses. En materia agrícola el objetivo es lograr la entrada a Estados Unidos de nuevas frutas y hortalizas colombianas y el ICA con el apoyo del Centro de Excelencia Fitosanitaria, CEF, avanza en los análisis de riesgo de plagas que permitirán muy pronto concretar las exportaciones de tomate, pimentón, papaya, maracuyá, tomate de árbol, granadilla y curuba. Actualmente ya se está exportando uchuva a ese país aplicando el tratamiento en frío, con lo que se garantiza la sanidad del producto. En relación con otros mercados, las negociaciones también son importantes; como el trabajo que se ha realizado en esta materia con Chile, República Checa, Taiwán y República del Líbano, países que han mostrado interés en nuestra producción bovina. Este panorama nos impulsa una vez más a mantener y presentarles trimestralmente una serie de informaciones de gran ayuda en el acontecer sanitario agropecuario, que redundarán en la calidad de los animales, vege- tales y subproductos de repercusión en la competitividad nacional e internacional. Este es un año de avances significativos en materia de bio- seguridad, el país ingresó a la era de los organismos modificados genéticamente mediante la aprobación de la siembra comercial de algodón Bollgard resistente a insectos lepidópteros, en un área de 6.850 hectáreas en el departamento de Córdoba y por otra parte la realización de diferentes actividades con OMG en arroz, yuca, brachiaria, stylozantes, café y caña de azúcar. En el área de bioseguridad pecuaria, se han analizado tres soli- citudes para comercializar en el país productos modificados gené- ticamente, una de las cuales corresponde a la producción de torta de algodón con semilla de algodón Bollgard para consumo animal, solicitud que obtuvo aprobación. Dentro de este grupo se continúa con el estudio de la respuesta inmunológica de una vacuna de ADN contra el virus de la fiebre aftosa que adelanta la Corporación de Investigaciones Biológicas de Medellín y se canceló, luego de varias observaciones, el desarrollo de dos estrategias para el control integrado de la garrapata. En el tema de la bioteconología y la bioseguridad, el com- promiso del ICA y de todos los actores que hacen parte de los Consejos Técnicos Nacionales de Bioseguridad es serio, basado en el estudio científico caso por caso, de acuerdo con las condiciones propias de las zona donde se busca utilizar la tecnología. De otra parte, es importante resaltar el trabajo que el ICA viene realizando en lo relacionado con la certificación de semillas, acciones de suprema importancia para la producción nacional, mediante las cuales en el año 2003 se aprobaron e inscribieron en el registro Nacional de Cultivadores comerciales las siguientes variedades: arroz Fedearroz del sistema Clearfield para la subregión del Valle Geográfico del Río Magdalena, con resistencia a herbicida para el control del arroz rojo; híbrido de maíz Turipana H-112 para la subregión Caribe húmedo, variedad con alto contenido de proteínas que representa un incremento y productividad de las industrias porcícola y avícola, y dos híbridos de maíz de grano blanco y tres de grano amarillo con rendimien- tos entre 5 mil y 9 mil kilogramos por ha, los cuales podrán ser usados en los departamentos de Tolima, Huila, Córdoba, Sucre y Llanos Orientales. Así mismo, en Colombia desde el año 2002 se están utili- zando, para la producción agropecuaria, insumos agrícolas genéri- cos. Hasta el momento en el país hay aprobados 16 registros de este tipo de productos, entre funguicidas, insecticidas y herbicidas, y están en estudio 20 más. Con esto, el gobierno busca ofrecer a los productores nuevas alternativas que cumplan los estándares de calidad para mejorar sus ingresos de producción. En esta ocasión presentamos en nuestra publicación temas que tienen que ver con: Las políticas de seguimiento y evaluación de proyectos; Diagnóstico y estrategias para la gestión ambiental en el ICA; en la parte agrícola, Renovación de la caficultura en Caquetá; Detección del mal de Panamá en la variedad de banano Gross Michel; La caracterización molecular y análisis polimórfico de aislamiento de R. solani en papa; Plan de prevención y contingencia de la cochinilla rosada en Colombia. Referente al área pecuaria: Encefalomiocarditis viral porcina en granjas intensivas de Colom- bia; Estudios de Newcastle en algunos municipios de Colombia; Importancia de la neosporosis en el diagnóstico integral del aborto bovino; Los modelos silvopastoriles en la producción ganadera; y Muerte súbita de los bovinos en la Orinoquia colombiana. Como se puede apreciar, el temario es bastante amplio y con él se pretende ofrecer conocimiento como parte fundamental del desarrollo económico y social del campo colombiano. 4 5 Contenido 5 PLANEACIÓN • Políticas de seguimiento y evaluación de proyectos en el ICA 7 AGRICULTURA HACIA EL FUTURO • Detección del mal de Panamá (Fusarium oxysporum f. sp. cubense), en la variedad de banano Gros Michel: Estudio exploratorio en el suroeste antioqueño • Caracterización molecular y análisis polimórfico de aislamientos de Rhizoctonia solani Kühn, provenientes de cultivos de papa en Cundinamarca y Nariño • Plan de prevención y contingencia contra la Cochinilla Rosada (Maconellicoccus hirsutus Green), en Colombia 27 DESARROLLO Y PERSPECTIVAS DE LA PRODUCCIÓN PECUARIA • Encefalomiocarditis viral porcina en granjas intensivas de Colombia • Estudio histopatológico y serológico de la enfermedad de Newcastle en los municipios de Villa del Rosario, Los Patios y San José de Cúcuta, Norte de Santander • Importancia de la neosporosis, en el diagnóstico integral del aborto bovino 41 GESTIÓN INTEGRAL • Los modelos silvopastoriles como una alternativa en la producción ganadera • Diagnóstico y estrategias para la gestión ambiental en el Instituto Colombiano Agropecuario, ICA 52 CAMPO DE OPINIÓN • Muerte súbita de los bovinos en la Orinoquía colombiana • Renovación de la caficultura en el Caquetá: Un reto para el presente 4 5 E n el ICA estas políticas tienen como fin orientar las labores de seguimiento y evaluación de los proyectos que se ejecutan en la entidad, para buscar tres objetivos fundamentales: a) Proporcionar un registro periódico acerca del avance de los proyectos, de acuerdo con los objetivos fijados b) Establecer tanto en la etapa de ejecución como al finalizar los proyectos, la eficacia, eficiencia, economía, equidad y sostenibilidad con que fueron logrados los objetivos de los mismos. c) Determinar las causas de los desvíos y tomar las deci- sionescorrespondientes. El logro de los anteriores objetivos se fundamenta en los siguientes criterios: • Los objetivos son el referente básico para llevar a cabo el seguimiento y la evaluación de los proyectos. • El seguimiento y la evaluación sobre la marcha de los proyectos constituyen los componentes básicos del aprendizaje y del mejoramiento organizacional continuo y efectivo, en la medida en que orientan la acción hacia el logro de los objetivos establecidos y disminuyen la incertidumbre producida por factores de riesgo endó- genos y exógenos. • La labor de seguimiento es adelantada fundamental- mente por los responsables de los proyectos, en los diferentes niveles jerárquicos de la institución, debido a que hace parte de la función gerencial de dicha figura programática. • El Instituto garantizará la participación de los diferentes actores intervinientes en los proyectos, en las labores de seguimiento y evaluación, de forma tal que se dé cumplimiento a los principios de participación y veeduría ciudadanas. • La continuidad o terminación definitiva de los proyec- tos deberá fundamentarse en el resultado de la eva- luación de los mismos, en términos de los principios que rigen la administración pública en el país. Las estrategias que se seguirán son básicamente las siguientes: • Fortalecimiento de las labores de seguimiento y evaluación en el Instituto, de conformidad con lo establecido en el Sistema Nacional de Evaluación de Resultados de la Gestión Pública, SINERGIA. • Fortalecimiento de las labores de seguimiento y eva- luación en el Instituto, de acuerdo con el funciona- miento de los diferentes eslabones que conforman el Subproceso de Planeación, para avanzar en términos de la eficiencia en la gestión de la entidad. • Coparticipación en las labores de seguimiento y evaluación, al interior de la entidad, de líderes de los proyectos, ejecutores de los mismos, del responsable del proceso misional, administrativo y financiero o de autoridad correspondiente y de la Oficina Asesora de Planeación, de forma tal que se disponga de la información y el conocimiento necesarios para la toma de decisiones en diferentes ámbitos, según las responsabilidades propias de cada uno de ellos sobre el particular. • Empoderamiento de los beneficiarios de los proyec- tos, a través de su participación en el seguimiento y la evaluación de los mismos, con miras a determinar el nivel de respuesta a sus demandas, la satisfacción POLÍTICAS DE SEGUIMIENTO Y EVALUACIÓN DE PROYECTOS EN EL ICA * Juan Carlos Castañeda Camacho ** Melba Hoyos Bernal * Coordinador Grupo Seguimiento y Evaluación. E-mail: seguimiento@ica.gov.co ** Coordinadora Grupo Políticas y Desarrollo Institucional. E-mail: planeación@ica.gov.co 6 7 con los servicios brindados por el Instituto y la eficiencia en el gasto. El seguimiento y evaluación de los proyectos tiene como instrumentos los siguientes: Reuniones del Comité de Proyecto El comité de proyecto es un órgano que debe operar, durante todo el ciclo del mismo, en las zonas en donde se ubican los núcleos productivos correspondientes. En los ámbitos del seguimiento y la evaluación le compete cono- cer, analizar y aprobar los informes correspondientes. Informes de Seguimiento de Proyectos Los informes de seguimiento reportan el avance tri- mestral de los proyectos en ejecución, en términos del cumplimiento de las metas fijadas, tomando como fundamento la validez de la estrategia y definiendo los factores o variables endógenas y exógenas que inci- dieron en el resultado. Cuando es del caso, señalan las medidas a tomar para reorientar las estrategias o las actividades. Informes de Evaluación Sobre la Marcha y de Evaluación Final de Proyectos Los informes de evaluación sobre la marcha y los de evaluación final de resultados dan a conocer en forma sistemática y objetiva la eficiencia, eficacia, economía, equidad y sostenibilidad alcanzadas en el logro de los objetivos de los proyectos. Por tanto, tienen la misma finalidad y características, pero comprenden períodos de tiempo diferentes. 6 7 Agricultura hacia el futuro La tecnología hecha realidad Detección del mal de Panamá (Fusarium oxysporum f. sp. cubense), en la variedad de banano Gros Michel: Estudio exploratorio en el suroeste antioqueño Caracterización molecular y análisis polimórfico de aislamientos de Rhizoctonia solani Kühn, provenientes de cultivos de papa en Cundinamarca y Nariño Plan de prevención y contingencia contra la Cochinilla Rosada (Maconellicoccus hirsutus Green), en Colombia 8 9 Detección del mal de Panamá (Fusarium oxysporum f. sp. cubense), en la variedad de banano Gros Michel: Estudio exploratorio en el suroeste antioqueño Mónica María Márquez Sánchez1 INTRODUCCIÓN E l área agrícola del suroeste antioqueño ha presentado en los últimos años cambios en las especies cultivadas, observándose, por ejemplo, incremento en áreas sembradas en banano variedad Gros Michel o “coco”, debido a que es una fruta que tiene mejores perspectivas comerciales internas respecto del banano que se produce en la región de Urabá. El mal de Panamá, también llamado marchitamiento por Fusarium, enfermedad causada por el hongo (Fusarium oxysporum f. sp. cubense), es considerada una de las enfermedades más limitantes del banano, especialmente de las variedades del grupo Gros Michel. El hongo causante tiene estructuras de supervivencia denominadas clamidosporas, que le permiten permanecer viable en el suelo por más de 20 años. Posee cuatro razas patogénicas, de las cuales la raza 1 es patogénica a la variedad Gros Michel. Esta raza obligó al cambio de esta variedad en las principales zonas productoras del país, predominando en la actualidad la variedad Cavendish. En el suroeste antioqueño, áreas relativamente nuevas en la producción de banano, se ha fomentado la variedad Gros Michel y debido a la rapidez con la que están creciendo las áreas de producción y a la susceptibilidad de esta variedad a la raza 1 del mal de Panamá, se hizo necesario realizar un estudio de tipo exploratorio que arrojara información preliminar sobre la presencia de esta enfermedad en esa región, con el fin de alertar a los agricultores de banano sobre las características, prevención y manejo de este problema fitopatológico. ANTECEDENTES El mal de Panamá se presenta en todas las regiones productoras de banano en el mundo excepto Papúa, Nueva Guinea, las islas del Pacífico sur y algu- nos países del Mediterráneo, constituyéndose en una enfermedad de gran importancia dentro del cultivo. El hongo es un deuteromiceto perteneciente al orden moniliales, que presenta características como presencia de monofialides, microconidias 1 I.A., Fitopatóloga, Sanidad Vegetal, Oficina ICA Medellín. Correo electrónico: icasv@epm.net.co El mal de Panamá, también llamado marchitamiento por Fusarium, enfermedad causada por el hongo (Fusarium oxysporum f. sp. cubense), es considerada una de las enfermedades más limitantes del banano 8 9 abundantes, individuales, no en cadenas, producidas sobre falsas cabezas o monofialides cortas, macroconi- dias abundantes y presencia de clamidosporas (Nelson y col., 1983). El patógeno (Fusarium oxysporum f. sp. cubense) presenta cuatro razas definidas como grupos simples de aislamientos que son virulentos sobre un mismo culti- var diferencial. La raza 1 es patogénica en los cultivares Gros Michel (AAA), manzano y prata(AAB), lady finger, silk (AAB) y pisang awak. La raza 2 en bananos de coc- ción Bluggoe (ABB), la raza 3 en especies de heliconias y la raza 4 en el cultivar Cavendish y todos los cultivares susceptibles a la raza 1 y 2 (Ploetz y col., 1990). La raza 4 fue reconocida como una raza distinta en 1977 y ha sido confirmada en cuatro áreas subtropicales del hemisferio oriental: Australia (New South Wales y Queensland), Islas Canarias (Tenerife), Suráfrica (Natal y Transval) yTaiwán, en el trópico se discute todavía su presencia en Filipinas (Ploetz y col., 1990). Los síntomas externos clásicos de la enfermedad aparecen inicialmente en forma de un amarillamiento en las orillas de las hojas viejas (Moore, 1995). Este amarillamiento aumenta y tiende a ser uniforme y pro- nunciado en la hoja (Zaag de Beer y col., 2001). La hoja colapsa gradualmente en el pecíolo, siendo aún funcional y cuando a varias hojas les ocurre lo mismo, estas forman una camisa de hojas muertas alrededor del seudotallo, presentándose el síntoma típico conocido como “ruana” o “enruanamiento”. En algunos cultivares, las hojas de las plantas afectadas permanecen predominantemente verdes hasta que los pecíolos se doblan y las hojas colap- san. También se pueden presentar fisuras longitudinales en el seudotallo (Moore, 1995). Los síntomas internos que se observan en el seu- dotallo, se pueden ver claramente a través de un corte transversal como áreas café o púrpura, que son llamados bolsillos gomosos. En el cormo se observan parches y hebras amarillas, que parecen fibras de pulpa de mango (Zaag de Beer y col., 2001). El manejo de la enfermedad se basa en la utili- zación de cultivares resistentes, prácticas preventivas y erradicación de plantas afectadas, pues el control químico no ha presentado resultados satisfactorios (Moore, 1995). La erradicación de las plantas afectadas se hace uti- lizando un herbicida traslocable inyectado al seudotallo, para disminuir la diseminación de la enfermedad. La prevención de la enfermedad se logra con la desinfesta- ción de las herramientas de trabajo entre planta y planta, utilizando material de propagación sano y realizando la desinfestación del calzado luego de ingresar a un lote enfermo (Moore, 1995). OBJETIVOS Y LOCALIZACIÓN El objetivo del presente trabajo fue la realización de un estudio de tipo exploratorio que arrojara información preliminar sobre la presencia de esta enfermedad en el suroeste antioqueño, con el fin de alertar a los cultiva- dores de banano sobre las características, prevención y manejo de este problema fitopatológico. Con este propósito se realizó un muestreo, en el primer semestre de 2003, en 10 municipios del suroeste antioqueño: Andes, Jardín, Jericó, Betania, Hispania, Venecia, Fredonia, Concordia, Pueblo Rico y Titiribí. En estos municipios se hicieron visitas de inspección a fincas que tuvieran cultivo de banano. METODOLOGÍA Con el fin de obtener rápida información relacionada con la presencia del mal de Panamá en el suroeste antioqueño y sobre la distribución del problema, se decidió seguir una metodología tipo “estudio exploratorio”, consistente en lo siguiente: En cada municipio se hicieron inspecciones directas en predios productores de banano, en los que se analizó la presencia o ausencia de sintomatología externa. En aquellas plantas con presencia de sintomatología externa, se pro- cedió a realizar un muestreo destructivo de la planta para analizar internamente el estado del seudotallo y cormo, con el fin de observar las lesiones típicas de la enfermedad. Posterior al diagnóstico basado en la sintomatología interna, se recolectaron muestras de cormo de las plantas con afección, las cuales fueron sembradas en medio de cultivo PDAA a 25°C por 8 días, después de ser sometidas a lavado con solución de hipoclorito de sodio al 1% por un minuto. Luego de la incubación, se observaron al microsco- pio las características del hongo para identificarlo, de acuerdo con las claves de Nelson y col., (1983). Adicionalmente, se enviaron muestras a un laboratorio de diagnóstico agrícola, como contramuestras del diagnóstico realizado. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los resultados de todos los lugares o predios muestrea- dos, se presentan en la siguiente tabla: 10 11 Núm. muestra MUNICIPIO VEREDA M.PANAMÁ positiva (pos)/ negativa(neg) 1 Pueblorrico Patudal Pos 2* Pueblorrico Lourdes Pos 3 Andes San Bartolo Neg 4 Andes San Bartolo Neg 5 Andes San Bartolo Neg 6 Andes El Tapado Neg 7 Andes San Bartolo Pos 8 Andes San Bartolo Pos 9 Andes San Bartolo Pos 10 Andes San Bartolo Neg 11 Concordia Santa Rita Arriba Pos 12 Concordia Las Partidas Pos 13 Hispania El Guamo Neg 14 Hispania La Florida Neg 15 Jericó La Montañita Neg 16 Jericó Estrella Vieja Neg 17 Jericó Estrella Vieja Neg 18 Jericó Buenavista Pos 19 Fredonia El Calvario Pos 20 Fredonia La Meseta Pos 21 Fredonia El Calvario Neg 22 Fredonia Z Urbana Pos 23 Fredonia Murrapal Pos 24 Fredonia El Edén Pos 25 Titiribí Los Micos Pos 26 Titiribí Corcovado Neg 27 Titiribí Corcovado Neg 28 Titiribí Corcovado Neg 29 Titiribí Corcovado Neg 30 Titiribí Corcovado Pos 31 Betania El tablazo Neg 32 Betania Las Mercedes Neg 33 Betania Los Aguacates neg 34 Betania Las Mercedes neg 35 Betania Las Mercedes neg 36 Betania Las Mercedes neg 37 Betania La Fé neg 38 Jardín Serranias neg 39 Jardín Z Urbana neg 40 Jardín Serranias neg 41 Venecia La Amalia pos 42 Venecia El Cerro pos 43 Venecia Peñas Azules pos 44 Venecia El Cerro neg * Variedad banano comino. Se observó presencia de la enfermedad en cinco de los 10 municipios muestreados: Andes, Fredonia, Vene- cia, Titiribí, Concordia, Jericó y Pueblo Rico, siendo este un dato que preocupa debido al gran movimiento que tiene el material de propagación (colinos) dentro de esta región (Figura 1). Fueron positivos 18 de los 44 sitios muestreados, lo que indica una presencia importante de la enfermedad en la zona del suroeste antioqueño (Figura 2). Las muestras positivas en campo, al ser sembradas en medio de cultivo, produjeron colonias con las carac- terísticas típicas del hongo, dentro de las que sobresa- len: colonias con coloraciones entre blanco y púrpura, presencia de monofialides, microconidias abundantes, individuales no en cadenas, producidas sobre falsas cabe- zas o monofialides cortas, macroconidias abundantes y presencia de clamidosporas. FIGURA 1. Síntomas externos ocasionados por el mal de Panamá. Nótese el amarillamiento pronunciado y uniforme que avanza desde las hojas más viejas hacia las más jóvenes. 10 11 CONCLUSIONES De acuerdo con el muestreo realizado, la enfermedad denominada mal de Panamá se encuentra en la región del suroeste antioqueño, siendo su presencia un riesgo para esta zona, en la que se observa un crecimiento de las áreas cultivadas con esta variedad. Se destaca que aquellos agricultores que tienen cul- tivos pequeños desconocen la enfermedad y confunden la sintomatología con problemas nutricionales, mientras que en plantaciones grandes, de manejo altamente tec- nificado, se conoce la enfermedad y se sigue un plan de manejo adecuado. En algunos lugares las deficiencias severas nutriciona- les pueden llegarse a confundir con este tipo de patolo- gía, por esto es necesario por parte del agricultor, como mínimo, la observación de la sintomatología interna. BIBLIOGRAFÍA ZAAG DE BEER et. al. False panama disorder on banana. Enfer- medades de Musa: Hoja divulgativa No. 9 del INIBAP. mayo de 2001. 4p. MOORE, N.Y. et. al. Marchitamiento del banano ocasionado por Fusarium. Hoja divulgativa N. 5. INIBAP. 4p. NELSON, P, TOUSSOUN,T and MARASAS, W. Fusarium species: an illustrated manual for identification. The Pennsylvania State University Press. 1983, 191p. PLOETZ, Randy. Fusarium wilt of banana. APS Press. 1990. 139p. FIGURA 2. Síntomas internos ocasionados por el mal de Panamá en el seudotallo, nótense las áreas manchadas de colores café o púrpura, llamadas “bolsillos gomosos”. Estas manchas avanzan desde la parte más externa hacia la más interna del seudotallo. 12 13 Caracterización molecular y análisis polimórfico de aislamientos de Rhizoctonia solani Kühn, provenientes de cultivos de papa en Cundinamarca y Nariño 1Nancy Ariza Castiblanco, 2Jorge Evelio Ángel Díaz, 3Omar Guerrero Guerrero INTRODUCCIÓN La coevolución de las plantas y los microorganismos asociados a ellas ha sido alteradapor agroecosistemas desarrollados por el hombre, las técnicas de monocultivo, mejoramiento genético de plantas, empleo intensivo de plaguicidas, entre otros, y han generado una selección de ciertos microorganismos. Esta selección ha conducido al desarrollo de patógenos más agresivos que resisten a los plaguicidas. Esta variación genética ha cambiado las expectativas de programas de mejoramiento de plantas y de control químico. Un ejemplo claro se presenta con Rhizoctonia solani Kühn, pues es una especie dividida en grupos de anastomosis que afectan a un gran número de plantas de importancia económica, que incluye el cultivo de la papa. El hongo R. solani kühn es causante de grandes pèrdidas económicas en el cultivo de papa, puesto que afecta aproximada- mente al 20% de la producción total de semilla, siendo necesario desarrollar un método de diagnòstico sensible y específico para su detección en el suelo y estudiar su variabilidad genética, debido a la multiplicidad de expresión de síntomas en tubérculos de papa; con este propósito se realizó un análisis de polimorfismo genético del hongo, mediante la técnica de marcadores moleculares RAPD (Ramdonly amplified polymorphic DNA = Polimorfismos de DNA amplificados al azar). Este trabajo aporta algunas de las bases para realizar nuevas investigaciones relacionadas con el hongo, como estudios de fitome- 1 B. Sc. Universidad Incca de Colombia, Investigador Laboratorio de Análisis Molecular ICA Tibaitatá. Bogotá. Colombia E- mail: Nancy.ariza@terra.com.co 2 B. Sc, .MSc., PhD. Director Laboratorio de Análisis Molecular ICA Tibaitatá. E- mail: jorgecol@hotmail.com., angeldiazjorgecol@yahoo.com 3 I.A., MSc Fitopatología Laboratorio de Diagnóstico Fitosanitario. ICA. Tibaitatá. Bogotá. Colombia E-mail: omarguer@hotmail.com Arbusto de papa y tubéculo infestado con Rhizoctonia solani Kühn. FIGURA 1. Síntesis de la metodología realizada para determinar la variabilidad genética de Rhizoctonia solani 12 13 joramiento para evaluar resistencia natural de ciertos cul- tivos que son susceptibles a la infección por el patógeno, también para evaluar resistencia a fungicidas de variantes genéticas del hongo; este aspecto es de particular interés en temas de conservación de suelo, agua, así como medio ambiente y disminución de costos de producción de los cultivos. Además, este estudio permitirá conocer aspec- tos de biodiversidad y variabilidad genética existentes en este microorganismo, de los cuales no existen registros en Colombia. OBJETIVO GENERAL Caracterizar y analizar la variabilidad genética existente entre aislamientos de R. solani provenientes de cultivos de papa en los departamentos de Cundinamarca y Nariño, utilizando la técnica de marcadores moleculares RAPD y establecer un banco de cepas del microorganismo. METODOLOGÍA La metodología para el desarrollo del presente estudio se resume en el siguiente diagrama: OBTENCIÓN DEL MATERIAL El hongo Rhizoctonia solani se obtuvo a partir de muestras de papa provenientes de los departamentos de Cundina- marca y Nariño. En total se contó con once aislamientos para Cundinamarca y cinco para Nariño, registrados en la Tabla 1. Tabla 1. Registro de los aislamientos provenientes de los departamentos de Cundinamarca y Nariño. Referencia de aislamientos Variedad Procedencia Rhs C 01 Diacol Monserrate San Jorge Rhs C 02 Pastusa Chocontá Rhs C 03 D. Capiro La Calera Rhs C 04 Desconocido Zipaquirá Rhs C 05 Pastusa Chocontá Rhs C 06 Pastusa Usme Rhs C 07 ICA Única Cogüa Rhs C 08 ICA Puracé Zipaquirá Rhs C 09 Desconocido Cogüa Rhs C 10 ICA Única Cogüa Rhs C 11 ICA Única Cogüa Rhs N 01 Diacol Capiro Ipiales Rhs N 02 Esperanza “Ecuatoriana” Ipiales Rhs N 03 Diacol Capiro Ipiales Rhs N 04 Diacol Capiro Pupiales Rhs N 05 Diacol Capiro Pupiales RECEPCIÓN DE LAS MUESTRAS El hongo se obtuvo a partir de tubérculos de papa con síntomas de la enfermedad, enviadas por funcionarios del ICA de las seccionales de Cundinamarca y Nariño. AISLAMIENTO DEL PATÓGENO Los tubérculos de papa fueron lavados con agua corriente en forma abundante, para eliminar residuos de suelo de la epidermis, secados y llevados a la cámara de flujo laminar. Los esclerocios se desprendieron cuida- dosamente del tubérculo y se colocaron en hipoclorito de sodio al 5.25% por un periodo de 5 a 7 minutos, finalizado este periodo se transfirieron a un beaker con agua desionizada estéril por un tiempo de 10 minutos. Pasado este periodo se secaron y se colocaron en cajas 14 15 de Petri con medio de cultivo papa, dextrosa, agar (PDA) pH 4.4; y se incubó a 28° C, durante 5 días. ANÁLISIS MICROSCÓPICO Después de 5 días de incubación, las cajas de Petri con crecimiento micelial, se llevaron a la cámara de flujo lami- nar donde se realizó un montaje en portaobjetos, en lactofenol con azul de algodón, Lacto-fucsina o safranina Los montajes se analizaron en objetivo de 40 y 100X, observándose las características morfológicas descritas para el hongo. CULTIVO DEL HONGO Cultivo en medio sólido El esclerocio tratado con hipoclorito se colocó en el centro de la caja de Petri que contenía medio sólido PDA acidificado; incubado durante 5 días a 28°C y mantenido mediante pases, tomando un cuadro de hongo con agar de aproximadamente 0.5 cm x 0.5 cm y transfiriéndolo a una caja que contenía medio fresco. Cultivo en medio líquido Con el fin de obtener una cantidad de biomasa necesa- ria para la extracción de DNA, el micelio del hongo se colocó a crecer en un erlenmeyer con medio líquido papa zanahoria (PZ) y se incubó con agitación constante a 130 rpm y 28°C, durante 5 a 6 días. EXTRACCIÓN DE DNA Se probaron varios protocolos de extracción con el fin de obtener un DNA de buena calidad y concentración, el que mostró los mejores resultados fue el reportado por Towner (2001). REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Se utilizaron cuatro oligonucleótidos para amplificar regio- nes ITS (Espaciadores de Transcripción Interna) de rDNA nuclear incluyendo el gen que codifica para la subunidad 5.8S del ribosoma; los oligonucleótidos fueron sintetiza- dos por IDT (Integrated DNA Technologies) Corpogen, Bogotá. Colombia (Tabla 2). TABLA 2. Secuencias nucleotídicas utilizadas para la amplificación de regiones ITS(s) Oligonucleotido Secuencia ITS 1 5´-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3´ ITS 2 5´-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3´ ITS 3 5´-GCATCGATGAAGAACGCAGC-3´ ITS 4 5´-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3´ Las parejas de iniciadores son las siguientes: ITS 1 con ITS 2 para amplificar la región ITS A ITS 3 con ITS 4 para amplificar la región ITS B ITS 1 con ITS 4 para amplificar las regiones ITS(s) completas más el gen 5.8S (Figura 3). FIGURA 2. Papas infectadas que muestran síntomas típicos de Rhizoctonia solani. Se observan grietas en la papa izquierda y esclerocios en la derecha. FIGURA 3. Diagrama de ubicación de las regiones ITS. La reacción de PCR fue llevada a cabo en tubos Eppendorf de 200 µl de capacidad ,con un volumen final de 50µl que contenía: 5 µl de Buffer de polimerasa (10X), 1µl de mezcla de dNTP´s (10mM), 1.5µl de MgCl (50mM), 0.25µl de Taq DNA polimerasa recombinante (5u/µl), 33.25 µl de agua destilada, desionizada y esteril, 14 15 4 µl (10 µlM) de cada oligonucleótido y 1µl de la solución de extracción de DNA. La reacción se llevó a cabo en un termociclador (PTC 0200 DNA Engine), utilizando el siguiente programa: 94°C por 2 minutos, para la denatura- ción inicial, seguido por 30 ciclos de un minuto a 94°C, un minuto a 57 °C y un minuto a 72°C, y una elongación final a 72°C durante 10 minutos. Los productos amplificados fueron analizados por electroforesis en gel de agarosa al 0.8% (P/V), los cuales fueron teñidos con bromuro de etidio (EtBr) con una concentración de 0.5µg / ml. POLIMORFISMOS DE DNA AMPLIFICADOS AL AZAR (RAPD) Se probaron 43 decanucleótidos aleatorios que fueron sinte- tizados por IDT (Integrated DNA Technologies) Corpogen. La reacción de RAPD´sfue llevada a cabo en tubos Eppen- dorf de 200 µl con un volumen de 50µl que contenía: 5 µl de Buffer de polimerasa (10X), 1µl de mezcla de dNTP´s (10mM), 1.5µl de MgCl (50mM), 0.25µl de Taq DNA poli- merasa recombinante (5u/µl), 37.25µl de agua destilada, desionizada y estéril, 4 µl del decanucleótido (10mM) y 1 µl de DNA (50 ng/.µl). La reacción se llevó a cabo en el ter- mociclador (PTC 0200 DNA Engine), utilizando el siguiente programa: 94°C por 5 minutos, para la denaturación inicial, seguido por 30 ciclos de un minuto a 94°C, un minuto a 36 °C, y 2 minutos a 72°C, y una elongación final a 72°C durante 10 minutos. Los productos amplificados fueron ana- lizados por electroforesis en gel de agarosa al 1.5% (P/V), los cuales fueron teñidos con bromuro de etidio (EtBr), con una concentración de 0.5µg / ml. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Cultivo del hongo El micelio obtenido de cada aislamiento realizado a partir de esclerocios provenientes de un tubérculo de papa, se verificó por análisis microscópico (Figura 4). Se obtuvieron colonias que cubrieron la totalidad de la superficie del medio de cultivo en las cajas de petri, las cuales se mantuvieron por múltiples repiques en condiciones de temperatura de laboratorio y por conservación a 4° C (Figura 5). Para la extracción del DNA se cultivó el hongo en medio líquido (pz), obteniéndose una biomasa micelial requerida para las diferentes pruebas (Figura 6). Extracción de DNA Se probó el protocolo para la extracción de DNA de R. solani reportado por Liu y Sinclair 1992, sin encontrar los resultados esperados, se observó la presencia de bandas en el gel de agarosa, se probaron otras metodologías reportadas para la extracción de DNA de micelio fúngico, logrando buenos resultados con el protocolo descrito por Towner 2001 , obteniéndose un DNA no degradado con alto grado de pureza (Figuras 7 y 8), que permitió realizar todas las pruebas de PCR. Esto se debió posiblemente a que este último incluye un tratamiento con fenol en la etapa de rompimiento celular con buffer de lisis, lo cual puede facilitar la limpieza de residuos de proteínas y la liberación del material genético. 1 2 3 4 5 FIGURA 4. Características morfológicas de hifas de R. solani (Ramificación en ángulo recto, constricción en la ramificación y septo con presencia de doliporo.) 100X. FIGURA 5. Colonia de color blanco y textura algodonosa (de 7 días de desarrollo), comenzando a tornarse de color café. 16 17 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Las 16 muestras aisladas mostraron productos de amplifi- cación con los iniciadores ITS1, ITS2, ITS3 e ITS4; dando como resultado una banda correspondiente a cada región ITS: ITSA, ITSB e ITS completa, las cuales no mostra- ron polimorfismo en las amplificaciones analizadas. Los resultados anteriores sugieren que estas regiones ITS no muestran variabilidad en el tamaño de las secuencias amplificadas con los iniciadores descritos, por tal razón se considera necesario hacer una secuenciación de dichas regiones para determinar posibles polimorfismos en las secuencias de nucleótidos en las bandas obtenidas de los diferentes aislamientos. La prueba de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS1 e ITS2 muestra una banda común de 312 pb (pares de bases) para todos los aislamientos, tanto en los pro- cedentes del departamento de Cundinamarca como los del departamento de Nariño (Figuras 9 y 10). FIGURA 6. Hongo crecido en medio líquido papa-zanahoria (PZ) FIGURA 7. Electroforesis en gel de agarosa del DNA total de R. solani, extraído por el método de Paúl Towner 2001, correspondiente a los 11 aislamientos de Cundinamarca. FIGURA 8. Electroforesis en el gel de agarosa del DNA total de R. solani, extraído por el método de Paul Towner 2001, correspondiente a los 5 aislamientos de Nariño. FIGURA 9. Análisis electroforético de los productos de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS1 e ITS2, de los 11 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Cundinamarca. FIGURA 10. Análisis electroforético de los productos de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS1 e ITS2, de los 5 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Nariño. 16 17 Tanto para el departamento de Cundinamarca como para el de Nariño, se observa una única banda, dado que el oligonucleótido ITS1 anilló en la región corres- pondiente a la subunidad 18S y que ITS 2 reconoció la secuencia correspondiente al gen 5.8S, dando como resultado la amplificación de la región denominada ITS A, de aproximadamente 312 pb, lo cual concuerda con lo reportado por Liu y Sinclair 1992 (Figuras 9 y 10). La prueba de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS3 e ITS4 muestra una banda común de 437 pb para todos los aislamientos tanto de Cundinamarca como de Nariño. (Figuras 11 y 12). 20La presencia de esta única banda, aproximada- mente de 437 pb común a todos los aislamientos se explica por la amplificación de la región ITSB, para la cual el oligonucleótido ITS3 reconoció una secuencia al final del gen 5.8S y el oligonucleótido ITS4 que anilló en la secuencia inicial de la subunidad 28S. Estos resul- tados coinciden con lo descrito por Liu y Sinclair 1992 (Figuras 11 y 12). La prueba de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS1 e ITS4 muestra una banda común de 735 pb para todos los aislamientos tanto de Cundinamarca como de Nariño (Figura 13 y 14). FIGURA 11. Análisis electroforético de los productos de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS3 e ITS4 de los 11 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Cundinamarca. FIGURA 12. Análisis electroforético de los productos de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS3 e ITS4 de los 5 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Nariño. FIGURA 13. Análisis electroforético de los productos de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS1 e ITS4 de los 11 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Cundinamarca. FIGURA 14. Análisis electroforético de los productos de PCR utilizando los oligonucleótidos ITS1 e ITS4 de los 5 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Nariño. Se observa una banda de 735 pb aproximadamente, debido a que el oligonucleótido ITS1 hibridizó una secuencia final de la subunidad 18S y el oligonucleótido ITS 4 anilló al comienzo de la subunidad 28S, lo cual da como resultado la amplificación de una banda que incluye tanto al gen 5.8S de DNAr ribosomal como a las regiones ITSA e ITSB, de acuerdo con lo recopilado por Liu y Sinclair, 1992. Cabe anotar que aunque la extracción de DNA no se realizó con el protocolo descrito por Liu y Sinclair 1992, específico para R. solani; los resultados obtenidos de la amplificación de ITSA e ITSB, concuerdan perfectamente con lo reportado por estos autores, lo que permite confir- mar que el material genético que se trabajó corresponde a R. solani, pues aunque puede presentarse amplificación con DNA de otros microorganismos, el tamaño de la 18 19 banda podría ser diferente debido a que las regiones ITS son normalmente variables entre especies. La amplificación de estas regiones ITS es de gran importancia en el estudio del hongo, ya que posibilita el desarrollo de una prueba diagnóstica del patógeno en suelo, agua y material vegetal, entre otros. Es necesario hacer la secuenciación de las regiones ITS, para identificar marcadores moleculares, los cuales permitirán detectar el patógeno de forma específica, así como conocer aspectos evolutivos de éste. Por esta razón, se hace necesario la secuenciación de las regiones ITS para identificar los posibles marcadores moleculares. POLIMORFISMOS DE DNA AMPLIFICADOS AL AZAR (RAPD) En total se probaron 43 oligonucleótidos, de los cuales 5 mostraron polimorfismo para los aislamientos del R. solani (Tabla 3). En total se obtuvieron 126 bandas, de las cuales 90 corresponden al departamento de Cundinamarca y 36 al departamento de Nariño. TABLA 3. Oligonucleótidospolimórficos para los aislamientos de R. solani Oligonucleótido Secuencia 91074 5’ –CGG CCC CTG T- 3’ OPC 12 5’ –TGT CAT CCC C- 3’ OPC 14 5’ –TGC GTG CTT G- 3’ PHA 02 5’ –GTT TCG CTC C- 3’ V 12 5’ –ACC CCC CAC T- 3’ Estos resultados preliminares suministraron suficiente información para establecer un polimorfismo genético entre los dos departamentos, por lo cual fue necesario hacer una modificación a la técnica RAPD, que consis- tió en utilizar dos oligonucleótidos que previamente mostraron polimorfismo en una misma reacción, de la cual se obtuvo un total de 101 bandas nuevas para el departamento de Nariño y 291 nuevas bandas para el departamento de Cundinamarca, con un gran total de 518 bandas, teniendo como promedio 27 bandas generadas por cada iniciador para el departamento de Cundinamarca y 11 para el departamento de Nariño. El rango de tamaño de los productos de amplificación para el departamento de Cundinamarca fue de 180 a 3282 Pb y para el departamento de Nariño fue de 138 a 3146 pares de bandas (Tabla 4). TABLA 4. Información general obtenida por la técnica RAPD. Cundinamarca Nariño Número total de oligonucleótidos probados 43 43 Oligonucleótidos polimórficos 5 5 Bandas totales 381 137 Bandas totales polimórficas 134 41 Rango de tamaño de los productos de amplificación 180 – 3282 pb 138 – 3146 pb Promedio de bandas por cada oligonucleótido polimórfico 27 11 Luego de llevar a cabo la totalidad de reacciones, así como la lectura y el registro fotográfico de los geles, en donde se corrieron sus productos como se muestra en las Figuras 15 a 18 se procedió a elaborar una matriz primaria de datos, para que a partir de esta, se hiciera el análisis estadístico. Amplificación con el oligonucleótido OPC 14 En el análisis de aislamientos correspondientes al depar- tamento de Cundinamarca, con el primer OPC12 se observó un claro patrón de semejanzas para los aisla- mientos Rhs C8 y Rhs C9, lo que significa alta similitud de sus genomas, además se presentan algunas bandas compartidas con otras muestras, que reflejan cercanía genómica entre sí, y ausencia total de bandas para el ais- lamiento Rhs C11 lo cual lo hace diferente con respecto al resto de aislamientos analizados. En el departamento de Nariño se presenta una banda de aproximadamente 906 pb, común en cuatro aislamientos y un patrón monomórfico para las muestras Rhs N1 Y Rhs N2, lo que indica que a pesar de existir un claro polimorfismo para el total de la muestra, se presentan sitios genómicos semejantes entre aislamientos (Figura 15 y 16). Amplificación del oligonucleótido OPC12 Todos los aislamientos de Cundinamarca mostraron amplificación con este oligonucleótido, observando una banda de aproximadamente 1765 pb común a los aisla- mientos Rhs C1, C2, C5, C6, y C7; una banda de aproxi- 18 19 madamente 1021 pb presente en los aislamientos de Rhs C3, C4, C6, C7 y C9 una aproximadamente de 1138 pb común a Rhs C3, C4, C5, C6,C7,C9, C10 y C11, lo que nos muestra la presencia de secuencias genómicas comunes entre ciertos aislamientos y polimorfismos entre otros. Para el departamento de Nariño se observó la presencia de dos bandas una de aproximadamente 1100 pb en el aislamiento Rhs N2 y otra de aproximadamente 1817 pb en el aislamiento Rhs N5, lo que muestra un alto grado de polimorfismo ya que este oligonucleótido solo presentó anillado en dos de las muestras (Figura 17 y 18). Comparando los resultados en los departamentos podemos apreciar que no existe ningún sitio del genoma amplificado común entre ellos. Tanto la distribución geo- gráfica, como su aislamiento, probablemente se exprese en estas diferencias genómicas como parte de la evolución de esta especie. FIGURA 15. Análisis electroforético de los productos de RAPD utilizando el oligonucleótido OPC14 con los 11 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Cundinamarca. FIGURA 16. Análisis electroforético de los productos de RAPD utilizando el oligonucleótido OPC14 con los 5 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Nariño. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Los resultados obtenidos fueron analizados por el método estadístico de Jaccard,1908, que permite trabajar datos cuali- tativos como son las ausencias y presencias de bandas y trans- formarlos en datos cuantitativos, asignando un valor de 1 para las presencias y de 0 para las ausencias. Este método permite ver las distancias genéticas entre cada una de las muestras y arroja además un Dendrograma que permite ver fácilmente la relación existente en la muestra total, razón por la cual fue escogido para el análisis de la presente investigación. Para el análisis estadístico fue necesario tener en cuenta el peso en pb de las bandas presentes para cada uno de los aislamientos y los patrones electroforéticos aportados por los RAPD, procesados y expresados en la matriz de distancia de Jaccard (Tabla 5), de donde se obtuvo un promedio de similitud de 0.678 en la muestra FIGURA 17. Análisis electroforético de los productos RAPD utilizando el oliglonucleótido OPC12 con los 11 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Cundinamarca. FIGURA 18. Análisis electroforético de los productos RAPD utilizando el oliglonucleótido OPC12 con los 5 aislamientos de R. solani correspondientes al departamento de Nariño. 20 21 total, lo que indica un muy alto porcentaje de variación. Y promedios entre departamentos de 0.679 para Cun- dinamarca y 0.360 para Nariño. Observando una mayor variabilidad en el departamento de Cundinamarca. El análisis de similitud de Jaccard dio como resultado una diferenciación marcada entre los dos departamentos (Figura 19); los aislamientos del patógeno del departamento TABLA 5. Matriz de distancias Jaccard C01 C02 C03 C04 C05 C06 C07 C08 C09 C10 C11 N01 N02 N03 N04 N05 C01 0.00 C02 0784 0.00 C03 0867 0833 0.00 C04 0813 0755 0691 0.00 C05 0750 0667 0701 0643 0.00 C06 0773 0765 0789 0636 0648 0.00 C07 0896 0830 0731 0825 0839 0817 0.00 C08 0917 0948 0783 0894 0873 0889 0722 0.00 C09 0915 0947 0814 0892 0906 0850 0612 0511 0.00 C10 0854 0933 0775 0866 0862 0841 0759 0709 0571 0.00 C11 0886 0979 0891 0846 0945 0904 0857 0900 0898 0840 0.00 N01 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.00 N02 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.00 N03 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.00 N04 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.00 N05 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.00 de Nariño (Rhs N01 a Rhs N05), evidencian ciertos parámetros de agrupamiento, lo que implica sectorización de características del patógeno. Sin embargo, para el departamento de Cundinamarca, que es un grupo más amplio en cuanto al número de individuos, se presentan dos divisiones: una para aislamientos Rhs C11, el cual presenta mayor polimorfismo, respecto a los otros aislamientos. Y FIGURA 19. Dendrograma de Jaccard. 20 21 un segundo grupo que incluye las demás muestras que a su vez se subdividen en dos grupos, uno que incluye los aislamientos: Rhs C01 a Rhs C06, mostrando gran similitud los aislamientos Rhs C04 y Rhs C06; y un segundo grupo con los aislamientos Rhs C07 a Rhs C10. Se puede decir que los aislamientos no presentaron una correlación geográfica ni concerniente a la variedad de papa afectada, pero que existe un flujo genético entre las poblaciones de las regiones estudiadas, lo que podría ser explicado por el intercambio comercial y el desplazamiento de material vegetal y humano en Colombia. CONCLUSIONES • Se estandarizó el crecimiento del hongo R. solani en el laboratorio empleando medio sólido PDA y líquido papa- zanahoria, encontrando que el desarrollo en el medio sólido coincide con el reportado por Silva H.1996. • Se seleccionó un protocolo de extracción de DNA para R. solani, con el cual se obtiene un DNA de alta pureza que permite el desarrollo de pruebas moleculares.• Se logró la amplificación de las regiones ITS, haciendo un reconocimiento del patógeno, lo cual concuerda con lo reportado por Liu y Sinclair.1992. • Se determinó que no existe relación genética para R. solani entre los municipios y las variedades de papa. • Con las mezclas de oligonucleótidos 91074-Pha02, 91074-V12 y OPC14-V12, no se observó polimor- fismo genético en los aislamientos procedentes de Nariño; pero sí en los de Cundinamarca, lo que refleja diferencias genómicas entre departamentos. • De acuerdo con el coeficiente de Jaccard se encontró un promedio de similitud de 0.678 para todos los aisla- mientos, lo que muestra un alto grado de polimorfismo genético de los aislamientos analizados. • El promedio de similitud para las muestras de Cundinamarca fue de 0.679 y para Nariño fue de 0.360, lo que quiere decir que los aislamientos de Nariño presentan menos diferencias genómicas entre sí. • Estos resultados preliminares muestran que el manejo de Rhizoctonia solani en el cultivo de papa debe hacerse teniendo en cuenta la alta variabilidad del patógeno. BIBLIOGRAFÍA Y REFERENCIAS RECOMENDADAS Agrios, G.1996. Editorial Limusa. México p 807 ISBN 968-18- 5184-6. Akino, S. and Ogoshi, A 1995. Pathogenicity and host specificity in Rhizoctonia solani. In: KOHOMOTO, K; singh, v.and singh R. Plant and host specifirty in plant diseases. Vol 2 Eucarides. Elsevier Science U.K. Pág. 37-50. Bharthan, N. and Tavantzis, S. M. 1991. Assessment of genetic relatedness among double-stranded RNAs from isolates of Rhizoctonia solani from diverse geographic. Phytopathology 81:411-415. Carling, D. and Kuninaga, S. 1990. DNA base sequence homology in Rhizoctonia solani Kühn: Inter-and intragroup relatedness of anastomosis group-p. Phytopathology 80: 1362-1364. Cubeta, M. and Vigalys. R. 1994. Population biology of the Rhizoctonia solani complex. Phytopathology 87 (4): 480-484 Dieffenbach, Dveksler, C.1995. PCR Primer A Laboratory Manual U.S.A ISBN 0-87969-448-3. Pág. 203-210. Jaccard, P.1908. Nourelles le cherches sur la distribution florale. 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UNIPAPA-ICA-CORPOICA. p107 Silva, M.1996 Evaluación de la Variabilidad fisiológica Presente en la población De Rhizoctonia solani, Agente Causal Del Anublo De La Vaina De Arroz, Proveniente De Diferentes Partes del País. Tesis. Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Agronomía. Bogotá, Colombia. 22 23 Plan de prevención y contingencia contra la Cochinilla Rosada (Maconellicoccus hirsutus Green), en Colombia Jaime Cárdenas López.1 Desde 1995, el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA) adelanta acciones en diferentes frentes con el objetivo de preparar al país del riesgo que significa la plaga denominada cochinilla rosada (CR).Mediante varias resoluciones, el Instituto elaboró y posteriormente ajustó el Plan de Contingencia de Colombia contra esta plaga. Las normas más recientes son las Resoluciones ICA Nos. 0121 de enero de 2003 por la cual se toman medidas para prevenir la entrada y establecimiento de la cochinilla rosada a Colombia, 2337 de agosto 29 de 2003 por la cual se declara la emergencia fitosanitaria por la aparición de focos de cochinilla rosada Maconellicoccus hirsutus Green en Colombia y 2735 de octubre 06 de 2003 por la cual se adoptan medidas de seguridad sanitaria y se autoriza la importación de agentes biológicos (parasitoides), Anagyrus kamali y Gyranusoidea indica (Hymenopteras: Encyrtitidae) para el control de cochinilla rosada Maconellicoccus hirsutus Green en Colombia. M. hirsutus Green es una plaga polífaga, del orden Homóptera, de la familia Pseudococcidae. Su distribución incluye países como India, Egipto, Australia, sudeste de Asia y recientemente ha sido registrada en las islas del Caribe, Trinidad y Tobago, Belice, Puerto Rico, USA y Venezuela (Figura 1). Recientemente en Colombia fueron reportados oficialmente 3 focos en la zona urbana del municipio de Maicao (departamento de La Guajira). Las medidas preventivas, cuarentenarias y de contingencia para disminuir el riesgo de ingreso de M. hirsutus, deben ser aplicadas en todos los países de la región y en especial en aquellos que se encuentran libres de ella. Deben aplicarse todas las medidas fitosanitarias para el control del ingreso de material vegetal y seguir las normas de organismos regionales de sanidad vegetal, aprovechando las experiencias de los países que han sido afectados como: Estados Unidos, Puerto Rico, Belice, Venezuela y Colombia (Figura 2). 1 I.A., M.Sc. Grupo Prevención de Riesgos Fitosanitarios ICA Bogotá. E mail: jaime.cardenas@ica.gov.co 22 23 Probabilidad de incidencia de CRH en Colombia SITIOS DE RIESGO Y MAYOR PROBABILIDAD DE INTRODUCCIÓN Y ESTABLECIMIENTO DE LA COCHINILLA ROSADA EN COLOMBIA (tomando como parámetro principal las condiciones de clima) Probabilidad de incidencia de CRH en el departamento de La Guajira, Colombia 24 25 MEDIDAS DE PREVENCIÓN Y CONTINGENCIA Sospechas y alarmas En caso de conocer una alarma (foco) de M. hirsutus en el territorio colombiano, los ingenieros agrónomos de instituciones o gremios del sector, o cualquier otro técnico, deberá proceder de la siguiente manera: • En ningún caso deben tomarse muestras para ser movilizadas del sitio de alarma. • La alarma debe ser reportada al ICA y atendida con el apoyo de personal técnico del Instituto. • No debe recomendarse la aplicación de controles químicos. • Deberá aislarse provisionalmente el área sospechosa, hasta tanto se tenga la visita de ICA, la cual debe ser inmediata. METODOLOGÍA PARA EL MONITOREO DE LA PLAGA • La diseminación de la plaga es relativamente rápida en condiciones normales, por lo cual es importante planificar y coordinar las acciones de manejo. • El manejo de focos iniciales debe buscar primero alternativas de erradicación, con el fin de evitar hasta donde sea posible la dispersión. • Las decisiones fitosanitarias de manejo y eliminación de focos iniciales, corresponderán a la comisión técnica liderada por ICA y compuesta ademas por la Secretaría de Agricultura y la Umata de la zona. • Debe tenerse presente que si se detecta la presenciadel M. hirsutus y no se toman las medidas necesarias, las cosechas pueden verse afectadas. ACCIONES A SEGUIR EN CASO DE DETECCIÓN DE UN FOCO Delimitación de un foco 1. Inventario de especies susceptibles 5 km2 a partir del sitio* donde se registra la presencia (incluye riguroso monitoreo) 2. Cuantificación del número de predios, número de propie- tarios y costo de la(s) cosecha(s) en la zona delimitada 3. Expedición de una reglamentación de cuarentena (Figura 3). *Area focal: fincas y vecinas Perifocal 5 km2 Área tampón 10 km2 4. Medida de choque (aplicación de un sistémico y/o erradicación de plantas) 5. Análisis de eventual compensación 6. Liberación de controladores biológicos 7. Restricción de movimiento de material vegetal 8. Campañas divulgativas y educativas 9. Ubicación de nuevos sitios de monitoreo (Figura 4). FIGURA 1. La cochinilla rosada se ha reportado en países de Asia, África y América. FIGURA 2. Distribución de la cochinilla rosada en el Caribe y la parte norte de Suramérica. 24 25 FIGURA 3. A manera de ejemplo, delimitación de las áreas focal, perifocal y tampón, a partir del sitio en donde hipotéticamente se registra la presencia de M. hirsutus. FIGURA 4. Red de monitoreo de la cochinilla rosada en Colombia. Procedimiento de Acción Inspeccionar árboles y ramas sospechosas, teniendo en cuenta los hábitos de la plaga (la planta indicadora inicial es el hibisco). Hábitos y daños: el ataque de M. hirsutus es realizado en los puntos de crecimiento (meristemos), también en los pliegues y zonas protegidas de frutos; generalmente produce fumagina, bloquea la fotosíntesis y debilita las plantas, las cuales se presentan siempre recubiertas de gran cantidad de cera algodonosa blanca. Se puede presentar cualquiera de las siguientes situaciones: falsa alarma, duda, confirmación. Para las situaciones de duda se debe coordinar de manera inmediata la visita de un especialista del ICA, a través del Grupo de Prevención y/o Control y Erra- dicación. En esta visita se tomarán las muestras y se hará la identificación respectiva, con base en el manual de identificación de M. hirsutus Green. 26 27 Si se da la confirmación, inmediatamente debe declararse en cuarentena la finca, mediante resolución expedida por el ICA. Igualmente, se explicará el plan de manejo, de acuerdo con el esquema planteado en el documento “Manual de proyecto para el control de M. hirsutus”. En toda la zona de influencia (zona urbana o vereda), se desplegará un trabajo conjunto del ICA, las Umata, la Secretaría Departamental de Agricultura, el Sena y otras instituciones, sobre los diversos aspectos de la plaga. Este trabajo será realizado por la Coordinación Seccional del ICA respectiva. Debe manejarse un mapa de riesgo con toda la información de áreas, tipo de cultivo y número de pro- pietarios. De manera concertada, el ICA definirá la declaración de emergencia fitosanitaria en la zona. El ICA reforzará la distribución de material divulgativo – educativo sobre M. hirsutus, el cual será entregado a través de las Coordinaciones Seccionales. En todo caso debe considerarse el concepto de áreas afectadas y áreas libres de M. hirsutus, en Colombia. Actualmente el ICA tiene una vigilancia fitosani- taria estricta sobre los departamentos de La Guajira, Cesar, Norte de Santander, Arauca y Magdalena, el cual incluye control fronterizo, retenes de revisión de productos de origen vegetal y lectura de más de 500 sitios de monitoreo, con el apoyo de los gremios, las UMATA y técnicos particulares y de otras instituciones públicas y privadas. Como consecuencia de lo anterior, todos los focos registrados se han detectado en la zona urbana del muni- cipio de Maicao y han sido erradicados conforme se ha dispuesto en el Plan de Contingencia. Primer foco de cochinilla rosada en Colombia. Árbol de guanábana en un patio de la zona urbana del municipio de Maicao (agosto de 2003). Este foco fue erradicado inmediatamente después de ser encontrado por los funcionarios del ICA que realizan permanentemente el monitoreo. 26 27 La tecnología hecha realidad Desarrollo y perspectivas de la producción pecuaria Encefalomiocarditis viral porcina en granjas intensivas de Colombia Estudio histopatológico y serológico de la enfermedad de Newcastle en los municipios de Villa del Rosario, Los Patios y San José de Cúcuta, Norte de Santander Importancia de la neosporosis, en el diagnóstico integral del aborto bovino 28 29 1Encefalomiocarditis viral porcina en granjas intensivas de Colombia María Antonia Rincón, José Darío Mogollón, Patricia Preciado, Gustavo Arbeláez, Boris Marcelo Cepeda, Sandra Ruiz * Respectivamente, Médicos Veterinarios y Bacteriólogas Instituto Colombiano Agropecuario ICA Laboratorio Nacional de Diagnóstico Veterinario. Sección Medicina Porcina. Avenida El Dorado No. 42-42. E mail: porcicol@tutopia.com E l virus de la Encefalomiocarditis (EMC), es un patógeno asociado con infecciones en roedores, aunque infecta en forma natural a un amplio rango de vertebrados dentro de los cuales se incluyen monos, elefantes, leones, ardillas, mangostas, mapaches y suinos. Los cerdos son los animales domésticos más susceptibles, principalmente por el consumo de alimento y agua contaminada con el virus excretado a través de la orina y heces de ratas y ratones infectados que colonizan las granjas. La transmisión de cerdo a cerdo es menos frecuente, aun cuando algunos estudios han demostrado la infección por el contacto de animales enfermos con porcinos sanos suscepti- bles. El virus ha sido clasificado como un Cardiovirus, de la familia Picornaviridae, tiene propiedades hemoaglutinantes y se han ais- lado cepas con diferentes grados de virulencia y tropismo. La enfermedad fue reportada inicialmente en porcinos por Mur- nane y colaboradores (1960), durante un brote agudo ocurrido en Panamá, y actualmente se considera que está distribuida en todos los continentes. En América, se ha reportado en países como Canadá, Estados Unidos, Cuba, Brasil y Venezuela. En Colombia, Roca García y Sanmartín (1957), aislaron el virus a partir de un mono Aotus pro- veniente de los Llanos orientales. Más tarde, en un estudio serológico realizado por Parra y Turriago (1993), mediante la técnica de inhibición de la hemoaglutinación se detectó reactividad serológica en granjas porcinas tecnificadas y de producción de tipo extensivo. EL DESARROLLO DE LA ENFERMEDAD La infección natural en cerdos ocurre principalmente por la vía oral. En los animales infectados experimentalmente la viremia (presencia del virus en la sangre) aparece a los dos días post-ino- FIGURA 1. Observe unos lechones momificados de tamaño variable por la acción del virus de la encefalomiocarditis. 28 29 culación (PI) y persiste por 2-4 días. El bazo y los ganglios linfáticos mesentéricos son considerados como los sitios de replicación viral, sin embargo, la detección del agente en las heces hasta por nueve días PI oral, sugiere que la multiplicación se realiza también a nivel intestinal. En animales inoculados e infectados naturalmente es posi- ble detectar altas concentraciones de virus en miocardio (corazón), hígado, páncreas y riñón. El curso de la enfermedad depende del tropismo (afi- nidad por cierto tipo de órgano) y virulencia de la cepa, la dosis infectiva y la susceptibilidad individual. Se sabe que ciertas cepas causan principalmente encefalitis (encefalotro- pismo), otras producen un extenso daño cardiaco (cardio- tropismo) y algunas ocasionan específicamente destrucción de las células pancreáticas tipo beta (pancreotropismo). SIGNOS QUE PRESENTAN LOS ANIMALES En animales jóvenes, el virus ocasiona muerte súbita debido a falla cardiaca, pudiendo ocasionar hasta 100% de mortalidad en lechones lactantes. Se pueden también observar otros signos tales como fiebre, anorexia, decai- miento, temblores, parálisisy diarrea. La infección en animales destetos, en crecimiento y adultos puede variar desde la forma subclínica (asintomática), hasta alteraciones reproductivas en cerdas gestantes. Estas últimas presen- tan signos de anorexia y fiebre con reporte de aborto, momificaciones y mortinatos (Figura 1). Aunque en las cerdas gestantes algunas consecuen- cias de la infección son similares a las observadas en otras enfermedades reproductivas, en la encefalomiocarditis se presenta alta mortalidad predestete, hay signos clínicos en las cerdas y afecta a hembras de diferentes partos. LESIONES EN LOS PORCINOS AFECTADOS Los animales que mueren en la forma aguda por falla cardiaca presentan hemorragias en el epicardio, el corazón usualmente está aumentado de tamaño, flácido, pálido y con múltiples focos blanquecinos de 2-15 mm de diámetro o áreas pálidas en forma de pinceladas. Las lesiones son más comúnmente observadas en el epicardio del ventrículo derecho, con extensión dentro del miocardio. Adicionalmente, puede observarse hidrotórax, hidropericardio, edema pulmonar y ascitis (Figuras 2 y 3). FIGURA 2. Corazón de un cerdo de precebo con lesiones necróticas (Focos de color blanco de tamaño variable) en la superficie del miocardio, producidos por el virus de la encefalo miocarditis. FIGURA 3. Sección histológica, corazón de un cerdo de precebo, note las áreas de necrosis (destrucción del tejido) con mineralización por acción del agente viral. 30 31 Dependiendo del tiempo de gestación, los fetos afectados presentan diferentes grados de momificación, encontrándose hemorrágicos, edematosos, aparente- mente normales. Las lesiones del miocardio pueden ser observadas en algunos fetos abortados, pero usualmente son difíciles de detectar en condiciones de campo. En la evaluación microscópica de los tejidos, el hallazgo más significante en animales jóvenes es la miocarditis focal o difusa, con acumulación de células mononucleares, congestión vascular, edema y degene- ración o necrosis de las fibras del miocardio. En algunos casos se presentan focos de mineralización (depósito de color) en las áreas de necrosis. Las lesiones en encéfalo incluyen meningitis, infiltración perivascular con células mononucleares, congestión y degeneración neuronal. La miocarditis y la encefalitis no supurativa también pueden ser observadas en los fetos naturalmente infectados. CÓMO SE PUEDE CONFIRMAR UN DIAGNÓSTICO DE CAMPO La historia clínica de fallas reproductivas, la alta mortalidad pre- destete y la observación de las lesiones a la necropsia, orientan un diagnóstico de encefalomiocarditis porcina. Sin embargo, otras enfermedades reproductivas como la parvovirosis porcina, el Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRS), Aujeszky y leptospirosis, deben ser consideradas en el diagnóstico diferencial. Por su parte, en las lesiones del corazón debe considerarse la deficiencia de vitamina E y Selenio y los infartos cardiacos por embolias sépticas. El diagnóstico definitivo se basa en el aislamiento e identificación del virus a partir de tejido cardiaco de fetos y lechones, mediante la inoculación de huevos embrionados o la infección de determinadas líneas celulares. El aislamiento es exitoso en animales con infección aguda, pero se dificulta una vez que aparecen los anticuerpos neutralizantes. Para la detección de los anticuerpos específicos, se emplean las pruebas de inhibición de la hemoaglutinación (títulos positivos iguales o mayores de 1:8), o la sero- neutralización, en la cual se consideran positivos sueros con títulos iguales o superiores a 1:16. También se ha desarrollado una prueba comercial de Elisa. MEDIDAS DE PREVENCIÓN Y CONTROL No hay tratamiento para esta enfermedad, pero la morta- lidad puede disminuirse evitando condiciones de estrés en los animales enfermos. Se deben aplicar las reglas básicas de higiene y desinfección, así como un control rutinario de roedores para minimizar la población de posibles vectores en la granja. En países como Estados Unidos existen vacunas inactivadas comerciales. LA REACTIVIDAD SEROLÓGICA EN COLOMBIA Teniendo en cuenta los antecedentes de serología positiva y el desconocimiento clínico y patológico de la enferme- dad en Colombia, en el Laboratorio Nacional de Diagnós- tico Veterinario ICA-CEISA, en Bogotá, se desarrolló un estudio mediante la técnica de seroneutralización con el fin de determinar la reactividad serológica frente al virus de la encefalomiocarditis en sueros porcinos colectados a nivel de granjas intensivas durante el año 2000 y el primer semestre del 2001. Se analizaron 887 porcinos procedentes de 120 explotaciones, distribuidos en tres grupos poblacionales a saber: cerdas multíparas, cerdas de reemplazo y ani- males de ceba. El test se realizó en células BHK21, empleando dilu- ciones dobles de suero y 100 dosis infectantes de cultivo celular (DICC50) del virus de referencia Florida (National Veterinary Service Laboratories, Ames, Estados Unidos). La interpretación de la prueba se basó en la presencia o ausencia de efecto citopático, considerando como posi- tivo un título seroneutralizante ≥ 1:16. Los resultados del estudio mostraron 17.9% de reactividad serológica puntual, encontrándose 19.7% de animales reactores en el grupo de cerdas multíparas, 15.2% en las cerdas de reemplazo y 17.2% en el grupo de animales de ceba (Tabla 1). El porcentaje de granjas con animales reactores por departamento estuvo com- prendido entre 43.9% en Antioquia y 100% de las explo- taciones examinadas en Cauca y Risaralda. Sin embargo, en 77 (64.2%) de las 120 explotaciones examinadas se detectaron animales seropositivos, que indican una alta distribución entre granjas y entre los departamentos analizados. Por otro lado, la distribución de los títulos seroneutralizantes en las tres categorías osciló entre 1: 16 y 1:128, siendo el grupo de cerdas reproductoras en donde se encontró el mayor porcentaje de animales con el título máximo. Estos hallazgos difieren de los estudios serológicos reportados en 1993 por Parra y Turriago, quienes a través de la técnica HI en granjas intensivas de Colombia 30 31 encontraron un 86.7% de serorreactores y 63.6% en explotaciones no tecnificadas. La reactividad serológica reportada en ambos estudios debe interpretarse como un indicativo de actividad viral en el campo, pero se desco- noce el significado clínico de los anticuerpos detectados. Es posible que debido al desconocimiento clínico patoló- gico de la enfermedad, a la semejanza con otros agentes reproductivos de los porcinos o a la presencia de cepas de baja virulencia no se haya detectado y diagnosticado la enfermedad en el país. Considerando que ciertas especies de roedores son reservorios naturales del virus, las deficiencias en el manejo e higiene de las granjas, así como las fallas en el control de ratas y ratones, pueden favorecer la presencia de una fuente de infección para los porcinos por conta- minación de la comida y del agua de bebida. Es importante continuar con otros estudios que per- mitan la detección y aislamiento del agente, con el fin de definir la situación epidemiológica de la enfermedad en Colombia y su impacto sanitario en la industria porcina. BIBLIOGRAFÍA Billinis C. y col. Persistence of encephalomyocarditis virus (EMCV) infection in piglets. Vet Microbiol. 70: 171-177,1999. Christianson y col. Reproductive and neonatal losses associated with possible encephalomyocarditis virus infection in pigs. Vet Rec, 20: 54-57,1990. Foni y col. Experimental Encephalomyocarditis virus infection in pigs. J. Vet Med. B40: 347-352,1993. Joo. H.S. Encephalomyocarditis virus as a possible cause of new reproductive problems, Swine herd health. Programming Conference University of Minnesota, September: 83-89, 1987. Joo, H.S. Encephalomyocarditis virus. Diseases of swine. Capítulo 11. Iowa State University Press: 139-143, 1986. Joo, H.S. Encephalomyocarditisvirus. Diseases of swine. Capítulo 11. Iowa State University Press: 139-144, 2001. López y col. First report encephalomyocarditis in Venezuela. Proceedings of the 15th IPVS congress, Birmingham, England, Julio: 234, 1998. Parra. y Turriago. Estudio seroepidemiológico de la encefalomiocarditis porcina. Tesis Pontificia Universidad Javeriana.47-77, 1993. TABLA 1. Reactividad serológica frente al virus de la encefalomiocarditis porcina por departamento y grupo poblacional. Departamento Granjas examinadas No. Muestras No. Reactores positivos % Reactividad Cerdas multíparas Reemplazo Ceba Cerdas multíparas Reemplazo Ceba Animal Granjas Antioquia 41 153 91 44 16 5 5 9.0 43.9 Atlántico 2 5 2 2 2 0 0 22.2 50.0 Caldas 10 46 22 12 10 0 2 15.0 70.0 Cauca 2 8 6 3 0 2 1 17.6 100 Cundinamarca 12 35 19 14 5 3 4 17.6 58.3 Meta 3 11 7 5 2 0 0 8.7 66.6 Risaralda 15 69 45 23 25 16 2 31.8 100 Valle 35 149 85 31 34 16 9 22.2 71.4 120 476 277 134 94 42 23 17.9 64.2 887 (19.7%) (15.2%) (17.2%) 32 33 Estudio histopatológico y serológico de la enfermedad de Newcastle en los municipios de Villa del Rosario, Los Patios y San José de Cúcuta, Norte de Santander 1Gerson Nieto, 2Néstor Mossos 1 MVZ, Bacteriólogo, Esp., Oficina ICA de Cúcuta, teléfono 5780012 2 MV, PhD, ICA Ceisa, Teléfono 3686820, Avenida Eldorado No. 42-42 Bogotá INTRODUCCIÓN Las enfermedades aviares causan grandes pérdidas económicas, representadas en muerte de aves, baja en la producción de carne y huevos, tratamientos y decomisos. Las aves domésticas en Colombia están afectadas por diferentes enfermedades que inciden negativa- mente en el desarrollo de la industria avícola nacional, representando problemas sanitarios limitantes a su vez en las negociaciones o libre acceso al comercio internacional. Una de las principales entidades patológicas aviares enmarcadas en este contexto es la enfermedad de Newcastle, la cual ocurre en Colombia en forma endémica, siendo de gran incidencia en las áreas de mayor densidad avícola, en donde periódicamente se presentan brotes, sobre todo en aquellas pobla- ciones sometidas a inadecuados procedimientos en lo relacionado con inmunización y nutrición. La epidemiología es la base de la vigilancia y el control continuo. Los informes sobre la situación zoosanitaria con datos de esta vigi- lancia, resultados de control continuo (atención a brotes, muestreos serológicos) y detalles histopatológicos son básicos en los procedi- mientos de evaluación del Newcastle. El propósito fundamental del presente trabajo es evaluar mediante estudio histopatológico y sero- lógico, la presencia de la enfermedad en una de estas zonas, poco tecnificadas y que a veces presentan inconvenientes para el desarrollo 32 33 de los programas de vigilancia y control epidemiológico planificadas por las autoridades sanitarias de un país. POBLACIÓN Y MUESTRA La población para trabajar durante la investigación se deter- minó una vez actualizado el censo, que según estimativos de la regional del ICA para el 2003 en el área de Villa del Rosario se compone de 308.200 aves (datos no publica- dos), distribuidas de la siguiente manera: 167.500 pollos de engorde, 132.700 ponedoras, 7.500 codornices; en Los Patios es de 433.300 aves, distribuidas así: 123.900 pollos de engorde, 298.000 ponedoras, 8.800 codornices; y en San José de Cúcuta es de 76.500 aves, distribuidas así: 43.000 pollos de engorde y 33.500 ponedoras. RESUMEN GENERAL La principal patología que afecta a las aves en los tres municipios es la enfermedad de gumboro, con 25.4 % de los casos, seguida de la enfermedad de Marek, con 16.2%; otras patologías como traqueítis no supurativa, se encontró en 16.2 % y la enfermedad de Newcastle se presenta en 10.6% de los casos, durante el tiempo del estudio (Tablas 1 y 2; Figuras 1 y 2). TABLA 1. Patologías encontradas en la zona de estudio. Lesiones encontradas Nº de casos Porcentaje (%) Traqueítis no supurativa 23 16,2 Newcastle 15 10,6 Neumonía granulomatosa 6 4,2 Lesiones de tipo bacterial 7 4,9 Lesiones micóticas 1 0,7 Marek 23 16,2 Gumboro 36 25,4 Bronquitis Infecciosa 3 2,1 Nematodos 3 2,1 Enteritis granulomatosa 1 0,7 Enteritis Necrótica 1 0,7 Encefalitis Micótica 1 0,7 Hepatitis necrótica multifocal 5 3,5 Cambio graso 4 2,8 Neumonía necrótica 2 1,4 Enteritis no supurativa 4 2,8 Encefalitis no supurativa 1 0,7 Enteritis micótica 1 0,7 Proventriculitis 2 1,4 Histomoniasis 2 1,4 Síndrome de Mala Absorción 1 0,7 Total 142 100 Fuente: Autor, 2003 *No se incluyen los casos de N.V.L. TABLA 2. Principales lesiones encontradas. Lesiones encontradas Nº de casos Porcentaje (%) No se ven lesiones 40 22 Tipo Nervioso 18 9.9 Tipo Entérico 29 15.9 Tipo Respiratorio 54 29.7 Tipo Bursal 23 12.6 Otras lesiones 18 9.9 Total 182 100 Fuente: Autor, 2003 *1= Traqueítis no supurativa, 2= Newcastle, 3= Neumonía Granuloma- tosa, 4= Tipo Bacteriano, 5= Tipo micótico, 6= Marek, 7= Gumboro, 8= Bronquitis Infecciosa, 9= Nematodos, 10= Enteritis granulomatosa, 11=Enteritis Necrótica, 12= Encefalitis Micótica, 13= Hepatitis Necrótica Multifocal, 14= Cambio Graso, 15= Neumonía Necrótica, 16= Enteritis no supurativa, 17= Encefalitis no supurativa, 18= Enteritis micótica, 19 = Proventriculitis, 20= Histomonas, 21=Síndrome de mala absorción. FIGURA 1. Lesiones encontradas en las aves enfermas de los municipios en estudio. PRINCIPALES HISTOPATOLOGÍAS *1= N.V.L., 2= Tipo Nervioso, 3= Tipo Enterico, 4= Tipo Respiratorio, 5= Tipo Bursal, 6= Otras Lesiones. Figura 2. Principales lesiones encontradas en las aves de los municipios en estudio. 34 35 COMPARACIÓN SEROLÓGICA Del total de las muestras, a 50.5% se les hizo la prueba serológica de inhibición de la hemoaglutinación para la enfermedad de Newcastle (Tabla 3, Figura 3). CONCLUSIONES De un total de 183 diagnósticos realizados, utilizando técnicas de necropsia, histopatología, serología, aisla- mientos virales y cultivos bacteriológicos, se determinó que la entidad patológica en mayor porcentaje corres- ponde a la enfermedad de Gumboro, con 36 casos para un 25.4%, del total de patologías. La enfermedad de Newcastle se encontró en 18 casos, de los cuales 15 corresponden a la zona de estudio, los otros tres casos son de los municipios de Zulia y Tibú, para un porcentaje de 10.2 % del total de la casuística estudiada y un 12.5 % en relación con los casos que presentaron algún tipo de patología. En 22% de las muestras, corres- pondiente a 40 casos, no se observan lesiones específicas. De las restantes patologías, 64.4% se encuentra distribuido entre enfermedades como Marek con 16.2 % (23 casos), traqueítis no supurati- vas de posible origen viral con 16.2% (23 casos), el restante del porcentaje total está distribuido en entidades de tipo bacteriológico, micológico y nutricional. No se encontró ninguna patología de posible origen tóxico. Se debe tener en cuenta el alto porcentaje de traqueítis no supurativa de posible origen viral (16.2 %), a los cuales por diferentes motivos no se les pudo realizar aislamiento viral o histopatologías completas, porque las muestras al momento del envío care- cían de tejido nervioso, lo cual podría aumentar el porcentaje final de la enfermedad de Newcastle. Este 16.2 % podría estar distribuido entre N.C., B.I. e incluso laringotraqueítis. De los 183 casos corresponden a pollo de engorde 59 casos, 9 a codornices, 66 a ponedoras y 49 a traspatio (conside- rando gallinas, patos, pavos, palomas, silvestres), correspondiendo a 4 casos positivos de la enfermedad de New- castle en pollo de engorde, 5 casos en ponedoras, 1 caso en codornices y 5 en traspatio; de los 18 casos de Newcastle presentados en el depar- tamento en el periodo estudiado, 16 se diagnosticaron por histopatología y aislamiento viral, quedando pendientes dos por resultado de aislamiento.FIGURA 3. Comparación serológica de las muestras procesadas en el estudio. Tabla 3. Comparación serológica de las
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