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@ B.I.S.S. julio/2018 
Flora normal de la garganta 
 
Objetivos 
1. Aprender sobre la flora microbiana asociada a la garganta y posibles patógenos de la garganta. 
2. Aislar bacterias asociadas a la garganta. 
3. Repasar sobre pruebas usadas para la identificación de especies de Streptococcus. 
 
I. Flora normal de la garganta 
La garganta es clasificada como parte de tracto respiratorio superior, al igual que la nariz, 
cavidades sinusales y nasofaringe. La levadura Candida se puede encontrar en menor proporción 
como parte de la flora oral y puede ocaionar candidiasis oral por su aumento de crecimiento en la 
zona. Este sobre crecimiento de la población puede ser causado porque el paciente esta 
inmunodeficiente, tomando terapias para el cáncer o antibióticos de amplio espectro, es un bebe 
prematuro. Algunas de las bacterias parte de la microflora del tracto respiratorio superior son 
especies de Neisseria no patogénicas, Staphylococcus, Streptococcus, Haemophilus sp. Aunque 
sean parte de la flora del lugar en algunos casos pueden ocasionar infecciones como es S. 
pyogenes que está asociada a la piel y a la garganta. Por eso al momento de diagnosticar una 
infección en esta área se lleva cabo pruebas que distingan entre especies patogénicas de las no 
patogénicas que forman parte de la microbiota del lugar. Se usa protocolo y medios selectivos y 
diferenciales para agilizar la identificación del causante de la infección. 
La toma de muestra del tracto respiratorio superior depende de la parte a evaluar. Por 
ejemplo, para tomar muestra clínica de la garganta se debe evitar tocar zonas de la lengua y boca 
con hisopo estéril. Usando depresor se pasa el hisopo estéril por el área detrás de la úvula por la 
tonsila (amígdalas), faringe posterior y zonas inflamadas o con ulceras. Se recomienda que la 
toma de muestra con el hisopo sea con movimiento rotatorios para tomar más muestra del lugar. 
Muchas veces estas muestras son inoculadas en agar de sangre para identificar posibles 
estreptococos que ocasionan infección. La faringitis puede ser ocasionada por S. pyogenes o por 
N. gonorrhoeae. Otras bacterias como H. influenzae, S. pneumoniae, Bordetella perussis, 
Corynebacterium diphtheriae pueden ocasionar infecciones en diferentes áreas del tracto 
respiratorio superior. 
El género Streptococcus tiene especies relacionadas a la microbiota del humano como 
asociados a enfermedades en humano. Se usa características morfológicas, pruebas serológicas, 
pruebas bioquímicas y reacciones en medios selectivos y diferenciales para su clasificación. Se 
clasifican en grupos A, B, C, D, F y G por las pruebas serológicas. Y en grupo alfa, beta. 
Gamma por su reacción hemolítica en el medio de agar de sangre. Es un género con 
importancia médica porque entre sus especies hay causantes de faringitis, impétigo, fiebre 
reumática, meningitis, abscesos, endocarditis, infecciones urinarias, caries, neumonía entre otras 
enfermedades. Por ejemplo, S. pyogenes es el más frecuente causante de faringitis y tonsilitis. 
Patrón hemolítico de los estreptococcos en agar de sangre 
Tipo de hemolisis Observación 
Alfa (α) Color verdoso o descoloración amarronada alrededor de la colonia que 
indica lisis parcial 
Beta (β) Zonas claras o incoloras alrededor de la colonia que indican lisis 
completa 
Gamma (γ) El medio queda igual alrededor de las colonias indicando que no hubo 
lisis. 
Tabla tomada del libro: Clinical and pathogenic microbioloy, B.J. Howard. 
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Práctica: 
A. Aislar bacterias de la garganta 
1. Limpie el área de trabajo con desinfectante y lleve a cabo las técnicas asépticas 
aprendidas en microbiología general. 
2. Rotule el anverso del plato Petri de agar de sangre con iniciales, fecha, Biol 4375L 
sección. Divida el plato en 4 zonas para poder inocular a través de un estriado de 4 
cuadrantes. 
3. Usando el depresor de lengua presione la lengua del estudiante para evitar contacto con la 
misma. Introduzca el hisopo humedecido con amortiguador hacia la parte de atrás de la 
garganta. Tome la muestra rotando a la vez el hisopo. Evite tocar la lengua, cachetes, 
dientes. 
4. Inocule la muestra en una porción del 1 cuadrante haciendo zig-zag y rotando el hisopo a 
la vez. 
5. Luego esparza el restante de la muestra desde el primer cuadrante a los demás usando una 
aguja de inocular y llevando a cabo la técnica de estriado en 4 cuadrantes. 
6. Coloque parafina al plato e incuba a 37ᵒC por 24-48 horas hasta que vea crecimiento 
bacteriano para aislar. 
7. Anote las observaciones de apariencia de las colonias, cambio de color del medio y tome 
fotos del plato. Verifique si hay hemolisis en el medio usando la tabla sobre el patrón 
hemolítico de los estreptococos. 
8. Luego, seleccione una colonia, favorablemente que produzca hemolisis, y aísle en un 
tubo inclinado de “Tryptic Soy Agar” (TSA). Guarde el plato de agar de sangre en la 
nevera e incubar el tubo a 37ᵒC por 24-48 horas. Guarde el tubo de TSA en la nevera 
luego de observar bastante crecimiento del desconocido. 
B. Pruebas para identificar el desconocido de la piel que se realizará en el próximo 
laboratorio. 
1. Tinción Gram: ya discutida y practicada en el primer laboratorio. Seguir las 
instrucciones de esa separata. 
2. Reacción CAMP: Es una prueba usada para identificar el grupo B de estreptococos 
porque este grupo produce un péptido (CAMP) que actúa en presencia de la beta 
hemolisis que produce S. aureus y se observa como un aumento en el efecto 
hemolítico. La prueba se hace en agar de sangre y se inocula el S. aureus horizontal a 
la inoculación recta del descocido. Si es positivo la prueba entonces se observa una 
hemolisis como en forma de flecha. 
a. Rotule el anverso del plato Petri de agra de sangre con iniciales, fecha, Biol 
4375L sección. Divida el plato de agar de sangre en tres zonas o franjas. 
b. Inocule haciendo zig-zag su desconocido en la primera división del plato. En 
esta área se hará la prueba de susceptibilidad a bacitracina y a SXT que se 
explicara más adelante. 
c. Inocule nuevamente su desconocido en una línea recta y de forma 
perpendicular en la parte central de la segunda división. 
d. En la tercera división del plato, inocule a S. aureus de forma horizontal 
haciendo una línea recta. 
 
 
 
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3. Sensibilidad a Bacitracina y a Trimethoprim/sulfamethoxazole (SXT): Se busca 
ver si la bacteria es susceptible al antibiótico bacitracina o a SXT. Se coloca discos 
impregnados una concentración específica del antibiótico. Si la bacteria forma un 
halo de inhibición que es una zona sin crecimiento bacteriano alrededor del disco, 
entonces es susceptible al antibiótico. Es recomendable que se corrobore con la 
información de manufacturero del antibiótico sobre el rango del diámetro del halo 
para ver si es realmente susceptible. Para BBL Sensi-disc antimicrobial susceptibility 
tets, la bacteria es resistente bacitracina si tiene un halo menor o igual a 8mm, 
susceptibilidad intermedia si es 9-10 mm y susceptible si es mayor o igual a 13mm. 
La bacteria S. aureus ATCC 25923 tiene un halo de 12-22mm con este antibiótico de 
esta compañía. Las bacterias del grupo A de estreptococos son sensibles a la 
bacitracina. La bacteria es resistente SXT si tiene un halo menor o igual a 10mm, 
susceptibilidad intermedia si es 11-15 mm para unas bacterias y de 16-18 para otras. 
Es susceptible a SXT si es mayor o igual a 16mm o 19mm. El grupo A y grupo B de 
estreptococos son resistentes a SXT. 
a. Coloque el disco de bacitracina en uno extremo de la primera división, usando 
unas pinzas previamente esterilizadas con alcohol y flameadas en el mechero. 
Luego deusar las pinzas debe esterilizarlas pasando por alcohol y flameando 
con fuego. 
b. Luego coloque el disco de SXT en el otro extremo de la primera división, 
usando unas pinzas previamente esterilizadas con alcohol y flameadas en el 
mechero. Luego de usar las pinzas debe esterilizarlas pasando por alcohol y 
flameando con fuego. 
c. Coloque parafina al plato e incube a 37ᵒC (no invertir el plato) por 24 horas. 
d. Anote las observaciones en la libreta y mida el diámetro del halo de inhibición 
en milímetros (mm). Tome foto. 
2. Prueba de esculina biliar: Ayuda a identificar el grupo D de estreptococos que son 
los enterococos. Estos hidrolizan la esculina en presencia de sales biliares rompiendo 
la esculina en glucosa y esculetina. El medio cambia a un color oscuro por las sales 
de hierro que se producen por la interacción de esculetina y el hierro, haciendo un 
resultado positivo para la prueba. La prueba es negativa si no ocurre el cambio de 
color a oscuro por completo en 24-48horas. 
a. Rotule el tubo del medio de esculina biliar usando un pedazo de cinta 
adhesiva y coloque iniciales, fecha, Biol 4375L sección. 
b. Usando las técnicas asépticas, inocule el desconocido en el tubo de agar 
inclinado haciendo zig-zag en la superficie inclinada. 
c. Incube a 37ᵒC por 24-48 horas. 
Discos antibióticos 
desconocido 
S. aureus 
Primera division 
Tercera division 
Segunda division 
B SXT 
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d. Anote las observaciones en la libreta a las 24 y 48 horas sobre cambio de 
color y tome foto. 
3. Catalasa: Enzima que degrada H2O2 (peróxido) en agua y oxígeno. El peróxido 
puede ser tóxico para las células incluyendo a las bacterias. Ayuda a diferencias 
bacterias de los géneros Staphylococcus y Streptococcus. 
a. Al finalizar de realizar las transferencias de su desconocido a las 
diferentes pruebas, añada unas gotas de peróxido 3% al tubo del 
desconocido. 
b. Observar si crea burbujas que es indicativo de un resultado positivo a la 
prueba. 
c. Anotar resultado en la tabla de su libreta y tome foto. 
 
Algunas pruebas para identificar grupos de estreptococos 
Grupo Hemólisis CAMP Bacitracina SXT Catalasa Esculina 
biliar 
Desconocido 
A Β - Sensible Resistente - - 
B Β + Resistente Resistente - - 
C Β - Resistente Sensible - - 
D α, β, γ - Resistente Resistente - + 
viridans α, γ - Resistente Sensible - - 
Tabla tomada del manual: Laboratory excercises in microbiology, 4ta ed., Harley & Prescott. 
 
Referencias 
Carroll, K.C. (2013).The streptococci, enterococci and related genera. In: Jawetz, Melnick & 
Adelberg’s medical microbiology (26ta ed., pp. 209-227). McGraw-Hill. Recuperado de: 
http://microbiology.sbmu.ac.ir/uploads/jawetz_2013__medical_miceobiology.pdf. 
 
Harley, J.P. & Prescott, L.M. (1999). Laboratory exercises in microbiology (4ta ed.). Dubuque, 
IA: WCB/McGraw-Hill. 
 
Howard, B.J. & Ducate, M.J. (1987). Sreptococci. In: B.J. Howard (Ed.), Clinical and 
pathogenic microbiology (pp. 245-263). St. Louis, Missouri: The C.V. Mosby Company. 
 
Norell, S.A. (1985). Laboratory text in introductory microbiology for health sciences students. 
Englewoods cliffs, NJ: Prentice-Hall, Inc. 
 
Rubin, S.J. (1987). Specimen collection and processing. In: B.J. Howard (Ed.), Clinical and 
pathogenic microbiology (pp. 207-230). St. Louis, Missouri: The C.V. Mosby Company. 
 
Vandepitter, J, Verhaegen, J., Enbaek, K, Rohner, P., Piot, P. & Heuck C.C (2003). Basic 
laboratory precedures in clinical bacteriology (2da ed.). World Health Organization Geneva. 
Recuperado de: http://apps.who.int/iris/handle/10665/42696. 
 
 
 
http://apps.who.int/iris/handle/10665/42696