Ratas tubo 11

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UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Inmunología
Proyecto citometría de flujo
Integrantes:
Daniela Falfán
Arantxa García
Luis Jiménez
Geraldine Vallejo
Freddy Salinas
Yezenia Martínez
Alicia Zamudio
Dayra Hernández
Rafael Melchor
Frida Galindo
Araceli Labourdette
Bryan Gastelo
	
INTRODUCCIÓN
El presente reporte de laboratorio está enfocado a la diferenciación entre un ratón que se encuentra sano y otro que se encuentra enfermo debido a la deficiencia de CD19 a partir de estudios realizados haciendo uso de la citometría de flujo. 
Para iniciar, se debe mencionar que la citometría de flujo es un método de laboratorio que se utiliza para la determinación del número de células, el porcentaje de células vivas y ciertas características morfológicas de las células en una muestra sanguínea, médula ósea u otro tejido que requiera este estudio. Funciona de la siguiente manera, para obtener las mediciones estas se basan en la manera en que las células teñidas responden a la luz. 
Dentro del área de la inmunología existen muchas determinaciones que se pueden hacer a partir de la técnica de la citometría de flujo como el inmunofenotipaje, determinación de la producción de citocinas intracelulares, proliferación celular, viabilidad celular y análisis del ciclo celular, estudio de poblaciones extrañas, células troncales y proteínas fluorescentes. 
Un sistema inmunológico en equilibrio se la pasa reconociendo agentes infecciosos en el organismo, pero al entrar una sustancia infecciosa se puede desencadenar una respuesta inmunológica. Si dicho sistema inmunológico se desequilibra se puede desencadenar una serie de alteraciones lo cual conlleva a producir inmunodeficiencias. CD38 es una proteína que se expresa en el sistema inmunológico, al tener una ausencia de esta, se acelera el desarrollo de una enfermedad auto inmune. Por otro lado CD19 al ser una glicoproteína que se encuentra en los LB, tiene la función importante de ampliar la duración y la fuerza de las señales del BCR. 
En este caso el objetivo destinado al que está el uso de esta técnica es la determinación de un ratón sano a un ratón enfermo que se encuentra deficiente de CD19, a partir de estos estudios nos será posible determinarlo gracias a que identificaremos a los linfocitos B T1, T2, foliculares y de zona marginal, lo cual nos será de gran ayuda para identificar cual es el ratón que se encuentra dentro de los valores de referencia y cuál es el ratón que se encuentra fuera de los valores de referencia, es decir enfermo. 
El presente reporte se da a conocer las anomalías que presentan las muestras obtenidas del bazo en los dos ratones (tubo 11 y tubo 12). Con ayuda de los valores de referencia tanto de linfocitos B Foliculares como de linfocitos B de Zona Marginal, se identificaron las anomalías y la causa de su aparición.
RESULTADOS
Al analizar los resultados de la citometría de flujo para el tubo 11, se obtuvo:
1. Células totales
SSC= Granularidad
FSC= Tamaño
2. Linfocitos B
Los Linfocitos B identificados corresponden al 83.9 %
PE= CD38
BV421= B2201= B220
3. Linfocitos B Transicional 1 y 2 sin diferenciar
FITC= CD21
PerCP-Cv5-5= CD24 = B220
4. Linfocitos B Transicional 1 y Transicional 2 diferenciados
FITC= CD21
PerCP-Cv5-5= CD24 = B220
5. Linfocitos B de Zona marginal y Foliculares sin diferenciar
FITC= CD21
PECv7= CD23 = B220
6. Linfocitos B de Zona marginal y Foliculares sin diferenciarFITC= CD21
PECv7= CD23 = B220
Los LB de Zona Marginal se expresan 20.6% por arriba del valor normal aproximado en un ratón sano. Mientras que, los LB Foliculares se encuentran 4.7% por debajo del valor normal.
Al analizar los resultados de la citometría de flujo para el tubo 12, se obtuvo:
1. Células totales
SSC= Granularidad
FSC= Tamaño
2. Linfocitos B
Los Linfocitos B identificados corresponden al 85.5 %
PE= CD38
BV421= B2201= B220
3. Linfocitos B Transicional 1 y 2 sin diferenciar
FITC= CD21
PerCP-Cv5-5= CD24 = B220
4. Linfocitos B Transicional 1 y Transicional 2 diferenciados
FITC= CD21
PerCP-Cv5-5= CD24 = B220
5. Linfocitos B de Zona marginal y Foliculares sin diferenciar
FITC= CD21
PECv7= CD23 = B220
6. Linfocitos B de Zona marginal y Foliculares sin diferenciar
FITC= CD21
PECv7= CD23 = B220
Los LB de Zona Marginal se expresan 20.6% por arriba del valor normal aproximado en un ratón sano. Mientras que, los LB Foliculares se encuentran 2.3% por debajo del valor normal.
INTERPRETACIÓN
En las muestras obtenidas del bazo de dos ratones, etiquetados como tubo 11 y 12, se logró detectar anomalías en los valores resultantes correspondientes a Linfocitos B Foliculares y de Zona Marginal, estos últimos presentando un aumento considerable en su conteo: En el tubo 11 el conteo de Zona Marginal arrojó una presencia del 27.6% y folicular de 58.1% frente al total, mientras que en el tubo 12 se registró un 27.6% de Zona Marginal y 60.5% de Foliculares. 
Los datos anteriores claramente se muestran anormales si los comparamos con los valores de referencia de 7% de Zona Marginal y 62.8% de foliculares en muestra de ratones sanos. Lo que se presenta en estos casos (haciendo referencia al tubo 11 y 12) es que existe un aumento de la zona marginal y las posibles causas de esto son variadas.
La primera posible causa del aumento de la zona marginal en los ratones 11 y 12, es la presencia de clonas autoinmunes de LinB; la premisa anterior se basa en la función base de los Linfocitos de Zona Marginal, los cuales se encargan de la destrucción dentro del bazo de aquellas células que provocan autoinmunidad, además de que liberan IgM de baja afinidad para neutralizar aquellos LinB autoinmunes que se encuentren en circulación y los anticuerpos que estos produzcan. Enfermedades relacionadas a este escenario son la LES (Lupus Eritematoso Sistémico) y Síndromes Linfoproliferativos como la enfermedad de cadenas pesadas o la Enfermedad de Franklin.
Además, las posibles causas también provienen de posibles problemas en la hipermutación somática, la cual provoque la aparición de autoreactividad en linfocitos maduros. Para arreglar los errores anteriores mencionados, el cuerpo obliga a la reaparición de las enzimas RAG 1 y 2 en el centro germinal que tendrán el papel de reeditar el BRC autoreactivo, regular dicha afección y disminuir la afinidad.
El aumento de Linfocitos de Zona Marginal puede estar ligado también a la presencia de linfomas esplénicos que son asociados en un 10-20% a autoinmunidad y se ha detectado que los linfocitos malignos en este tipo de linfomas pueden presentar segmentos VH tanto mutados como no mutados. Esto sugiere que, en algunos casos, la autoinmunidad puede ser debida al secuestro en el bazo de linfocitos B maduros vírgenes con reordenamientos VDJ que dieron lugar a un BCR autorreactivo, y en otros a la generación de autoinmunidad durante la hipermutación somática en un centro germinal (T dependiente) o al reconocer un antígeno independiente de linfocitos T.
Al igual que las células B tipo B1, las células B de la ZM pueden desarrollarse rápidamente en las respuestas inmunes adaptativas tempranas de manera independiente de las células T. Las células B de la ZM están especialmente bien posicionadas como una primera línea de defensa contra los antígenos sistémicos transmitidos por la sangre que ingresan a la circulación y quedan atrapados en el bazo. Se cree que son especialmente reactivos a los componentes bacterianos de la pared celular y a los autoantígenos que son productos del envejecimiento. 
CONCLUSIÓN
Para concluir podemos decir que los valores de los linfocitos foliculares se pueden ver disminuidos debido a que en proporción de totales de la zona marginal, estos aumentan en gran medida pero puede que los niveles de foliculares sean los normales pero se vean disminuidos por el total. El trabajo se realizó con dos muestras del bazo de dos ratones diferentes los cuales los etiquetamos como tubo 11 y 12, en dichas muestras se detectaronanomalías en los valores correspondientes a linfocitos b foliculares y de zona marginal: En el tubo 11 el conteo de zona marginal tuvo una presencia del 27.6% y de zona folicular de 58.1% frente al total. En el tubo 12 se obtuvo un 27.6% de zona marginal y 60.5% de zona folicular. Con estos resultados nos podemos dar cuenta que los valores son anormales con los valores de referencia (7% zona marginal y 62.8% en zonas foliculares) y las muestras presentan un aumento en la zona marginal y una leve deficiencia en la zona folicular para poder comprender como funcionan ciertos procesos del cuerpo, detectar ciertas anomalías y como usar estas técnicas para diferenciarlas. 
La citometría de flujo constituye una técnica de avanzada, automatizada, objetiva y altamente sensible, muy útil para el estudio del inmunofenotipo de las células normales y anormales. Así también, se usa en investigación básica y para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades, como el cáncer.
REFERENCIAS
· García-Muñoz R. Aspectos inmunológicos relacionados con la generación de linfomas y autoinmunidad. Inmunologia [Internet]. 2010 [citado el 10 de junio de 2022];29(1):34–49. Disponible en: https://www.elsevier.es/es-revista-inmunologia-322-articulo-aspectos-inmunologicos-relacionados-con-generacion-S0213962610700093 
· Wikipedia contributors. Células B de la zona marginal [Internet]. Wikipedia, The Free Encyclopedia. Disponible en: https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=C%C3%A9lulas_B_de_la_zona_marginal&oldid=143023295