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Universidad de La Salle Universidad de La Salle Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle Veterinaria y zootecnia Catálogo General 4-23-2013 Técnicas para el diagnóstico de endoparásitos de importancia Técnicas para el diagnóstico de endoparásitos de importancia veterinaria veterinaria Efraín Vicente Benavides Ortiz Universidad de La Salle, Bogotá, efbenavides@unisalle.edu.co Follow this and additional works at: https://ciencia.lasalle.edu.co/edunisalle_veterinaria-zootecnia Recommended Citation Recommended Citation Benavides Ortiz, Efraín Vicente, "Técnicas para el diagnóstico de endoparásitos de importancia veterinaria" (2013). Veterinaria y zootecnia. 11. https://ciencia.lasalle.edu.co/edunisalle_veterinaria-zootecnia/11 This Libro is brought to you for free and open access by the Catálogo General at Ciencia Unisalle. It has been accepted for inclusion in Veterinaria y zootecnia by an authorized administrator of Ciencia Unisalle. For more information, please contact ciencia@lasalle.edu.co. https://ciencia.lasalle.edu.co/ https://ciencia.lasalle.edu.co/edunisalle_veterinaria-zootecnia https://ciencia.lasalle.edu.co/libros-catalogo-general https://ciencia.lasalle.edu.co/edunisalle_veterinaria-zootecnia?utm_source=ciencia.lasalle.edu.co%2Fedunisalle_veterinaria-zootecnia%2F11&utm_medium=PDF&utm_campaign=PDFCoverPages https://ciencia.lasalle.edu.co/edunisalle_veterinaria-zootecnia/11?utm_source=ciencia.lasalle.edu.co%2Fedunisalle_veterinaria-zootecnia%2F11&utm_medium=PDF&utm_campaign=PDFCoverPages mailto:ciencia@lasalle.edu.co Técnicas para el diagnóstico de endoparásitos de importancia veterinaria pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 1 11/19/14 9:03 PM pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 2 11/19/14 9:03 PM Técnicas para el diagnóstico de endoparásitos de importancia veterinaria Efraín Benavides Ortiz 2014 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 3 11/19/14 9:03 PM ISBN: 978-958-8572-84-0 © Primera edición: Bogotá, abril del 2013 Primera reimpresión: Bogotá, noviembre del 2014 Oficina de Publicaciones Cra. 5 N.° 59A-44 Teléfono: 3 48 80 00 exts.: 1224-1227 Fax: 2 17 08 85 publicaciones@lasalle.edu.co Dirección Carlos Enrique Carvajal Costa, Fsc. Vicerrector Académico Dirección editorial Guillermo Alberto González Triana Coordinación editorial Marcela Garzón Gualteros Corrección de estilo María Elvira Mejía Diagramación Precolombi EU-David Reyes Carátula Giovanny Pinzón Las imágenes de la portada ilustran al protozoario flagelado Giardia canis en una muestra copro- lógica de un paciente canino. La imagen superior izquierda muestra el organismo teñido con lugol y la margen inferior derecha es una coloración de Giemsa, donde se notan con mayor detalle los flagelos y los nucléolos que semejan ojos. La mayoría de las fotografías de este manual son originales de su autor. En caso contrario se brinda el crédito correspondiente. Impresión Xpress Estudio Gráfico y Digital S. A. Benavides Ortiz, Efraín Técnicas para el diagnóstico de endoparásitos de importancia veterinaria / Efraín Benavides Ortiz. -- Bogotá: Universidad de la Salle, 2013. 179 p.; 14 x 21 cm. Incluye referencias bibliográficas. ISBN:v 978-958-8572-84-0 1. Veterinaria 2. Ganado vacuno - Enfermedades - Diagnóstico 3. Parasitología veterinaria 4. Parásitos del ganado I. Tít. 636.089 cd 21 ed. A1387733 CEP-Banco de la República-Biblioteca Luis Ángel Arango pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 4 11/19/14 9:03 PM Contenido Agradecimientos 15 Prefacio 17 Introducción 19 Recolección y procesamiento de muestras fecales para parasitología veterinaria 25 Obtención y transporte de la muestra 26 Procesamiento 28 Técnicas de análisis coproparasitario 31 Examen de frotis fecal directo 35 Preparación de una suspensión patrón de heces 37 Flotación cualitativa y cuantitativa 40 Técnica de McMaster para el recuento de huevos de parásitos en la materia fecal 43 Prueba de sedimentación fecal para el diagnóstico de huevos de trematodos 48 Técnica de flotación, centrifugación diferencial para Fasciola hepatica 53 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 5 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz6 Prueba modificada de Baermann para la búsqueda de larvas de parásitos en la materia fecal 54 Extracción de larvas de parásitos pulmonares (mini-Baermann) 57 Separación de larvas de parásitos pulmonares del bovino, a partir de la solución patrón de heces 59 El cultivo de larvas de nematodos gastrointestinales 61 Técnicas adicionales auxiliares para la detección de parásitos en animales domésticos y silvestres 67 Técnica de la cinta adhesiva para el diagnóstico de Oxyuriosis en equinos o prueba de Graham 67 Técnica de formol-éter para el diagnóstico de protozoos 70 Técnicas para el diagnóstico de criptosporidiosis 73 Coloración de Giemsa para el diagnóstico de criptosporidiosis 74 Coloración modificada de Ziehl Neelsen para el diagnóstico de criptosporidiosis 75 Esporulación de ooquistes de coccidias para identificación 77 Criterios de interpretación de recuentos de huevos de parásitos en heces de diversas especies animales 79 La diferenciación de larvas de helmintos de bovinos y equinos que surgen en el cultivo de materia fecal a partir de huevos tipo Strongylo 89 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 6 11/19/14 9:03 PM contenido 7 Clave para identificación de larvas obtenidas del cultivo de heces de rumiantes 90 La identificación de larvas procedentes del cultivo larvario de equinos 92 Galería de huevos de parásitos que se pueden encontrar en diversas especies animales 95 Materiales y reactivos utilizados en las pruebas 105 Diversos tipos de soluciones utilizadas para la flotación 106 Solución de Dennis (solución de detergente para sedimentación) 108 Coloración de Giemsa para diagnóstico de criptosporidiosis 108 Reactivos para la prueba de Ziehl Neelsen modificada para diagnóstico de criptosporidiosis 109 Bibliografía 111 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 7 11/19/14 9:03 PM pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 8 11/19/14 9:03 PM Lista de figuras Figura 1. Materiales utilizados en el laboratorio para el desarrollo de la mayoría de pruebas para el examen coprológico de diversas especies animales 34 Figura 2. Microscopio y estereoscopio utilizados en las pruebas para el diagnóstico de endoparásitos 34 Figura 3. Pasos en la preparación de un frotis fecal directo 36 Figura 4. Examen sistemático de la laminilla conteniendo la muestra en el examen coproparasitario a un aumento de 10X 37 Figura 5. Descripción del procedimiento para la preparación de la suspensión patrón de heces para el examen coprológico de cualquier especie animal, con énfasis en herbívoros 39 Figura 6. Pasos en la preparación de una suspensión patrón de heces 40 Figura 7. Prueba de flotación 42 Figura 8. Cámara de McMaster para el recuento de huevos de parásitos 44 Figura 9. Pasos en la ejecución de la técnica de McMaster 46 Figura 10. Recuento de huevos de parásitos en las celdas de la cámara de McMaster 46 Figura 11. Cámara de Whitlock, McMaster para recuento cuantitativo de la excreción de huevos de parásitos 48 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 9 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz10 Figura 12. Pasos en el desarrollo de la prueba de sedimentación 50 Figura 13. Resultado de una prueba de sedimentación positiva para el hallazgo de huevos de Fasciola hepatica 51 Figura 14. Diagnóstico de infección por Fasciola hepatica con la prueba de sedimentación 51 Figura 15. Huevo del trematodo Fasciola hepatica utilizando una solución débil de azul de metileno como contraste 52 Figura 16. Ooquiste de Buxtonella sulcata en las heces de un rumiante obtenido por el método de sedimentación (40X) 52 Figura 17. Aparato de Baermann 56 Figura 18. Larva de parásito pulmonar en heces frescas de pequeños rumiantes,extraída mediante la prueba de Baermann 56 Figura 19. Montaje de la técnica de mini-Baermann para el diagnóstico de parásitos pulmonares usando tubos de ensayo de 15 ml 58 Figura 20. Pasos en el desarrollo del cultivo larvario en el laboratorio 63 Figura 21. Larvas parasíticas de nematodos gastrointestinales de rumiantes y estructuras que permiten su clasificación 64 Figura 22. Características que permiten la diferenciación del tipo de nematodos que ocurren en los equinos a partir del cultivo larvario 65 Figura 23. Larva de Haemonchus spp. procedente de un cultivo larvario de rumiante 65 Figura 24. Identificación de larvas de nematodos de equinos que se observan en el cultivo larvario, con base en la relación cuerpo:cola y las células intestinales 66 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 10 11/19/14 9:03 PM lista de figuras 11 Figura 25. Pasos en la preparación de los bajalenguas para la prueba de Graham 69 Figura 26. Imágenes Oxyuris equi 69 Figura 27. Morfología característica de los huevos de Oxyuris equi obtenida mediante la técnica de la cinta engomada 70 Figura 28. Trofozoito del protozoario Giardia canis en una muestra coprológica de canino teñida con lugol 40X 71 Figura 29. Trofozoito (A) y ooquiste (B) de Giardia canis en una muestra concentrada por el método de formol-éter y teñida con Giemsa 72 Figura 30. Ooquistes de Cryptosporidium parvum teñidos con una modificación de la coloración ácido alcohol resistente 76 Figura 31. Ooquiste no esporulado del protozoario Eimeria spp. 78 Figura 32. Huevo de nematodo de la familia Trichostrongylidae en las heces de un rumiante 82 Figura 33. Elipses de las dimensiones de huevos de nematodos del orden Strongylida de parásitos gastrointestinales que ocurren en la oveja en Escocia y que se excretan en la materia fecal 83 Figura 34. Diversos tipos de ooquiste no esporulado del protozoario Eimeria spp., que es factible hallar en la materia fecal de rumiantes 86 Figura 35. Clave dicotómica para la identificación las larvas de nematodos gastrointestinales del orden Strongylida 91 Figura 36. Larva de un nematodo de vida libre que se encuentra en el cultivo larvario cuando la muestra se recolecta del suelo 91 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 11 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz12 Figura 37. Larva de Strongyloides papillosus aobtenida en un cultivo larvario de bovinos 92 Figura 38. Larva de un nematodo de la subfamilia Cyathostominae obtenida en un cultivo larvario de equinos 94 Figura 39. Huevos encontrados en una flotación de materia fecal de un ternero 96 Figura 40. Huevo con doble opérculo de Trichuris ovis, hallado en una prueba de sedimentación 96 Figura 41. Huevos elipsoidales morulados, correspondientes a la familia Trichostrongylidae en rumiantes 97 Figura 42. Muestra de un ternero en la región de la Macarena, Meta 97 Figura 43. Huevo (oncosfera) de Moniezia benedeni de los bovinos 99 Figura 44. Huevos de la tenia del equino Anoplocephala perfoliata 99 Figura 45. Huevo de forma triangular de la tenia de los equinos Anoplocephala perfoliata 100 Figura 46. Huevos de Ascaris suum (izquierda) y del acantocéfalo Macracanthorhynchus hirudinaceus hallados en las heces de un porcino 100 Figura 47. Huevos de Nematodirus spp. de los ovinos de forma romboide y mórulas grandes, acompañados de huevos de Strongyloides papillosus 101 Figura 48. Materia fecal de ovino 102 Figura 49. Flotación cuantitativa obtenida a partir de una muestra de materia fecal de ovino examinada a 100X 102 Figura 50. Huevos de helmintos que es posible encontrar en las heces de caninos y felinos 103 Figura 51. Diferenciación de huevos de ascárido que ocurren en el canino con base en su morfología 104 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 12 11/19/14 9:03 PM Lista de tablas Tabla 1. Ventajas y limitaciones de algunas técnicas utilizadas para la detección de parásitos en las heces de animales domésticos 32 Tabla 2. Modelo sugerido de formato para la organización y presentación de resultados cuantitativos en el examen de materia fecal de rumiantes en búsqueda de parásitos internos 84 Tabla 3. Formato para la organización y presentación de resultados cuantitativos en el examen coprológico de équidos 85 Tabla 4. Características para diferenciación de huevos de nematodos del orden Strongylida que ocurren en el caballo 93 Tabla 5. Características útiles para diferenciar larvas (L3) de nematodos del orden Strongylida que ocurren en el equino, con énfasis en los Strongilos 94 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 13 11/19/14 9:03 PM pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 14 11/19/14 9:03 PM Agradecimientos Siempre recordaré con agrado mis primeros años de entrena- miento en el laboratorio de parasitología veterinaria del Labo- ratorio de Investigaciones Médicas Veterinarias (limv), Instituto Agropecuario (ica), bajo la tutela del doctor Guillermo Mateus Valles (q.e.p.d.) y los compañeros del Programa de Parasitología Veterinaria del ica: Otoniel Vizcaíno Gerdts, Gustavo López Valencia, Danilo Parra Gil y Carlos Villar Cleves. Un reconoci- miento especial a los colegas y amigos por ese apoyo en la for- mación y el aprendizaje conjunto en el ámbito de la parasitología veterinaria. También deseo agradecer a las directivas de la Universidad de La Salle, al decano de la Facultad de Ciencias Agropecuarias, Dr. Luis Carlos Villamil, y al director del programa de Medicina Veterinaria, Dr. Juan Fernando Vela, por el apoyo y palabras de aliento para sacar adelante esta iniciativa. Finalmente, un gran sentimiento de gratitud amistad y ca- maradería con Aquilino Rincón Sánchez y José Antonio Ávila Velásquez, auxiliares del laboratorio de Parasitología Veterinaria de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad de La Salle, quienes me han colaborado en hacer realidad el desarrollo de estas técnicas en nuestra facultad. Efraín BEnavidEs Ortiz 2013 pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 15 11/19/14 9:03 PM pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 16 11/19/14 9:03 PM Prefacio En la actualidad, las enfermedades parasitarias de las diferentes especies animales constituyen una seria limitante en el proceso de desarrollo animal, así como en los sistemas de producción. Las condiciones climáticas, la temperatura, la humedad y la presencia de flora y fauna se convierten en condiciones ideales para el desarrollo parasitario; aunque en el mercado se dispone de sustancias químicas para su control, no se logra la disminu- ción del problema por cuanto se carece de métodos sencillos y modernos para el correcto diagnóstico, identificación, estudio de poblaciones parasitarias, su bioecología y ciclos biológicos. Los ganaderos invierten elevadas sumas de dinero en el control parasitario en aplicaciones desde un día de nacidos los animales sin conocimiento de los parásitos existentes y con el perjuicio de ir seleccionando los genes resistentes. Por otra parte, el calentamiento global también está influ- yendo en la aparición de parásitos tanto internos como externos, sobre todo en altitudes que antes les eran impropias; por lo tanto, un buen diagnóstico de los parásitos debe contribuir a que se controle de manera efectiva; sin embargo, esto solo se logra con pruebas sencillas y a la vez eficaces, utilizadas en los laborato- rios de diagnóstico, en facultades de Medicina Veterinaria y en el ejercicio particular. Desde 1979 solo se contaba con el Manual de técnicas de parasitología y entomología veterinaria del Instituto Colombiano pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 17 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz18 Agropecuario (ica), editado por los médicos veterinarios Parra y Vizcaíno. La presente publicación es la culminación del com- promiso con la docencia, la investigación yla transferencia tecnológica, hecho por el médico veterinario Efraín Benavides Ortiz, doctorado en Epidemiología Veterinaria con toda una vida dedicada a la investigación y a la docencia. En el libro se recogen metodologías con las cuales será posible estandarizar esos procesos en las diferentes facultades de Medicina Veterina- ria y en los laboratorios de diagnóstico, con el fin de lograr una formación homogénea de estudiantes y profesionales de campo. Las diversas imágenes serán la mayor ayuda en el diagnóstico parasitológico. Estas son elaboración propia del autor. GustavO lópEz valEncia Médico Veterinario, MSc. Parasitólogo Instituto Colombiano de Medicina Tropical pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 18 11/19/14 9:03 PM Introducción La parasitología es la ciencia que estudia los parásitos; organis- mos que viven dentro o sobre otros organismos vivos, obtenien- do de ellos nutrientes sin brindar compensación a cambio. De cualquier forma se entiende que el asunto se trata de la convi- vencia entre diversos organismos animales, en la que existe un componente coevolutivo, por lo cual se habla de diversos niveles de esa asociación y se describe la ocurrencia de comensalismo, mutualismo, simbiosis, foresis y parasitismo propiamente di- cho, lo cual, por lo general, ha implicado que el parásito viva a costa del animal del que obtiene su sustento. Sin embargo, en la naturaleza, la convivencia tiende a llegar a niveles de equilibrio por lo que no necesariamente el parasitismo es perjudicial para el animal con el que convive. En consecuencia, se ha sugerido (Soulsby, 1982) que se debe entender el concepto de parasitis- mo como una relación en la cual un organismo (el parásito) es dependiente metabólicamente en mayor o menor extensión de otro organismo (el huésped). En términos biológicos se consi- dera que un parásito está más adaptado a su huésped, cuando le produce menor daño (Botero y Restrepo, 1999). En términos amplios, las definiciones de parasito y parasi- tismo abarcan todas las asociaciones biológicas entre organis- mos vivos, también pueden involucrar a organismos patógenos de distintos niveles del árbol de la vida, virus, bacterias, hon- gos, etc., pero, por costumbre, en las ciencias médicas y en las pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 19 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz20 veterinarias generalmente se ha restringido el término parásito solamente para organismos eucariotas y metazoarios, es decir, los protozoarios, helmintos y artrópodos (Soulsby, 1982; Botero y Restrepo, 1999). Aunque existen diversas formas de clasificar los organismos parásitos, generalmente estos se catalogan de acuerdo con su ubi- cación, es decir, pueden ser parásitos externos o ectoparásitos y parásitos internos o endoparásitos. Mientras los artrópodos, en su mayoría, actúan como ectoparásitos, los endoparásitos están representados por los protozoarios, organismos eucariotas uni- celulares microscópicos y por los helmintos, organismos meta- zoarios que están actualmente agrupados en tres filos del reino animal: Acantocephala, Platyhelmintes y Nematoda (Soulsby, 1992; Bowman, 2009). Los ciclos de vida de estos organismos son diversos y com- plejos. En la evolución conjunta se han embebido en las cadenas alimenticias y hábitos de los huéspedes e incluyen componentes parasíticos dentro del animal y de vida libre en el ecosistema; sin embargo, su entrada y salida del organismo parasitado ocurre a través del sistema digestivo —con excepción de los organismos que son transmitidos por la picadura de un vector artrópodo o los que penetran activamente a través de la piel—. Entonces, en las materias fecales de las diversas especies animales se pueden encontrar huevos, larvas, trofozoítos, ooquistes y ocasionalmen- te parásitos adultos de endoparásitos que habitan en el tracto digestivo y en el sistema biliar, pero también de los parásitos pulmonares y del sistema nervioso y circulatorio (Sloss, 1970; Thienpont, Rochette y Vanparijs, 1979). Esto brinda la oportuni- dad de utilizar las heces como punto importante de partida para el diagnóstico e investigación parasitológica; la descripción de estas técnicas es un componente central de este manual, el cual se acompaña de imágenes ilustrativas. pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 20 11/19/14 9:03 PM introducción 21 La primera experiencia del autor de este manual con las téc- nicas parasitológicas requeridas para el examen coprológico fue en el Laboratorio de Investigaciones Médicas Veterinarias (limv) del Instituto Colombiano Agropecuario (ica), a inicios de la dé- cada del ochenta. En este laboratorio estaban en curso diversas investigaciones sobre la epidemiología de parásitos en rumian- tes (Rivera, Parra, García y Aycardi, 1983) y se procesaban las muestras que llegaban al centro de diagnóstico de Bogotá. Las técnicas allí utilizadas eran las recopiladas a partir del texto de Parra y Vizcaíno (1979), el cual es una referencia imprescindible para el parasitólogo veterinario en Colombia. Esas técnicas se estandarizaron en Colombia en el marco de proyectos de coo- peración internacional, particularmente, gracias a los convenios del ica con Texas A&M y el convenio colombo-inglés. Posteriormente en el Centro de Medicina Veterinaria Tropi- cal (ctvm), de la Universidad de Edimburgo, en el marco de la maestría en Ciencia Veterinaria Tropical se volvieron a retomar estas técnicas en el curso de helmintología aplicada (Sewell, Hammond y Wright, 1983). En esta ocasión fue interesante estu- diar diversas modificaciones de las técnicas, principalmente para permitir su aplicabilidad bajo diversas y adversas condiciones en el trópico, con énfasis especial en las condiciones de los ser- vicios veterinarios de las excolonias británicas en Asia y África, donde los problemas parasitarios son de primera importancia en animales domésticos y silvestres. Las técnicas desarrolladas en el ctvm son concordantes con aquellas recomendadas por el Central Veterinary Laboratory en Gran Bretaña (maff, 1977) y que han sido publicadas en el Manual de investigación veteri- naria (Davies, 1990); ahora bien, estas técnicas son ligeramente diferentes de las desarrolladas en Norteamérica, pero conservan similares principios (Sloss, 1970). En este caso, las técnicas tien- den a adquirir formatos para ser comercializadas, adquiriendo pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 21 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz22 nombres específicos y desarrollando variaciones comerciales para ser aplicadas en finca o consultorio. Desde los centros de diagnóstico veterinario del ica, don- de actué como coordinador de la red a inicios de la década del noventa, fue posible constatar que existía una gran diversidad de protocolos de prueba para el diagnóstico de parásitos inter- nos de animales. Mientras unos centros proferían resultados de forma cuantitativa (huevos por gramo: hpg), otros solo indicaban la presencia o la ausencia de huevos de parásitos y otros lo hacían en forma semicuantitativa utilizando cruces (+, ++, -) para indicar la intensidad de presencia de huevos o larvas de parásitos en una muestra. Este deficiente método de diagnóstico sigue siendo la forma principal de entregar los re- sultados de análisis coprológicos en el territorio colombiano. Se sabe que un certero diagnóstico cuantitativo es requerido en diversas especies animales, principalmente en herbívoros (Sloss, 1970; maff, 1977; Thienpont et ál., 1979). De esa deficiencia surge la primera motivación para la pre- paración de este texto, ya que se requiere estandarizar métodos de diagnóstico en los laboratorios de parasitología veterinaria, de forma que los resultados de esos análisis ayuden a racionalizar el uso intenso, muchas veces innecesario, de antihelmínticos que se realiza en el campo colombiano. La necesidad de un diagnóstico certero es reafirmada por la aparición y la confirmación dela presencia de poblaciones de endoparásitos resistentes a diversos grupos de antihelmínticos en varias especies animales, pero con énfasis en pequeños rumiantes y en equinos, en diversas regio- nes del globo: Taylor y Hunt (1989), Kaplan, Klei, Lyons, et ál. (2004); en Sudamérica: Waller, Echevarria, Eddi, Maciel, Nari y Hansen (1995), Almeida, García, Torgerson y Amarante (2010); y en el país: Márquez, Jiménez, García y Garzón (2008), Barragán y Benavides (2011). pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 22 11/19/14 9:03 PM introducción 23 La elaboración de este manual se retomó como parte de ac- tividades académicas en el programa de Medicina Veterinaria, de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad de La Salle, en la que se tiene a cargo la cátedra de parasitología veterinaria desde el 2004. Con la presente publicación se quiere brindar una base textual y de imágenes que faciliten la formación del estudiante de Medicina Veterinaria y ciencias relacionadas; asimismo, se quiere iniciar el diálogo necesario que se requiere para que en el territorio nacional exista una homologación de procesos y estandarización de técnicas en nuestros laboratorios veterinarios, de forma que se llegue a protocolos unificados y criterios claros de interpretación de resultados. Por otra parte, fuera de los textos básicos de parasitología veterinaria que se han tenido como base para el afinamiento de estas técnicas y que se describieron en párrafos precedentes, se han consultado diversas fuentes de información en Internet y se ha tratado de poner información para los estudiantes en estos medios, ya que actualmente se ha sugerido el amplio uso de tecnologías de la información y la comunicación (tic) para la enseñanza de la parasitología veterinaria (Vercruysse y Eckert, 2002). Las prin- cipales fuentes consultadas en la Web incluyen el proyecto cal Diagnostics of Veterinary Endoparasitic Infections, de la Univer- sidad de Pennsylvania (Nolan, 2004) y la Guía del Royal Vete- rinary Collegue (rvc)/faO: Diagnostic Veterinary Parasitology. Las técnicas se han adaptado bajo nuestras condiciones y las que aquí se recomiendan han sido seleccionadas por su robustez, su aplicación sencilla y por la capacidad de reproducción de los resultados, además de tener como premisa el uso de materiales de fácil consecución en cualquier lugar de nuestra geografía. pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 23 11/19/14 9:03 PM pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 24 11/19/14 9:03 PM Recolección y procesamiento de muestras fecales para parasitología veterinaria En el presente capítulo se describen de forma resumida varias de las técnicas que se utilizan para demostrar la presencia de huevos, quistes, trofozoítos o larvas de parásitos en las heces de animales domésticos, silvestres o en el hombre. Las técnicas se han seleccionado de acuerdo con su capacidad de ejecución ba- jo condiciones de practicidad y robustez; se comparan diversas fuentes y textos sobre el particular, pero también se tiene como premisa de base la experiencia del autor. Para el estudiante in- teresado en el tema se sugiere consultar la sección de técnicas que casi todo texto de parasitología posee. Adicionalmente, se cuenta con dos fuentes de internet: • La guía interactiva de diagnóstico parasitológico veterinario del rvc/faO (Gibonns et ál., 2005): http://www.rvc.ac.uk/ review/Parasitology/Index/Index.htm • La página del proyecto cal, de la universidad de Pennsylva- nia, para diagnóstico de endoparasitos: http://cal.vet.upenn. edu/projects/dxendopar/index.html Mientras la primera fuente enfatiza en el tema de los parásitos de especies de interés productivo, principalmente rumiantes, la se- gunda página posee interesante información relacionada con los pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 25 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz26 parásitos de caninos y felinos. Las técnicas difieren ligeramente entre las diversas fuentes de información, pero los principios generales de uso y de interpretación son los mismos. Antes de proceder a describir cada una de las técnicas es importante tener en cuenta algunas recomendaciones generales sobre recolección, mantenimiento durante el transporte y prin- cipios básicos para el procesamiento de las muestras. Obtención y transporte de la muestra Estas recomendaciones generales están dirigidas a asegurar que la muestra que se procesa en el laboratorio llegue en un estado no deteriorado que permita la certera identificación del parásito que afecta al animal (Sloss, 1970; maff, 1977; Thienpont et ál., 1979; Parra y Vizcaíno, 1979): • Idealmente, las heces se deben procesar lo más rápido po- sible luego de salir del animal. La muestra es mucho más representativa si se asegura la recolección directamente del recto de los animales. • En el caso de animales indómitos o cuando se trabaja con fauna silvestre, la sujeción del animal se dificulta y se requie- re trabajar con muestras recolectadas del suelo. Ante estas situaciones se debe asegurar que la muestra se recolecta lo más rápido posible luego de la deposición, ojalá observando al animal a la distancia y luego recolectando la muestra, pues es posible que nematodos de vida libre (no parasitarios) la contaminen, lo que entorpece el diagnóstico. • Las muestras se deben poner en un recipiente hermético o en una bolsa plástica sellada, para evitar que se desequen. La base de la conservación es asegurar que en el recipiente quede pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 26 11/19/14 9:03 PM recolección y procesamiento de muestras fecales 27 la menor cantidad de aire posible. Es necesario no olvidar, identificar adecuadamente la muestra. • Si el proceso de las muestras no se puede realizar inme- diatamente, entonces se debe asegurar que las muestras se procesan adecuadamente para evitar su deterioro. Se sugiere utilizar uno de estos dos procesos: – Refrigerar las muestras, lo cual puede asegurar el mante- nimiento de estas hasta por cinco días (pero se debe evitar su congelación). Para que este método de conservación tenga éxito se requiere extraer la mayor cantidad de aire posible del recipiente. Este proceso no se recomienda cuando se requiere el examen de larvas vivas mediante la técnica de Baermann. – Fijar la muestra usando formol al 10%, añadiendo fijador a las heces a una proporción de 3:1 (volumen muestra: vo- lumen fijador) y mezclando bien. Si se quiere examinar la muestra para quistes de protozoos es mejor usar formol al 5% en solución salina. Las fijación de muestras en formol permite la conservación prácticamente indefinida y es muy usada en el estudio de parásitos de especies silvestres, pero se debe tener en cuenta que inhabilita procesos que requieren parásitos vivos (Baermann, cultivo larvario). • Si el animal ha sido tratado con antidiarreicos que contie- nen caolin o bismuto, aceite mineral o material de contraste para radiografía (bario), lo mismo que algunos antibióticos; todos estos materiales flotan y hacen difícil o imposible el hallazgo de parásitos. En estos casos, el examen coprológico se debe repetir cinco o diez días después luego de suspender el tratamiento. pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 27 11/19/14 9:03 PM efraín benavides ortiz28 Procesamiento Los procesos de análisis de muestras se realizan en laborato- rios de parasitología veterinaria o en laboratorios clínicos ve- terinarios, bien de investigación, docencia o servicio. En cada laboratorio es importante verificar los procesos de catálogo y manejo de información, además de tener en cuenta las debidas consideraciones de bioseguridad, entendiendo que algunos de los parásitos de animales domésticos o silvestres pueden tener potencial zoonótico. Afortunadamente, ese potencial zoonótico difiere según la especie animal que se trabaje y es importante que el laboratorista conozca las peculiaridades del ciclo devida de los organismos que espera encontrar durante el examen (Soulsby, 1983; Botero y Restrepo, 1999), para así tomar las precauciones necesarias. Se puede afirmar que el riesgo zoonótico es menor cuando se trabaja con muestras fecales de rumiantes y equinos, mientras es alto cuando se trabaja con muestras de cánidos y félidos, pero también de la especie porcina. • Primero, examine las heces para examinar la presencia de sangre o cualquier material anormal; luego examine el inte- rior del material para evidenciar la presencia de segmentos de tenias (los que se mueven y se tratan de alejar de la masa fecal) o de parásitos enteros. • Existen diversas técnicas que se han diseñado para aumentar la probabilidad de recobrar las larvas o huevos de parásitos presentes en la muestra. Cada tipo de prueba posee sus mé- ritos y limitaciones y se debe tratar de usar la prueba que sea más apropiada para el tipo de parásito que se quiera encon- trar. En esta consideración se debe tener en cuenta la especie animal con la que se trabaja. pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 28 11/19/14 9:03 PM recolección y procesamiento de muestras fecales 29 • Para su adecuada ejecución se debe asegurar seguir paso a paso los procesos descritos para cada una de las técnicas. Algunos estudiantes y profesionales buscan tomar atajos para disminuir la labor y el tiempo requerido en los procesos de laboratorio; esto generalmente lleva a resultados desastrosos, pues los resultados poseen bajo nivel de confiabilidad. • La repetición de un análisis coprológico de un animal o gru- po de animales, en particular, se sugiere bajo las siguientes situaciones: – Los signos clínicos sugieren parasitismo, pero el examen resulta negativo. Repita la prueba en dos o tres días. Re- pita el examen hasta por tres veces en un periodo de siete a diez días. Si en este caso no se encuentran parásitos, lo más probable es que el animal no esté infectado y que el problema tenga otra causa. – Cuando la muestra se recolecta muy rápido después de tratamiento parasitológico específico, el tiempo de espera debe ser superior a las dos semanas. El tema de evalua- ción de la presencia de resistencia a los antihelmínticos se explica en un protocolo específico (Coles, Jackson, Pomroy et ál., 2006). pi Tecnicas para el diagnostico_final.indd 29 11/19/14 9:03 PM Técnicas para el diagnóstico de endoparásitos de importancia veterinaria Recommended Citation tmp.1665500042.pdf.t3pYU
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