Estado de avance 2022 INIQUI- Rivero Mariano

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INFORME DE AVANCE DE TESIS 
Rivero Mariano
	
TÍTULO DE LA TESIS: “PRODUCCION DE BIOSURFACTANTES A PARTIR DE MICROORGANISMOS HALOTOLERANTES: OPTIMIZACION, ESCALADO Y ANALISIS DE COSTO-BENEFICIO”
DIRECTORA: Dra. Irazusta, Verónica P 
CODIRECTORA DOCTORADO INGENIERIA: Dra. Gutiérrez Cacciabue, Dolores
CODIRECTORA BECA CONICET: Dra. Rajal, Verónica B
OBJETIVo GENERAL: 
Búsqueda de moléculas biosurfactantes producidas por microorganismos extremófilos, con el fin de estudiarlas, caracterizarlas y producirlas en diferentes escalas para finalmente evaluar su producción a nivel industrial y realizar un análisis de costo-beneficio para comparar con otros surfactantes existentes en el mercado.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
· Búsqueda y evaluación de la propiedad biosurfactante por parte de microorganismos extremófilos. Selección de los microorganismos más prometedores.
· Purificación y caracterización de las biomoléculas producidas.
· Optimización de las condiciones de producción de los biosurfactantes en Erlenmeyer agitado.
· Escalamiento y optimización de la producción en biorreactor a escala laboratorio. 
· Evaluación costo-beneficio de los biosurfactantes obtenidos y su comparación con los surfactantes existentes en el mercado.
Tareas realizadas durante 2022
Selección de una cepa para la producción y optimización de biosurfactantes: a partir de ensayos previos se seleccionó la cepa Lactobacillus paracasei a1 entre otras razones debido a su condición GRAS (Generally Recognized as Safe). Se realizaron diferentes ensayos experimentales utilizando la cepa a1 para optimizar el medio de producción utilizando distintos factores físicos y químicos de crecimiento como también, distintas formulaciones del medio de cultivo. La producción de biosurfactantes se evaluó indirectamente mediante la disminución de la tensión superficial (TS) en el sobrenadante del medio de producción (biosurfactante excretado) y en el buffer fosfato (PBS). Este último se utilizó para el lavado de las células, donde queda adherido una parte del bioproducto de interés. Se realizó un diseño factorial tipo Plackett Burman utilizando 11 variables y se seleccionaron algunas para para los ensayos en laboratorio. Los experimentos se llevaron a cabo variando un factor a la vez para las variables: pH, relación C/N, FeSO4 y aceite. Luego se realizó un diseño factorial de optimización tipo Box Behnkhen variando los factores temperatura, pH y concentración de caldo nutritivo. Las respuestas medidas fueron el cambio en la TS entre el medio estéril y el de producción con crecimiento microbiano (ΔTS), el cambio en la TS entre el PBS estéril y el PBS de lavado (ΔTS-PBS) y la densidad óptica. Se determinaron los rangos óptimos de producción a partir del modelo obtenido y se verificó mediante modelos de redes neuronales. La tensión superficial se midió de forma rutinaria utilizando el método de gota colgante.
Purificación y caracterización de las biomoléculas obtenidas 
Se produjo biosurfactante en cantidad y se inició el proceso de purificación mediante acidificación del sobrenadante, seguido de lavados y centrifugación. Sobre este sólido se realizaron extracciones sucesivas y se inició el proceso de caracterización mediante cromatografía en capa fina (TLC). Posteriormente, se evaluaron las fracciones obtenidas por su capacidad de reducir la TS mediante la técnica de la gota colgante.
PUBLICACIÓN CIENTÍFICA
High throughput screening of the potential biosurfactants production by extremophiles isolated from vinasse and black liquor. Rivero M, Gutiérrez-Cacciabue D, Sanguino-Jorquera DG, Rajal VB, Irazusta VP. 2022. Results in Engineering. In prees. https://doi.org/10.1016/j.rineng.2022.100587 
PARTICIPACIÓN EN VENTOS científico-tecnológicos:
2022. Rivero M, Coronel CV, D´Ambrosio-Ornass AE, Viltes Sánchez AS, Cuesta P, Wierna V, Gutiérrez-Cacciabue D, Rajal VB, Irazusta VP. Biosurfactantes: producción, caracterización y evaluación a nivel industrial. XV-JCyT NOA Modalidad Poster.
2022. Rivero M, Sanguino-Jorquera DG, Diedrich E, Gutiérrez-Cacciabue D, Rajal VB, Irazusta VP. OPTIMIZATION OF CULTURE MEDIUM FOR MICROBIAL BIOSURFACTANTS PRODUCTION. Congreso SAMIGE Modalidad Poster.
PARTICIPACIÓN EN PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN
· 2019-2023. “Estudio de microorganismos halófilos aislados de salares del NOA: Aplicaciones agronómicas y biotecnológicas” Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica PICT A-2017-1909. Res 310/18. Dirigido por Dra. Verónica Irazusta. 
· 2021-2023. “A multidisciplinary approach to characterize extremophile bacteria isolated from “Salar del Hombre Muerto”: applications in agro-ecology and human health”. Proyecto Internacional ECOS-Sud en colaboración con CIRAD-Montpellier Francia. Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación de Argentina (MINCyT) y ECOS-sud Francia, Université de Paris. Código del proyecto A19S06. Dirigido por Dra. Verónica Irazusta.
· 2021-2022. “Biosurfactantes: producción, caracterización y evaluación a nivel industrial.” PIE N° 2690/0 CIUNSa “Programa de apoyo al Fortalecimiento de la Ciencia y Técnica en Universidades Nacionales - Convocatoria 2019”, financiado por la Secretaría de Políticas Universitarias (SPU). Dirigido por Dra. Verónica Irazusta. 
· 2022-2025. "Productos Biotecnológicos a partir de microorganismos extremófilos" Proyecto A N° 2727. Financia CIUNSa. Res 172/2021-CCI. 1/01/2022-31/12/2025.
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