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COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
CLAVE: 
CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 1 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
2023-01-11 
FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
2029-01-11 
SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
CONTROL DE EMISIÓN 
Elaboró: Revisó: Autorizó: 
Nombre: Alejandro Galindo García 
Imelda Rocío Guzmán 
Cervantes 
Imelda Rocío Guzmán 
Cervantes 
Firma y fecha: 
1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos generales y específicos para la preparación y evaluación del desempeño de 
los medios de cultivo preparados en el Departamento de Análisis y Desarrollo de Pruebas Microbiológicas 
de la Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura (CCAYAC). 
2. ALCANCE
Aplica a los medios de cultivo preparados y evaluados en el Departamento de Análisis y Desarrollo de 
Pruebas Microbiológicas de CCAYAC. 
3. DEFINICIONES
 Medios de mantenimiento: Su propósito es mantener cultivos puros para ser usados
posteriormente en otras pruebas o para conservarlos por periodos prolongados de tiempo. Tales
medios son simples en términos de composición y no contienen componentes que puedan
favorecer un crecimiento excesivo.
 Medios Selectivos: Contienen ingredientes que inhiben el crecimiento de microorganismos
indeseables seleccionando de esta manera el o los microorganismos deseados.
 Medios diferenciales: Contienen indicadores como colorantes que permiten diferenciar entre
microorganismos como resultado de reacciones bioquímicas que se llevan a cabo durante el
crecimiento de microorganismos, que se pueden observar mediante el cambio de color del
indicador (colorante).
 Medio de enriquecimiento: Es un medio líquido en el cual la muestra es inoculada con la
finalidad de aumentar la cantidad de ciertos microorganismos y al mismo tiempo suprimir el
crecimiento de otros no deseados.
 Medios selectivos y diferenciales: Son medios solidos que contienen ingredientes que
permiten diferenciar microorganismos de interés de otros que no lo son, del universo de
microorganismos presentes en una muestra.
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COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
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CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 2 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
2023-01-11 
FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
2029-01-11 
SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
 
4. DESARROLLO 
 
Se deben seguir las indicaciones de solicitud de medios, preparación, control de calidad y entrega de 
medios de cultivo conforme a lo indicado en los siguientes incisos 
 
A) SOLICITUD DE MEDIOS DE CULTIVO 
 
La solicitud de medios de cultivo se realiza de la siguiente forma: 
 
A.1. El usuario elabora una solicitud de preparación de medios de cultivo en el CCAYAC-F-227 
“Solicitud de medios de cultivo”, en original y copia. Anotar el nombre del solicitante, fecha y hora 
de solicitud, laboratorio al que pertenece, el nombre y concentración del medio cuando proceda, 
la cantidad en unidades de presentación (cajas Petri, tubos, frascos, matraces) y el volumen de 
cada unidad de presentación. 
A.2. La fecha de recepción de las solicitudes de medios de cultivo es de lunes a viernes. 
A.3. Recepción de solicitudes: el personal del área de medios de cultivo recibe el vale y se revisa que 
cumplan con los datos arriba mencionados y se le asigna a cada medio un número consecutivo 
de solicitud de preparación medio. 
 
A.3.1. Se debe llenar el formato CCAYAC-F-474 “Preparación y evaluación del desempeño de 
medios de cultivo” con los siguientes campos: 
 Medio de cultivo: anotar el nombre del medio solicitado. 
 No. de lote: el formato asigna de manera automática el lote correspondiente a la siguiente 
nomenclatura: dd.mm.hh.ss, donde dd= día de preparación, mm=mes de preparación, 
hh=hora de preparación, ss=segundo de preparación. 
 Cantidad a preparar: el volumen solicitado más un excedente para realizar el control de 
calidad. 
 Fecha de preparación: el día de preparación. 
 Realizado por: la persona que preparó. 
 Formulación: Escribir el o los ingredientes, marca, lote, y cantidad en g o mL por litro. 
 Cantidad requerida para 1000 ml: la computadora realiza el cálculo de la cantidad a pesar. 
 Los demás campos son llenados por el personal encargado de preparar medios de cultivo. 
 El personal encargado del control de calidad llena los campos mencionados en el CCAYAC-
F-474. 
NOTA 1: Los únicos datos generados automáticamente son el número de lote y la cantidad 
requerida a pesar por mL los demás datos deben ser llenados por los técnicos o analistas. 
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CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 3 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
2023-01-11 
FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
2029-01-11 
SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
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NOTA 2: Para el caso de los medios de cultivo cuya formulación es comercial solo se debe 
registrar el nombre del medio, marca, lote y cantidad en g o mL por litro. En caso de que el 
medio se prepare por ingredientes se debe llenar cada uno de los ingredientes utilizados. 
B) PREPARACIÓN 
 
La información de la composición de los medios de cultivo, soluciones y reactivos que se usan para los 
métodos analíticos se encuentra descrita en las fichas técnicas de preparación. 
 
Para consultar las fichas técnicas de preparación de los medio de cultivo, se debe revisar el siguiente 
listado. Al hacer click en el nombre de cada medio se desplegara el archivo en formato PDF 
 
LISTADO DE FICHAS DE MEDIOS DE CULTIVO 
 
AGARES 
CLAVE MEDIO 
AG-1 Agar ASTEL 
AG-2 Agar Azul de Toluidina 
AG-3 Agar Baird Parker 
AG-4 Agar BCYE 
AG-5 Agar de Hierro Kligler (KIA) 
AG-6 Agar de hierro y lisina (LIA) 
AG-7 Agar Entérico de Hektoen 
AG-8 Agar modificado con Celobiosa, Polimixina B y Colistina (mCPC) 
AG-9 Agar Movilidad 
AG-10 Agar Nutritivo 
AG-11 Agar oxford 
AG-12 Agar PALCAM 
AG-13 Agar Sangre de Cordero 
AG-14 Agar Soya Tripticaseina 
AG-15 Agar Sulfito de Bismuto 
AG-16 Agar T1N1 (Agar Triptona y Sal) 
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-6%20Agar%20de%20hierro%20y%20lisina%20(LIA).pdf
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-11%20Agar%20oxford.pdffile://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-12%20Agar%20PALCAM.pdf
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-14%20Agar%20Soya%20Tripticaseina.pdf
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-16%20Agar%20T1N1%20(Agar%20Triptona%20y%20Sal).pdf
 
 
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CCAYAC-CT-03/6 
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FECHA: 2022-07-19 
 
AGARES 
CLAVE MEDIO 
AG-17 Agar TBX 
AG-18 Agar Tiosulfato, Citrato, Sales Biliares y Sacarosa (TCBS) 
AG-19 Agar Urea de Christensen 
AG-20 Agar Xilosa Lisina Desoxicolato 
AG-21 Agar-hierro-triple azúcar (TSI) 
AG-22 Agar Dextrosa Sabouraud 
AG-23 Agar para antibióticos #1 
AG-24 Agar para antibióticos #2 
AG-25 Agar para antibióticos #4 
AG-26 Agar para antibióticos #5 
AG-27 Agar para antibióticos #8 
AG-28 Agar para antibióticos #9 
AG-29 Agar para antibióticos #10 
AG-30 Agar para antibióticos #11 
AG-31 Agar para antibióticos #19 
AG-32 Agar para antibióticos #32 
AG-33 Agar para antibióticos #35 
AG-34 Agar para antibióticos #36 
AG-35 Agar para antibióticos #40 
AG-36 Agar Papa Dextrosa 
AG-37 Agar Glucosa Rojo Violeta Billis (RVBAG) 
AG-38 Agar MacConkey 
AG-39 Agar Cetrimida 
AG-40 Agar Sal Manitol 
AG-41 Medio de enriquecimiento para Clostrodios 
AG-42 Agar Columbia 
AG-43 Agar EMB-L 
AG-44 Agar Citrato de Simmon 
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-19%20Agar%20Urea%20de%20Christensen.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-20%20Agar%20Xilosa%20Lisina%20Desoxicolato.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-21%20Agar-hierro-triple%20azucar%20(TSI).pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-22%20Agar%20Dextrosa%20Sabouraud.pdf
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-26%20Agar%20para%20antibioticos%20No%205.pdf
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-33%20Agar%20para%20antibioticos%20No%2035.pdf
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-35%20Agar%20para%20antibioticos%20No%2040.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-36%20Agar%20Papa%20Dextrosa.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-37%20Agar%20Glucosa%20Rojo%20Violeta%20Billis%20(RVBAG).pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-38%20Agar%20MacConkey.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-39%20Agar%20Cetrimida.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-40%20Agar%20Sal%20Manitol.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-41%20Medio%20de%20enriquecimiento%20para%20Clostrodios.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-42%20Agar%20Columbia.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-43%20Agar%20EMB-L.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-44%20Agar%20Citrato%20de%20Simmon.pdf
 
 
COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
CLAVE: 
CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 5 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
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FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
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SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
 
AGARES 
CLAVE MEDIO 
AG-45 Agar Neutralizante 
AG-46 Agar Glucosa Rojo Violeta Billis (RVBA) 
AG-47 Agar Cuenta Estándar 
AG-48 Agar Indicador PM 
AG-49 Agar Swarm 
AG-50 Agar Mueller-Hinton 
AG-51 Agar Vogel Jhonson 
AG-52 Agar Hígado de Ternera 
AG-53 Agar GVPC 
AG-54 Agar Letheen modificado 
AG-55 Agar Extracto de Malta 
AG-56 Agar Verde Brillante 
AG-57 Agar Eosina Azul de Metileno (AEMB) 
AG-58 Agar SIM 
AG-59 Agar modificado semi-solido Rappaport – Vassiliadis (MSRV) 
AG-60 Agar Listeria acorde a Ottaviani 
 
CALDOS 
CLAVE MEDIO 
CL-1 Caldo Carbohidratos (Ramnosa y Xilosa) 
CL-2 Caldo Cerebro Corazón 
CL-3 Caldo Fraser Completo 
CL-4 Caldo Fraser Medio 
CL-5 Caldo glutamato con minerales modificado (MMGB) 
CL-6 Caldo L-lisina descarboxilasa 
CL-7 Caldo Muller Kauffmann Tetrationato 
CL-8 Caldo Rappaport-Vassiliadis 
CL-9 Caldo Rojo de Fenol 
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-45%20Agar%20Neutralizante.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-46%20Agar%20Glucosa%20Rojo%20Violeta%20Billis%20(RVBA).pdffile://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-47%20Agar%20Cuenta%20Estandar.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-48%20Agar%20Indicador%20PM.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-49%20Agar%20Swarm.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-50%20Agar%20Mueller-Hinton.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-51%20Agar%20Vogel%20Jhonson.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-52%20Agar%20Hígado%20de%20Ternera.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-53%20Agar%20GVPC.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-54%20Agar%20Letheen%20modificado.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-55%20Agar%20Extracto%20de%20Malta.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-56%20Agar%20Verde%20Brillante.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-57%20Agar%20Eosina%20Azul%20de%20Metileno%20(AEMB).pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-58%20Agar%20SIM.pdf
file://///ccayac/Catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-59%20Agar%20modificado%20semi%20solido%20Rappaport%20Vassiliadis%20MSRV.pdf
file://///ccayac/Catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/AGARES%20PDF/AG-60%20Agar%20Listeria%20acorde%20a%20Ottaviani.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-1%20Caldo%20Carbohidratos%20(Ramnosa%20y%20Xilosa).pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-2%20Caldo%20Cerebro%20Corazón.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-3%20Caldo%20Fraser%20Completo.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-4%20Caldo%20Fraser%20Medio.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-5%20Caldo%20glutamato%20con%20minerales%20modificado%20(MMGB).pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-6%20Caldo%20L-lisina%20descarboxilasa.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-7%20Caldo%20Muller%20Kauffmann%20Tetrationato.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-8%20Caldo%20Rappaport-Vassiliadis.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-9%20Caldo%20Rojo%20de%20Fenol.pdf
 
 
COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
CLAVE: 
CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 6 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
2023-01-11 
FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
2029-01-11 
SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
 
CALDOS 
CLAVE MEDIO 
CL-10 Caldo Triptona y Caldos Triptona Sal T1N0,T1N1,T1N3 y T1N6,T1N8 y T1N10 
CL-11 Caldo Tioglicolato 
CL-12 Caldo Soya Tripticaseina 
CL-13 Caldo para antibioticos #3 
CL-14 Caldo para antibioticos #13 
CL-15 Caldo para antibioticos #34 
CL-16 Caldo para antibioticos #39 
CL-17 Caldo para antibioticos #41 
CL-18 Caldo Dextrosa Sabouraud 
CL-19 Caldo Mossel de enriquecimiento para enterobacterias 
CL-20 Caldo MacConkey 
CL-21 Caldo A1 
CL-22 Caldo Lauril Triptosa 
CL-23 Caldo EC 
CL-24 Caldo Triptona 1% 
CL-25 Caldo MR-VP 
CL-26 Caldo Citrato de Koser 
CL-27 Caldo Lactosa Billis Verde Brillante 
CL-28 Caldo Lauril Triptosa con MUG 
CL-29 Caldo Neutralizante 
CL-30 Caldo Soya Tripticaseina Sin dextrosa 
CL-31 Caldo Urea 
CL-32 Caldo Carne Cocida 
CL-33 Caldo Glucosa Purpura de Bromocresol 
CL-34 Caldo Extracto de Malta 
CL-35 Caldo Ácido 
CL-36 Caldo CSTEL 
CL-37 Caldo Letheen modificado 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-10%20Caldo%20Triptona%20y%20Caldos%20Triptona%20Sal%20T1N0,T1N1,T1N3%20y%20T1N6,T1N8%20y%20T1N10.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-11%20Caldo%20Tioglicolato.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-12%20Caldo%20Soya%20Tripticaseina.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-13%20Medio%20para%20antibioticos%20No%203.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-14%20Medio%20para%20antibioticos%20No%2013.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-15%20Medio%20para%20antibioticos%20No%2034.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-16%20Medio%20para%20antibioticos%20No%2039.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-17%20Medio%20para%20antibioticos%20No%2041.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-18%20Caldo%20Dextrosa%20Sabouraud.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-19%20Caldo%20Mossel%20de%20enriquecimiento%20para%20enterobacterias.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-20%20Caldo%20MacConkey.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-21%20Caldo%20A1.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-22%20Caldo%20Lauril%20Triptosa.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-23%20Caldo%20EC.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-24%20Caldo%20Triptona%201%25.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-25%20Caldo%20MR-VP.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-26%20Caldo%20Citrato%20de%20Koser.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-27%20Caldo%20Lactosa%20Billis%20Verde%20Brillante.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-28%20Caldo%20Lauril%20Triptosa%20con%20MUG.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-29%20Caldo%20Neutralizante.pdffile://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-30%20Caldo%20Soya%20Tripticaseina%20%20Sin%20dextrosa.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-31%20Caldo%20Urea.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-32%20Caldo%20Carne%20Cocida.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-33%20Caldo%20Glucosa%20Purpura%20de%20Bromocresol.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-34%20Caldo%20Extracto%20de%20Malta.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-35%20Caldo%20Acido.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-36%20Caldo%20CSTEL.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-37%20Caldo%20Letheen%20modificado.pdf
 
 
COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
CLAVE: 
CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 7 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
2023-01-11 
FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
2029-01-11 
SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
 
CALDOS 
CLAVE MEDIO 
CL-38 Caldo Nitrato 
CL-39 Caldo Lactosado 
SOLUCIONES 
CLAVE MEDIO 
SOL-1 Solución Reguladora de Fosfatos (0.25M) 
SOL-2 Solución salina fisiológica 
SOL-3 Agua Peptonada Alcalina 
SOL-4 Agua Peptonada Amortiguada 
SOL-5 Solución Peptonada al 0.1% 
SOL-6 Solución Peptonada al 0.1% con polisorbato 80 
SOL-7 Solución de peptona y extracto de carne con polisorbato 80 
SOL-8 Solución amortiguadora al 1% pH 6.0±0.05 
SOL-9 Solución amortiguadora 0.1M pH 8.0±0.1 
SOL-10 Solución amortiguadora 0.1M pH 4.5±0.05 
SOL-11 Solución amortiguadora 10% pH 6.0±0.05 
SOL-12 Solución amortiguadora 0.2 M pH 10.5±0.1 
SOL-13 Solución amortiguadora 0.1 M pH 7.0±0.2 
SOL-14 Solución Reguladora de Fosfatos (0.25M) diluida 
SOL-15 Solución Neutralizante Concentrada 
SOL-16 Solución Neutralizante Diluida 
SOL-17 Agua Peptonada 
SOL-18 Solución Reguladora de Fosfatos pH 6 
SOL-19 Buffer de Extracción 
SOL-20 Solución salina amortiguadora de fosfatos (PBS) 
SOL-21 Triton X 
SOL-11 Sauton diluido 
 
 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/CALDOS%20PDF/CL-39%20Caldo%20Lactosado.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL%201%20Solucion%20Reguladora%20de%20Fosfatos.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-2%20Solucion%20salina%20fisiológica.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-3%20Agua%20Peptonada%20Alcalina.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-4%20Agua%20Peptonada%20Amortiguada.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-5%20Solucion%20Peptonada%20al%200.1%25.pdf
file://///ccayac/Catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-6%20Solución%20Peptonada%20al%200.1%20con%20polisorbato%2080.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-7%20%20Solucion%20de%20peptona%20y%20extracto%20de%20carne%20con%20polisorbato%2080.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-8%20Solucion%20amortiguadora%20al%201%25%20pH%206.0±0.05.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-9%20Solucion%20amortiguadora%200.1M%20pH%208.0±0.1.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-10%20Solucion%20amortiguadora%200.1M%20pH%204.5±0.05.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-11%20Solucion%20amortiguadora%2010%25%20%20pH%206.0±0.05.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-12%20Solucion%20amortiguadora%200.2%20M%20pH%2010.5±0.1.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-13%20Solucion%20amortiguadora%200.1%20M%20pH%207.0±0.2.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-14%20Solucion%20Reguladora%20de%20Fosfatos%20(0.25M)%20diluida.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-15%20Solucion%20Neutralizante%20Concentrada.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-16%20Solucion%20Neutralizante%20Diluida.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-17%20Agua%20Peptonada.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-18%20Solucion%20Reguladora%20de%20Fosfatos%20%20pH%206.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-19%20Buffer%20de%20Extraccion.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-20%20Solucion%20salina%20amortiguadora%20de%20fosfatos%20(PBS).pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-21%20Triton%20X.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/SOLUCIONES%20PDF/SOL-22%20Sauton%20diluido.pdf
 
 
COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
CLAVE: 
CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 8 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
2023-01-11 
FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
2029-01-11 
SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
 
REACTIVOS 
CLAVE REACTIVO 
REC-1 Reactivo de Kovacs 
REC-2 Reactivo de β-Galactosidasa 
REC-3 Reactivos para la prueba de VP 
REC-4 Reactivos para la reacción de Indol 
REC-5 Reactivos para la tinción de Gram 
REC-6 Reactivo Azul de Bromotimol 0.04% 
 
 
B.1. PESADO 
Leer cuidadosamente la etiqueta o la fórmula del medio y pesar exactamente la cantidad indicada en 
una balanza granataria o analítica dependiendo de la cantidad a pesar, la cual debe estar calibrada 
y verificada. Medidas de seguridad para pesar, usar máscara anti polvo y guantes desechables de 
vinilo cuando así se indique en la etiqueta. 
B.2. HIDRATACIÓN 
Colocar la mitad del volumen de agua tipo I a preparar en un contenedor de al menos el doble del 
volumen solicitado. 
Adicionar el polvo y mezclar. Dejar reposar de 10 a 15 minutos para su completa humectación. Se 
puede utilizar un agitador magnético. Adicionar el resto de agua y mezclar procurando que el resto 
del polvo adherido a las paredes del recipiente, se resbale e integre al resto del medio. 
Si esnecesario, calentar ligeramente o calentar a ebullición para la completa disolución del polvo, en 
una parrilla caliente con agitación o en la flama utilizando una rejilla y agitando de manera continua, 
evitando que el medio se derrame o se pegue al recipiente por calentamiento excesivo; si es 
necesario durante la ebullición disminuir la temperatura o la flama o someter en un baño de agua fría 
para evitar que el medio se derrame. La disolución total se reconoce cuando al agitar el medio no se 
adhieren partículas en las paredes y el medio es transparente. 
NOTA: Todo medio es sensible al calentamiento, por ese motivo no debe calentarse más de lo 
necesario. 
 
 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/REACTIVOS%20PDF/REC-1%20Reactivo%20de%20Kovacs.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/REACTIVOS%20PDF/REC-2%20Reactivo%20de%20β-Galactosidasa.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/REACTIVOS%20PDF/REC-3%20Reactivos%20para%20la%20prueba%20de%20VP.pdf
file://///ccayac/catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/REACTIVOS%20PDF/REC-4%20Reactivos%20para%20la%20reaccion%20de%20Indol.pdf
file://///ccayac/Catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/REACTIVOS%20PDF/REC%205%20Reactivos%20para%20la%20tincion%20de%20Gram.pdf
file://///ccayac/Catalogo%20medios%20de%20cultivo/FICHAS%20TECNICAS%20DE%20PREPARACION/VERSION%20PDF/REACTIVOS%20PDF/REC%206%20Reactivo%20Azul%20de%20Bromotimol%200.04.pdf
 
 
COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
CLAVE: 
CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 9 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
2023-01-11 
FECHA DE PRÓXIMA REVISIÓN: 
2029-01-11 
SUSTITUYE A: 
CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
 
B.3. DETERMINACIÓN DE pH 
Medir el pH del medio con un potenciómetro previamente calibrado con soluciones de referencia pH. 
4, 7 y 10. La temperatura del medio y de las soluciones de referencia deben estar a temperatura 
ambiente, ya que de lo contrario las lecturas serán imprecisas (verificar la temperatura en el 
termómetro integrado del equipo). 
Registrar los datos en el formato de registro de pH. 
Ajustar si es necesario con soluciones de hidróxido de sodio 1N o ácido clorhídrico 1N, para el caso 
de soluciones amortiguadoras o diluyentes de acuerdo a la formulación correspondiente. 
Para determinar el pH final de medios sólidos, macerar una alícuota con una varilla de vidrio e 
introducir el electrodo para determinar el pH. 
B.4. ENVASADO 
Distribuir en tubos, frascos o matraces la cantidad necesaria del medio de cultivo limitando el volumen 
a las ¾ partes de la capacidad del recipiente. Etiquetar los envases con el nombre del medio, fecha 
de preparación e iniciales de quién preparó. Para los medios donde el volumen es crítico, considerar 
la cantidad perdida de volumen durante la esterilización. 
Utilizar frascos, matraces o tubos que eviten la evaporación y contaminación del medio con tapa de 
rosca de baquelita las cuales durante la esterilización deben estar flojas; alternativamente se puede 
utilizar papel aluminio en las tapas. Colocar cinta indicadora de esterilización en los envases. 
Para medios líquidos se puede utilizar un dosificador automático. Los dosificadores manuales se 
recomiendan para un menor número de tubos. 
Para los medios que contiene colorantes se recomienda envasarlos en frascos ámbar. 
B.5. ESTERILIZACIÓN 
Esterilizar a 121 ºC por 15 minutos o de acuerdo con los procedimientos recomendados para cada 
medio o lo que indique el fabricante. El autoclave debe estar previamente evaluada con esporas de 
Geobacillus stearothermophylus sometidas a un ciclo de esterilización e incubadas a 60°C ±2°C por 
48 horas mensualmente y con ciclos de esterilización validados. Para los medios líquidos que se 
vayan a utilizar en el área de esterilidad se debe realizar la esterilización del agua previa a la 
preparación y registrarlo en el formato de Preparación de medios líquidos de esterilidad. 
No sobrecargar la autoclave ya que se reduce su eficiencia. 
 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA 
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CCAYAC-CT-03/6 
CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 10 DE 31 
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2029-01-11 
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CCAYAC-CT-003/5 
FECHA: 2022-07-19 
 
Registrar tiempo, temperatura, presión de los medios a esterilizar en cada ciclo de esterilización en 
el formato de registro de esterilización por calor húmedo y en el registro de uso de olla de presión 
para tratamientos térmicos diferentes a la esterilización. 
Los medios que contienen carbohidratos u otros ingredientes no estables al calor se deben esterilizar 
por filtración de membrana de 0.45µm. 
B.6. ADICIÓN DE SUPLEMENTOS 
Cualquier ingrediente termolábil debe obtenerse e incorporarse en condiciones asépticas al medio de 
cultivo estéril, a una temperatura no mayor de 50 ºC o lo que indique el fabricante. Para medios de 
cultivo sólidos el suplemento debe estar a temperatura ambiente para evitar la solidificación antes de 
su incorporación total al medios. 
B.7. VERTIDO EN CAJA PETRI 
Distribuir en condiciones asépticas volúmenes de medio fundido a temperatura de 45 a 50 ºC en cajas 
Petri evitando la formación de burbujas. Permitir el secado del agar en una campana de flujo laminar 
horizontal. Almacenar las placas con la base de la caja hacia arriba para evitar que se acumule la 
humedad del agar y haya posible contaminación. 
B.8. CONSERVACIÓN Y USO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS 
La mayoría de los medios deben conservarse en refrigeración de 2 a 8 ºC con su respectivo registro 
de temperatura. Sin embargo siempre se deben seguir las instrucciones indicadas por el fabricante. 
El área asignada para el almacenamiento de medios debe ser exclusiva para tal fin, separada de 
muestras o cualquier posible fuente de contaminación cruzada, en lugares limpios, secos, protegidos 
de la luz directa del sol y polvo perfectamente bien cerrados e identificados. Los medios que contienen 
fosfatos o tioglicolato se conservan mejor a temperatura ambiente, debido a que se pueden precipitar 
a temperatura baja. El tiempo y condiciones de almacenamiento depende de cada tipo de medio de 
acuerdo con las instrucciones del fabricante; en general se recomienda que los caldos y agares 
envasados en tubos o frascos con tapa de rosca bien cerrados, no se usen después de 4 semanas 
de su preparación en refrigeración y no más de 2 semanas a temperatura ambiente. Los agares en 
placa para control ambiental por no más 4 semanas y para otro tipo de agares lo que indique el 
fabricante, en refrigeración siempre y cuando se conserven en condiciones que eviten su 
deshidratación. Los medios conservados en refrigeración deben sacarse antes de su uso para permitir 
que alcancen la temperatura ambiente y evitar la presencia de agua de condensación. 
No se deben utilizar medios sólidos o líquidos que muestren signos de deshidratación o evaporación 
respectivamente. 
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CATÁLOGO OFICIAL DE MEDIOS DE CULTIVO HOJA: 11 DE 31 
VIGENTE A PARTIR DE: 
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SUSTITUYE A: 
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FECHA: 2022-07-19 
 
Fundir el medio sólido en olla de presión sin sobrecargar. No fundir el medio más de una vez. 
Una vez fundido el medio debe ser utilizado dentro de las siguientes 3 horas mantenido a 45 ± 1°C. 
Si se formaalgún precipitado o un cambio anormal en la coloración desechar el medio. 
Utilizar los medios que contienen sustancias perecederas o antibióticos inmediatamente después de 
su preparación y de preferencia elaborar primero la base que puede almacenarse y el día de su uso 
agregar el complemento perecedero. 
B.9. ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DESHIDRATADOS 
En general los medios deshidratados deben estar almacenados en contenedores bien cerrados en 
lugares frescos, secos, protegidos de la luz o de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Si el 
medio ambiente es húmedo y caliente, los medios deben ser almacenados en refrigeración. La 
mayoría de los medios de cultivo deshidratados, son estables por al menos 3 años siempre y cuando 
sean almacenados adecuadamente, por lo que la compra debe ser planeada para que el medio se 
termine en un año. 
C) CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO 
C.1. EVALUACIÓN FÍSICA 
Verificar en forma visual la apariencia y color, en los caldos no debe haber turbiedad o material 
precipitado, existen excepciones como el caldo tetrationato cuya apariencia física particular y 
diferente se especifica en la parte de fórmulas de cada medio de cultivo. Los agares deben de tener 
una consistencia firme y de color característico. 
Verificar los volúmenes con una probeta calibrada y/o verificada. Registrar datos en la bitácora 
CCAYAC-B-536 “REGISTRO DE VOLUMEN FINAL DE MEDIOS DE CULTIVO” 
 
C.2. PRUEBA DE ESTERILIDAD 
Incubar el 5% del lote de medio de cultivo preparado a 35 ± 1 ºC por 24 a 48 horas para mesofílicos 
aerobios y a 25 ± 1 ºC por 3 a 5 días para mohos y levaduras dependiendo del tipo de medio. 
Observar si los medios presentan algún signo de contaminación. Descartar el lote si está 
contaminado. Registrar resultados. 
 
C.3. DETERMINACIÓN DE pH 
Determinar el pH en los medios de cultivo preparados con un potenciómetro calibrado como lo 
describe este catálogo. 
 
 
 
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D) EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE MEDIOS DE CULTIVO 
Para la evaluación del desempeño de los medios de cultivo utilizados en el área de Microbiologia 
farmacéutica, revisar el Anexo 1 de este documento. 
 
Para el resto de los medios de cultivo proceder como se indica a continuación: 
 
D.1. PREPARACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DEL INÓCULO. 
Para cada una de las cepas control realizar lo siguiente: 
 A partir de los cultivos desarrollados en agar soya tripticasa de 24 horas a 35 °C, transferir una 
colonia a 10 mL de caldo BHI incubar 18 horas a 35°C. 
 Tomar un mL del cultivo anterior y realizar diluciones decimales en 9 mL de solución salina 
(0.85%) peptonada al 0.1% (10-1 – 10-10), hasta obtener una densidad microbiana de no más de 
100 a 150 UFC/ml. 
 Sembrar 1ml de las diluciones apropiadas para obtener el inóculo deseado por vaciado en placa 
con AST o tomar 0.1ml y sembrarlo por extensión en placa con AST por duplicado. 
 Incubar las cajas invertidas a 35°C durante 24 horas. Contar las colonias para conocer en que 
dilución se encuentra el inóculo deseado. 
 Realizar este procedimiento varias veces hasta obtener resultados repetibles. Una vez 
establecida la dilución, inocular el medio de cultivo a probar incubándolo bajo las condiciones 
establecidas en el método. 
 
NOTA 1: Alternativamente se pueden usar métodos nefelométricos o espectrofotométricos para 
el ajuste del inoculo de las cepas. 
 NOTA 2: Para el uso de inóculos de los liofilizados, seguir las instrucciones de uso del 
fabricante. 
 
D.2. MÉTODO PARA EVALUAR EL DESEMPEÑO DE MEDIOS SÓLIDOS PARA PRUEBAS 
CUANTITATIVAS 
 Preparar los cultivos de acuerdo, en una concentración de menos de 100 UFC del 
microorganismo blanco. 
 Seleccionar dos placas que estén secas del medio a probar y dos placas del medio de referencia 
AST. Sembrar 1ml del inoculo y sembrar por vaciado en placa o sembrar 0.1ml del inoculo si son 
sembradas por extensión en placa. 
NOTA: Consultar e interpretar los anexos E y F de la norma ISO 11133 para los microorganismos 
de prueba comúnmente usados y recomendados para cada tipo de medio 
 
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Coeficiente de productividad: 
 
 
PR = (Ns / No) 
Dónde 
PR = Coeficiente de productividad 
Ns = Es la cuenta total obtenida del medio de cultivo a probar 
No = Es la cuenta total obtenida del medio de referencia (AST) y deberá ser ≤ 100 UFC/ mL 
Interpretación de resultados: 
Agares no selectivos: se considera aceptable si el coeficiente de productividad es de ≥ 0.7 
Agares selectivos: se considera aceptable si el coeficiente de productividad es de ≥ 0.5 
 
D.3. MÉTODO PARA EVALUAR EL DESEMPEÑO DE MEDIOS SÓLIDOS PARA PRUEBAS 
CUALITATIVAS 
 
Prueba de productividad y especificidad 
 Preparar cultivos de trabajo como se describe en el inciso D.1 
 Para la prueba de productividad y especificidad, utilizar placas de medio a probar estriando 
con asa de 1 µl para cada microorganismo de prueba de manera que se obtengan colonias 
aisladas. 
 Para selectividad usar un medio de prueba y estriar cada microorganismo de prueba con 
una sola línea recta en la misma placa paralelamente sin que se crucen las estrías, deben 
ser distinguibles para permitir la observación morfológica típica y tamaño de la colonia. 
Incubar las placas bajo condiciones definidas en los métodos de prueba correspondientes. 
 
Interpretación de resultados 
El crecimiento de las placas se evalúa como sigue: 
- 0 Corresponde a no crecimiento 
- 1 Corresponde a crecimiento débil (aun cuando se reduzca el crecimiento o el tamaño de la 
colonia) 
- 2 Corresponde a buen crecimiento 
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FECHA: 2022-07-19 
 
 La calificación del microorganismo blanco debe ser 2 y tener apariencia típica, tamaño y 
morfología colonial (especificidad). Para las pruebas de selectividad dependerá del grado de 
inhibición y de tipo de medio. El crecimiento para microorganismos no blanco deber ser 
parcialmente inhibidos o completamente inhibidos. 
 
D.4. MÉTODOS PARA EVALUAR EL DESEMPEÑO DE MEDIOS LÍQUIDOS. PRUEBAS 
CUANTITATIVAS (DILUCIÓN HASTA EXTINCIÓN DEL INÓCULO). 
 
Método adecuado para medios selectivos o no selectivos usados para medios líquidos para 
enumeración como NMP 
 
Preparar el inóculo de acuerdo a lo siguiente: 
 Sembrar 1ml de las diluciones apropiadas para obtener el inóculo deseado por vaciado en placa 
o 0.1 ml por extensión en placa en AST. 
 Incubar las cajas invertidas a 35°C durante 24 horas. Contar las colonias para conocer en que 
dilución se encuentra el inóculo deseado (≤100 UFC). 
 Una vez establecida la dilución, inocular el medio de cultivo a probar incubándolo bajo las 
condiciones establecidas en el método de prueba y 2 o más diluciones hasta la extinción del 
inóculo. 
NOTA: Para el uso del inóculos de liofilizados, seguir las instrucciones de uso del fabricante si 
este es el caso no se debe realizar la extinción del inoculo. 
 
D.5. MÉTODO PARA EVALUAR EL DESEMPEÑO DE MEDIOS SELECTIVOS LÍQUIDOS 
 
 Preparar los inóculos para losmicroorganismos blancos y no blancos de acuerdo a lo establecido 
en el inciso D.1 
 Para microorganismos blanco el inoculo debe ser de ≤100 UFC 
 Para microorganismos no blanco ≥1000UFC 
 Alternativamente se puede usar inóculos liofilizados y seguir las instrucciones del fabricante. 
 Inocular el medio líquido a probar con los inóculos preparados e incubar de acuerdo al método 
de prueba correspondiente. Posteriormente estriar ambos inóculos con un asa de 1 µl en el medio 
selectivo correspondiente como XLD. 
 Incubar de acuerdo a lo indicado en el método correspondiente. 
 Interpretación de resultados 
 La productividad del medio líquido es satisfactoria si hay crecimiento confluente en al menos una 
línea del microorganismo blanco en el medio específico para el microorganismo. 
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 Selectividad del medio líquido es satisfactoria si no hay crecimiento en el microorganismo no 
blanco o crecimiento parcial. 
 
 
D.6. MEDIOS DE PRE ENRIQUECIMIENTO 
 Preparar cultivos de trabajo como se describe en el inciso D.1 
 Inocular el medio de pre eriquecimiento a probar con un inóculo de ≤100 UFC 
 Incubar de acuerdo a lo indicado en el método correspondiente 
 Interpretación de resultados 
 Se reconoce un resultado satisfactorio si al agitar el tubo se observa la presencia de turbiedad 
y/o gas, células agregadas, depósito de desarrollo en la base del tubo o la botella y cambio de 
color. 
 
E) TOXICIDAD DEL DILUYENTE (REGULADOR DE FOSFATOS) 
E.1. Método de prueba cuantitativo para diluyentes 
 El método determina la habilidad del diluyente para mantener vivos a los microorganismos sin 
multiplicarse o reducirse durante un periodo de contacto antes de que sean inoculados en agar o 
medio líquido. 
E.2. Procedimiento 
 Inocular una porción a probar (por ejemplo 9 ml) del diluyente con 1 ml del microorganismo 
conteniendo 10 4 UFC/ml y mezclar. Inmediatamente tomar 0.1ml del diluyente inoculado y 
sembrar por extensión en placa por duplicado sobre la superficie en agar no selectivo (medio 
de referencia) como AST (t0). 
 Mantener el diluyente inoculado a temperatura ambiente por el tiempo especificado apropiado 
descrito en el método de prueba empleado, entre la preparación de la suspensión inicial y el 
momento cuando el inóculo está en contacto con el medio de cultivo (normalmente 45 minutos). 
 Mezclar y tomar el mismo volumen (0.1ml) e inocular por duplicado las placas de medio de 
referencia (t1). 
 Incubar el medio de referencia a una temperatura y tiempo apropiados como 35 ° C por 24 
horas. 
 Lectura e interpretación de datos 
 Después de la incubación contar las colonias en las placas a tiempo t1 y t2 y realizar los 
promedios de los duplicados. El número de microorganismos, t1, después de la incubación del 
diluyente debe estar dentro de ±30% de la cuenta inicial (t0) 
FÓRMULA: 
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Promedio de la cuenta al tiempo 45’t45 - Promedio de la cuenta al tiempo 0’ t0 X 100 
Promedio de la cuenta al tiempo 0’ 
E.3. Interpretación de resultados 
 
Se considera aceptable si el porcentaje se encuentra entre ± 30%. 
Realizar la prueba cada mes y registrar los resultados. 
 
F) ENTREGA DE MEDIOS DE CULTIVO 
F.1. Los medios de cultivos ya preparados se deben recoger de preferencia al siguiente día de su 
preparación o el mismo día por el solicitante anotando quien entregó, la hora y fecha. 
F.2. El usuario deberá firmar de recibido en el formato correspondiente, revisando que todos los datos 
de preparación y almacenamiento estén correctos. 
F.3. Una vez que los medios preparados salen del área de preparación de medios de cultivo, es 
responsabilidad del solicitante la correcta conservación de los mismos (ver. conservación y uso 
de los medios de cultivo preparados). No pueden ser procesadas quejas de medios de cultivo 
cuyo tiempo, temperatura y forma de conservación no se apegue a las instrucciones de este 
catálogo o lo indicado por el fabricante. 
 
4.1 POLÍTICAS GENERALES 
 En la mayoría de los casos se pueden obtener medios en forma deshidratada. Las fórmulas 
pueden estar disponibles en varias marcas comerciales y se deben preparar de acuerdo con las 
instrucciones del fabricante. 
 Debido a que pueden existir algunas diferencias entre marcas, es necesario que el laboratorio 
determine la funcionalidad de los medios rutinariamente como parte de un programa de control 
de calidad. Los medios deshidratados pueden usarse a menos que en el método se recomiende 
lo contrario, recomiende alguna marca por no estar disponible en el mercado o por haberse 
evaluado diversas marcas comerciales. 
 Para algunos ingredientes o reactivos que se utilizan en la preparación de medios de cultivo o 
soluciones, el fabricante no dispone de una fecha de caducidad declarada en el certificado de 
calidad ya que lo considera solo como requisito para productos perecederos que son utilizados 
en humanos como alimentos, fármacos o en análisis clínicos. 
Por tal motivo, en los casos que se tengan reactivos sin fecha de caducidad declarada por el 
fabricante, se considera que la vida media de un reactivo almacenado a temperatura ambiente 
es de 5 años, reactivos en refrigeración de 3 años y reactivos congelados de 1 año, todos a partir 
de la fecha de entrega del producto, por lo que en caso de utilizar este tipo de reactivos se deberá 
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llenar el formato Etiqueta para sustancias químicas no peligrosas, indicando la fecha de recepción 
y apertura del insumo, y la caducidad será conforme lo estipulado anteriormente. 
 Es recomendable emplear siempre que sea posible medios de cultivo deshidratados comerciales 
a menos que el método de prueba indique que se elabore a partir de ingredientes. 
 Se deben respetar estrictamente las indicaciones del fabricante y/o las estipuladas en este 
documento. 
 Los medios de cultivo son muy higroscópicos, por lo que hay que evitar tener los frascos 
destapados por mucho tiempo. Abrir un frasco nuevo solo cuando el que este en uso se haya 
terminado, anotar en el frasco la fecha de apertura. 
 No mezclar medio de cultivo o reactivos de frascos de diferente lote. 
 No usar medios apelmazados, con cambios en la coloración o textura, aun cuando no hayan 
expirado. 
 Los contenedores donde se preparen o se envasen los medios de cultivo deben ser de 
borosilicato, libres de inhibidores microbianos, enjuagados con agua tipo I, perfectamente limpios, 
libres de residuos de detergente alcalino, para lo cual se debe realizar la prueba de residuos de 
detergente alcalino, aleatoriamente y al menos dos veces al mes; adicionando al material seco 
unas gotas de indicador azul de bromotimol al 0.04% y registrarlos en el formato y/o bitácora 
correspondiente. 
 El agua tipo I que se utilice para preparar los medios de cultivo debe cumplir con lo establecido 
en el CCAYAC-P-040 “Procedimiento para la recolección, uso, distribución,almacenamiento y 
control del agua usada en CCAYAC”. Los resultados del análisis microbiológico se registrarán en 
la bitácora del Análisis microbiológico de agua tipo I, tipo II y red municipal. 
 El laboratorio donde sean procesadas las muestras no debe rebasar de 15 colonias en 15 minutos 
de exposición de una placa de agar soya tripticasa o agar peptona-glucosa extracto de levadura 
 Condiciones del laboratorio: Llevar acabo la prueba en condiciones asépticas. Limpiar y 
desinfectar el área y registrar en el CCAYAC-F-586 “Limpieza y sanitización de áreas de trabajo 
de microbiología farmacéutica”. 
 
5. DOCUMENTOS DE REFERENCIA 
 
Documentos Clave 
5.1 Instructivo para el manejo de las autoclaves CCAYAC-I-001 
5.2 Instructivo de uso de baños para control de temperatura CCAYAC-I-003 
5.3 Instructivo para la operación de incubadoras CCAYAC-I-011 
5.4 Instructivo de uso y verificación de potenciómetros CCAYAC-I-017 
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Documentos Clave 
5.5 Instructivo para lavado y uso de refrigerador y congelador CCAYAC-I-018 
5.6 Instructivo de operación para manejo y uso de las balanzas granatarias CCAYAC-I-026 
5.7 Instructivo para el uso de contadores de colonias CCAYAC-I-062 
 
6. BIBLIOGRAFÍA 
 
Documentos 
6.1 FEUM 13.0, Tomo I, MGA 0571, pp. 463-473. México 2021. 
6.2 FEUM 13.0, Tomo I, MGA 0381, pp. 395-401. México 2021. 
6.3 FEUM 13.0, Tomo I, MGA 0100, pp. 275-288. México 2021. 
6.4 
ISO 11133 Microbiology of food, animal feed and water--- Preparation, production, storage and 
performance testing of culture media. 
6.5 
Bacteriological Analytical Manual US Food and Drug Administration Center for Food Safety Applied 
Nutrition. 
6.6 Buenas prácticas de la OMS para laboratorios de Microbiología Farmacéutica 
6.7 Buenas prácticas de la OMS para laboratorios de Control de Calidad de productos Farmacéuticos 
 
 
7. ANEXOS 
 
ANEXO 1. PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO DE LOS MEDIOS UTILIZADOS EN LA PRUEBA DE 
ESTERILIDAD, LÍMITES MICROBIANOS Y VALORACIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS. 
 
ANEXO 2. ELABORACIÓN DE FICHAS TÉCNICAS DE PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, 
SOLUCIONES Y REACTIVOS. 
 
 
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ANEXO 1. 
PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO DE LOS MEDIOS UTILIZADOS EN LA PRUEBA DE 
ESTERILIDAD, LÍMITES MICROBIANOS Y VALORACIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS. 
 
La prueba de promoción de crecimiento se realiza con el fin de garantizar la funcionalidad de los medios 
de cultivo y consiste en demostrar la capacidad del medio para permitir el crecimiento de una cantidad 
determinada de microorganismos control. Esto se consigue inoculando muestras representativas de cada 
lote del medio de cultivo listo para su uso con una cantidad determinada de microorganismos para poner 
de manifiesto que estos pueden recuperarse bajo las condiciones de prueba. Adicionalmente en el caso 
de los medios de cultivo utilizados para el análisis microbiológico de productos farmacéuticos no estériles 
se evalúa el desempeño respecto a las propiedades inhibidoras e indicadoras de los medios selectivos. 
 
1. Preparación de los inóculos 
 
1.1. Inóculos comerciales estandarizados 
 
Reconstituir el liofilizado de acuerdo a lo indicado en el instructivo del fabricante para obtener de 
10 a 100 UFC de cada microorganismo de prueba cuando vaya a realizarse la prueba de 
promoción de crecimiento y más de 100 UFC cuando sean usadas para evidenciar la inhibición 
del crecimiento, esto según lo indicado en las tablas 1 a la 4. 
 
1.2. Estandarización de inóculos en el laboratorio (en los casos en que no se dispone de 
inóculos comerciales estandarizados). 
 
1.2.1. Preparación del inoculo de Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 
6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Escherichia coli ATCC 8739, Salmonella 
typhimurium ATCC 14028, Kocuria rhizophila ATCC 9341, Staphylococcus epidermidis 
ATCC12228. 
 
 A partir de los cultivos desarrollados en agar soya tripticaseína de 24 horas (h) a 32.5 
°C± 2.5 °C, transferir una asada a 10 mL de caldo BHI, e incubar de 18h a 24h a 32.5 
°C± 2.5 °C, en condiciones de aerobiosis. 
 Tomar un mL del cultivo anterior y realizar diluciones decimales en 9 mL de solución 
salina (0.85%) peptonada al 0.1% (de 10-1 a 10-10), hasta obtener una densidad 
microbiana de no más de 100 UFC/mL. 
 Sembrar por vaciado en placa, por duplicado en agar soya tripticaseína las diluciones 
apropiadas para obtener el inóculo deseado, (un inoculo de no más de 100 UFC / mL 
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cuando las cepas son empleadas para evidenciar la promoción de crecimiento en los 
medios de cultivo, cuando sean usadas para evidenciar la inhibición de crecimiento en 
los medios de cultivo deben ajustarse a más de 100 UFC/mL) De acuerdo a tablas 1 y 2. 
 Colocar las placas invertidas e incubar en condiciones de aerobiosis a 32.5 °C± 2.5 °C 
por 24 horas. 
 
1.2.2. Preparación del inoculo de Clostridium sporogenes ATCC 11437 y ATCC 19404 
 
 A partir de los cultivos desarrollados en agar soya tripticaseína de 24h a 32.5 °C± 2.5 
°C, en condiciones de anaerobiosis. Transferir una asada a 10 mL de caldo BHI, e 
incubar de 18h a 24h a 32.5 °C± 2.5 °C. 
 Tomar un mL del cultivo anterior y realizar diluciones decimales en 9 mL de solución 
salina (0.85%) peptonada al 0.1% (de 10-1 a 10-10), hasta obtener una densidad 
microbiana de no más de 100 UFC/mL. 
 Sembrar por vaciado en placa, por duplicado en agar soya tripticaseína las diluciones 
apropiadas para obtener el inoculo deseado, (un inóculo de no más de 100 UFC/mL 
cuando las cepas son empleadas para evidenciar la promoción de crecimiento en los 
medios de cultivo). 
 Colocar las placas invertidas e incubar en condiciones de anaerobiosis a 32.5 °C± 2.5 
°C por 24 horas. 
 
1.2.3. Preparación del inoculo de Candida albicans ATCC 10231 
 
 A partir de los cultivos desarrollados en Agar Dextrosa Sabouraud de 48 horas a 22.5 
°C± 2.5 °C, transferir una asada a 10 mL de caldo BHI, e incubar 48 h a 22.5 °C± 2.5 
°C, en condiciones de aerobiosis. 
 Tomar un mL del cultivo anterior y realizar diluciones decimales en 9 mL de solución 
salina (0.85%) peptonada al 0.1% (de 10-1 a 10-10), hasta obtener una densidad 
microbiana de no más de 100 UFC/mL. 
 Sembrar por vaciado en placa, por duplicado en Agar Dextrosa Sabouraud las diluciones 
apropiadas para obtener el inóculo deseado, (un inóculo de no más de 100 UFC / mL 
cuando la cepa es empleada para evidenciar la promoción de crecimiento en los medios 
de cultivo). 
 Colocar las placas invertidas e incubar en condiciones de aerobiosis a 22.5 °C± 2.5 °C 
por 48 horas. 
 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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1.2.4. Preparación del inoculo de Aspergillus brasiliensis ATCC16404 
 
 A partir de los cultivos desarrollados en Agar Dextrosa Sabouraud de 48 horas a 22.5 °C± 
2.5 °C, recuperar las esporas con solución salina (0.85%) peptonada al 0.1% y adicionada 
con polisorbato 80 al 0.05% 
 Tomar un mL de la suspensión anterior y realizar diluciones decimales en 9 mL de solución 
salina (0.85%) peptonada al 0.1% (de 10-1 a 10-5), hasta obtener una densidad microbiana de 
no más de 100 UFC/mL. 
 Sembrar por vaciado en placa, por duplicado, en Agar Dextrosa Sabouraud las diluciones 
apropiadas para obtener el inóculo deseado, (un inoculo de no más de 100 UFC / mL cuando 
la cepa es empleada para evidenciar la promoción de crecimiento en los medios de cultivo). 
 Colocar las placas invertidas e incubar en condiciones de aerobiosis a 22.5 °C± 2.5 °C por 
48 horas. 
 
2. Inoculación de los medios para la prueba de esterilidad 
 
2.1. Inocular muestras representativas de cada lote nuevo de medio de cultivo con 1mL de la dilución 
que contenga no más de 100 UFC (o el volumen indicado por el fabricante) de cada uno de los 
microorganismos indicados en la Tabla 1. Paralelamente inocular de la misma forma dos frascos 
de medio de cultivo del lote anterior aprobado y dos placas de un agar no selectivo, como AST, 
esto con la finalidad de verificar que realmente se inocularon menos de 100 UFC. Los medios 
que deben inocularse se indican a continuación: 
 Frascos de medio fluido de tioglicolato. 
 Frascos de caldo soya tripticaseína. 
 Frascos de fluido A. 
 
2.2. Para cada uno de los microorganismos de prueba, usar porciones independientes del medio de 
cultivo. 
2.3. Incubar los frascos en las condiciones establecidas en la tabla 1 según corresponda a cada 
microorganismo, considerando incluir un frasco sin inocular como control negativo el cual se 
debe incubar por 14 días. 
2.4. Revisar si los frascos inoculados presentan turbidez como evidencia del crecimiento microbiano 
y registrar. 
2.5. Criterios de aceptación 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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 Se debe observar crecimiento microbiano claramente visible, en todos los medios 
inoculados en no más de tres días en el caso de bacterias y no más de cinco días en el 
caso de hongos a las temperaturas indicadas. 
 El control en agar no selectivo debe tener menos de 100 UFC. 
 El nivel de turbidez del medio del lote nuevo y el lote previamente aprobado debe ser 
equivalente al comparar visualmente. 
 El control negativo no presenta crecimiento. 
 
2.6. Si no se cumplen los criterios de aceptación anteriormente descritos, la prueba es insatisfactoria 
y el lote de medio se desecha y no se emplea en la prueba de Esterilidad. 
 
Tabla 1 Microorganismos de prueba para promoción de crecimiento para los medios de la prueba de Esterilidad 
Medios 
de 
cultivo 
Microorganismos de prueba Condiciones 
Temperatura de 
Incubación 
Tiempo 
máximo de 
incubación 
M
ed
io
 L
iq
u
id
o
 d
e 
T
io
g
lic
o
la
to
 (
M
ed
io
 “
A
”)
 
Staphylococcus aureus 
ATCC6538 CIP4.83 
NCTC10788 
NCTMB9518 
Aerobiosis 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
Pseudomonas aeruginosa * 
ATCC9027 CIP 82.118 
NCIMB 8626 
Aerobiosis 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
Clostridium sporogenes ** 
ATCC 6633 ATCC11437 
NCTC532 CIP793 
Anaerobiosis 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
C
al
d
o
 S
o
ya
-t
ri
p
ti
ca
se
in
a 
(M
ed
io
 “
B
”)
 
Bacillus subtilis 
ATCC 6633 
CIP52.62 
NCIMB 8054 
Aerobios 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
Candida albicans 
ATCC10231 
IP 48.72 NCPF3179 
Aerobios 32.5 °C± 2.5 °C 5 días 
Aspergillus brasiliensis 
ATCC16404 
IP1431.83 
IMI149007 
Aerobios 22.5 °C± 2.5 °C 5 días 
S
o
lu
ci
ó
n
 a
l 0
.1
 p
o
r 
ci
en
to
 d
e 
p
ep
to
n
a 
(F
L
U
ID
O
 “
A
”)
 
Staphylococcus aureus 
ATCC6538 
CIP4.83 
NCTC10788 
NCTMB9518 
Aerobiosis 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
Pseudomonas aeruginosa* 
ATCC9027 
CIP 82.118 
NCIMB 8626 
Aerobiosis 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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Medios 
de 
cultivo 
Microorganismos de prueba Condiciones 
Temperatura de 
Incubación 
Tiempo 
máximo de 
incubación 
Bacillus subtilis 
ATCC 6633 
CIP52.62 
NCIMB 8054 
Aerobios 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
Candida albicans 
ATCC10231 
IP 48.72 
NCPF3179 
Aerobios 32.5 °C± 2.5 °C 5 días 
Clostridium sporogenes ** 
ATCC 6633 
ATCC11437 
NCTC532 
CIP793 
Anaerobiosis 32.5 °C± 2.5 °C 3 días 
* Kocuria rhizophila ( Micrococcus luteus ) ATCC 9341 Microorganismo alternativo: de Pseudomonas aeruginosa 
**: Bacteróides vulgatus ATCC 8482 Microorganismo alternativo: de Clostridium sporogenes 
ATCC American Type Culture Collection CIP Collection de l´Institut Pasteur IMI Commonwealth Mycological Institute 
NCPF National Collection of Pathogenic Fungi NCIMB The National Collection of Industrial and Marine Bactéria Limited 
3. Inoculación de medios de cultivo para recuento microbiano de la prueba de límites 
microbianos. 
3.1. A partir de un inóculo estandarizado que contenga menos de 100 UFC, probar cada lote de 
medio preparado ya sea sólido o líquido forma independiente para cada microorganismo. 
3.2. Por cada microorganismo de prueba de acuerdo a lo indicado en la tabla 2 inocular dos placas 
o tubos del lote nuevo a probar y de un lote previamente aprobado de AST (referencia), bajo las 
mismas condiciones ambientales y técnicas. Incluir un control negativo del lote nuevo para dar 
validez a la prueba. 
3.3. Incubar a la temperatura indicada en la tabla 2 durante un periodo no mayor al tiempo mínimo 
establecido en la prueba. 
 
3.4. Criterios de aceptación 
 
3.4.1. Medios sólidos. 
 Debe haber crecimiento microbiano en el lote nuevo y el previamente aprobado. 
 El recuento microbiano en cada placa no debe exceder las 100 UFC. 
 El promedio de las cuentas del nuevo lote puede variar en un factor de 2 respecto del lote 
previamente aprobado. Para conocer el factor de 2 (intervalo), dividir y multiplicar por 2 el 
promedio calculado para un inóculo previamente estandarizado en un medio de cultivo 
analizado y aprobado previamente (medio de referencia). 
Ejemplo: 
Cuenta promedio del medio a evaluar (lote nuevo): 47 UFC 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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Cuenta promedio (Lote previamente aprobado de referencia): 44 UFC 
 
Cálculo del factor 2: 44 UFC ÷2 = 22 
 44 UFC x 2 = 88 
El lote nuevo de preparación debe presentar una cuenta promedio entre 22 y 88 UFC, por lo que la cuenta 
promedio del medio a evaluar (47 UFC) puede considerarse aceptable. 
El control negativo no presenta crecimiento. 
 
3.4.2. Medios líquidos. 
 Se debe observar crecimiento microbiano claramente visible, en todos los medios inoculados 
en no más de tres días en el caso de bacterias y no más de cinco días en el caso de hongos 
a las temperaturas indicadas. 
 El control en agar no selectivo debe tener menos de 100 UFC. El nivel de turbidez del medio del lote nuevo y el lote previamente aprobado debe ser 
equivalente al comparar visualmente. 
 El control negativo no presenta crecimiento. 
 
4. Inoculación de medios de cultivo usados para determinación de microorganismos específicos 
de la prueba de límites microbianos. 
 
Inocular los medios sólidos o líquidos con el tipo de microrganismo apropiado según la prueba que 
vaya a realizarse, de acuerdo a lo descrito en la tabla 3. Las pruebas que se realizan a estos medios 
son las siguientes: 
 
4.1. Promoción de crecimiento a medios sólidos o líquidos. 
 Se inoculan con no más de 100 UFC del microorganismo de referencia. En el caso de medios 
sólidos usar el método de extensión en superficies. 
 Por cada microorganismo de prueba de acuerdo a lo indicado en la tabla 3 inocular dos placas 
o tubos del lote nuevo a probar y de un lote previamente aprobado de AST (referencia), bajo 
las mismas condiciones ambientales y técnicas. Incluir un control negativo del lote nuevo 
para dar validez a la prueba. 
 Incubar a la temperatura indicada en la prueba (ver tabla 3) durante un tiempo no mayor al 
mínimo establecido también en la prueba. 
 Revisar los medios inoculados en busca de crecimiento microbiano y registrar. 
Criterios de aceptación: 
 Los mismos que los enlistados en el numeral 3.4 del presente anexo. 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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4.2. Determinación de las propiedades selectivas en medios sólidos o líquidos. 
 Se inoculan con mínimo 100 UFC. En el caso de medios sólidos usar el método de extensión 
en superficies. 
 Se inoculan dos tubos o placas del lote nuevo a probar y paralelamente se inocula de la 
misma forma dos placas un agar no selectivo, como AST, esto con la finalidad de verificar el 
tamaño del inoculo utilizado, ya que el medio podría inhibir el crecimiento de los 
microrganismos que deberían crecer en él. 
 Incubar a la temperatura especificada en la tabla 3 durante un tiempo no menor al tiempo 
máximo indicado en la prueba. Incluir un control negativo del lote nuevo a probar que debe 
ser tratado en las mismas condiciones de incubación. 
 Revisar los medios inoculados en busca de inhibición del crecimiento microbiano en los 
medios selectivos y registrar. 
 
Criterios de aceptación: 
 El crecimiento microbiano debe ser inhibido en el medio selectivo. 
 El recuento microbiano debe ser mayor a 100 UFC en el agar no selectivo de referencia. 
 
4.3. Determinación de las propiedades diferenciales en medios sólidos o líquidos. 
 Se inoculan con no más de 100 UFC del microorganismo de referencia. En el caso de medios 
sólidos usar el método de extensión en superficies. 
 Por cada microorganismo de prueba de acuerdo a lo indicado en la tabla 3 inocular dos placas 
o tubos del lote nuevo a probar, un lote previamente aprobado del mismo medio diferencial y 
un lote previamente aprobado de AST (referencia), todos bajo las mismas condiciones 
ambientales y técnicas. Incluir un control negativo del lote nuevo para dar validez a la prueba. 
 Incubar a la temperatura especificada durante un periodo de tiempo que se encuentre en el 
intervalo indicado en la prueba (ver tabla 3). 
 
Criterios de aceptación: 
 Las colonias deber tener apariencia similar en el lote nuevo y en el lote previamente 
aprobado, en el caso de que no se disponga de un lote previamente aprobado, se debe tomar 
como referencia las características diferenciales típicas descritas en la tabla 3. 
 Además se deberán cumplir los criterios enlistados en el numeral 3.4 del presente anexo. 
 
5. Inoculación de medios de cultivo usados para la valoración microbiológica de antibióticos. 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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FECHA: 2022-07-19 
 
 A partir de un inóculo estandarizado que contenga menos de 100 UFC, probar cada lote de 
medio preparado de forma independiente para cada microorganismo. 
 Por cada microorganismo de prueba de acuerdo a lo indicado en la tabla 4 inocular dos placas 
del lote nuevo a probar y de un lote previamente aprobado de AST (referencia), bajo las 
mismas condiciones técnicas y ambientales. 
 Incubar a la temperatura indicada en la tabla 4 incluyendo un control negativo del lote nuevo 
para dar validez a la prueba. 
 
Criterios de aceptación: 
 Debe haber crecimiento microbiano en el lote nuevo y el previamente aprobado. 
 El recuento microbiano en cada placa no debe exceder las 100 UFC. 
 El promedio de las cuentas del nuevo lote puede variar en un factor de 2 respecto del lote 
previamente aprobado. 
 El control negativo no presenta crecimiento. 
 
Tabla 2. Promoción de Crecimiento para los medios de recuento microbiano de Límites Microbianos 
 
Medio 
Microorganismo 
de prueba 
Tamaño 
de 
inóculo 
Condiciones 
de incubación 
Resultado esperado 
Agar Soya 
Tripticaseina 
S. aureus 
≤100 
UFC 
32.5 °C± 2.5 °C 
≤ 3 días 
Crecimiento de 50 a 200% del promedio 
de UFC obtenidas en el medio de 
referencia. 
P. aeruginosa 
≤100 
UFC 
B. subtillis 
≤100 
UFC 
C. albicans 
≤100 
UFC 22.5 °C± 2.5 °C 
≤ 5 días 
A. brasiliensis 
≤100 
UFC 
Caldo Soya 
Tripticaseina 
S. aureus 
≤100 
UFC 
32.5 °C± 2.5 °C 
24-48 h 
Crecimiento visible (turbidez) 
P. aeruginosa 
≤100 
UFC 
B. subtillis 
≤100 
UFC 
C. albicans 
≤100 
UFC 22.5 °C± 2.5 °C 
≤ 5 días 
A. brasiliensis 
≤100 
UFC 
"Debe confirmarse su vigencia antes de hacer uso de esta versión"
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Agar dextrosa 
Sabouraud 
C. albicans 
≤100 
UFC 
22.5 °C± 2.5 °C 
≤ 5 días Crecimiento de 50 a 200% del promedio 
de UFC obtenidas en el medio de 
referencia. A. brasiliensis 
≤100 
UFC 
22.5 °C± 2.5 °C 
≤ 5 días 
 
 
Tabla 3. Evaluación de los medios para determinación de patógenos específicos de Límites Microbianos 
 
Medio 
Cepas de 
prueba 
Tamaño de 
Inoculo 
Propiedad a 
evaluar 
Temperatura 
y tiempo de 
incubación 
Resultado esperado 
Caldo Mossel de 
enriquecimiento 
para 
enterobacterias 
E. coli 
P. aeruginosa 
≤100 UFC 
Promoción de 
crecimiento 32.5 °C± 2.5 °C 
24 - 48 horas 
Crecimiento visible (turbidez) 
S aureus ≥100 UFC Selectividad Ausencia de crecimiento 
Agar glucosa rojo 
violeta bilis 
E. coli 
P. aeruginosa 
≤100 UFC 
Promoción de 
crecimiento + 
diferencial 
32.5 °C± 2.5 °C 
18 - 24 horas 
Crecimiento de 50 a 200% del promedio de UFC 
obtenidas en el medio de referencia. 
E. coli: colonias rojo-púrpura rodeadas de un halo 
de precipitación rojizo. 
P. aeruginosa: colonias incoloras. 
Caldo MacConkey 
E. coli ≤100 UFC 
Promoción de 
crecimiento 43 °C± 1 °C, 
24 - 48 horas 
Crecimiento visible (turbiedad) 
S. aureus ≥100 UFC Selectividad Ausencia de crecimiento 
Agar MacConkey E. coli ≤100 UFC 
Promoción de 
crecimiento + 
diferencial 
32.5 °C± 2.5 °C 
18 - 72 horas 
Crecimiento de 50 a 200% del promedio de UFC 
obtenidas en el medio de referencia. 
E. coli: colonias rosadas- rojizas. 
Caldo Rappaport 
Vassiliadis de 
enriquecimiento 
para Salmonella 
Salmonella 
typhimurium 
≤100 UFC 
Promoción de 
crecimiento 
 
32.5 °C± 2.5 °C