Coloraciones de Microbiología

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Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Bioanálisis - Sede Carabobo
Departamento de Estudios Clínicos
Prácticas Profesionales de Hospitalaria
Integrante:
Arencibia R. Angely
Ciudad Hospitalaria Dr. Henrique Tejera, Junio 2016
Tinciones de 
Microbiología
http://www.google.co.ve/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAcQjRw&url=http://www.busaca.com/search/images&search=universidad de carabobo&type=images&ei=aSPkVK2PH4iqNpKjgYgD&bvm=bv.85970519,d.cWc&psig=AFQjCNHI_HNV4mVTfZcfy25k7eiwsWZqAQ&ust=1424323803975692
Es una técnica diferencial de 
laboratorio que se utiliza 
rutinariamente en los estudios 
microbiológicos de las bacterias. 
¿Qué es la 
Tinción de 
Gram?
Fue diseñada por Hans 
Christian Gram, un 
científico danés, en el 
año 1884. 
Su objetivo es diferenciar 
los grupos de bacterias 
para así poder estudiarlas y 
clasificarlas. 
Es muy útil no solo para el estudio 
de las bacterias, sino también para 
poder identificarlas rápidamente en 
una infección y seleccionar el
antibiótico más adecuado para 
tratarla.
Un aspecto negativo es 
que no puede identificar 
el tipo exacto de bacteria 
responsable de la 
infección.
¿Cuándo se hace 
una Tinción de 
Gram?
Neumonías
(esputo)
Infección de orina
(orina)
Uretritis: infección 
de transmisión sexual 
más frecuente 
(secreción)
Meningitis (LCR)
Exudado vaginal: 
(proporción de Gram 
positivas y Gram negativas. 
Así se diagnostican las 
vaginosis, tan frecuentes 
en las mujeres con 
menopausia)
Abscesos (pus)
Sepsis: 
(sangre)
http://www.webconsultas.com/neumonia/neumonia-642
http://www.webconsultas.com/infecciones-urinarias/infecciones-urinarias-607
http://www.webconsultas.com/infecciones-urinarias/infecciones-urinarias-607
http://www.webconsultas.com/salud-al-dia/uretritis/uretritis-13715
http://www.webconsultas.com/meningitis/meningitis-615
http://www.webconsultas.com/embarazo/vivir-el-embarazo/exudado-vaginal-y-rectal-durante-el-embarazo-13899
http://www.webconsultas.com/salud-al-dia/sepsis/sepsis-12063
¿Cuál es el procedimiento de la Tinción 
de Gram?
¿Cómo diferencia la Tinción de Gram?
¿Procedimiento de la Tinción de Gram 
desde un crecimiento en placa?
Bacterias Gram positivas (púrpuras) o 
Gram negativas (rosas)
Según su forma pueden ser cocos (esferas), 
bacilos (cilindros finos) o cocobacilos. 
Según su organización en racimo o en 
cadenas; a veces están dispersas.
¿Reporte de la Tinción de Gram?
¿Qué es la 
técnica KOH?
Es un examen al fresco o 
directo útil para la 
visualización de micelios 
fúngicos
Muestras:
Piel 
Pelo
Uñas
Muestras respiratorias
Exudados de abscesos
Su objetivo es la 
disociación de las células 
y las fibras facilitando la 
visualización de los 
hongos
El Hidróxido de potasio al 
10% (solución de KOH) 
permite ver elementos de 
hongos ya que el KOH 
digiere parcialmente los 
componentes proteicos, por 
ejemplo de la célula 
huésped, pero no actúa 
sobre los polisacáridos de las 
paredes celulares de los 
hongos.
Es un compuesto químico 
inorgánico de fórmula KOH, 
es una base fuerte de uso 
común.
En el laboratorio clínico es 
un procedimiento auxiliar 
para el diagnostico de:
-Micosis
-Diagnóstico de 
enfermedades 
vulvo/vaginales 
(Gardnerella vaginalis)
Colocar el material de la 
lesión en un placa portaobjetos 
Colocar una gota de KOH al 10 
ó 20%, y calentar suavemente. 
Observar al microscopio.
¿Cuál es el procedimiento de la Técnica de 
KOH?
El efecto clarificador del 
KOH puede demorar desde 
10 minutos hasta horas, en 
el caso de las muestras de 
uñas, y puede reducirse 
calentando ligeramente la 
preparación.
Se suele utilizar 2 
concentraciones:
-Una más fuerte del 20-30% para 
uñas
-10% al 15% para el resto de 
muestras.
Uno de los inconvenientes del 
KOH es que su reacción con el 
material clínico puede crear 
unos artefactos que pueden 
parecerse a los hongos, con lo 
que hace necesaria cierta 
experiencia del observador.
¿La técnica 
KOH?
-KOH Glicerol Previene la degradación de los elementos fúngicos,
evita la deshidratación de la preparación
convirtiéndola en semipermanente.
-KOH-Dimetilsulfóxido (DMSO) Acelera la clarificación, evita la necesidad del
calentamiento, la cristalización y la formación de
artefactos.
-KOH-Colorante de Cobre Mejora la visualización de los hongos.
(Tinta de Parker-OH)
-KOH Azul Algodón de Lactofenol Se utiliza a partir de cultivos. El fenol destruye la
flora acompañante y organismos; el ácido láctico
conserva las estructuras fúngicas y el azul algodón
tiñe la quitina de las paredes fúngicas.
-KOH Blanco de Calcofluor Se emplea para algunos hongos “Hongos
dematiaceos” que se tiñen con gran dificultad.
¿Métodos Modificados del KOH?
¿Qué es la 
Tinción de 
Tinta China?
Muestras:
LCR
Exudados
La Tinción negativa o Tinta china 
(suspensión de partículas de carbón 
coloidal) la tinción negativa utiliza 
tintes ácidos.
Se emplea para ver la 
cápsula de:
S. pneumoniae
Cryptococcus
neoformans
en LCR.
Los polisacáridos capsulares 
rechazan la tinta china y la 
cápsula aparece como un halo 
claro alrededor de los 
microorganismos.
Los tintes ácidos poseen 
un cromógeno negativo 
que no penetra la célula 
de la bacteria debido a la 
carga negativa en la 
pared celular, por esta 
razón el microorganismo 
se verá transparente y el 
fondo de la lamina de 
color negro (Tinte).
1.Agarrar con el asa una gota de la tinta china y ponerla en la placa
2.Esterilizar el asa y coger una muestra de cultivo del hongo y ponerlo en la placa
3.Con el cubreobjetos mezclar la tinta con el hongo
4.Dejar secar al aire
5.Con el frotis hacia arriba, pasar 2-3 veces sobre la flama (fijación)
4.Observar la placa en el microscopio a 40x y 10x
¿Cuál es el procedimiento de la Tinción 
de Tinta China?
REPUBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA
MINISTERIO DEL PODER POPULAR PARA LA EDUCACIÓN
VALECIA- EDO. CARABOBO
Autores:
Delgado, Arianna.
Valencia, julio 2016.
MICOBACTERIAS
COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN 
MYCOBACTERIUM
 Bacilos aerobios Bacilos 
acidorresistentes
 Inmóviles 
 No esporulados
 Exigente nutricionalmente
 Crecimiento lento (8 semanas)
 130 especies de micobacterias
 las infecciones en el ser humano: M. tuberculosis, 
M. leprae, complejo M. avium, M. kansasii, M. 
fortuitum, M. chelonae y M. abscessus.
IMYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
 Bacilo aerobio Gram positivo.
 Acidorresistente.
 Capaz de crecimiento intracelular en los macrófagos
alveolares inactivados .
 Infección primaria es pulmonar.
 Un tercio de la población mundial esta infectada por este
MO.
 El hombre único reservorio natural.
 Transmisión a través de aerosoles infectados.
IMYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
IMYCOBACTERIUM LEPRAE
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
 Bacilo débilmente Gram positivo.
 Período de incubación es prolongado
 Infección crónica que afecta a la piel y los nervios
periféricos.
 El diagnostico se establece con pruebas cutáneas
especificas (forma tuberculoide de la enfermedad) o con
tinciones de ácido alcohol (forma lepromatosa)
IMYCOBACTERIUM LEPRAE
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
Manifestaciones clínicas e inmunológicas de la 
lepra
IMYCOBACTERIUM LEPRAE
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
IMYCOBACTERIUM AVIUM
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
 Bacilo débilmente Gram positivo.
 Colonización asintomática
 Se adquiere a través de la ingesta de agua o alimentos
contaminados
 El diagnostico se establece con microscopia y cultivo.
IMYCOBACTERIUM AVIUM
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
IMYCOBACTERIUM AVIUM
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
IDIAGNOSTICO DE LABORATORIO
[Continuación]
Alteraciones 
FuncionesGastrointestinales
DIAGNOSTICO INMUNOLÓGICO
* Prueba cutánea de la tuberculina
* Pruebas de liberación de IFN-
MICROSCOPIA
* Tinción de Ziehl-Neelsen
* Tinción acidorresistente con fluorocromo
Truant
PRUEBAS BASADAS EN LOS ÁCIDOS 
NUCLEICOS 
* Pruebas de amplificación de los 
ácidos nucleicos (AAN)
CULTIVO 
* Medios de agar sólido o con huevo 
* Medios de caldo
IDENTIFICACIÓN
* Propiedades morfológicas 
* Reacciones bioquímicas 
*Análisis de los lípidos de la pared celular 
* Sondas de ácidos nucleicos 
* Secuenciación de los ácidos nucleicos
ITRATAMIENTO Y CONTROL
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
 Complejos y controvertidos
 Combinaciones farmacológicas. 
OMS
Tuberculoide
(paucibacilar)
Rifampicina y 
Dapsona
6 meses
Lepromatosa
(multibacilar). 
Clofacimina 12 meses
ISONIAZIDA
RIFAMPICINA
ETAMBUTOL
PIRAZINAMIDA
ITRATAMIENTO Y CONTROL
[Continuación]
Alteraciones 
Funciones 
Gastrointestinales
Vigilancia 
activa.
Intervenciones 
profilácticas y 
terapéuticas .
Seguimiento 
cuidadoso de 
los casos.
CONTROL
COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
Paul Ehrlich
Examen básico 
para el control y 
tratamiento de 
la tuberculosis 
COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
[Continuación]
Especies Reactivas de Oxígeno (ERO)
Capacidad de Detoxificación
• Microflora intestinal
«PERMEABILIDAD INTESTINAL»
1
 Seleccionar de la muestra (esputo) la partícula útil.
 Realizar extendido de la muestra (Extender de manera
homogénea).
 Dejar secar la preparación a temperatura ambiente.
 Fijar al calor.
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
[Continuación]
Especies Reactivas de Oxígeno (ERO)
Capacidad de Detoxificación
• Microflora intestinal
«PERMEABILIDAD INTESTINAL»
2
 Cubrir todo el extendido con fucsina fenicada .
 Calentar lentamente hasta la emisión de vapores. (5 min)
 Lavar con agua. Eliminar el exceso de fucsina.
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
[Continuación]
3
 Cubrir el extendido con alcohol acido.
 Decolorar hasta eliminar el exceso de colorante (incoloro).
 Lavar con agua. Eliminar el exceso de agua.
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
[Continuación]
Especies Reactivas de Oxígeno (ERO)
Capacidad de Detoxificación
• Microflora intestinal
«PERMEABILIDAD INTESTINAL»
4
 Cubrir todo el extendido con azul de metileno.
 Dejar actuar durante 1 minuto.
 Lavar ambos lados de la lamina con agua. Limpiar por debajo.
 Dejar secar a temperatura ambiente en posición vertical .
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
[Continuación]
Especies Reactivas de Oxígeno (ERO)
Capacidad de Detoxificación
• Microflora intestinal
«PERMEABILIDAD INTESTINAL»
5
 Observar al microscopio con
objetivo de inmersión de 100x
Bastones largos, delgados , ligeramente
curvos, rojos o fucsia en un fondo azul.
COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
[Continuación]
Especies Reactivas de Oxígeno (ERO)
Capacidad de Detoxificación
• Microflora intestinal
«PERMEABILIDAD INTESTINAL»
6
 (-) Negativo: No se observaron BAR en 100 campos observados.
 (+) : Menos de 1 BAR x C, en 100 campos observados.
 (++) : De 1 a 10 BAR x C, en 50 campos observados.
 (+++) : Mas de 10 BAR x C, en 20 campos observados.
¡¡MUCHAS
GRACIAS!!