Evaluación del crecimiento in vitro de maracuyá amarilla (Passiflora edulis SIMS forma flavicarpa) a partir de segmentos nodales mediante la técnica de organogènesis

•

Escuela Universidad Nacional

Kerli Julieth Martínez Arias

20/3/2024

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EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO IN VITRO DE MARACUYÁ AMARILLA (Passiflora
edulis SIMS FORMA FLAVICARPA) A PARTIR DE SEGMENTOS NODALES MEDIANTE
LA TÈCNICA DE ORGANOGÈNESIS

LIZETH PAOLA ORTIZ RODRIGUEZ

UNIVERSIDAD DE SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, NATURALES Y AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
BUCARAMANGA
2019

EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO IN VITRO DE MARACUYÁ AMARILLA (Passiflora
edulis SIMS FORMA FLAVICARPA) A PARTIR DE SEGMENTOS NODALES MEDIANTE
LA TECNICA DE ORGANOGENESIS

LIZETH PAOLA ORTIZ RODRIGUEZ

TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito Para optar al título de
MICROBIÓLOGO INDUSTRIAL

Director
CHRISTIAN ANDREI CHACIN ZAMBRANO
Ing. MSc en Biotecnología Microbiana

UNIVERSIDAD DE SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, NATURALES Y AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
BUCARAMANGA
2019
iii

AGRADECIMIENTOS
A Dios por darme la vida, sabiduría en este camino. A mis padres y mis hermanos y sobrino, que
más que una inspiración, se han convertido en mis asesores académicos y personales brindándome
en todo momento para convertirme en un gran ser humano. A John Edward Montes por su respaldo
y apoyo incondicional
Agradezco a mi tutor Christian Andrei Chacín Zambrano y María Cañas por brindarme el apoyo y
guiarme en este proceso, por hacerme parte de este proyecto por brindarme todo su apoyo y
comprensión.
Al SENA Tecnoparque nodo Bucaramanga por su apoyo financiero para el desarrollo de este
proyecto.

DEDICATORIA

A Dios por la sabiduría y la paciencia para continuar trabajando con esfuerzo alcanzando triunfos
a mis padres a quienes agradezco todas sus enseñanzas, por guiarme en cada paso a dar y ese apoyo
en cada una incondicional, a mis hermanos y sobrino por acompañarme y alegrarme la vida en esta
etapa culminada. Y a mi familia por su apoyo incondicional.

TABLA DE CONTENIDO
1 INTRODUCCIÓN .................................................................................................................... 1
2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................................................. 4
3 PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN ....................................................................................... 6
4 JUSTIFICACIÓN ..................................................................................................................... 7
5 MARCO TEÓRICO .................................................................................................................. 8
5.1 Descripción botánica ......................................................................................................... 8
5.2 Origen y taxonomía ........................................................................................................... 8
5.2.1 Clasificación taxonómica ......................................................................................... 9
5.3 Cultivo ............................................................................................................................... 9
5.4 Fenología ......................................................................................................................... 10
5.4.1 Etapa vegetativa ..................................................................................................... 10
5.4.2 Etapa reproductiva ................................................................................................ 10
5.4.3 Etapa productiva .................................................................................................... 10
5.5 Morfología ...................................................................................................................... 11
5.6 Raíz ................................................................................................................................. 11
5.7 Tallo ................................................................................................................................ 11
5.8 Hojas ............................................................................................................................... 11
5.9 Zarcillos .......................................................................................................................... 12
5.10 Flores ............................................................................................................................... 12
5.11 Fruto ................................................................................................................................ 12
5.11.1 Exocarpio ................................................................................................................ 12
5.11.2 Mesocarpio .............................................................................................................. 13
5.11.3 Endocarpio .............................................................................................................. 13
5.12 Cultivo de Tejidos Vegetales .......................................................................................... 13
5.13 Etapas de la micropropagación ....................................................................................... 14
5.13.1 Etapa 0 ..................................................................................................................... 14
5.13.2 Etapa 1 ..................................................................................................................... 14
vii

5.13.3 Etapa 2 ..................................................................................................................... 15
5.13.4 Etapa 3 ..................................................................................................................... 15
5.13.5 Etapa 4 ..................................................................................................................... 15
7 HIPÓTESIS ................................................................................................................................. 19
8 OBJETIVOS ................................................................................................................................ 20
9 METODOLOGÍA ................................................................................................................... 21
9.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN ......................................................................................... 21
9.2 Fases de investigación. .................................................................................................... 21
9.2.1 FASE I. Estandarización del proceso de desinfección ........................................ 21
9.2.1.1 Obtención y preparación del material vegetal ....................................................... 21
9.2.1.2 Obtención y preparación del material vegetal ....................................................... 21
9.2.2 FASE II. Establecimiento del cultivo .................................................................... 24
9.2.3 Análisis Estadístico. ................................................................................................ 24
10 RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................................ 25
10.1 FASE I. Desinfección de explantes de maracuyá amarilla ............................................ 25
10.2 FASE II. Establecimiento del cultivo de maracuyá amarilla ........................................ 31
11 CONCLUSIONES .................................................................................................................. 36
12 RECOMENDACIONES .........................................................................................................37
13 BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................... 38
14 ANEXOS ................................................................................................................................ 42

viii

LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Porcentaje de contaminación de explantes de maracuyá . ............................................. 22
Figura 2 A.Descripción macroscópica: de color blanco, aspecto algodonoso con consistencia
blanda. B.Descripción microscópica: no se observa ninguna estructura reproductiva siendo
clasificado como Micelio esterilia. . .............................................................................................. 24
Figura 3 Porcentaje de oxidación de explantes de maracuyá. ...................................................... 24
Figura 4 A. Oxidación total de los explantes de maracuyá sin la aplicación de ácido cítrico en el
proceso de desinfección. B. Explantes de maracuyá con aplicación de ácido cítrico en el proceso
de desinfección. ............................................................................................................................. 26
Figura 5 Porcentaje de explantes vivos de maracuyá. .................................................................. 26
Figura 6 Porcentaje de formación de botes de maracuyá.. ........................................................... 27
Figura 7 Porcentaje de número de botes de maracuyá ................................................................. 29
Figura 8 Promedio largo de hojas de botes de maracuyá . ........................................................... 30
Figura 9 Explante de hoja de maracuyá del T4 ............................................................................ 31

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ix

LISTA DE TABLAS

Tabla 1 Componentes del tratamiento 1 de desinfección para explantes de maracuyá .............. 19
Tabla 2 Componentes del tratamiento 2 de desinfección para explantes de maracuyá .............. 19
Tabla 3 Componentes del tratamiento 3 de desinfección para explantes de maracuyá .............. 19
Tabla 4 Componentes del tratamiento 4 de desinfección para explantes de maracuyá .............. 20
Tabla 5 Fórmula de los porcentajes de protocolos de desinfección (Braun & Zucari, 2014) .... 20
Tabla 6 Formulación del medio de cultivo a partir del medio basal MS (Murashige Skoog 1962).
Para los explantes del maracuyá in vitro ..................................................................................... 44

LISTA DE ANEXOS

Anexo 1 Análisis de varianza del porcentaje de contaminación. .................................................. 38
Anexo 2 Análisis de varianza del porcentaje de oxidación. ......................................................... 39
Anexo 3 Análisis de varianza de la variable prósperos. ............................................................... 40
Anexo 4 Análisis de varianza de formación de brotes. ................................................................. 41
Anexo 5 Análisis de varianza de número de brotes. ..................................................................... 42
Anexo 6 Análisis de varianza de largo de hojas. .......................................................................... 43
Anexo 7. Formulación del medio de cultivo a partir del medio basal MS (Murashige Skoog 1962)
…………………………………………………………………...………….............................…44

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RESUMEN
Titulo: Evaluación del crecimiento in vitro de maracuyá amarilla (passiflora edulis sims forma
flavicarpa) a partir de segmentos nodales mediante la técnica de organogénesis.
Autor: Lizeth Paola Ortiz Rodriguez
Palabras clave: Cultivo in vitro, maracuyá, segmentos nodales,6-BAP, desinfección, Arginina
Descripción:
Los cultivos de maracuyá se han logrado beneficiar gracias a su gran demanda de exportación a
nivel internacional. En Colombia los cultivos de maracuyá entre los años 2014-2018 han
aumentado de manera significativa. En el departamento de Santander se han presentado factores
como enfermedades causadas principalmente por Fusarium oxysporum y Fusarium solani.
Llevando esto a la baja producción en los cultivos de maracuyá generando pérdidas hasta una 60%
de la producción, con el fin de presentar una alternativa viable para la multiplicación de forma
sana, libre de patógenos y genéticamente uniformes, este trabajo tiene el objetivo evaluar el
crecimiento in vitro de maracuyá amarilla a partir de segmentos nodales mediante la técnica de
organogénesis.
Por esta razón se estableció un proceso de desinfección con diferentes tipos de compuestos y
tiempo de exposición donde se evidenció que T4 presento bajos índices de contaminación,
oxidación y explantes prósperos, de igual forma se estableció un medio de cultivo donde se
estableció que a bajas concentraciones 0,2 mg/l de 6-BAP se logra generar la formación de brotes
con un porcentaje de 97% y un promedio de número de hojas de 1,80 por segmento nodales, igual
manera la aplicación de arginina en concentración de 30 mg/l genera un mayor largo de las hojas
de 2,9 cm.

xii

ABSTRACT
Title: Evaluation of the in vitrogrowth of yellow passion fruit (passiflora edulis sims flavicarpa
form) from nodal segments using the organogenesis technique.

Author: Lizeth Paola Ortiz Rodriguez
Key words: In vitro culture, passion fruit, nodal segments,6-BAP, disinfection, arginine.
Description:
Passion fruit cultivation has been successful thanks to its great export demand internationally. In
Colombia, the cultivation of passion fruit between 2014-2018 has significantly increased the
production of passion fruit. In the department of Santander, factors such as diseases caused mainly
by Fusarium oxysporum and Fusarium solani have been presented.
Leading to low production in passion fruit crops, generating losses of up to 60% of crop production,
in order to present a viable alternative for the massive multiplication of progenies in a healthy way,
free of pathogens and genetically uniform, this project will be developed where the main objective
is to evaluate the in vitro growth of yellow passion fruit from nodal segments through the technique
of organogenesis.
For this reason, a disinfection process was established with different types of compounds and time
of exposure where T4 showed low levels of contamination, oxidation and prosperous explants, in
the same way a culture medium was established where it was established that at low concentrations
0.2 mg / l of 6-BAP is achieved generating the formation of shoots with a percentage of 97% and
an average number of leaves of 1.80 per nodal segment, the same way the application of arginine
in concentration of 30 mg / l generates a greater length of the leaves of 2.9 cm
1

1 INTRODUCCIÓN
Las Passifloraceae, pertenecen a una familia de plantas con una distribución geográfica tropical,
esta comprende de 17 géneros y de más de 660 especies esta es originaria de Brasil, donde llego a
ser extendida Australia. En América (Perú, Ecuador, Venezuela y Colombia) se encuentran
localizados más de 4 géneros y alrededor de 500 especies en su gran mayoría Passifloras (Marín,
Caetano, & Posada, 2009). La gran demanda presentada por exportación de estos cultivos a nivel
internacional, ha permitido que diferentes países extiendan las áreas de cultivos logrando aumentar
investigaciones referentes a la fisiología, control de plagas y enfermedades que afectan los cultivos.
(Delgado, Castaño, & Villegas, 2013). Colombia ha logrado destacarse como un país tropical con
gran diversidad de fuentes biológicas y frutales esto dado por sus diferentes climas y ecosistemas
presentes en los territorios colombianos, el crecimiento de la actividad fructífera en Colombia es
considerada como una actividad con mayor potencialidad, por su gran expansión a nivel
internacional esto dado por connotación y preponderancia en la dieta alimenticia de la población
(Hermandez, 2009)
El maracuyá (Pasiflora edulis Sims forma flavicarpa) que logran crecer en forma de enredadera su
crecimiento optimo oscila entre 24 y 28ºC, cuando se presentan temperaturas por encima el
crecimiento vegetativo de la planta es acelerada, pero logran disminuir su producción debido a que
las altas temperaturas donde logra deshidratarse el líquido estigmático, la cual no realiza una
fecundación de las flores (Fischer, Casierra, & Piedrahíta, 2009).

En Colombia los cultivos de maracuyá entre los años 2014- 2018 ha aumentado de manera
significativa la producción del maracuyá llegando a producir 241.393 toneladas y un área de 14,17
toneladas/área. El departamento de Antioquia se convirtió en el principal producto a nivel nacional,
con una producción de 33.500 toneladas, en segundo lugar, se encuentra el departamento del Meta
con una producción de 32.345 toneladas, en el tercer puesto el departamento del Huila con una
producción de 25.871 toneladas y en el cuarto lugar el departamento del Valle del Cauca con una
producción de 11,110 toneladas en quinto lugar el departamento de Santander con un 5,8% en
producción 5.791 toneladas (Minagricultura, 2018).
En el sector fructífero en el departamento de Santander, presenta un aumento en los últimos años
con un área de sembrada total 646.306 toneladas producidas, en la Provincia de Soto se encuentra
la mayor producción de cultivos de maracuyá donde Girón, Piedecuesta, Lebrija, Rionegro, El
Playón y Los Santos presenta un 75% de cultivos de maracuyá, la siembra de estos cultivos presenta
grande demanda gracias a que sus suelos presentan potencial para la siembra de cítricos
tecnificados (Asohofrucol, 2016)
El cultivo in vitro logra brindar posibilidades para la propagación y el mejoramiento de las plantas,
mejorando la calidad y garantizando una mejor producción, mostrándose como una alternativa,
para la producción de plantas uniformes con altos estándares de calidad para el establecimiento de
cultivos comerciales; por esto la propagación, logra ser una alternativa en cuanto a la producción
de material vegetal, el maracuyá se presenta como un cultivo con una diversidad genética, la cual
permita una micropropagación para la obtención de plantas libres de patógenos (Manjarrés &
Perea, Establecimiento de un protocolo de propagación de Gulupa (Passiflora edulis SIMS) a partir
3

de embriones cigóticos y yemas axilares, 2012) mediante el crecimiento de esta forma evaluar el
crecimiento in vitro de maracuyá amarilla (Pasiflora edulis Sims forma flavicarpa) a partir de la
técnica de organogénesis.
Este trabajo está estructurado en varios capítulos donde en la primera parte se realiza una
introducción acerca de la importancia de los cultivos de maracuyá logrando servir como base para
futuros estudios e investigaciones, como segundo capítulo se realiza la descripción del
planteamiento de problema, justificación, pregunta problema, antecedentes, se establecerán los
objetivos específicos y general del trabajo de investigación. Como tercer capítulo se planteará la
metodología implementada en tres fases y por último capítulo los resultados, discusión,
conclusiones, bibliografía y anexos.

2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En los últimos años los cultivos de maracuyá se han logrado beneficiar gracias a la gran demanda
de importación de 50 toneladas y exportación de 9.486 toneladas para el 2017 donde este es llevado
para el consumo fresco (supermercados, plazas de mercado) o incluso es llevado para procesos
agroindustriales (suplementos vitamínicos, néctares, jugos multivitamínicos). Dentro de los países
que es exportado la maracuyá se encuentra Alemania con 5691.5 toneladas, Bélgica 226,8
toneladas, Canadá con 217,2 toneladas entre otros, en cuanto a importación se encuentra Ecuador
188 toneladas (Minagricultura, 2018).
En nuestro país, el cultivo de maracuyá se ha visto afectando por el fenómeno de la niña generando
una serie de enfermedades fitosanitarias afectando de manera directa la calidad y el rendimiento de
la producción (Mora, 2011). En segundo semestre del 2010 al 2011 se generaron perdidas parciales
y totales en los cultivos de maracuyá, pasando de un rendimiento en el 2010 de 35 toneladas a 8.6
toneladas para el 2011 (Dane, 2011). Es de interés para el agrónomo implementar estrategias
alternativas para sus cultivos y evitar así la pérdida total de la producción de maracuyá (Pasiflora
edulis Sims forma flavicarpa) (Jaramillo, Cárdenas, & Orozco, 2009).
En el departamento de Santander hay factores que han contribuido a la baja producción en los
cultivos de maracuyá amarilla (Pasiflora edulis Sims forma flavicarpa); una de ellas son las
enfermedades causadas principalmente por Fusarium oxysporum y Fusarium solani, agentes de la
pudrición a nivel radicular que en su mayoría generando pérdidas hasta una 30% de la producción
en los cultivos.
5

El control de las enfermedades se basa en la práctica de manejo convencional que resulta costosa
para los agricultores,teniendo que recurrí a la aplicación de fungicidas que en ocasiones resulta ser
ineficientes y a su vez incrementando los costos de producción hasta de un hasta de 70% del cultivo
y contribuyendo a la contaminación ambiental de la biota del suelo (Cubillos, Paez, Valero, Mejia,
& Gámez, 2008) además disminuyendo la biodiversidad asociada del mismo y arriesgando la salud
del suelo , animales y seres humanos que se logren encontrar en su alrededor (Fao, 2015)
Por otro lado, la falta de apoyo gubernamental en la tecnificación de los cultivos y las inadecuadas
buenas prácticas agrícolas (BPA), como también la ausencia de bancos de germoplasma en el
departamento de Santander a nivel de campo que logren estar orientados en la masificación de
variedades con un interés agronómico y económico importante para el productor.

3 PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN
¿Es posible realizar propagación in vitro a partir de maracuyá (Pasiflora edulis Sims forma
flavicarpa) a partir de segmentos nodales mediante de la técnica de organogénesis?

4 JUSTIFICACIÓN
Se desarrollará este proyecto con el fin de evaluar el crecimiento in vitro de explantes de maracuyá
amarilla (Pasiflora edulis Sims forma flavicarpa) a partir de la técnica de organogénesis, como una
alternativa viable para la multiplicación masiva de explantes de forma sana, libre de patógenos y
genéticamente uniformes.
Así mismo, se generará nuevo conocimiento por cuanto ésta es la primera investigación in vitro de
maracuyá en Santander quedando como guía para estudios posteriores mediante el desarrollo de
protocolos para los procesos de desinfección y micropropagación vegetal.
Santander cuenta, con una alta producción de maracuyá. Para ello el gobierno departamental y
asohofrucol departamental formulación en plan de desarrollo del año 2016-2019 que Santander
aplicará nuevas tecnologías tales como la propagación in vitro para la conservación de especies de
interés agrícola para la región de Santander como lo es el maracuyá amarillo (Pasiflora edulis Sims
forma flavicarpa), destacando que los primeros beneficiados sean los agricultores, y sus ingresos
en la producción del fruto serán elevados, reduciendo los costos en la aplicación de químicos
(fertilizantes, insecticidas e fungicidas), buscando aumentar así la producción para el año 2020,
logrando que Santander se convierta en la tercera potencia frutícola a nivel nacional.
A su vez, se seguirá alimentando el banco de germoplasma del laboratorio de tejidos vegetales
ubicado en la Universidad de Santander. Igualmente, se contribuirá en la formación del recurso
humano del área de cultivos in vitro de tejidos vegetales.
8

5 MARCO TEÓRICO
5.1 Descripción botánica

El maracuyá (Passiflora edulis Sims forma flavicara) se caracteriza por ser una planta trepadora
semileñosa, y de gran vigor vegetativo. Su propagación es sexual (hermafroditas) lograda mediante
semillas, la flor prospera a partir de las axilas de las hojas logrando ser vigorosa de color blanco
con rayas púrpuras de 7 cm de ancho; presenta sépalos y pétalos con finos vellos siendo suaves y
tupidos. El tallo es redondo, raíz ramificada, las hojas crecen de 5 a 11 cm de largo y el zarcillo
axilares largos enrollado en la parte superior son de color verde y presentan una apariencia rojiza
o incluso violeta. Así mismo, sus hojas son alternas trilobadas de base acorazonada y bordes
ligeramente cortantes.
El fruto es de forma de ovoide de 4 a 10 cm de largo y un diámetro de 4 a 20 cm, lo que logra
equivaler entre 100 g y 130 g. La base y el ápice son redondos su corteza de color amarillo, de
consistencia dura, lisa y cerosa, la semilla en forma ovalada de 5 a 6 mm de largo y de ancho 3 a 4
mm con retículas de color negro o incluso marrón. La floración o apertura de la flor logra ser dada
únicamente en las tardes, y de acuerdo a las condiciones ambientales inicialmente la lluvia durante
el periodo de floración de la planta y a su adecuado manejo (Jaramillo, Cárdenas, & Orozco, 2009)
5.2 Origen y taxonomía

El maracuyá (Passiflora edulis Sims forma flavicara) es originario de América específicamente de
Brasil, aunque fue difundida a Australia, y pasando luego por Hawái, este tipo de cultivo se ve en
gran extensión en climas tropicales, es casual encontrar en climas fríos. (Amaya, 2009)
9

5.2.1 Clasificación taxonómica

División Espermatofita
Subdivisión Angiosperma
Clase Dicotiledónea
Subclase Arquiclamídea
Orden Perietales
Suborden Flacourtinae
Familia Plassifloraceae
Genero Pasiflora
Especie Edulis
Variedad Flavicarpa
Fuente: (Amaya, 2009)
5.3 Cultivo

En Colombia, la maracuyá se cultiva desde una altura entre los 800 y 1.200 msnm; sin embargo las
mejores condiciones para el desarrollo del cultivo esta los 400 y 800 msnm, con temperaturas que
varían entre 21 y 25Cº, el clima es un factor importante para este tipo de cultivo este se desarrolla
en un clima cálido (Jaramillo, Cárdenas, & Orozco, 2009).
El área destinada para la producción de maracuyá en Colombia, en el año 2011, fue de 5.950
hectáreas, de las cuales 3.065 hectáreas se encontraban en edad productiva. Huila, contribuye con
el 26% de hectáreas siendo el principal departamento productor de este fruto (Dane, 2011).

5.4 Fenología

En cultivo de maracuyá en su desarrollo fenológico resalta la polinización como una práctica
exigida, por genética las plantas de maracuyá presentan una condición de autoincompatibilidad por
lo que las flores no polinizan solas; dado esto por la posición de anteras, éstas solo logran
permanecer viable en el día en ese momento se realiza la polinización artificial llevando el polen
de una flor a otra con los dedos o por insectos siendo este el método más efectivo. La etapa de
desarrollo del cultivo de maracuyá es de 20 meses y presenta 3 etapas en condiciones óptimas que
son: etapa vegetativa, reproductiva y productiva (Betancur, y otros, 2014)
5.4.1 Etapa vegetativa

Inicia con la germinación de manera sexual (semillas) siendo trasplantada, y llevada a siembra
hasta el momento de la floración, tiene un tiempo de duración de 180 días (Betancur, y otros, 2014)
5.4.2 Etapa reproductiva

Esta inicia con la formación de la yema floral hasta la polinización, esta etapa es de 420 días,
equivalentes a 14 meses, se considera que la cosecha grande tiene una duración de dos meses,
intercalados con dos cosechas pequeñas de cuatro meses (Betancur, y otros, 2014)
5.4.3 Etapa productiva

Inicia con la polinización hasta la cosecha del fruto, comprendiendo así la etapa completa del
cultivo que esta entre dos a tres años, donde si las buenas prácticas agrícolas son adecuadas este
logra una vida útil de cuatro años en producción (Betancur, y otros, 2014).
11

5.5 Morfología

El maracuyá se caracteriza por ser una planta trepadora que llega a alcanzar unos 9 metros de altura,
de igual forma, por tener raíz ramificada, tallos redondos, zarcillos, hojas ovaladas, flores
hermafroditas, frutos redondos y semillas de color negro o incluso marrones (Betancur, y otros,
2014).
5.6 Raíz

Su sistema radicular es totalmente ramificado, superficial y distribuido en un 90% a los 0.15 a 0.45
cm de profundidad, por esta razón es importante el realizar cuidadosamente al realizar deshierbadas
y demás labores que remuevan el suelo para no causar daño al sistema radicular (Betancur, y otros,
2014).
5.7 Tallo

Esta planta se caracteriza por ser trepadora, la base del tallo es leñoso a medida que se acerca al
ápice logra perder consistencia (EnColombia, 2018).
5.8 Hojas

Son de color verde profundo, brillantes en el haz y pálidas en el envés, simples, alternas
comúnmente trilobuladas con márgenes finamente dentados, néctares redondos en la base del
foliolo,lamina foliar palmeada y mide entre 7 a 20 cm de largo (Betancur, y otros, 2014).

5.9 Zarcillos
Son redondos y en forma espiral, algunos alcanzan longitudes de 0.30 a 0.40 cm, una parte se
origina en las axilas de las hojas junto a las flores estos son las responsables de que la planta tenga
crecimiento trepador (EnColombia, 2018).
5.10 Flores
Son hermafroditas y auto incompatibles, dentro del androginóforo se encuentra el órgano
masculino (androceo), siendo formado por 5 estambres con anteras, los cuales obtienen granos de
polen de color amarillo una de sus desventajas es muy pesado lo cual dificulta la polinización con
el viento, nacen solitarias en las axilas sostenidas por 3 brácteas verdes, con 3 pétalos de color
blanco verdoso 5 pétalos y una corona formada por un abanico filamentoso de color púrpura en la
base y blanca en el ápice la cual atrae insectos para la polinización. La estructura gineceo
(femenina) está ubicada en la parte superior de los estambres (En Colombia 2018).
5.11 Fruto
Es una baya redonda u ovalada de color entre verde intenso a amarillo al momento de la
maduración, posee pequeñas semillas miden entre 6 a 7 cm de diámetro y entre 6 a 12 cm de
longitud por fruto, de color oscuro estas semillas contienen alto contenido de aceite con grandes
valores nutricionales este fruto se diferencia en 3 partes:
5.11.1 Exocarpio

Cascara o corteza, su característica es lisa y brillante por la cera natural, el color puede llegar variar
desde verde a amarillo de acuerdo al estado de maduración.
13

5.11.2 Mesocarpio
Es aquella parte blanca y porosa y de color blanco, compuesta principalmente de pectina, al entrar
en contacto con el agua, se reblandece con facilidad.
5.11.3 Endocarpio
Es aquella envoltura que cubre la semilla generalmente de color pardo oscuro, el jugo es de color
amarillo caracterizado por ser acido, aromático, y de gran sabor agradable (Amaya, 2009).
5.12 Cultivo de Tejidos Vegetales
El cultivo de tejidos, cosiste en tomar una fracción de planta (explante) el cual es cultivado de
manera aséptica logrando así, explantes libres de contaminantes, estos cultivados en un medio
artificial en condiciones físicas y químicas donde la célula logra su potencial intrínseco siendo
llevados condiciones ambientales controlas (Roca & Mroginski, 1991). En los últimos años la
técnica del cultivo “in vitro” ha logrado posicionarse con gran interés para el establecimiento de
diversas plantas; la producción de compuestos útiles, incrementado así la variabilidad genética,
para la obtención de plántulas libre de patógenos, propagación de plantas y conservación e
intercambio de germoplasma (Roca & Mroginski, 1991).
Micropropagación
Es una aplicación más generalizada del cultivo “in vitro” la cual permite cultivar células, tejidos,
órganos, semillas embriones y de esta manera generar explantes de manera rápida y de
descendencia uniforme. Por otra parte, el medio a utilizarse se compone de una mezcla de sales
minerales, vitaminas, reguladores de crecimiento, azúcar, agua y agar y condiciones ambientales
14

controladas (temperatura, humedad y luz). Esto de acuerdo a la especie vegetal y de la etapa del
proceso, logrando ser una herramienta muy útil para el mejoramiento, y la producción de plantas
con calidad uniforme a escala comercial, partiendo de un genotipo selecto y una tasa de
multiplicación ilimitada, todo esto es dado gracias a la propiedad totipotencial que presentan las
células vegetales generando plantas completas. (Aguinaga, 2013).
5.13 Etapas de la micropropagación

5.13.1 Etapa 0

5.13.1.1 Preparación de la planta madre

Para establecer el cultivo en condiciones de asepsia, los explantes deben tener las siguientes
características; sanas, vigorosas, fuera de estrés, nivel nutricional adecuado y un grado de
desarrollo adecuado para lograr así explantes en condiciones sanitarias óptimas, con un crecimiento
vigoroso y libre de contaminantes (Castillo, 2014).
5.13.2 Etapa 1

5.13.2.1 Establecimiento de un cultivo aséptico

Una vez elegida la planta madre, seleccionar los fragmentos (yemas, trozos de hojas, porciones de
raíces, semillas, entre otros), la asepsia de los explantes y las condiciones de esterilidad, son de
vital importancia para el cultivo. Una vez extraído el material de los explantes la realización de una
adecuada desinfección de los fragmentos de la planta, logrando la eliminación de contaminantes
15

(hongos, bacterias) que habitan de forma natural en el ambiente. Una vez realizada la desinfección
del material vegetal, se deben mantener en condiciones de asepsia controladas (Castillo, 2014).
5.13.3 Etapa 2

5.13.3.1 Multiplicación

Mantener y aumentar la cantidad para los nuevos ciclos de multiplicación de brotes, puede llevarse
a cabo, partiendo de tres enfoques: proliferación y crecimiento de meristemos de brotes y axilares
de la planta de la madre, inducción de meristemos adventicios a través de organogénesis (directa o
indirecta) o incluso por embriogénesis somática, o explantes directamente de órganos, tejidos o
células (Castillo, 2014).
5.13.4 Etapa 3

5.13.4.1 Enraizamiento

Durante esta fase se espera que los brotes derivadas de las etapas 1 y 2 que se logren desarrollar
raíces adventicias, el enraizamiento in vitro puede llegar a emplear diferentes tipos de sustratos
(medios solidificado y reguladores de crecimiento (Auxinas) promoviendo la rizogénesis (Castillo,
2014).
5.13.5 Etapa 4

5.13.5.1 Aclimatación de los explantes

Los explantes enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, los brotes se han
desarrollado en condiciones de alta humedad y baja intensidad de luz las características de las hojas
16

obtiene menos ceras epicuticulares, en comparación con las sembradas en condiciones externas.
En pocos días son capaces de adaptarse para así producir su propio recurso de carbono, ya que al
ser cultivadas de manera in vitro logran ser suplementadas con sacarosa y se mantiene en poca luz,
por lo que no dependerá totalmente de su fotosíntesis. (Felix, 2018).

6 MARCO REFERENCIAL
En los últimos años el estudio de la biotecnología vegetal se ha logrado generar gran interés en
investigaciones buscando respuestas a las necesidades según el material vegetal a evaluar. Por esto,
la Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado a través investigador Víctor Otahola (Otahola,
2000) con el fin de determinar la regeneración de la maracuyá, Passiflora edulis flavicarpa a partir
de explantes foliares donde se trabajó con diferentes concentraciones de 6-BAP (0; 0,3; 0,6; 0,9 y
1,2 mg/l) en medio MS utilizando explantes foliares circulares utilizaron un diseño estadístico de
bloque al azar con cinco repeticiones, se encontraron diferencias significativas en la formación de
callos a los 15,25 y 35 días y a su vez la formación de yemas a los 25 y 35 días la mayor formación
de yemas se presentó con la dosis de 0.6 mg/l.
La revista colombiana de biotecnología (Cecilia Severin, 2011) observó la respuesta in vitro de
diferentes biotipos y explantes de Passiflora caerulea L. Utilizando dos tipos de explantes
(entrenudos y segmentos nodales), en medio de cultivo MS, suplementado con vitaminas y 1mg/l-
1 de 6-BAP. Las respuestas fueron diferentes según el genotipo y el explante, los entrenudos
ubicados tanto horizontal como verticalmente en medio de cultivo generaron callos como única
respuesta. A través de estudios histológicos se determinó que en medio de cultivo MS con 1 mg/L-
1 de 6-BAP, los segmentos nodales de P. caerulea originan brotes a partir de las yemas axilares
preformadas y raíces que parten de callos en la base de los mismos. En iguales condiciones, los
entrenudos originan callo como única respuesta.
Tiempo después en Colombia laUniversidad Nacional con el trabajo de Manjares Hernández Elsa
y Perea Dallos Margarita (Manjarrés & Perea, 2012) con establecimiento del protocolo de
18

propagación de gulupa Passiflora edulis. Sims partiendo de embriones cigóticos y yemas axilares.
Donde evaluaron diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio para desinfección de semillas
observando que a concentraciones de 1 y 2% logra ser eficientes para la desinfección.
En el establecimiento del cultivo de embriones cigóticos se observó que la imbibición de las
semillas es dada a concentraciones de 4,33 µm AG3 y además con 6,66 µm 6-BAP. La proliferación
de brotes y su elongación se observó que con la adición de tiamina 3 mg/L, AG3 0,58 µm, 6-BAP
4,44 µm y kinetina 4,65 µm.

7 HIPÓTESIS
Hipótesis nula
No se desarrolla propagación in vitro de Maracuyá amarilla (Pasiflora edulis Sims forma
flavicarpa) a partir de segmentos nodales mediante la técnica de la organogénesis
Hipótesis alterna
Se desarrolla propagación in vitro de Maracuyá amarilla (Pasiflora edulis Sims forma flavicarpa)
a partir de segmentos nodales mediante la técnica de la organogénesi

8 OBJETIVOS

Objetivo general.
General: Evaluar el crecimiento in vitro de maracuyá amarilla (Pasiflora edulis Sims forma
flavicarpa) a partir de segmentos nodales mediante la técnica de organogénesis.
Objetivos específicos
 Estandarizar el proceso de desinfección de explantes de maracuyá amarilla (Passiflora edulis
Sims forma flavicarpa) para lo obtención libre de patógenos.
 Establecer la fase de multiplicación de los explantes de maracuyá amarilla (Passiflora edulis
Sims forma flavicarpa) para la formación de brotes in vitro.
21

9 METODOLOGÍA
9.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN
El proyecto es experimental, lo cual permite evaluar el desarrollo de la investigación que se llevó
a cabo en el laboratorio de tejidos vegetales, ubicado en el la Universidad de Santander, Campus
Lagos del Cacique –Bucaramanga, Colombia.
9.2 Fases de investigación.
Para el desarrollo del proyecto se realizaron las siguientes etapas de investigación:
9.2.1 FASE I. Estandarización del proceso de desinfección
9.2.1.1 Obtención y preparación del material vegetal
La obtención de los segmentos nodales de maracuyá amarilla (Pasiflora edulis Sims forma
flavicarpa), fueron suministrados por el SENA seccional Rionegro, Santander con una temperatura
de 25°C y una altitud de 590 m.s.n.m. Para la recolección del material vegetal, se tendrá en cuenta
que el material no presentará daños aparentes en los tejidos y con una buena calidad fitosanitaria.
Dicho material se llevará al laboratorio de tejidos vegetales en bolsas ziploc a una temperatura de
10°C y almacenados en nevera hasta su utilización.
9.2.1.2 Protocolo de desinfección
Se evaluaron cuatro (4) protocolos de desinfección donde varió el tipo de desinfectante, las
concentraciones y tiempos de aplicación. De esta forma, se buscó asegurar la asepsia de los
explantes durante todo el proceso.

Tratamiento (1):
Compuesto Tiempo (min)
Agua 10
Alcohol al 70% 2
Hipoclorito de sodio 3% 15
Cloranfenicol 3
Tabla 1. Componentes del tratamiento 1 de desinfección para explantes de maracuyá

Tratamiento (2):
Compuesto Tiempo (min)
Hipoclorito de sodio 2% 20
10 gotas de Tween 80 15
Cloranfenicol 5
Tabla 2. Componentes del tratamiento 2 de desinfección para explantes de maracuyá

Tratamiento (3):
Compuesto Tiempo (min)
70 gotas de Yodopovidona 30
Alcohol al 70% 1
Timsen 10
Tabla 3. Componentes del tratamiento 2 de desinfección para explantes de maracuyá

Tratamiento (4):
Compuesto Tiempo (min)
Agua + Solución Jabonosa 5
Timsen 10
40 gotas Yodopovidona 10
Hipoclorito de sodio 5% +
2 gotas de Tween 80 10
Tabla 4. Componentes del tratamiento 2 de desinfección para explantes de maracuyá
Nota: Se realizaron lavados de agua destilada estéril para los tratamientos 1 y 2 en cada paso y los
tratamientos 3 y 4 se realizó el lavado con agua destilada + ácido crítico por 3 (min) con el fin de
eliminar residuos de las soluciones desinfectantes.
Para la lograr determinar el mejor tratamiento se tendrán en cuenta las variables de medición
como es el porcentaje de explantes oxidados, porcentaje de explantes contaminados y porcentaje
de explantes prósperos. (Ver tabla 5).

Variables de medición

Formula de variables
Porcentaje de explantes oxidados (%EO)

Porcentaje de explantes contaminados (%EC)

Porcentaje de explantes prósperos (%EP)
Tabla 5. Fórmula de los porcentajes de protocolos de desinfección (Braun & Zucari, 2014)
24

9.2.2 FASE II. Establecimiento del cultivo

En esta fase se determinó la formulación del medio a partir del medio basal MS (Murashige Skoog
1962). Para ello, se estableció cuatro (4) medios de cultivos. Tabla 6 los cuales variaron en la
concentración de soluciones como auxinas, citoquininas, vitaminas y hormonas de crecimiento
vegetal, cabe resaltar que estos medios son formulados en el laboratorio de Tejidos Vegetales. Ver
anexo (7). Para determinar cuál es la mejor formulación se realizará medición de las siguientes
variables: Número de brotes, largo de las hojas y tiempo de brotación.
9.2.3 Análisis Estadístico.

Para el análisis estadístico se realizó un diseño estadístico factorial 3x3 a partir de ANOVA
obteniendo así diferencias significativas para la comparación de los resultados se utilizó el método
de Turkey en un software Infostat.
25

10 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
10.1 FASE I. Desinfección de explantes de maracuyá amarilla (Passiflora edulis Sims
forma flavicarpa)

De acuerdo a la figura 1 se observan diferencias significativas entre los tratamientos (p<0,05). Ver
anexo (1), se evidencia que el tratamiento T1 obtuvo un mayor porcentaje de contaminación con
un valor del 67% en comparación a los tratamientos T3 con 58%, T2 con 42% y T4 con 2

Figura 1. Porcentaje de contaminación de explantes de maracuyá.

Es posible que el T4 evidenció bajos índices de contaminación por la aplicación del fungicida
Timsen (N-aquil dimetil amonio clorado) en donde se presentó una disminución del 25% de
contaminación con respecto al T1, el cual posee porcentajes de contaminación altos, el timsen es
considerado un agente no oxidante cuya acción biocida, es dada por la alteración del metabolismo
al contacto de la célula. Esta acción del timsen se atribuye principalmente a la ruptura de la
26

membrana, la reactivaciónde las enzimas productoras de energía y a la desnaturalización de las
proteínas esenciales de la célula (Negroni, 2009).
Según (Nel, Steinberg, Labuschagne, & & Viljoen, 2007) el timsen es considerado como un
desinfectante de acción rápida y es activo a concentraciones bajas, mediante investigaciones
realizadas se observó que posee una eficacia alta contra conidios de Fusarium oxysporum,
Fusarium cubense en un tiempo de 30 segundos de exposición en cultivo de banano. Otros estudios
realizados por (Hernández & González, 2010) demostraron que la aplicación de fungicidas logran
disminuir o eliminar de manera parcial la acción de microorganismos fungosos en las plantas
durante la fase cero o incluso en la fase preparativa de micropropagación de la planta. Se observó
con la aplicación del fungicida logró disminuir de manera rápida la presencia de hongos y bacterias
en un tiempo de exposición de 10 minutos, este tiempo en comparación con otros tiempos usados
en otras investigaciones es alto; pero con esto asegura que su efecto sea el adecuado en los cultivos
de maracuyá sin embargo se deben realizar estudios que optimicen el tiempo v.s las
concentraciones del desinfectante.
Otros autores como (Rebolledo, Aparicio, & Cruz, 2006)y (Guerrero, Basantez, Rafael, & Idalmis,
2016) utilizaron hipoclorito de sodio en el proceso de desinfección donde obtuvieron bajos
porcentajes de contaminación al respecto es importante tener en cuenta que al aumentar la
concentraciones y el tiempo de exposición del hipoclorito de sodio los explantes presentaron
necrosis. En este trabajo de investigación se observó que al disminuir la concentración del
hipoclorito de sodio y aumentar el tiempo de exposición, el porcentaje de contaminación aumenta.
27

En relación al tratamiento T4 en el que se aumenta la concentración del hipoclorito de sodio y se
baja el tiempo de exposición se disminuyó el porcentaje de contaminación de los explantes.

La mayor incidencia de contaminación que se presentó en el proceso fue dada por la presencia del
hongo Micelio esterilia, con un porcentaje del 100% como se observa en la figura 2 donde se
muestra el crecimiento de la contaminación presente en la desinfección de marcuya in vitro.

A B
28

Figura 2. A. Descripción macroscópica: de color blanco, aspecto algodonoso con consistencia blanda. B.
Descripción microscópica: no se observa ninguna estructura reproductiva siendo clasificado como Micelio
esterilia.

Figura 3. Porcentaje de oxidación de explantes de maracuyá
En cuento al porcentaje de oxidación en la figura 3, se observan diferencias significativas entre los
tratamientos (P<0.05).Ver anexo (2) donde se presenta un 0% de oxidación en los tratamientos T3
y T4, seguido por el T1 con un 25% y por último tratamiento T2 con un porcentaje de oxidacion
de 58%; resultado que obedece a la aplicación de acido citrico como enjuague en los trataminetos
T3 y T4, lo que influyó en la reduccion de oxidación o fenolizacion en los explantes de maracuya.
En este sentido ácido cítrico es el encargado de inhibir o atrasar el oscurecimiento que se pueden
presentar en frutas y verduras. Para los procesos de desinfección en el cultivo de células vegetales in
vitro, redujo la oxidación de fenoles al momento de realizar los cortes o heridas al cultivo (Meza
Sosa, 2003). La adición de ácido cítrico como antioxidante en el proceso de desinfección, influyo
en una mayor supervivencia de los explantes de maracuyá. Mediante la aplicación del ácido cítrico
como enjuague se evidenció una gran ventaja en comparación con los otros tratamientos. Otro
29

comportamiento de efectividad se vio por la combinación de procesos y condiciones de cultivos
óptimos (tiempo, compuestos inhibidores de crecimiento, y por último la aplicación de soluciones
antioxidantes), establecidos durante la estandarización del proceso de desinfección para el cultivo
de maracuyá. (Ancasi, Montero, Ferreira, & Muñoz, 2016) en su trabajo observaron que la
aplicación de ácido cítrico obtuvo menor grado de oxidación reduciendo el complejo de fenólico
logrando la supervivencia de los explantes de plátano de manera in vitro, evidenciando que la
aplicación del ácido cítrico figura 4, es uno de los antioxidantes más comunes en cultivos in vitro
para evitar la oxidación de tejidos como es en los segmentos nodales del cultivo de maracuyá.
30

Figura 4. A. Oxidación total de los explantes de maracuyá sin la aplicación de ácido cítrico en el proceso
de desinfección. B. Explantes de maracuyá con aplicación de ácido cítrico en el proceso de desinfección.

Figura 5. Porcentaje de explantes vivos de maracuyá

B A

Respecto al porcentaje de explantes vivos en la figura 5, se observa una diferencia significativa
para cada uno de los tratamientos (P<0,05). Ver anexo (3), donde el tratamiento T4 presenta el 75%
de explantes vivos, seguido por el tratamiento T3 con un 42%, tratamiento T1 con un 8% y por
último el tratamiento T2 con un porcentaje 0%. A partir de los segmentos nodales de maracuyá, se
realizó el proceso de desinfección, encontrando que una de las causas de baja contaminación en el
tratamiento T4 es la aplicación de fungicidas Timsen y como agente antioxidante la aplicación de
ácido cítrico, combinación que permitió obtener explantes vivos de maracuyá.
10.2 FASE II. Establecimiento del cultivo de maracuyá amarilla (Passiflora edulis Sims
forma flavicarpa)

Figura 6. Porcentaje de formación de brotes de maracuyá

En la figura 6, se observa el promedio de formación de brotes a partir de los segmentos nodales de
maracuyá, donde se evidencia diferencias significativas entre cada tratamiento (p<0,05). Ver anexo
(4). El tratamiento T4 presentó un promedio de 0,93 de brotes formados, seguido por T3 con un
promedio de 0,67, el tratamiento T2 con un 0,33 y por último T1 con un promedio de 0,00, siendo
el tratamiento T4 el de mayor efectividad en formación de brotes de maracuyá. El alto promedio
de formación de brote obtenido puede estar atribuido al efecto del 6- Bencil aminopurina (6-BAP)
a bajas concentraciones en el medio de cultivo. Según (Chamoro, Martinez, Fernendez, &
Mosquera, 2007) en su investigación demostraron que a bajas concentraciones de 6-BAP logra ser
más eficiente la formación de brotes, de Limonium; estimulando la proliferación de tejidos; esto
corrobora lo obtenido en el presente estudio, donde el T4 generó un 97% de formación de brotes
de maracuyá a partir de los segmentos nodales a una concentración de 0,2 mg/L de 6-BAP. El 6-
BAP es un citoquinina que interviene principalmente en la promoción de la división celular, su
actividad puede variar de acuerdo al estado de diferenciación celular induciendo la formación de
órganos, desarrollo de brotes, estimulación de nutrientes y síntesis de clorofila (Vilchez, Rivas,
Albany, Molina, & Martínez, 2009). (Nasib & Ali, Pakistan Journal of Botany), en su estudio
trabajaron con diferentes concentraciones de 6-BAP, para evaluar porcentaje de brotes de
Codiaeum variegatum, donde al trabajar con concentraciones menores a 0,5 mg/l, mostró un
incremento significativo en la formación de brotes, así mismo, valores por encima de 0,5 mg/l no
lograron mostrar de manera significativa la inducción de brotes. (Paneque, Milanés, Pupo, Reyes,
& Pompa, 2003), demostraron que al trabajar con una concentración de 0,2 mg/l de 6-BAP, se
logró la proliferación de brotes de boniato.
33

Figura 7. Promedio de número de brotes de maracuyá
En la figura 7, evidencia el promedio de numero de brotes, presentando diferencias significativas
entre cada tratamiento (p<0,05). Ver anexo (5), en donde el tratamientoT4 con un promedio de
1,80, generó el mayor número de brotes, seguidos del T3 con un 0,60, T2 con un 0,27 y el T1
presentó un 0,00. En este trabajo se observó que al trabajar con concentraciones bajas de 6-BAP a
0,2 mg/l se generó la mayor cantidad de brotes y número de brotes sanos con características
uniformes entre ellas.Por el contrario, se observó que al aumentar la concentración de 6-BAP se
inhibió el crecimiento de los mismos, (Borges, y otros, 2011) en su estudio tuvo como propósito
optimizar el medio de cultivo in vitro para la micropropagación de Dioscorea alata L conocido
como ñame donde evaluaron diferentes concentraciones de 6-BAP, observando que a una
concentración de 0,01 mg/l de 6-BAP incrementa el desarrollo de brotes y numero de hojas,
resultados similares al estudio se encontró que a bajas concentraciones de 6-BAP logra generar o
aumentar de manera significativa el promedio de brotes y número de hojas para la propagación de
maracuyá.
34

Figura 8. Promedio largo de hojas de botes de maracuyá
De acuerdo a la figura 8, se observan diferencias significativas entre los tratamientos (p<0,05). Ver
anexo (6), donde el tratamiento T4 fue el mejor tratamiento en cuanto al crecimiento de hojas con
un promedio de 2,93 centímetros, seguido por el T3 con un promedio de 1,69; el T2 con promedio
de 0,32 y el T1 no evidenció brotes en los explantes de maracuyá respectivamente. El alto promedio
del crecimiento de hojas puede estar atribuido al efecto de la adición de la arginina en el medio de
cultivo. (Harty, 1985), en su estudio, trabajaron con una concentración de 40 mg/l de arginina, el
cual dio como resultado un promedio de 6,1 de crecimiento donde se muestra que con la aplicación
de arginina al medio de cultivo se logra estimular la expansión de las hojas.
35

Así mismo, (Rodríguez, Capote, & Zamora, 1999) en su investigación de aguacatero (Persea
americana Mill.) demuestra que al trabajar con una concentración de 40 mg/l de arginina en el
medio, se favorece el crecimiento y desarrollo de la lámina foliar. Esto corrobora con los resultados
obtenidos en el presente estudio, en donde el T4 y T3 se le adicionó arginina al medio establecido
para maracuyá, presentándose un crecimiento notorio de las hojas en cada uno de los explantes con
respecto a los otros tratamientos. Siendo el T4 el de mayor crecimiento foliar figura 9, ya que se
adicionó mayor proporción de arginina (30 mg/L).

Figura 9. Explante de hoja de maracuyá del T4

11 CONCLUSIONES
El método de desinfección más eficiente para los segmentos nodales de maracuyá, fue el
tratamiento T4, donde los componentes y sus tiempos fueron agua + solución jabonosa por 5
minutos, timsen por 10 minutos, yodopovidona 10 minutos e hipoclorito de sodio al 5% + tween
20 por 10 minutos y enjuagues con ácido cítrico por 3 minutos obteniendo explantes libre de
patógenos.
En la fase de establecimiento de cultivo se observó, que tratamiento T4 con la concentración de
0.2 mg/L de 6-BAP, generó una mayor respuesta en el porcentaje de formación de brotes con un
97%, un promedio en número de brotes de 1,80 por segmento nodal y un tamaño de hoja de 2,9 cm
con concentraciones de 30 mg/l de arginina.

12 RECOMENDACIONES

Se sugiere aumentar los tiempos de exposición y variar los componentes para el protocolo de
desinfección de los tratamientos T1 y T2 logrando así una disminución de contaminación fúngica
presente en los cultivos de maracuyá.
Evaluar el efecto de otros reguladores de crecimiento a diferentes concentraciones para estimular
proliferación de los explantes a partir de los segmentos nodales.

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14 ANEXOS

Anexo 1

Anexo 2

Anexo 3

Anexo 4

Anexo 5

Anexo 6

Anexo 7
Tabla 6. Formulación del medio de cultivo a partir del medio basal MS (Murashige Skoog 1962). Para
los explantes del maracuyá in vitro.
Formulación de medios para 200 ml
Composición T1 T2 T3 T4
Solucione A 5000 µl 5000 µl 5000 µl 5000 µl
Solucione B 2000 µl 2000 µl 2000 µl 2000 µl
Solucione C 560 µl 560 µl 560 µl 560 µl
Solucione D 200 µl 200 µl 200 µl 200 µl
Solucione E 2000 µl 2000 µl 2000 µl 2000 µl
Ácido ascórbico 0,004 g 0,004 g 0,004 g
Mionositol 0,02 g 0,02 g 0,015 g 0,02 g
Ácido cítrico - - 0,015 g -
Glicina - - 15 µl -
Piridoxina - - 105 µl -
Arginina - 40 µl 30 µl
Riboflavina 0,02 g 0,02 g - 0,02 g
Sacarosa 6 g 6 g 4,5 g 6 g
pH 5,8 5,8 5,8 5,8
Agar 1,4 g 1,4 g 1.8 g 1,4 g
6-BAP 50 µl 40 µl 10 µl 20 µl
Tiamina 100 µl 100 µl 120 µl 100 µl
AIA - - 75 µl -
Ácido nicotínico 36 µl 36 µl - 36 µl
Antibiótico 0,016 g 0,016 g 0,012 g 0,016 g
Orthocide 0,016 g 0,016 g 0,012 g 0,016 g