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Los resultados de crecimiento y características de calidad de la lubina europea ( D. labrax ) alimentados con dietas que incluyen el aumento de los niveles de liofilizado Isochrysis sp. (T-ISO) la biomasa como fuente de proteínas y n-3 PUFA de cadena larga en sustitución parcial de los derivados de pescado.
Abstracto
El objetivo de este estudio fue evaluar la digestibilidad de los nutrientes, el crecimiento, la biometría, vestirse cabo parámetros, músculo filete de composición de ácidos grasos de la próxima y lubina ( Dicentrarchus labrax L.) de tamaño casi comercializable, alimentó niveles crecientes de un secado por congelación biomasa de Isochrysis sp. (Clon T-ISO) como un sustituto parcial de proteínas y lípidos a partir de derivados de pescado, en las dietas donde el nivel de n-3 de cadena larga (LC) PUFA se reduce a través de una renovación parcial de aceite de pescado para el aceite crudo de palma. Desde las dietas que incluyen los ingredientes de la prueba podrían posiblemente dar lugar a cambios de ciertos atributos de calidad, pescado también fueron sometidos a evaluaciones sensoriales en general por un panel entrenado de evaluadores de acuerdo con una prueba triangular.
Tres dietas fueron formuladas para ser groseramente iso -nitrogenous (N, materia seca 7,5%). Una preparación en la que la harina de pescado / guarniciones y aceite de pescado fueron las principales fuentes de proteínas y lípidos fue utilizado como una dieta de control positivo. Dos dietas completas de ensayo se obtuvieron de la preparación de control de manera que aproximadamente 10 y 20% de proteína bruta a partir de una harina de pescado de alta calidad y 18 y 36% de lípidos del aceite de pescado fueron suministrados por la biomasa de microalgas seca. Para destacar el papel de Isochrysis sp. como una fuente de n-3 (LC) PUFA, las dietas que incluyen el aumento de los niveles de la biomasa de microalgas se hicieron groseramente iso --caloric lipídica mediante la sustitución de una parte de aceite de pescado con el aceite de palma que se sabe que es virtualmente libre de n-3 PUFA. Cada dieta se alimentó al aparente saciedad cuadruplicar grupos de lubina (142 g) durante 121 días. Los resultados han mostrado que la sustitución de hasta 20% de proteína cruda a partir de harina de pescado con un secado Isochrysis biomasa y hasta 36% de lípidos de pescado para los suministrados por las microalgas en una dieta con nivel reducido de aceite de pescado, no afectó negativamente a la ingesta de alimento o Crecimiento de desempeño respecto a los controles, incluso si la tasa de sustitución más alta resultó en una disminución (P <0,05) en los lípidos y energía aparente digestibilidad coeficientes y de n-3 (LC) ligeramente reducida contenido de AGPI del tejido muscular comestible (P <0,05) . No se observaron cambios importantes en la dieta depende de las características biométricas y rendimiento masacre. En los niveles reales de inclusión en la dieta, la presencia de microalgas se secó condujo a un aumento de la pigmentación verdosa de la piel, pero no permitió la discriminación de los filetes cocinados por análisis sensorial mediante la prueba de triángulo.
Palabras Clave
Dicentrarchus labrax ;Se alimenta ;La carne de calidad ;Isochrysis sp. (T-ISO) ;La digestibilidad de nutrientes
1. Introducción
Similar a lo que ha ocurrido con otras especies de peces marinos cultivados, también en el caso de la lubina europea ( D. labrax ), un teleósteo carnívoros de gran importancia económica para la acuicultura mediterránea, la búsqueda de alternativas dietéticas para pescar harinas y aceites ha sido principalmente dirigida a la utilización de ingredientes vegetales terrestres ricos en proteínas y aceites vegetales ( Kaushik et al., 2004 , Messina et al., 2013 , Mourente y Bell, 2006 y Tibaldi et al., 2006 ) y la poca atención ha sido hasta hace poco pagado para explorar el potencial de la dieta de las fuentes de alimentación de la novela como la biomasa macro y microalgas ( Tulli et al., 2012 y Valente et al., 2006 ).
Microalgas, en particular, además de sus aplicaciones ya establecidas en los criaderos acuícolas, han atraído una atención creciente como suplementos de alimentos para animales, ya que son una fuente natural de pigmentos, antioxidantes y otros compuestos bioactivos que les dan propiedades funcionales, además de su valor nutricional básico ( Spolaore et al., 2006 ). Más recientemente, la biomasa de microalgas secas se han propuesto también como materias primas potenciales en sustitución parcial de proteínas y lípidos fuentes de pescado en el pescado se alimenta, incluso si los altos costos y la disponibilidad incierta en comparación con los piensos de los productos básicos, actualmente ajustado un límite a su gran uso en los alimentos acuícolas comerciales ( Chini Zittelli et al., 2013 y Shields y Lupatsch, 2012 ).
En general, la biomasa de microalgas contener medios a altos niveles de proteína cruda, a menudo superiores a 45% y oscila entre el 28 y el 71% MS, dependiendo de las especies y condiciones de cultivo / cosecha, con un perfil de aminoácidos que se compara favorablemente con la de otras proteínas de los alimentos ( Becker, 2007 ). Hasta la fecha se han realizado muy pocas investigaciones donde palatabilidad y digestibilidad de las dietas que incluyen la biomasa de microalgas seca han sido estimados en animales monogástricos ( Becker, 2007 y Skrede et al., 2011 ) y más aún en el pescado, donde la información sobre el valor nutritivo de la biomasa de microalgas seca es muy limitada ( Burr et al., 2011 ). A pesar de esto, los estudios anteriores han demostrado la biomasa seca de Spirulina spp., Chlorella spp., Scenedesmus spp., Nanofrustulum spp. y Tetraselmis suecica , para ser fuentes de proteína suplementaria de valor o sustitutos parciales de proteína de la harina de pescado en la dieta de varias especies de peces omnívoros y carnívoros en la etapa juvenil ( Badwy et al., 2008 , Belay et al., 1996 , Kiron et al. 2012 , Nandeesha et al., 2001 , Olvera-Novoa et al., 1998 , Palmegiano et al., 2005 , Vizcaíno et al., 2014 y Walker y Berlinsky, 2011 ). En la lubina, la biomasa seca de T. suecica fue recientemente demostrado ser capaz de reemplazar hasta un 20% de proteína de harina de pescado sin obstaculizar el desempeño del crecimiento de los peces ( Tulli et al., 2012 ).
Algunas microalgas marinas pueden producir directamente n-3 de cadena larga (LC) ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs) y en este sentido su inclusión en la dieta podrían posiblemente escatimar el uso de lípidos de pescado. Preparaciones secas de microalgas particularmente ricos en ácido docosahexaenoico (DHA), tales como Schizochytrium spp. y chonii Crypthecodinium , han demostrado su eficacia como los sustitutos parciales de aceite de pescado en las dietas de iniciación de ciertas especies de peces marinos ( Atalah et al., 2007 , Carter et al., 2003 y Miller et al., 2007 ).
En este concurso, la biomasa seca de Isochrysis sp. merece especial atención, ya que combina nivel y calidad de proteína con alta en lípidos y contenido de DHA medio-alto ( Ben-Amotz et al., 1987 , Brown et al., 1993 y Sánchez et al., 2000 ), lo que lo convierte en un potencial ingrediente candidato para las dietas altamente sostenible, donde además de la harina de pescado, incluso a niveles considerables de aceite de pescado tienen que ser sustituida por otras fuentes. Esto sería particularmente el caso de las dietas para la lubina europea, que es notablemente incapaz de biosíntesis significativa de n-3 (LC) PUFA ( Mourente et al., 2005 ) y donde un reemplazo sustancial de aceite de pescado por aceites vegetales llevado a una marcada reducción de la n-3 (LC) el contenido de AGPI de la carne ( Montero et al., 2005 y Mourente y Bell, 2006 ). Hasta la fecha, a pesar de una composición de nutrientes favorables y alentadores resultados observados en los menores la dorada ( Palmegiano et al., 2009 ), el uso de secado Isochrysis biomasa como materia prima en las dietasde peces ha sido poco investigado en especies de peces marinos. Además, hay poca información sobre los efectos de la inclusión de importantes niveles de biomasa de microalgas marinas secos en la dieta de crecimiento especies de peces marinos, donde, además de la eficiencia alimenticia respuesta de crecimiento y los efectos sobre la calidad nutricional de la parte comestible, el papel de microalgas en que afecta a ciertos atributos sensoriales de los peces tales como el color de la piel y la carne ( Belay et al., 1996 , Tulli et al., 2012 y Walker y Berlinsky, 2011 ), así como las características sensoriales generales de la filete cocinado merecen atención desde el punto de vista de la aceptación del consumidor.
El objetivo de este estudio fue evaluar la digestibilidad de los nutrientes, el crecimiento, la biometría, vestirse cabo parámetros, músculo filete de composición de ácidos grasos de la próxima y lubina ( D. labrax L.) de tamaño casi comercializable, alimentado aumento de los niveles de secado por congelación biomasa de Isochrysis sp. (Clon T-ISO) como un sustituto parcial de proteínas y lípidos a partir de derivados de pescado, en las dietas donde el nivel de n-3 (LC) PUFA se reduce a través de una renovación parcial de aceite de pescado para el aceite crudo de palma. Desde las dietas que incluyen los ingredientes de la prueba podrían posiblemente dar lugar a cambios de ciertos atributos de calidad, pescado también fueron sometidos a evaluaciones sensoriales en general por un panel entrenado de evaluadores de acuerdo con una prueba triangular.
2. Materiales y métodos
2.1. Ingredientes de prueba y dietas
La biomasa liofilizada de Isochrysis sp. F & M-M36 (T-ISO) fue producido por CNR-Instituto para el Estudio de los Ecosistemas, Florencia, Italia, en la planta comercial de Microalghe Camporosso Srl. (Imperia, Italia). La planta consta de cuatro módulos independientes cada uno incluyendo un número de fotobiorreactores Panel de pared verde de la primera generación (GWP-I) de 1 m de altura, de 12,5 m de largo, 4 cm de espesor y 500 L de volumen de cultivo, coloca verticalmente en paralelo filas ( Chini Zittelli et al., 2013 y Tredici y Rodolfi, 2004 ). Isochrysis sp. F & M-M36 se cultivan al aire libre durante el verano el uso de agua de mar artificial (Mar Adriático Aquarium & Equipment, Rimini, Italia) a 30 g L - 1 salinidad, filtrada a través de 80, 10 y 1 micras sopladas en fusión cartuchos de polipropileno (Everblue, Parma, Italia) y añadido con f medio como una fuente de nutrientes ( Guillard y Ryther, 1962 ). Sobrecalentamiento Cultura fue impedido por la activación automática de los intercambiadores de calor cuando la temperatura supera 28 ° C. pH se mantuvo en valores de aproximadamente 7.8 a 7.9 mediante la inyección de CO puro 2 en la cultura a través de difusores de gas colocados a lo largo de los reactores. La biomasa de algas se cosechó por centrifugación. Acerca de 1.000 L de la cultura se alimenta continuamente a un separador de centrífuga (Westfalia mod. KA6, Alemania) que produjo una pasta con un contenido medio de humedad de 80% (agua principalmente intracelular), que se recuperó de las cámaras de recogida en 1 kg palmaditas, entonces congelado, liofilizado y envasado al vacío.
La composición química y el perfil de ácidos grasos de la liofilizado Isochrysis biomasa se ​​muestran en la Tabla 1 y la Tabla 3 , respectivamente.
Tabla 1.
Composición química de Isochrysis sp. F & M-M36 biomasa liofilizadas (datos expresado en materia seca).
	Composición aproximada (%)
	La proteína cruda
	45.4
	Lípido total
	27.3
	Ceniza
	9.7
	Fósforo (g / kg)
	0.3
	ß-Caroteno (mg / kg)
	761.7
	
	AA esenciales (%)
	Arginina
	2.52
	La histidina
	0.91
	Isoleucina
	1.76
	La leucina
	3.92
	Lisina
	2.46
	La metionina + cisteína
	1.41
	La fenilalanina + tirosina
	3.75
	Treonina
	2.38
	El triptófano
	0.56
	Valina
	2.37
	
	AA no esenciales (%)
	Alanina
	3.17
	El ácido aspártico
	4.19
	Ácido glutamico
	4.58
	Glicina
	2.64
	Proline
	2.36
	Serina
	2.17
	CEA: relación NEAA
	1.15
	
	La composición de ácidos grasos (%)
	SFA total
	5.66
	MUFA total
	3.89
	N-6 Total PUFA
	1.98
	N-3 PUFA total
	5.52
	20: 5n-3
	0.19
	22: 6 n-3
	1.81
	n-3 / n-6
	2.8
Tres dietas fueron formuladas para ser groseramente iso -nitrogenous (N, 7,5% MS) y iso -lipidic (lípidos totales, el 17,5% de MS). Niveles de proteína cruda y lípidos fueron elegidos en base a las cifras sugeridas como óptimo para la lubina europea por Peres y Oliva-Teles, 1999a y Peres y Oliva-Teles, 1999b .
La composición de ingredientes, análisis proximal, de aminoácidos y contenido de ácidos grasos y los perfiles de las dietas de prueba se muestran en la Tabla 2 y la Tabla 3 . Una preparación en la que la harina de pescado / guarniciones y aceite de pescado fueron las principales fuentes de proteínas y lípidos fue utilizado como una tratamiento de control positivo. Los otros dos alimentos completos, denotadas como IPO1 y IPO2, se obtuvieron de la preparación de control a través de la sustitución parcial de la harina de pescado y aceite de pescado con niveles crecientes de la biomasa de microalgas liofilizado. Estos cambios dieron como resultado aproximadamente 10 y 20% de proteína cruda a partir de una harina de pescado de alta calidad y 18 y 36% de lípidos en bruto de aceite de pescado para ser sustituido con los mismos nutrientes suministrados por la biomasa de microalgas seca. Para destacar el papel de Isochrysis spp. como una fuente de n-3 (LC) PUFA las dietas que incluyen el aumento de los niveles de la biomasa de microalgas se hicieron groseramente isocalórica isolipidic mediante la sustitución de una parte de aceite de pescado con el aceite de palma que se sabe que es virtualmente libre de n-3 PUFA ( Ng y Gibon, 2011 ). Como se muestra en la Tabla 2 , incluso en la dieta altamente sustituido (IPO2) el nivel de n-3 PUFAs (LC) se mantuvo muy por encima del mínimo requerido en la dieta de la lubina europea (por ejemplo, 7 g / kg seca de la dieta; Skalli y Robin , 2004 ).
Tabla 2.
Composición de ingredientes, análisis proximal, contenido de energía bruta, composición en aminoácidos esenciales y el contenido de AGPI de las dietas de la prueba.
	
	Dietas
	
	Control
	IPO1
	IPO2
	Composición Ingrediente (g / kg)
	Chile harina de pescado prime
	300
	250
	200
	Recortes de pescado un
	250
	250
	250
	Liofilizado Isochrysis sp.
	0
	70
	140
	El gluten de trigo b
	120
	120
	120
	La harina de soja (46% PC)
	80
	80
	80
	Harina de trigo
	100
	85
	70
	Aceite de pescado
	100
	70
	40
	Aceite de palma crudo
	0
	25
	50
	Mezcla mineral c
	10
	10
	10
	La vitamina mezcla d
	10
	10
	10
	Celita®
	15
	15
	15
	Na lignosulfonato
	15
	15
	15
	
	Composición aproximada (% como fed)
	Humedad
	5.6
	5.3
	5.6
	La proteína cruda
	47.9
	47.7
	47.1
	Lípido total
	17.2
	17.8
	18.2
	Ceniza
	15.5
	15.2
	14.8
	Cenizas insolubles en ácido
	1.5
	1.6
	1.6
	ND fibra
	3.6
	3.3
	3.7
	Fibra AD
	2.2
	2.0
	1.7
	β-caroteno (mg / kg)
	10.0
	69.0
	130.0
	La energía bruta (MJ / kg)
	20.3
	20.5
	20.6
	
	AA esenciales (como% alimentado)
	Arginina
	2.5
	2.7
	2.6
	La histidina
	0.9
	0.9
	0.9
	Isoleucina
	1.2
	1.6
	1.6
	La leucina
	2.9
	3.2
	3.0
	Lisina
	2.3
	2.6
	2.4
	La metionina + cisteína
	1.9
	1.8
	1.7
	La fenilalanina + tirosina
	2.9
	3.1
	3.0
	Treonina
	1.8
	2.0
	2.1
	triptófano
	0.3
	0.3
	0.3
	valina
	1.8
	2.0
	1.9
	
	AA no esenciales (como% alimentado)
	Alanina
	2.7
	2.8
	2.7
	El ácido aspártico
	3.5
	3.7
	3.5
	Ácido glutamico
	7.7
	8.0
	7.3
	Glicina
	3.8
	3.8
	3.5
	Proline
	3.5
	3.6
	3.5
	Serina
	2.2
	2.2
	2.1
	CEA: relación NEAA
	0.80
	0.84
	0.86
	
	Contenido de PUFA (g / 100 g)
	SFA total
	3.10
	3.69
	4.00
	MUFA total
	6.15
	5.71
	4.97
	N-6 Total PUFA
	2.13
	2.14
	2.00
	N-3 PUFA total
	4.54
	3.93
	3.15
	20: 5n-3
	1.09
	0.83
	0.55
	22: 6 n-3
	2.24
	1.85
	1.39
un
Vereinigte Fischmehlwerke Cuxhaven GmbH & Co. KG, Cuxhaven, Alemania (humedad, 6,9%; proteína cruda, el 64,3% MS; lipídico crudo, un 9,1%MS; ceniza, 23,8% DM).
b
Roquette, Lestrem, Francia.
c
Composición (% de la mezcla): HPO 4 · 2H 2 O, 78,9; NaCl, 17,65; MgO, 2.725; FeCO 3 , 0.335; KI, 0.005; ZnSO 4 · H 2 O, 0.197; MnSO 4 · H 2 O, 0,094;CuSO 4 · 5H 2 O, 0,027; Na Selenita, 0.067.
d
Composición (% de la mezcla): Clorhidrato de tiamina, 0.16; La riboflavina, 0,39; Piridoxina HCl, 0,21; Cianocobalamina, 0,21; La niacina, 2,12; Pantotenate calcio, ácido fólico 0,63, 0,10; La biotina Vit H, 1,05; La colina Clorure, 83.99; Mioinositol, 3,15; Manténgase C® DSM, 4,51; a-tocoferol Vit E, 3,15;Menadiona Vit K3, 0,24; Vit A (2500 UI / kg de dieta), 0,03; Vit D3 (2400 UI kg / dieta), 0,05.
Tabla 3.
Perfil de ácidos grasos de las dietas de biomasa de microalgas, aceite de palma y de prueba se secaron (ésteres metílicos de ácidos grasos totales%) (a) .
	
	Liofilizado Isochrysis sp.
	Aceite de palma
	Dietas
	
	
	
	Control
	IPO1
	IPO2
	12: 0
	2.1
	0.2
	tr.
	tr.
	tr.
	14: 0
	10.5
	1.6
	4.3
	4.6
	4.3
	16: 0
	6.8
	43.9
	11.7
	16.0
	20.4
	18: 0
	1.1
	5.0
	2.1
	2.3
	2.6
	20: 0
	1.6
	0.4
	0.4
	0.4
	0.4
	SFA total
	32.3
	51.1
	19.2
	23.6
	28.1
	
	16: 1n-7 + 9
	6.3
	0.1
	4.3
	3.4
	2.6
	18: 1n-9
	9.4
	39.2
	17.1
	19.8
	22.1
	18: 1n-7
	2.1
	-
	2.1
	1.9
	1.7
	20: 1n-9
	0.5
	0.1
	5.3
	4.2
	3.0
	20: 1n-11
	2.1
	-
	0.7
	0.8
	0.4
	22: 1n-9
	0.5
	-
	0.7
	0.4
	0.4
	22: 1n-11
	-
	-
	7.8
	6.1
	4.3
	MUFA total
	22.6
	39.4
	38.1
	36.5
	34.9
	
	18: 2n-6
	5.8
	9.7
	11.7
	12.2
	12.8
	18: 3n-6
	1.6
	-
	-
	-
	0.4
	20: 4n-6
	0.5
	-
	0.4
	0.4
	0.4
	22: 5n-6
	2.1
	-
	-
	0.4
	0.4
	N-6 Total PUFA
	11.5
	9.7
	13.2
	13.7
	14.0
	
	18: 3n-3
	7.4
	0.1
	2.9
	3.0
	3.4
	18: 4n-3
	11.0
	-
	2.1
	2.7
	3.4
	20: 4n-3
	0.3
	-
	0.7
	0.8
	0.4
	20: 5n-3
	1.1
	-
	6.8
	5.3
	3.8
	22: 5n-3
	1.0
	-
	1.4
	1.1
	0.9
	22: 6 n-3
	10.5
	-
	13.9
	11.8
	9.8
	N-3 PUFA total
	32.0
	0.1
	28.1
	25.1
	22.1
(A) Los ácidos grasos 10: 0, 11: 0, 12: 0, 13: 0, 14: 1n-5, 15: 0, 16: 2n-4, 16: 3n-4, 17: 1, 16: 4n-1, 18: 2n-4, 18: 3n-4, 18: 4n-1, 20: 1n-7, 20: 3n-6, 20: 3n-3, 20: 4n-3, 21: 5n- 3, 22: 4n-6 fueron considerados en sus respectivas fracciones compuestas, pero no se muestran en la Tabla.
Si no se especifica lo contrario en la Tabla 2 , las materias primas y aditivos alimenticios se obtuvieron a través de proveedores locales. Las dietas fueron fabricados en los laboratorios del Departamento de Ciencia de los Alimentos (DIAL), Universidad de Udine (Italia). Todos los ingredientes se molieron a través de un tamiz de 0,5 mm antes de la mezcla final y la granulación seca a través de un colorante de 4,5 mm. Las dietas se almacenaron a - 3 ° C hasta su uso.
2.2. Prueba de crecimiento
Ciento sesenta y ocho bajo-medio sib mar fueron seleccionados de acuerdo con el tamaño de una población residente y dividieron al azar en 12 grupos, cada uno de los 14 ejemplares. Los grupos de peces se almacenan en tanques de fibra de vidrio de 250 L que forman parte de un sistema de agua parcialmente recirculación interior (volumen total, 9 m 3 ; renovarlo todos los días, 5%; la duración del día artificial, 12 h; la intensidad de luz en la superficie del tanque, 200 lx) provistos con control termostático de la temperatura del agua, mecánica filtro de arena, filtro biológico y un aparato de la lámpara UV. El sistema garantiza casi constante y óptima calidad del agua para la lubina (temperatura, 22,8 ± 0,90 ° C; salinidad, 25 ± 1 ‰, el oxígeno disuelto, 7,0 ± 0,29 mg / L; pH, 8,2 ± 0,20; nitrógeno total amoníaco, <0,25 mg / L; nitrito-nitrógeno, <0,10 mg / L).
Después de la siembra, los peces fueron alimentados con la dieta control y adaptados más de 2 semanas a las condiciones experimentales. Al final de este período preliminar, dos peces por tanque se tomaron muestras al azar, se sacrificaron mediante una sobredosis de anestésico (Finquel®, Argent laboratorios, Redmont-VI, EE.UU.) y luego agrupada, picada, liofilizado y molido para ser analizados por inicial composición de todo el cuerpo.
Al comienzo de la prueba de crecimiento hubo 12 peces en cada tanque (peso corporal medio inicial 142,0 ± 0,5 g). Los peces se pesaron a granel y cisterna grupos asignados por cuadruplicado a las tres dietas de acuerdo con un diseño completamente al azar.
Lubina se ofrecieron las dietas de prueba 6 días a la semana durante 121 días. Los peces fueron alimentados dos comidas diarias (08:00 y 16:30) hasta la saciedad visual (es decir, hasta que se le negó el artículo primero de alimentación). El consumo de alimento real por grupo se registró diariamente. Peces eran grupo pesaron cada 4 semanas, después de un 24-h rápido y bajo anestesia moderada (Finquel®, Argent Laboratories, Redmont-VI, EE.UU., 20-50 mg / L).
Los procedimientos de manipulación y métodos de muestreo que involucran peces utilizados en el juicio seguido las directrices de la directiva de la Unión Europea 2010/63 / UE relativa a la protección de los animales utilizados para fines científicos. El consumo de alimento, tasa de crecimiento específico (SGR), la conversión alimenticia (FCR), y tasa de eficiencia proteica (PER) se midieron / calculado por grupo de más de 121 días. Al final del experimento, todos los peces de cada tanque se mataron por un golpe de percusión a la cabeza y se mantienen sumergidas en un baño de hielo-lechada antes de ser sometido a la biometría, las mediciones de color de la piel o transformados para su posterior análisis.
De ellos, 4 peces por grupo se tomaron muestras al azar y luego picada, agrupado y se utilizan como muestras finales para el análisis conjunto posterior contenido del cuerpo N y para calcular la retención de proteína bruta (GPR).
Después de matar, treinta peces por tratamiento dietético se sometió inmediatamente a las mediciones de color de piel individuales. De estos, 15 muestras se sometieron entonces a mediciones de dureza y de biometría antes de ser diseccionado a fin de evaluar pesos de los órganos principales y el rendimiento masacre calculados en muestras individuales. Los 15 filetes izquierda obtenidos hasta el momento fueron sometidos a análisis de color entonces estaban desolladas y el músculo masa obtenida se picó y se mantuvieron congeladas (- 60 ° C) para ser analizados posteriormente por la composición de ácidos grasos y la próxima.
2.3. Digestibilidad de los alimentos
La digestibilidad aparente de las dietas de prueba se midió al mismo tiempo que la prueba de crecimiento descrito anteriormente y adoptando el método indirecto. Cenizas insolubles en ácido (AIA) se utilizó como un marcador indigestible externo (Celite®, Prolabo, Francia, es decir, polvo de sílice de diatomeas purificada, que contiene> 95% w / w de la ceniza insoluble en ácido) añadido en cantidades iguales (15 g / kg) a cada dieta antes de la mezcla final y la granulación seca ( Tabla 2 ). Las mediciones de digestibilidad se llevaron a cabo usando un sistema de tanque desarrollado por la Universidad de Guelph (Guelph CYAQ-2; Cho, 1992 ) que consiste en unidades de tres tanques cada uno equipados con un tubo de desagüe común conectado a una columna de decantación para recoger el material fecal. Cada tanque 60-L estaba abastecido con 10 lubina (peso promedio 107 ± 12 g; 3.1 a 3.2 kg de biomasa por unidad). El aparato de todo el sistema de tanque estaba conectado al sistema de agua de recirculación parcialmente descrito anteriormente. Los peces fueron dejados para adaptarse a las condiciones de cultivo de más de 30 días antes de comenzar la recolección fecal. Las mediciones de digestibilidad de cada dieta se llevaron a cabo en unidades triplicado utilizando los procedimientos descritos por Tibaldi et al. (2006) . Los coeficientes de digestibilidad aparente (ADC) de MS, proteína cruda, lípidos crudo y la energía bruta de las dietas se calcularon de acuerdo a Maynard y loosly ( Cho, 1992 ).
2.4. Mediciones de color de piel y músculo
Mediciones de color de la piel individual y musculares filete fueron realizados por un CM 2600d Chroma Meter (Minolta, Reino Unido). Lecturas de color de la piel se llevaron a cabo en tres dorsal (post-craneal,medial, caudal) y dos ubicaciones ventrales (post-craneales, mediales), mientras que las mediciones de color musculares filete se tomaron en tres lugares de cada filete a la izquierda (dorsal, ventral, caudal) .
Los datos se expresaron usando el sistema L * a * b *, que representa ligereza, rojo / greeness y amarillo / color azulado, respectivamente ( CIE, 1976 ). Además, los valores de "Chroma" = (a * 2 + b * 2 ) media se calcularon, como una medida de la saturación de color y "Hue" = arctan (b * / a *).
2.5. Medidas de dureza Pescado
Mediciones de dureza de pescado entero individuales se llevaron a cabo en dos lugares diferentes a lo largo del cuerpo de dorsal a caudal con el instrumento Zwick Analog dureza Shore. Este instrumento manual sólo es capaz de medir la dureza Shore A, que es la dureza relativa de los materiales elásticos. Una lectura de 0 significa una penetración completa de la muestra. Por el contrario una lectura de 100 corresponde a ninguna penetración. Una carga de ensayo de 8 N se utiliza para calibrar el instrumento.
2.6. La evaluación sensorial
Para la evaluación sensorial de una prueba triangular ( ISO, 1983 fue organizado). En la prueba triangular se les pide a los evaluadores para determinar diferencia sensorial general entre tres muestras (de los cuales dos son muestras del mismo grupo y uno de un grupo diferente) que ofrece al mismo tiempo en el mismo período de sesiones, y que indique la muestra impar. Este método, es un procedimiento para determinar si existe una diferencia perceptible sensorial para todos los atributos de las muestras o similitud entre las muestras ( Meilgaard et al., 1991 ). La prueba se llevó a cabo utilizando 45 filetes por tratamiento dietético (15 filetes correctas obtenidas a partir de pescado previamente analizado más 30 filetes obtenidos después de la disección de los peces restante). Para este fin, la porción epaxial (dorsal) de cada filete con la piel se dividió en tres porciones, envuelto en papel de horno microondas especial y cocinado en un horno de microondas (Moulinex Optiquick compacto, Grupo SEB Italia Spa, Assago, Milano, Italia) a 500 W durante 70 s. La prueba se llevó a cabo en dos sesiones (dos repeticiones por sesión), donde un panel entrenado compuesto por 9 (primera sesión) o 10 (segunda sesión) jueces evaluó los filetes en cajas individuales con aire acondicionado diseñados para el análisis sensorial ( ISO, 1988 ) . En la primera sesión, la porción cocida de peces alimentados con dietas C vs. IPO1 y en la segunda sesión de los de las dietas de peces dada C vs. IPO2, se compararon.
2.7. Los métodos de análisis
El liofilizado biomasa de microalgas, dietas de la prueba, las heces, el cuerpo y los músculos filete de todo el tejido se somete a los de humedad y proteína bruta análisis ( AOAC, 1998 );
También se analizaron las pruebas de biomasa y las dietas de microalgas secas para β caroteno, cenizas, fósforo y fibra fracciones totales (FDN y FDA) contenido ( AOAC, 1998 ).
La ceniza insoluble en ácido (AIA) contenido de las dietas de prueba y las heces se determinó según el método CEE-UE (GU Comunidad Europea n. L.155 / 21, 12.07.71) y su contenido bruto de energía se midió mediante un adiabática calorímetro de bomba (IKA C7000, Werke GmbH & Co., Staufen, Alemania);
El análisis de aminoácidos de Isochrysis sp. biomasa y dietas de ensayo se realizaron usando un sistema de HPLC provisto de una bomba LC 200 de Perkin Elmer equipado con un (bucle de 20 l) muestreador automático ISS-100 y un detector fluorimétrico (Perkin Elmer, Norwalk, CT, EE.UU.), EX 250 nm y EM 395 nm. La separación se consiguió mediante el uso de una columna de análisis de aminoácidos AccQ.Tag (Waters Corporation, Milford, MA, EE.UU.) y uno Aguas filtro de pre-columna. La columna se estabiliza térmicamente a 31 ° C y la tasa de flujo fue de 0,8 ml / min ( Liu et al., 1995 ). La fase móvil A consistía en tampón acuoso-acetato fosfato, y la fase móvil B era acetonitrilo al 100%. La hidrólisis ácida con HCl 6 M a 115-120 ° C durante 22-24 h se utilizó para todos los aminoácidos excepto cisteína (Cys) y metionina (Met), para lo cual se utilizó perfórmico la oxidación de ácidos seguido por hidrólisis ácida y triptófano que se determinó después de hidróxido de litio (4 M) hidrólisis. Después de la adición de tampón de borato, hidrolizados muestras filtradas se derivatizan a 55 ° C durante 10 min con 20 l de reactivo AccQ.Fluor (carbamato de 6-aminoquinolil-N-hidroxisuccinimidilo) antes de la inyección en el sistema de HPLC ( Bosch et al., 2006 ).
La fracción total de lípidos de la biomasa de microalgas liofilizadas, dietas de prueba, las heces y el músculo filete de tejido, se extrajo con cloroformo-metanol (2: 1 v: v) mezcla ( Folch et al, 1957. ). Los ésteres metílicos de ácidos grasos se obtuvieron de acuerdo con Morrison y Smith (1964) , y su composición cuantitativa se determinó por cromatografía de gases Varian 430-GC bajo la condición descrita anteriormente ( Tulli et al., 2012 ). Los ésteres metílicos de ácidos grasos fueron identificados por comparación con patrones de referencia (Supelco, Bellefonte, PA, EE.UU.) y un estándar interno (C23: 0) se utilizó para obtener su cuantificación.
2.8. El análisis estadístico de los datos
Todas las variables de respuesta a los tratamientos dietéticos fueron analizados por ANOVA (factor individual - dieta modelo fijo) de acuerdo con los procedimientos GLM del paquete / PC SPSS para Windows liberan 16.0.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.). En su caso, medios dietéticos fueron sometidos a la prueba de comparación múltiple de Duncan, para p <0,05.
Los resultados obtenidos en cada sesión de la prueba triangular se analizaron comparando el número de asignaciones correctas con el número que se puede esperar obtener por azar utilizando la tabla estadística de Roessler y otros. (1948) para P <0,05.
3. Resultados
Como se muestra en la Tabla 4 , los coeficientes de digestibilidad aparente de proteína cruda y el extracto seco no se vieron afectados por los tratamientos dietéticos (P> 0,05), mientras que los ADCs de energía bruta y lipídico crudo se redujeron significativamente en la dieta altamente sustituido en comparación con el control de uno. A pesar de las diferencias mencionadas en los valores de ADC, todas las dietas resultaron en proteína digestible similar a las relaciones energéticas.
Tabla 4.
Coeficientes de digestibilidad aparente (ADCi%) de materia seca, los principales nutrientes, energía bruta y proteína y energía contenidos digeribles de las dietas de la prueba (los valores son la media de mediciones por triplicado).
	
	Dietas
	sem 2
	
	Control
	IPO1
	IPO2
	
	ADCi (%) 1 :
	
	
	
	
	Materia seca
	78.4
	76.7
	75.3
	2.20
	La proteína cruda
	93.2
	93.4
	92.6
	1.39
	Lípido crudo
	92.4 un
	91.7 un
	87.6 b
	1.73
	La energía bruta
	88.7 un
	86.8 ab
	85.0 b
	1.56
	Proteína-DP digerible (g / kg)
	446,9
	445.9
	435.9
	
	Energía digestible-DE (MJ / kg)
	18.0
	17.8
	17.5
	
	DP / DE (g / MJ)
	24.8
	25.0
	24.9
	
Fila significa con diferentes superíndices son significativamente diferentes, a, b: p <0,05.
1
ADC (%) = {[(% de nutrientes en la dieta / marcador% en la dieta) - (% de nutrientes en las heces / marcador% en las heces)] / (% de nutrientes en la dieta / marcador% en la dieta)} × 100.
2
EEM = error estándar de la media.
La eficiencia de conversión de la ingesta de alimento, el rendimiento del crecimiento, alimentación y proteína de lubina alimentadas con las dietas de ensayo más de 121 días se muestran en la Tabla 5 . En comparación con el tratamiento de control se observó un ligero aumento en el consumo de alimento (+ 4/5%) de los peces alimentados con las dietas sustituidos con un valor significativamente mayor sólo en el caso de los alimentados IPO2 dieta. Las diferencias observadas en el consumo de alimento no dio lugar a cambios paralelos de los resultados del crecimiento como todas las dietas dieron lugar a muy similar peso final promedio individual o SGR (P> 0,05) y no significativamente diferentesvalores FCR, PER y GPR.
Tabla 5.
El consumo de alimento, el crecimiento, la conversión alimenticia y eficiencia bruta retención de proteínas de lubina alimentados con las dietas de ensayo durante 121 días. Los valores son medias de los grupos por cuadruplicado por tratamiento dietético.
	
	Dietas
	
	
	Control
	IPO1
	IPO2
	sem
	Peso inicial (g)
	142.0
	141.9
	142.1
	0.46
	Peso final (g)
	285.4
	287.7
	286.3
	11.15
	El consumo de alimento (g / pez / día)
	1.93 b
	2.01 ab
	2.03 un
	0,048
	SGR 1
	0.58
	0.58
	0.58
	0,032
	FCR 2
	1.68
	1.69
	1.76
	0,093
	POR 3
	1.25
	1.24
	1.21
	0,064
	GPR 4
	27.6
	27.0
	27.3
	1.73
Fila significa con diferentes superíndices son significativamente diferentes, a, b: p <0,05.
1
SGR: 100 × {(ln peso corporal final - ln peso corporal inicial) / día}.
2
FCR: alimentación ganancia de admisión / peso.
3
PER: peso ganancia / consumo de proteína cruda.
4
GPR: 100 × [(contenido final de las proteínas corporales - contenido inicial de proteína corporal) / ingesta de proteína cruda].
Como se muestra en la Tabla 6 , no se observaron efectos inducidos por la dieta en los principales rasgos de biometría, rendimiento masacre, índices somáticos o de la dureza (Shore). De manera similar, los tratamientos dietéticos no afectaron la humedad, proteína bruta y el contenido de lípidos totales de carne de pescado ( Tabla 7 ). Por otro lado, el perfil de ácidos grasos de la fracción lipídica del músculo filete se vio afectada sustancialmente por el tratamiento dietético ( Tabla 7 ). En comparación con los controles, la proporción de ácidos grasos saturados (especialmente 16: 0) aumentó de forma gradual (P <0,05) en los filetes de peces alimentados con dietas IPO1 y IPO2, de acuerdo con niveles crecientes de la dieta de reemplazo de lípidos de peces. Hubo un aumento paralelo en la proporción de 18: 1n-9 (P <0,05), pero no hay grandes cambios en la dieta dependientes fueron observadas en la incidencia de ácidos grasos monoinsaturados totales (P> 0,05), linoleato o total AGPI n-6 (P> 0,05) a pesar de una proporción marginal, pero significativamente menor de 20: 4n-6 en los filetes de peces alimentados con dietas ambos sustituidos. Por el contrario, la sustitución de aumentar el nivel de aceite de pescado en la dieta con fuentes de lípidos alternativos resultó en linolenato ligeramente superior (P <0,05), pero en los valores de la disminución gradual de todos los n-3 (LC) PUFAs (P <0,05), excepto que DHA menor incidencia en filetes de peces alimentados con dietas IPO1 y IPO2 estadísticamente no fue significativa en comparación con los controles. Una tendencia similar fue evidente también cuando la composición de ácidos grasos cuantitativa se consideraba (datos no mostrados) así como en la relación de n-3 / n-6 PUFA cuantitativa (1.7 vs. 1.4, P <0,05).
Tabla 6.
Longitud total, vestir a rendimiento, índices somáticos y dureza de lubina alimentados con las dietas de ensayo durante 121 días. Los valores son medias de 15 mediciones individuales por tratamiento dietético.
	
	Dietas
	sem
	
	Control
	IPO1
	IPO2
	
	Longitud total (cm)
	29.5
	29.8
	29.8
	0.18
	Rendimiento de la canal 1 (%)
	92.6
	92.1
	92.3
	0.15
	Filetes rinden 2 (%)
	45.3
	46.0
	46.3
	0.34
	Índice viscerosomatic 3 (%)
	7.4
	7.9
	7.7
	0.82
	IHS 4 (%)
	1.7
	1.6
	1.6
	0.05
	Índice de grasa mesentérica 5 (%)
	3.1
	3.6
	3.4
	0.12
	Dureza Dorsal (N)
	12.4
	12.9
	11.3
	0.29
	Caudal dureza (N)
	11.9
	12.6
	11.9
	0.26
1
Rendimiento de la canal (%): (peso corporal eviscerado / peso corporal) × 100.
2
Filete rendimiento (%): (filetes con piel de peso / peso corporal) × 100.
3
Índice de viscerosomatic (%): (peso de las vísceras / peso corporal) x 100.
4
Índice de Hepatosomático (%): (peso del hígado / peso corporal) x 100.
5
Índice de grasa mesentérica (%): (peso de la grasa mesentérica / peso corporal) x 100.
Tabla 7.
Humedad muscular Filete, proteína bruta, porcentaje de lípidos totales (% de peso húmedo) y el perfil de ácidos grasos (ésteres metílicos de ácidos grasos totales%) de lubina alimentadas con las dietas de ensayo durante 121 días. Los valores son medias de 15 análisis individual por tratamiento dietético.
	
	Dietas
	sem
	
	Control
	IPO1
	IPO2
	
	Humedad (%)
	69.9
	69.1
	69.3
	0.39
	Proteína (%)
	19.9
	20.1
	19.3
	0.19
	Los lípidos totales (%)
	7.7
	8.0
	8.2
	0.47
	
	Los ácidos grasos (ácidos grasos totales%) 1
	14: 0
	3.1 un
	3.1 un
	2.7 b
	0.09
	16: 0
	14.8 c
	16.7 b
	17.9 un
	0.13
	18: 0
	3.1
	3.1
	3.2
	0.04
	 SFA total
	21.7 c
	23.6 b
	24.5 un
	0.16
	
	16: 1n-7
	4.2 un
	3.4 b
	3.1 b
	0.04
	18: 1n-9
	21.7 c
	23.9 b
	25.4 un
	0.14
	18: 1n-7
	2.3 un
	2.1 ab
	1.7 b
	0.14
	20: 1n-9
	4.1 un
	3.7 un
	3.1 b
	0.12
	22: 1n-11
	3.4 un
	3.5 un
	2.6 b
	0.15
	 MUFA total
	35.4
	35.1
	34.5
	0.46
	
	18: 2n-6
	14.2
	14.9
	14.9
	0.43
	20: 2n-6
	0.7 b
	0.7 b
	0.9 una
	0.02
	20: 4n-6
	0.5 una
	0.4 b
	0.4 b
	0.01
	 N-6 Total PUFA
	16.0
	16.7
	17.2
	0.43
	
	18: 3n-3
	2.2 b
	2.6 una
	2.7 una
	0.03
	18: 4n-3
	0.2
	0.2
	0.3
	0.01
	20: 5n-3
	5.4 un
	3.8 b
	3.4 b
	0.04
	22: 5n-3
	1.3 un
	1.1 b
	0.9 c
	0.02
	22: 6 n-3
	8.7
	7.7
	7.4
	0.15
	 N-3 PUFA total
	25.1 un
	23.7 ab
	22.8 b
	0.54
Fila significa con diferentes superíndices son significativamente diferentes, a, b: p <0,05.
1
Los ácidos grasos 12: 0, 13: 0, 14: 1n-5, 15: 0, 16: 2n-4, 16: 3n-4, 17: 1, 16: 4n-1, 18: 2n-4, 18 : 3n-6, 18: 3n-4, 18: 4n-1, 20: 1n-7, 20: 3n-6, 20: 3n-3, 20: 4n-3, 21: 5n-3, 22: 4n -6 y 22: se consideraron 5 n-6 en la fracción compuesta pero no fueron reportados en la Tabla.
Como se muestra en la Tabla 8 , la alimentación de las dietas de la prueba más de 121 días dio lugar a algunos cambios en los parámetros de color instrumentales de la piel y el músculo de pescado filete. Independientemente de la posición topográfica lo largo del cuerpo o filete, la luminosidad (L *) de la piel y el tejido muscular no se vio afectado (P> 0,05) por los tratamientos dietéticos. Relativa a los controles, hubo un ligero pero significativo incremento en el verdor (a *) en cualquiera dorsal o ventral posiciones de la piel en los peces alimentados con la dieta incluyendo el nivel más alto de microalgas se secó (IPO2). A ello se sumó el aumento de los valores de Hue (P <0,05) y la saturación de color ligeramente diferente (Chroma). En caso del músculo filete, ambas dietas IPO1 y IPO2, en comparación con los controles, dieron como resultado el aumento de los valores de los parámetros a * (dorsal y la posición caudal, P <0,05), b * (dorsal y ventral posición, P <0,05), y Chroma (región ventral, P <0,05) y en los valores de Hue disminución (P <0,05), independientemente de la posición de muestreo.
Tabla 8.
Parámetros de color (L *, a *, b *, C *, H *) en la piel y ventral regiones dorsal y en el dorsal del músculo filete, posiciones caudal y ventral de lubina alimentados con las dietas de ensayo durante 121 días.
	
	Dietas
	sem
	
	Control
	IPO1
	IPO2
	
	Piel
	
	
	
	
	Dorsal 1
	
	
	
	
	L *
	58.90
	57.61
	58.83
	3.59
	a *
	1.59 un
	1.68 un
	- 0.66 b
	0.31
	b *
	12,50 ab
	13.59 una
	11.59 b
	0.66
	Chroma
	12,61 ab
	13.70 una
	11.62 b
	0.67
	Matiz
	82.9 b
	83.1 b
	93.5 un
	4.25
	
	Ventral 1
	
	
	
	
	L *
	86.16
	85.46
	86.92
	4.91
	a *
	- 0.67 un
	- 0.68 un
	- 1.60 b
	0.29
	b *
	8.53 b
	9.90 un
	7.62 b
	0.69
	Chroma
	8.59 b
	9.96 un
	7.80 b
	0.66
	Matiz
	95.8 b
	95.4 b
	102.7 un
	22.96
	
	Filete
	
	
	
	
	Dorsal 1
	
	
	
	
	L *
	27.57
	28.25
	29.29
	0.60
	a *
	- 5.57 b
	- 3.87 un
	- 3.56 un
	0.23
	b *
	3.64 b
	6.43 un
	5.76 un
	0.37
	Chroma
	6.73
	7.84
	7.20
	0.26
	Matiz
	147.1 un
	123.6 b
	127.1 b
	2.7
	
	Caudal 1
	
	
	
	
	L *
	30.87
	29.35
	30.26
	0.75
	a *
	- 4.86 b
	- 3.28 un
	- 3.17 un
	0.78
	b *
	5.35
	6.95
	6.74
	0.45
	Chroma
	7.55
	8.44
	7.66
	0.29
	Matiz
	136.2 un
	107.7 b
	118.2 b
	3.5
	
	Ventral 1
	
	
	
	
	L *
	36.90
	38.04
	40.99
	1.95
	a *
	- 2.13
	0.72
	0.04
	0.89
	b *
	4.57 b
	9.02 un
	8.88 un
	0.51
	Chroma
	5.23 b
	10.08 una
	8.95 un
	0.45
	Matiz
	117.5 un
	96.74 b
	90.69 b
	2.5
Fila significa con diferentessuperíndices son significativamente diferentes, a, b: p <0,05.
1
Los valores de la ubicación diferente en la misma región se agruparon porque no significativamente diferente.
Una prueba triangular se llevó a cabo para evaluar las posibles diferencias sensoriales generales entre porciones de filetes de pescado cocidos sometidos a los diferentes tratamientos dietéticos. En las dos sesiones de la prueba triangular no hubo repeticiones donde el umbral menos significativo (P <0.05) de 6 asignaciones correctas de 9 (sesión 1) o 7 de cada 10 (sesión 2) se había alcanzado, por lo que los atributos sensoriales generales filetes de cocinado de los peces alimentados con las dietas diferentes, indistinguibles de los evaluadores.
4. Discusión
En la presente investigación, alimentos completos, incluyendo la biomasa de microalgas liofilizado, fueron altamente apetecible y esto parece ser, en contraste con lo que se ha informado en algunas investigaciones anteriores. En juveniles de bacalao, una dieta que contiene 140 g / kg de una mezcla de biomasa de microalgas marinas se secó incluyendo una proporción sustancial de Isochrysis sp., resultó en el consumo de alimento y crecimiento deprimido ( Walker y Berlinsky, 2011 ), que fue primero atribuido a problemas de palatabilidad. Reducción del consumo de alimento era probable una causa importante de problemas de crecimiento en alevines de peces de colores alimentados con una dieta que contiene 5% en peso de una biomasa seca de I. galbana para reemplazar 25% de proteína de pescado ( Coutinho et al., 2006 ). Por otro lado, Palmegiano et al. (2009) no observaron una reducida palatabilidad en juveniles de dorada alimentados con una dieta que incluya el 70% del peso seco de Isochrysis sp. (T-ISO) biomasa seca, que de hecho dio lugar a una mayor eficiencia el consumo de alimento, el crecimiento y la conversión alimenticia en comparación con los controles indicados una dieta comercial. Sin embargo, en este último experimento mayor consumo de alimento podría haber sido el resultado de una respuesta compensatoria de dorada a energía y proteínas reducidas densidades en las microalgas que contiene la dieta en relación con el control de uno. Reducción del consumo de alimentación y el rendimiento de crecimiento también se han reportado en tilapias alimentadas con dietas que incluyen más de 200 g / kg de biomasa seca de diferentes especies de microalgas tales como Chlorella , Scenedesmus y Spirulina spp., mientras que en la inferior o incluso a niveles de inclusión en la dieta más altas, la misma biomasa de microalgas como resultado mayor o igual el consumo de alimento y similares o una mejor respuesta de crecimiento respecto a los controles ( Badwy et al., 2008 , Olvera-Novoa et al., 1998 y Vizcaíno et al., 2014 ). En estudios anteriores resumidos por Belay et al. (1996) , la inclusión de biomasa seca de Spirulina sp. hasta un 10% en la dieta seca de diversas especies de peces carnívoros marinos, dio lugar a respuesta de crecimiento similar y eficiencia de la alimentación respecto a la de los peces alimentados con dietas a base de harina de pescado. En otras investigaciones recientes, el uso de una biomasa seca de la marina microalgas Nanofrustulum sp., a niveles de inclusión de hasta 174 y 323 g / kg, en la dieta de salmón del Atlántico juvenil y carpa común, respectivamente, dio como resultado el mismo consumo de alimento y el rendimiento del crecimiento cuando se compara con la de los peces alimentados con las dietas de control en gran medida a base de proteínas y aceites de pescado ( Kiron et al., 2012 ). Del mismo modo, en la lubina, Tulli et al. (2012) observó la ingesta de igualdad de alimentación, el crecimiento y la conversión alimenticia en el pescado dado un alimento de control o dietas incluyendo hasta 160 g / kg de una biomasa seca de T. suecica para reemplazar el 20% de proteína de harina de pescado de la preparación de control.
Por lo tanto, basado en la literatura disponible no hay explicación para los diferentes resultados a dietas incluyendo diferentes especies y niveles de biomasa de microalgas. Sin embargo, parece que las respuestas en términos de parámetros de consumo de alimento y crecimiento dependen en cierta medida de las especies y tamaño de peces y varía con el nivel de inclusión, el valor nutricional y, posiblemente, la palatabilidad de la biomasa de microalgas que se sabe que ser ampliamente afectada por especies, así como el cultivo, la cosecha, el procesamiento y las condiciones de secado ( Brown et al., 1997 , Reitan et al., 1994 y Sánchez et al., 2000 ).
Un ligero aumento en el consumo de alimento con preparados que contengan la biomasa de microalgas seca y CPO en el presente estudio, parece compatible con una respuesta compensatoria a una ligera dilución paralelo de disposición densidad de nutrientes / energía en las mismas dietas. De hecho, en sustitución de los crecientes niveles de harina de pescado y aceite de microalgas secas y CPO dio lugar a una tendencia hacia la reducción de la digestibilidad aparente de los lípidos y la energía bruta. Dado que todas las dietas resultaron en valores aparentes de ADC de proteína bruta similares, parece que en los niveles de inclusión de la presente estudio, digestibilidad de la proteína de la seca Isochrysis sp. biomasa se ​​compara favorablemente con la de la dieta de control en gran parte basado en fuentes de proteínas de alta digestibilidad, como las harinas de pescado y gluten de trigo. Desafortunadamente, el simple diseño del experimento no ayuda a establecer en qué medida la depresión observada de los lípidos y los valores de ADC de energía bruta es atribuible a la inclusión de la biomasa de microalgas en la dieta. Las comparaciones con otros estudios son difíciles ya que ha habido muy pocas investigaciones en la digestibilidad de la biomasa de microalgas secas se han estimado en animales monogástricos ( Becker, 2007 y Skrede et al., 2011 más aún en el pescado, en donde la información disponible sobre) y este tema es particularmente escasa. En la trucha alpina y salmón del Atlántico, Burr et al. (2011) encontraron la digestibilidad aparente de la proteína cruda y energía bruta de un secado al sol Spirulina sp. biomasa a nivel de inclusión en la dieta de 30%, un rango de entre 82 y 85% en ambas especies, que se compara favorablemente con los de derivados de proteínas vegetales de uso común, tales como la proteína de canola o de concentrado de proteína de soja. En un estudio reciente con el bacalao y el salmón del Atlántico citado por Reitan et al. (2013) , una sustitución de hasta 12% en peso, de harina de pescado en la dieta por una biomasa liofilizada de Pheodactylum tricornutum resultó en similarmente alta de nitrógeno aparente (90-92%) y la energía (85-88%) en la digestibilidad tanto a los peces especies, independientemente del nivel de inclusión de la biomasa de microalgas marinas. Por otro lado, en la lubina Europea ( Tulli et al., 2012 ), una preparación que incluye 16% en peso de un liofilizado T. suecica biomasa para reemplazar recortes de pescado de una dieta de control, resultó en todavía alto, pero los valores de ADC significativamente más bajos de proteína cruda, lípidos y la materia orgánica. A nuestro entender, el único estudio que informó las estimaciones de la digestibilidad aparente de las dietas que incluyen un liofilizado I. galbana biomasa en comparación con los de otras microalgas marinas como Nannochloropsis oceanica y P. tricornutum se llevó a cabo por Skrede et al. (2011) en el visón como modelo carnívoros para el salmón. En ese estudio, diferente a la actual, la digestibilidad de la proteína cruda de las dietas que incluyen I. galbana y N. oceanica en niveles graduales (desde 0 hasta 24% en peso seco) para reemplazar mismas proporciones de harina de pescado en una dieta basal, se redujo sustancialmente cuando se incluyó sólo el 6% de la biomasa de microalgas en la dieta mientras que la digestibilidad aparente de lípidos fue afectada adversamente sólo a el más altonivel de sustitución. Reducción de la digestibilidad de nutrientes fue supuestamente atribuido a la resistencia de la pared celular gruesa y rígida de las dos especies de algas a la interrupción de los procesos digestivos y de la eventual presencia de actividad del inhibidor de la lipasa en microalgas marinas citado por Bitou et al. (1999) . Al estar menos marcada que las observadas en el estudio sobre el visón, los valores de digestibilidad aparente disminución de lípidos en respuesta al aumento de los niveles dietéticos de secado Isochrysis sp. la biomasa en este estudio podría sólo en parte se explica por los mismos mecanismos, dado que la pared celular de Isochrysis sp. es especialmente delgada. Sin embargo, la grasa deprimido y digestibilidad aparente de energía brutas observados aquí con las dietas sustituidos también podrían haber sido consecuencia de un aumento paralelo en el nivel dietético de ácidos grasos saturados debido a la inclusión de un aceite SFA-rica como CPO. Este parece ser apoyado por los modelos propuestos por Hua y Oficina (2009) que encontró la digestibilidad aparente de lípidos de la dieta en una gran variedad de especies de peces, a estar inversamente relacionada con la proporción de SFA en ácidos grasos de la dieta totales. Reducida en grasa y SFA digestibilidad aparente se observaron en los salmónidos en respuesta a niveles graduales de aceite SFA-rica dieta, como el aceite de palma crudo con una tendencia a la baja más pronunciada cuando los peces se mantuvieron a bajas temperaturas del agua ( Ng et al., 2003 ). Grasa significativamente inferior y SFA digestibilidad se ha reportado también en tilapia híbrida roja se mantuvo a 29 ° C cuando el aceite de pescado en la dieta fue totalmente sustituido por aceites de palma ( Bahurmiz y Ng, 2007 ). En las investigaciones antes mencionados, la caída en aparente de los lípidos y los valores de ADC SFA se ha atribuido al punto de fusión alto y al aumento de la resistencia a la digestión de los triglicéridos de la dieta rica en SFA.
Como se ha observado consistentemente en especies de peces cultivados incluso en el presente estudio, los cambios en la composición de ácidos grasos de la dieta se reflejan en el perfil de ácidos grasos y la composición del tejido muscular comestible de la lubina. Un aumento gradual en la incidencia de 16: 0, total de SFA y 18: 1n-9 en el músculo se esperaba debido a la abundancia relativa de los mismos ácidos grasos en las dietas correspondientes que a su vez reflejan principalmente el aumento de la contribución de un SFA-rica fuente de lípidos de aceite como el aceite de palma con el total de lípidos de la dieta. Cambios similares en el mismo perfil de ácidos grasos de la fracción total de lípidos en el tejido muscular de peces se han observado en otros estudios al aumentar los niveles de aceites de palma reemplazados lípidos marinos en la dieta de una gran variedad de especies de peces, incluidos los salmónidos y teleósteos marinos carnívoros ( Ng y Gibon, 2011 ). Una disminución de la proporción y el contenido de n-3 (LC) PUFA en filetes de peces alimentados con dietas IPO1 y IPO2 También se esperaba debido a la escasez simultánea de los mismos ácidos grasos en las dietas correspondientes. Sin embargo, tal disminución, aunque estadísticamente significativa, apareció menos marcada en magnitud que en las dietas correspondientes que indican que n-3 (LC) PUFAs fueron depositados y retenidos en la carne como se observa ampliamente en especies de peces cultivados selectivamente. En tejido particular DHA se redujo sólo en un 23% y EPA menos del 35% cuando los peces fueron alimentados con la dieta donde hasta el 36% de lípidos a partir de derivados de pescado fueron reemplazados por los lípidos suministrados por Isochrysis en comparación con grupos de control, mientras que en la misma dieta estos n-3 (LC) PUFAs eran sólo el 58% de las concentraciones en la preparación de control. Esto parece apoyar la idea de que el DHA suministrado por la biomasa de microalgas era realmente biodisponible y depositado eficazmente en la parte comestible de pescado. Dadas las funciones nutricionales y saludables reconocidas de PUFA n-3 (LC) y n-3 / n-6 proporción a los seres humanos, cualquier cambio hacia el uso de alternativas a los lípidos marinos en la dieta de las especies de peces de cultivo no debe ser a expensas del valor nutricional del producto final. En este sentido, el presente estudio mostró una reducción moderada de la EPA, DHA y n-3 / n-6 en la carne de lubina alimentadas con las dietas sustituidos. Esto podría tener un cierto impacto en términos de semanal humana recomendada n-3 (LC) la ingesta de AGPI ( ISSFAL, 2009 ) y las reclamaciones de más estudios para ser llevado a cabo con el fin de optimizar la inclusión en la dieta de secado Isochrysis biomasa como alternativa parcial a los peces marinos lípidos.
Además de las propiedades nutricionales, si un tratamiento dietético novela podría afectar ciertos atributos de calidad de todo el pescado o la carne, las características sensoriales también merecen atención desde el punto de vista de la aceptación del consumidor. En este estudio la adición de microalgas imparte un color verde a las dietas, debido a la clorofila y otros pigmentos, ya que también se observó en otras investigaciones ( Walker y Berlinsky, 2011 ). Es bien sabido que la presencia de diversos pigmentos puede resultar en una mayor pigmentación de la piel o la carne o ambos, en el pescado ( Belay et al., 1996 , Tulli et al., 2012 y Walker y Berlinsky, 2011 ). Esto también fue evidente en el presente estudio, donde el aumento de la pigmentación de la piel verdosa se ​​asoció a una carne amarillenta ligeramente mayor en los peces alimentados con las dietas que contenían las microalgas seca. ¿En qué medida los cambios observados en los patrones europeos de pigmentación lubina podrían impactar en atractivo para el consumidor es actualmente impredecible. Sin embargo, basado en la evaluación sensorial mediante la prueba de triángulo, los panelistas entrenados no fueron capaces de discriminar entre los filetes cocidos obtenidos a partir de peces alimentados con las diferentes dietas.
En conclusión, los resultados del presente estudio han demostrado que la sustitución de hasta 20% de proteína cruda a partir de harina de pescado por secado Isochrysis sp. biomasa y casi el 36% de los lípidos de pescado por lípidos proporcionada por microalgas en la dieta de lubina europea adulta, no afectó negativamente el consumo de alimento y el crecimiento, incluso si dio lugar a una ligera disminución de los lípidos y energía digestibilidad y una reducción moderada de n -3 (LC) contenido de PUFA en el tejido muscular comestible. No se observaron cambios importantes en la dieta depende de las características biométricas y rendimiento masacre. En los niveles reales de inclusión en la dieta, la presencia de microalgas seca provocó un aumento de la pigmentación verdosa de la piel, pero no permitió que la discriminación del filete cocinado en base a la evaluación sensorial.
Hasta la fecha, sobre la base de muy limitada de datos disponibles, el uso de microalgas en alimentos acuícolas no es económicamente factible ( Vizcaíno et al., 2014 ). Mercados de alimentación requieren grandes cantidades de biomasa producidos a bajo costo (menos de 1 € kg - 1 ) ( . Draaisma et al, 2013 ), mientras que los costos de producción de microalgas son actualmente superiores a 05.04 € kg - 1 , a pesar de los recientes análisis prevén una disminución a 02.01 € kg - 1 ( Norsker et al., 2011 ).
Desde esta perspectiva los resultados de la presente investigación sugieren que se necesitan más estudios para encontrar combinaciones dietéticas óptimas de biomasa de microalgas marinas y las fuentes alternativas de lípidos baratas que podrían hacer que los costos de alimentación más asequible, al tiempo que reduce la dependencia de la harina de pescado y aceite de pescado y preservar la nutrición valor de las especies de peces marinos cultivados.