Taller Microbiologia - Ninguna

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Ginna Paola González Barrera 94087 
Karen Andrea Caro Oliveros 95576 
Ayma Valentina Ortega Morlaes 90552 
 
Taller de laboratorio No 2. 
 
1) Indique cómo prepararía las siguientes soluciones y medios de cultivo 
a) 350 mL de agua peptonada 0,1% p/v. 
 00 0, 1 1ml g⇒ 
 Agua peptonada , 5 g
100 ml
350 0,1 ml x g
= 0 3 
0,35 g de Agua peptonada se disuelven hasta 350 mL de agua destilada 
b) 9 frascos de 90 mL de NaCl 0, 85%p/v. 
 
c) 20 cajas grandes de agar ENDO (24g/L) 
 20 20 Cajas ml⇒ 
 , 9 g
1000 ml
400 24 ml x g Agar Endo
= 9 6 
9,69 g de Agar Endo se disuelve hasta 400 ml de agua destilada 
d) 15 cajas pequeñas de agar nutritivo (18g/l) 
 
e) 500 mL de glucosa 5M 
 
x X x X 
1000 ml
500 1 ml x L
1 L
5 6 moles C H1206
1 mol C6 1206H
180 1206 g C6H 1 ml
1,54 g C6 12 6H O
100 ml RX
100 ML C6 12 6H O
=292.207 g 
 
 
d= 1,54 
pM= 180 g/mol 
f) 400 mL de NaOH 1N 
 
 x 6g ( )NaOH
1L
0,4 1 L x eq g NaOH−
1 eq g Naoh−
39,997 g NaOH
= 1 
16 g de NaOH se disuelve hasta 400 ml de agua 
 
g) 250 mL de H 2 SO 4 0,1N 
 
 
 
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 N = 
Litros de solución
equivalente gramos de soluto − 
 X X 0, 6 ml H2 4SO
L
0,25 0,1 2 4L x eq g H SO− 49 g H2 4SO
1 2 4eq g H SO−
1 ml H2 4SO
1,83 G H2S04
= 6 
 
66O MICROLITROS 
 
Tenga en cuenta la pureza y densidad de estos reactivos. 
Nota: Cajas pequeñas 10 mL capacidad 
Cajas grandes: 20 mL de capacidad 
 
 
2) Con respecto a los diluyentes: 
a) Qué características debe tener una solución para ser empleada como diluyente 
1. Tienen una composición conocida. Es decir, se ha de conocer la estructura y 
elementos que lo componen, lo cual servirá para hacer los cálculos 
estequiométricos respectivos. 
2. Deben tener elevada pureza . Para una correcta estandarización se debe utilizar 
un patrón que tenga la mínima cantidad de impurezas que puedan interferir con 
la titulación. En cualquier caso, más del 98,5% de pureza, preferiblemente un 
99,9%. 2 
3. Debe ser estable a temperatura ambiente. No se pueden utilizar sustancias 
que cambien su composición o estructura por efectos de temperaturas que 
difieran ligeramente con la temperatura ambiente ya que ese hecho aumentaría 
el error en las mediciones. 
4. Debe ser posible su secado en estufa. Además de los cambios a temperatura 
ambiente, también debe soportar temperaturas mayores para que sea posible su 
secado. Normalmente debe ser estable a temperaturas mayores que la del punto 
de ebullición del agua. 
5. No debe absorber gases. No debe reaccionar con los componentes del aire . 
Ya que este hecho generaría posibles errores por interferencias, así como 
también degeneración del patrón. 
6. Debe reaccionar rápida y estequiométricamente con el titulante. De esta 
manera se puede visualizar con mayor exactitud el punto final de las titulaciones 
por volumetría y además se pueden realizar los cálculos respectivos también de 
manera más exacta. 
7. Debe tener un peso equivalente grande. Ya que este hecho reduce 
considerablemente el error de la pesada del patrón. 
Se debe tomar en cuenta la cantidad de patrón primario que debe pesarse para un análisis . Se 
recomienda una masa de 100 mg (ó 50 mg como mínimo) ya que de esta manera se reduce el 
error relativo de la pesada, veamos : 
● Tomando en cuenta el error absoluto de la balanza: 0,0001 g 
● Error relativo de la pesada: 
 
Entonces: 
 
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Asumiendo que un error aceptable es de 0,1% y el error absoluto de la balanza, 
tenemos: 
 
De esta manera: 
 
 
Donde: 
 
● Er= Error relativo (%) 
● Ea= Error absoluto 
● W= peso del patrón 
 
b) Explique por qué el agua peptonada puede ser empleada como diluyente en 
microbiología? 
 
El agua peptonada se usa como diluyente para el pre enriquecimiento y enriquecimiento 
bacteriano no selectivo, además es ideal para el cultivo de microorganismos no fastidiosos y 
como medio base para estudios de fermentación de carbohidratos. 
 
c) Mencione otros diluyentes ( al menos 2) que se empleen en microbiología 
Agua peptonada 
solución salina isotónica 
solución amortiguadora de fosfatos 
Agar nutritivo en ciertos casos 
 
 
3) En los laboratorios de microbiología se emplean diferentes mecanismos para eliminar los 
agentes contaminantes 
 
a) Explique en qué consiste el proceso de limpieza, desinfección y esterilización. 
 
La esterilización es la completa eliminación de todos los microorganismos presentes en un 
objeto o superficie; mientras que la desinfección destruye parte de la vida microbiana, la 
esterilización es un proceso de la limpieza especialmente en entornos de alto contagio o 
alta presencia de patógenos. 
 
b) En el siguiente cuadro indique porqué método esterilizan y desinfectan los siguientes 
materiales 
 
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Material 
 
MATERIAL MÉTODO FUNDAMENTOS DEL 
MÉTODO 
Medios de cultivo Calor húmedo 
ejemplo:autoclave 
El calor húmedo destruye 
los microorganismos por 
coagulación de sus 
proteínas celulares. 
Al aplicar a un determinado 
material vapor de agua a 
una presión de 15 lb 
(121ºC) por un tiempo 
determinado, se produce la 
destrucción total de los 
microorganismos viables 
presentes en el mismo. 
Solución acuosa aumentos de temperatura 
(autoclave) 
 Normalmente la 
esterilización se lleva a 
cabo a temperaturas de 
121°C, lo que corresponde 
a una presión de vapor 
aproximada de 2 bares. 
Estas altas temperaturas y 
la consiguiente presión 
pueden considerarse un 
riesgo potencial importante 
para el usuario si el 
autoclave tiene defectos de 
diseño o la esterilización no 
se realiza correctamente 
Cajas de petri Calor seco 
Horno de pasteur 
Autoclave 
 
Para la esterilización por 
calor seco: papel Craft o 
papel de aluminio. 
Todo el material de vidrio se 
esteriliza con calor seco, 
generalmente en un horno 
Pasteur. 
Cuando se trata de material 
contaminado, se deberá 
esterilizar en autoclave a 
121ºC, 15 libras de presión, 
durante 20 a 30 minutos 
antes de someterlo al 
proceso de lavado. 
Mesón deLaboratorio Limpieza alcohol al 70% La limpieza y esterilización 
de los mesones tiene que 
realizarse antes de 
comenzar las actividades 
diarias del laboratorio y 
después de terminadas. 
Para esto se debe utilizar 
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alcohol etílico al 70% y 
toallas de papel desechable. 
Se deben tener utensilios 
únicos para la limpieza, de 
esa manera se evita la 
contaminación cruzada. 
Embudos polipropileno Calor seco 
Autoclave 
Rapidez, eficacia, 
compatibilidad con la 
mayoría de los materiales. 
 
Permite que se alcance y 
mantenga durante el tiempo 
óptimo de exposición las 
condiciones de temperatura 
y presión necesarias para 
alcanzar la muerte de 
microorganismos y la 
destrucción de sus esporas 
mediante la 
desnaturalización 
irreversible de enzimas y 
proteínas.