Técnicas Histológicas y Microscopio Óptico

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Técnicas Histológicas 
y Microscopio Óptico
Yojan Monserrat
¿Qué es la histología?
Ciencia que estudia todo lo relacionado con la estructura 
microscópica de:
• La célula.
• Los tejidos.
• La arquitectura de los órganos, su desarrollo y su función en 
condiciones normales.
Educación médica 
Investigación médica
Estudios bioanalíticos
IMPORTANCIA
Métodos de 
Investigación
Existen dos métodos de estudio:
Material muerto. 
Material vivo.
Métodos de 
Investigación
Material Muerto Material Vivo
Ventajas Desventajas Ventajas Desventajas
• Variedad de 
técnicas.
• Material 
permanente.
• Producción de 
artefactos. 
(autólisis, arrugas, 
precipitaciones, 
restos)
• Información de 
estructuras 
vivas.
• Estructuras que 
desaparecen 
con la muerte.
• No es 
permanente.
• No se puede 
aplicar técnicas 
múltiples.
Microscopio Óptico
Instrumento que sirve para visualizar
estructuras pequeñas cuyas dimensiones
son inferiores al límite del poder de
resolución del ojo humano normal que es
de 0.25mm.
Fuente de Luz visible: El M.O. al igual que
los M. de Polarización, Contraste de Fases,
Interferencia, Campo Oscuro.
Fuente de Luz invisible: M. de Rayos
Ultravioleta y el microscopio electrónico.
PARTES DEL
MICROSCOPIO
Propiedades del Microscopio
Amplificación: capacidad de aumentar la imagen que se va a observar.
Definición: nitidez que nos proporciona el uso adecuado de los lentes.
Resolución: capacidad de mostrar como separados dos puntos que están
muy unidos, cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo mayor
definición, será más clara la imagen y aumentará la capacidad de poner en
manifiesto detalles estructurales.
Profundidad de Foco: es la capacidad de los objetivos de permitir observar
varios planos en una misma posición de enfoque.
Distancia Focal: es la distancia que existe entre el lente frontal del objetivo
y el portaobjetos cuando la imagen está enfocada.
Lograr el mejor enfoque
PASO 1: bajar la platina completamente usando el tornillo
Macrométrico y coloque el objetivo de 4X en el eje óptico.
PASO 2: colocar el preparado histológico sobre la platina de 
tal forma que quede sujetado por las pinzas.
PASO 3: sube la platina utilizando el tornillo Macro hasta 
obtener una imagen borrosa.
PASO 4: usar el tornillo Micro hasta lograr una imagen 
completamente nítida.
PASO 5: para utilizar el objetivo de 10X, 40X y/o 100X 
haga girar el revólver. 
NOTA: Con estos objetivos se usa SÓLO el tornillo 
micrométrico, NUNCA el macrométrico.
Tipos de Microscopio
CAMPO OSCURO: se emplea en bacteriología con
preparaciones húmedas, para detectar espiroquetas u otros
microorganismos con movilidad.
CONTRASTE DE FASE: permite el estudio de material vivo
no teñido.
POLARIZACIÓN: sirve para identificar cuerpos extraños,
tales como partículas de talco, suturas y pelos en los tejidos.
FLUORESCENCIA = INMUNOFLUORESCENCIA
ELECTRÓNICO: permite investigar detalles ultraestructurales
de las células y los tejidos al ofrecernos un incremento del
aumento y del poder de resolución, utiliza como fuente de luz un
haz de electrones.
DE FUERZA ATÓMICA: registra la topografía de una muestra y
permite visualizarla a través de la medición y manipulación de
los átomos que componen su materia obteniendo dimensiones
nanométricas
ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB)
ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN (MET)
Técnica Histológica en
Microscopia Óptica
Recolección 
de material
Fijación Autólisis Putrefacción
Material muerto
(necropsia) o
material vivo
(biopsia).
Preservar las 
estructuras de la 
célula. Detiene 
los procesos de 
autólisis y 
putrefacción
Proceso de 
autodigestión
enzimática tras la 
muerte celular, por la 
salida de contenido 
lisósomico al 
citoplasma por rotura 
de la membrana 
delimitante de estos 
orgánulos.
Efecto ejercido 
por determinadas 
toxinas y enzimas 
bacterianas sobre 
los tejidos.
Imágenes Histológicas
IMAGEN HISTÓLOGICA
EQUIVALENTE
Obtenida después de la manipulación
histológica (fijación, inclusión, corte y
coloración).
IMAGEN HISTÓLOGICA REAL
Es la que mostraría ese tejido cuando
estaba vivo
Fijadores
CARACTERÍSTICAS FUNDAMENTALES QUE DEBE POSEER UN 
LÍQUIDO FIJADOR IDEAL
Capacidad para bloquear de inmediato la autólisis. 
Efecto microbicida.
No provocar retracciones o distorsiones del tejido. 
Alta velocidad de penetración.
Fijadores Simples
❑ Alcohol etílico. 
❑ Acetona.
❑ Ácido acético.
❑ Ácido tricloro acético. 
❑ Ácido crónico.
❑ Cloruro de mercurio.
❑ Dicromato potásico.
❑ Ácido pícrico.
❑ Acetato de uranilo.
❑ Formol o formaldehido (MO)
❑ Glutaraldehído (ME)
❑ Tetraóxido de osmio (ME)
Procesamiento del Material 
Histológico
Deshidratación: busca extraer toda el agua de los
tejidos. (baños de alcohol en concentraciones
crecientes)
Aclaramiento: consiste en eliminar el exceso de
alcohol (Xilol)
Inclusión: consiste en sustituir con parafina todos los
espacios antes ocupados por el agua (parafina)
Corte del Bloque de 
Parafina
Se saca la tira de 
parafina extendida de
baño de flotación en una
lámina portaobjetos.
Se extiende la tira de 
parafina en el baño de
flotación para eliminar 
las arrugas del tejido.
Las láminas portaobjetos 
conteniendo las tiras de
parafina son introducidas en
una estufa, para fijar los
cortes a la lámina. Son 
introducidas por un mínimo
de quince minutos en la
estufa.
Coloración del Preparado 
Histológico
Después de fijadas las tiras de parafina en la estufa se
sacan y se dejan enfriar por cinco minutos y luego se
procede a la coloración.
XILOL
Montaje del Preparado 
Histológico
Etapa final, utilizando un medio de montaje para
colocar la laminilla cubre objetos.
TIPOS DE COLORANTES
❑ Ácidos.
❑ Básicos.
❑ Neutros.
❑ Indiferentes.
HEMATOXILINA
Colorante básico que se asocia y tiñe componente ácidos de 
la célula como las estructuras aniónicas (de carga negativa).
Tal como:
❑ Heterocromatina.
❑ Nucleolo.
❑ ARN Ribosomal.
❑ Matriz Extracelular.
EOSINA
Colorante ácido que se asocia y tiñe componentes básicos de 
la célula como las estructuras catiónicas (de carga positiva) 
presentes en la matriz extracelular.
Tal como:
❑ Filamentos.
❑ Componentes membranosos intracelulares.
❑ Fibras extracelulares.
Basófilo
ACIDÓFILO
Terminologías de Tinción
❑ Basófilo: afinidad a lo básico.
❑ Acidófilo: afinidad a lo ácido.
❑Ortocromático: mismo color.
❑Metacromático: distinto color.
❑ Coloraciones vitales: intravital y supravital.
¿Cómo preparar un corte de ME?
❑ Tejidos de menor tamaño.
❑ Bloques más pequeños.
❑ El tejido tiene que ser lo más fresco posible.
❑ Procesamiento más rápido.
❑ Fijadores (formol, tetroxido de osmio y glutaraldehido).
❑ Medio de inclusión: Resina epon.
❑ Colorantes sales de metales pesados como el citrato de plomo y uranio.
❑ Método de preparación para los tejidos se utiliza la criofractura
(congelación y fractura).
Otros Métodos de 
Coloración
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Otros Métodos de 
Coloración
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Eso es todo
Gracias por su atención
	Diapositiva 1: Técnicas Histológicas y Microscopio Óptico
	Diapositiva 2: ¿Qué es la histología?
	Diapositiva 3: Métodos de Investigación
	Diapositiva 4: Métodos de Investigación
	Diapositiva 5: Microscopio Óptico
	Diapositiva 6: PARTES DEL MICROSCOPIO
	Diapositiva 7: Propiedades del Microscopio
	Diapositiva 8: Lograr el mejor enfoque
	Diapositiva 9: Tipos de Microscopio
	Diapositiva 10: Técnica Histológica en Microscopia Óptica
	Diapositiva 11: Imágenes Histológicas
	Diapositiva 12: Fijadores
	Diapositiva 13: Fijadores Simples
	Diapositiva 14: Procesamiento del Material Histológico
	Diapositiva 15: Corte del Bloque de Parafina
	Diapositiva 16: Coloración del Preparado Histológico
	Diapositiva 17: Montaje del Preparado Histológico
	Diapositiva 18
	Diapositiva19
	Diapositiva 20: Terminologías de Tinción
	Diapositiva 21: ¿Cómo preparar un corte de ME?
	Diapositiva 22: Otros Métodos de Coloración
	Diapositiva 23: Otros Métodos de Coloración
	Diapositiva 24: Eso es todo