Extracción del ADN de diferentes especies

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Extracción del ADN de diferentes especies 
I. INTRODUCCIÓN
El ADN es una molécula formada por dos cadenas de polinucleótidos unidas por
puentes de hidrógeno. Los nucleótidos que presentan son: la timina, adenina, guanina y
la citosina; las cuales forman los genes, que de acuerdo a la secuencia de orden en que
se encuentran determinan las características biológicas de todo ser vivo. Además esta
molécula de vida está constituido por un azúcar desoxirribosa y un grupo fosfato.
El ADN lleva la información necesaria para dirigir la síntesis de proteínas y la
replicación. Se llama síntesis de proteínas a la producción de las proteínas que necesita
la célula para realizar sus actividades y desarrollarse. 
La mayoría de los organismos, están formados por millones de células, el ADN está
presente en todas las células de todos estos seres vivos. En las células procariotas el
ADN se encuentra disperso en el citoplasma. Y por el contrario en las células eucariotas
está ubicado dentro de un núcleo, donde está asociado con proteínas y el ARN.
Por otro lado, el ADN al ser una molécula larga puede en conjunto ser visualizada y
además al estar en todas las células de todos los organismos, puede ser extraído con
facilidad de cualquier tejido, para ello se requiere un procedimiento que implica la
ruptura de las células, la separación del ADN de otros compuestos celulares y por
último la precipitación de esta molécula de vida (Mogrovejo, 1999).
En el presente informe se mostraran los procedimientos que se realizó para obtener el
ADN de las células vegetales y de las células animales 
II. OBJETIVOS
 Obtener el ADN utilizando un procedimiento alternativo con prolijidad y
precisión que permita observar la sustancia responsable de la herencia presente
en las células de la mucosa bucal. 
 Realizar la extracción del ADN del hígado de pollo mediante el uso de
materiales caseros. 
 Obtener el ADN de un plátano utilizando materiales sencillos de conseguir.
 Obtener el material genético de una fresa mediante los procedimientos
impartidos en el protocolo. 
III. FUNDAMENTOS CIENTÍFICOS
El ADN se encuentra en el interior del núcleo de las células eucariotas rodeado de
proteínas (histonas) que lo mantienen unido y compactado. Para poder aislarlo y
observarlo se deben deshacer la membrana plasmática y la envoltura nuclear y también
se precisa la desnaturalización de las proteínas. 
A continuación se explicará qué pasos del procedimiento son los encargados de realizar
estas funciones y también se aclarará el porqué de cada paso.
- La acción de trituración: Incrementar el área superficial ayuda a hacer la superficie
de la membrana más fácil de disolver y también permite una absorción más efectiva del
calor y de las soluciones que se añadirán.
- Detergente: Las membranas de las células están formadas por dos capas de lípidos
con proteínas transmembrana a través de estas. El detergente ayuda a romper la bicapa
de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura nuclear. Los lípidos de la
membrana se descomponen debido al detergente que deshace las uniones que mantienen
la membrana junta. Cuando el detergente se pone en contacto con los lípidos éstos se
separan de la membrana rompiéndola. La estructura de los lípidos es similar a la del
detergente y eso hace que se combinen, formando una burbuja de detergente y lípidos. 
- Baño caliente: Este paso se utiliza para liberar el ADN de sus barreras protectoras. La
incubación se utiliza para acelerar el proceso de rotura de las membranas y para ayudar
a disolver la bicapa de fosfolípidos mediante la desnaturalización de las proteínas de
membrana y rotura de los enlaces que mantienen los fosfolípidos unidos. El calor
“ablanda” la membrana.
- Baño frio: El agua fría ayuda a mantener el AND intacto durante el proceso de
extracción. El enfriamiento de la solución ayuda a prevenir la desnaturalización que
podría destruir el DNA si se expusiera al calor de manera prolongada (protege el DNA
de enzimas que pueden destruirlo como las ADNasas ya que la refrigeración ralentiza
las reacciones enzimáticas).
- Homogeneización continua: Con este procedimiento conseguimos que la temperatura
(tanto el calor como el frío) actúe sobre todo el contenido del extracto, y no sólo sobre
las partes en contacto con el vaso de precipitados. También se consigue que la solución
detergente pueda actuar sobre todo el triturado.
- Filtración: Este paso permite separar los restos de los tejidos y de las células que
hemos roto en los pasos anteriores. Ese material no nos interesa y quedará retenido en el
colador (los restos más grandes) o en el filtro (restos más pequeños). El líquido filtrado
que conseguimos es el que contiene el ADN libre de la membrana nuclear.
- Zumo de piña: Las moléculas de ADN están rodeadas de proteínas del tipo histonas,
y para obtener un extracto más puro de ADN es necesario eliminarlas. Para ello hay que
utilizar enzimas proteolíticos. El zumo de piña contiene bromelaína, una enzima capaz
de hidrolizar las proteínas y por tanto capaz de separar el ADN de las histonas. Este
proceso ayuda a que el ADN se desempaquete y es más fácil su extracción.
- Sal en la solución de extracción: La molécula de ADN es soluble en agua y por tanto
invisible, pero si se pone en contacto ADN que haya estado en un medio salado y
alcohol frío el ADN se vuelve insoluble y precipita. Por lo tanto el agua salada ayuda a
la precipitación en el alcohol. La sal también ayuda a separar el ADN de las histonas.
- Alcohol congelado: El ADN es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a
muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un
precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto. El ADN es el
único componente de la solución que no es soluble en el etanol, y se hace visible porque
las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la acción de
fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre
la capa del extracto.
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
PROTOCOLO # 1
EXTRACCIÓN DEL ADN HUMANO DE LAS CÉLULAS DE LA MUCOSA BUCAL
Materiales
Tubos de ensayo grandes Cernidor
Espátula Jeringuilla de 10 cc
Gotero Agua destilada
Bicarbonato de sodio Alcohol etílico al 96% (frio)
Detergente liquido Sal común
Procedimiento
*Solución de extracción
1. En un vaso de precipitación colocar:
 120 ml de agua destilada
 1.5 gr de sal de mesa
 5 g de bicarbonato de sodio
 5 ml de detergente liquido
2. Mezclar lentamente
NOTA: Esta solución tampón mantener en la nevera o en un recipiente con hielo.
*Extracción
3. Cada estudiante deposita 10 ml de la solución tampón bien fría en un tubo de
ensayo.
4. Añadir 5 ml de la saliva
5. Mover ligeramente el tubo para que se mezcle bien
6. Pipetear 10 ml de alcohol de 96% frio y colocarlo resbalando por las paredes del
tubo que contiene la saliva.
7. Luego de unos 10 minutos en la interface solución acuosa – alcohol se empiezan
a visualizar unas fibras blanquecinas que son las moléculas de ADN.
8. El ADN se elevara desde la mezcla de saliva hasta la capa de alcohol. Puede
usar un palillo de madera y otro tipo de gancho para arrastrar el ADN que está
en el alcohol.
9. Experimente con otras fuentes de ADN el proceso
Resultado final
Imagen 1: Resultado final de la extracción de ADN por el método planteado.
PROTOCOLO 2
EXTRACION DE ADN DEL HIGADO DE POLLO
MATERIALES:
 Mortero o licuadora  100 ml Agua 
 Agitador  2 gr Bicarbonato de sodio
 Jeringuilla  5 ml Alcohol
 Tubo de ensayo  2 ml Detergente 
 Palillos de dientes  10 gr Cloruro de Sodio
 Vaso de precipitación
 Hígado de pollo 
 Cuchara 
PROCEDIMIENTO:
1) Preparación de la solución tampón: Coloque la sal en un vaso de precipitación
y añadir el bicarbonato de sodio, en el vaso luego colocar el agua y finalmente se
coloca 5ml del jabón de lavavajillas yse homogenizó la solución.
2) Preparación de la Muestra: cortar en pedazos pequeños el hígado y aplastar en
un mortero agregando un poco de agua, una vez obtenida la muestra, se procedió
a cernir en un vaso el líquido resultante de aplastar los materiales. 
3) Separación del ADN: Agregar en un nuevo vaso, 5ml de la muestra con 10ml
de la solución tampón y agitar durante 2 minutos, posteriormente se coger 5ml
de la nueva mezcla y se colocó en un tubo de ensayo, además en el tubo de
ensayo se añadió 10 ml de alcohol. 
4) Visualización del ADN: En el tubo de ensayo quedó dividido una capa de la
muestra con una capa de alcohol, se introdujo un palillo hasta el nivel donde
quedó la separación y, se observa el ADN.
 Imagen 2: Resultado final de la extracción de ADN por el método planteado.
 PROTOCOLO 3
EXTRACCIÓN DE ADN DE UN PLÁTANO
MATERIALES:
- Plátano - Agua destilada
- Piña - Etileno 95% (dos horas congelador)
- Papel filtro - Detergente
- Sal - Tenedor
- Balanza - Tubos de ensayo
- Probeta - Embudo
- Varilla agitadora - Colador
- 2 Vasos de precipitación - Termómetro
PROCEDIMIENTO:
1. Trituración del plátano: Con la ayuda de un tenedor cortamos unos 100g de
plátano y lo troceamos hasta obtener porciones muy pequeñas. Después
aplastamos todos los trozos para formar una pasta más o menos homogénea.
Depositamos esta pasta en un vaso de precipitación.
2. Preparación de la solución de extracción: Primero pesamos con la balanza 3g
de sal. Con una probeta preparamos 100ml de agua destilada y 10ml de
detergente. A continuación lo mezclamos todo en otro vaso de precipitación
procurando no formar muchas burbujas.
3. Detergente + plátano: Vertemos el detergente en el vaso de precipitados que
contiene el plátano y lo mezclamos todo procurando de nuevo no hacer muchas
burbujas.
4. Baño caliente: Ponemos agua a calentar y con un termómetro medimos la
temperatura hasta que alcance unos 60ºC aproximadamente. Después
introducimos el vaso de precipitados con la mezcla y vamos removiendo durante
unos 15 minutos con la ayuda de una barita agitadora. Hay que procurar
mantener la temperatura en los 60ºC y no hacer muchas burbujas.
5. Baño frio: Preparamos un recipiente con agua y hielo e introducimos el vaso de
precipitados. Lo dejamos en estas condiciones durante 5 minutos removiendo
constantemente.
6. Preparación del zumo de piña: Mientras esperamos que pasen los 5 minutos
del baño frío preparamos el zumo de piña. Troceamos una piña y trituramos la
parte central o corazón. Filtramos la pasta con un colador para obtener el zumo.
7. Filtración de la solución: Preparamos un vaso de precipitación con un colador
encima y vertemos el contenido del vaso de precipitados. A continuación
preparamos un embudo con un papel de filtro encima y vertemos la solución
obtenida anteriormente recogiendo el líquido en un tubo de ensayo. Este
segundo proceso puede tardar unos minutos.
8. Solución + zumo de piña: Cogemos 1ml de zumo de piña y lo añadimos a 5ml
del extracto en un tubo de ensayo. Dejamos que actúe el zumo en la solución de
2 o 3 minutos.
9. Solución + alcohol: Sacamos el alcohol del congelador y preparamos en un tubo
de ensayo aproximadamente el mismo volumen de alcohol que de la solución de
interés.
10. Observación del DNA: Vertemos muy lentamente el alcohol en el tubo de
ensayo con la solución. Al cabo de pocos segundos seremos capaces de observar
tres capas bien diferenciadas. Encima de todo estará el alcohol, debajo de todo
estarán los restos celulares (membranas, orgánulos) del plátano y los otros
componentes de la solución y, en la interfase observaremos una especie de hilos
blancos rodeados de burbujas. ¡Eso es el ADN! 
Imagen 3: Resultado final de la extracción de ADN por el método planteado.
 PROTOCOLO 4
EXTRACCIÓN DE ADN DE LAS FRESAS
MATERIALES:
- Fresas - Vaso de precipitación
- Bolsa de plástico - Etileno 95% (dos horas congelador)
- Papel filtro - Detergente
- Sal - Varilla agitadora.
- Balanza - Tubos de ensayo
PROCEDIMIENTO:
1. Tomar 2 fresas y extraer las hojas verdes.
2. Colocar las fresas en una bolsa de plástico y ciérrela, hacerlas puré con la mano
suavemente alrededor de 2 minutos.
3. En un vaso de precipitación preparar el líquido de extracción del ADN, mezclar
10 ml de detergente, 3 gr de sal y 100 ml de agua destilada. 
4. Añadir 10 ml del líquido de extracción de ADN a la bolsa que contiene las
fresas.
5. Volver a cerrar la bolsa y continuar haciéndolas puré suavemente por otro
minuto, evitar crear demasiadas burbujas de jabón.
6. Colocar el papel filtro en otro vaso de precipitación, abrir la bolsa y vertit el
líquido de las fresas en el filtro. Se puede exprimir suavemente el resto del
líquido.
7. A continuación verter sobre la pared interna del vaso una cantidad de alcohol
que equivalga a la misma cantidad que haya del líquido de las fresas. No lo
mezcle ni lo agite. Con este paso acaba de aislar el ADN del resto del material.
8. En unos pocos segundos observe cómo se desarrolla una sustancia turbia y
blanca en la capa superior, por encima de la capa del extracto de las fresas. 
Imagen 4: Resultado final de la extracción de ADN por el método planteado.
V. CONCLUSIONES
 El producto final no es ADN puro, ya que se encuentran diminutos fragmentos
de ARN e incluso algunas proteínas.
 El ADN es una molécula muy larga y tiende a agruparse, esto permite extraerla
y visualizarla con facilidad.
 La extracción de ADN requiere de un proceso secuencial, en el cual se trata de
aislar a esta molécula de los demás componentes de la célula.
 Todo el proceso realizado provoca el desenrollamiento del ADN que tiene la
apariencia de material fibroso
 El procedimiento de extracción del ADN es un procedimiento de extracción de
ácidos nucleicos.
 El ADN puede ser extraído de cualquier ser vivo de cualquier célula.