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TÓPICOS TAXONÓMICOS PARA EL ESTUDIO DEL GÉNERO Fusarium Emiro Ortiz1, Donald Riascos1, Myriam Angarita1, Olga Castro1, Carlos Rivera1, Dayana Romero1, Carol Puentes1, Karen Silva1 y Liliana Hoyos2 1Programa de Maestría en Ciencias Agrarias con Énfasis en Fitopatología, Facultad de Agronomía, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá. 2Profesora Asistente, Facultad de Agronomía, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá. limhoyosca@unal.edu.co Revisión bibliográfica recibida para publicación el 05/08/2009, aceptada el 27/08/2009 RESUMEN En razón del grado de desconocimiento acerca de diversas etiologías asociadas a Fusarium sobre todo en cultivos de reciente implementa- ción y a la potencialidad característica del patógeno, es oportuno dar a conocer los recientes avances que se han dado en este aspecto, toman- do en cuenta que una identificación correcta es el punto de partida para la toma de medidas de manejo adecuadas. En esta revisión se indican las principales particularidades taxonómicas del género Fusarium y algunos lineamientos que se han propuesto para llegar finalmente a una identificación satisfactoria, con énfasis en cultivos de importancia económica en el trópico. Palabras clave: Fusarium, concepto biológico de especie, concepto morfológico de especie, concepto filogenético de especie, formas especiales, Fusarium oxysporum. SUMMARY Given the lack of knowledge about various etiologies associated with Fusarium cultures especially in recent implementation and potential feature of pathogen, is it appropriate to publish the recent advances that have occurred in this aspect, taking into account that a correct identification is the starting point for taking appropriate management measures. This review identifies the main taxonomic characteristics of Fusarium and some guidelines that have been proposed for a final, satisfactory identification, with emphasis on economically important crops in the tropics. Keywords: Fusarium, biological species concept, morphological species concept, phylogenetic species concept, formae speciales, Fu- sarium oxysporum INTRODUCCIÓN Fusarium es un habitante del suelo con mu- chas especies que causan serias enfermedades de plantas alrededor del mundo (Agrios, 2005), adaptándose a un amplio rango de condiciones climáticas, hábitats ecológicos, y plantas hospederas (Backhouse, 2001). Las especies de Fusarium podrían ser consideradas como hemibiotróficas, debido a que son hongos que infectan tejidos vivos como biótrofos, pero después tienen un pe- riodo de latencia de días a semanas en el cual pueden llegar a causar la muerte del tejido del hospedero y comportarse como necrótrofos (Schulz et al. 2006). Los tipos de enfermedades inducidas por Fusarium son muy variados e incluyen pudri- ciones de raíces y tallos, chancros, marchite- ces, pudriciones de frutos o semillas, y daños en hojas (Leslie et al., 2006). Las marchiteces por Fusarium afectan y causan grandes pérdidas en cultivos de hortalizas, flores, algodón, tabaco, banano, café, tomate y caña de azúcar (Agrios, 2005). Entre las enfermedades por Fusarium que han tenido gran impacto, es importante men- cionar el mal de panamá, causado por F. oxysporum f.sp. cubense el cual fue respon- sable de un destructiva epidemia en las plan- taciones comerciales de Panamá en los años cincuenta (Ploetz, 2006). Mientras las enfer- medades causadas por estos hongos han merecido gran atención en las zonas templa- das (Leonard 2003; Windels, 2000), muy pocas investigaciones se han realizado en el trópico (Cook, 1981; Holliday, 1980; Ploetz, 2001). Por lo tanto, es pertinente dirigir un importante número de investigaciones sobre enfermedades causadas por Fusarium en el trópico (Summerell et al., 2003). PARTICULARIDADES TAXONÓMICAS DEL GENERO Fusarium El género Fusarium cuenta con tres estados teleomórficos reconocidos Giberella, Haema- tonectria y Albonectria, pertenece a la familia Nectriaceae, orden Hypocreales, clase, Sorda- riomycetes, subphyllum Ascomycota (Blackwell et al, 2006). El número de especies reconocidas por caracteres morfológicos varía de un experto a otro; Gerlach and Niremberg (1982) incluye 73 especies y 26 variedades, mientras Nelson et al. (1983), distingue 30 especies (Webster et al, 2007). Sin embargo, un amplio número de especies, las cuales no pueden ser distin- guidas por caracteres morfológicos, ahora están siendo definidas mediante técnicas moleculares y análisis de extrolitos o metabo- litos excretados (O′Donell, 1996). Adicio- nalmente, se ha establecido una base de datos de acceso público de diagnóstico de secuen- cias de ADN como una ayuda para la identi- ficación (Geiser, 2004). En cuanto a la alternancia de estados sexuales y asexuales, algunas especies tienen claras conexiones con sus teleomorfos, por ejemplo, F. solani, se reproducen sexual y asexualmente, mientras otras, por ejemplo, F. oxysporum no tienen estados teleomórficos conocidos (Agrios, 2005). Los conceptos morfológico, biológico, y filogenético de especies, han tenido una contribución hacia un concepto de especie en Fusarium. Tradicionalmente el concepto morfológico ha dominado (Nelson et al, 1983), pero más recientemente el concepto biológico (Leslie, 1999) y el concepto filo- genético (O′Donell, 2004) han llegado a ser de igual importancia. Una especie robusta por lo general sigue siendo la misma sin importar el enfoque que se utilice para describirla, pero cada uno de estos conceptos puede fallar por razones en la información biológica. Por ejemplo, la descripción morfológica de espe- cie puede fracasar debido a mutaciones gené- ticas que son críticas para estas característi- cas; definiciones biológicas de especies no son posibles a menos que las cepas sean sexualmente fértiles; y definiciones filogené- ticas de especies pueden fallar si la hibridiza- ción entre las especies ocurre frecuentemente sobre una escala evolutiva en el tiempo, las descripciones morfológicas por ejemplo fallan por un fenómeno común, la homoplasia de caracteres fenéticos (este fenómeno con- siste en que los organismos comparten la misma característica fenotípica), además del reciente descubrimiento en hongos de la ocurrencia de especies crípticas (Leslie y Summerell, 2006). Los problemas actuales con este grupo de hongos sugieren claramente que relativamen- te pocos se pueden distinguir por característi- cas morfológicas, y que los caracteres sexua- les, tales como fertilización-cruzada y las variaciones en la secuencia del ADN son importantes para la precisión de las identifi- 2009 Fitopatología Colombiana /Volumen 33 No 2 61 mailto:limhoyosca@unal.edu.co caciones. Así, la integración de especies morfológicas, biológicas y filogenéticas, podría llegar a ser la regla más que la excep- ción (Leslie y Summerell, 2006). Organización del género Fusarium Secciones: Wollenweber y Reinking, 1935 definieron un sistema que divide el género Fusarium en secciones con especies que comparten caracteres morfológicos importan- tes y que sigue en vigencia actual. Las espe- cies se agrupan en un total de catorce seccio- nes. Aunque las secciones no son monofiléti- cas sobre la base de las secuencias de caracte- res de ADN, muchas de estas todavía son de uso común, ya que son un medio útil de clasificación a partir de caracteres morfológi- cos. Algunas secciones tienden a confundirse con denominaciones de especies, por ejemplo ejemplares de la sección Roseum, son con frecuencia tipificados como “F. roseum” pero al parecer, muchos de estos son ejemplares de Giberella zeae, el cual es el nombre actual de la especie descrita en 1832 como F. roseum, precisamente la especie tipo del género Fusa- rium . Especies: Posterior al género se encuentra la categoría de especie, la cual será objeto de discusión más adelante. El concepto biológi- co de especie considera a las especies como grupos depoblaciones que pueden cruzarse real o potencialmente entre sí (Leslie y Sum- merell, 2006) y requiere que la progenie de estos cruces sea viable y fértil (Summerell, et al., 2003); en términos generales puede decir- se que para el género Fusarium se hace nece- sario el concepto de Taylor, 2000 de concu- rrencia de conceptos de especie, que incluyan aspectos o caracteres morfológicos, biológi- cos, ecológicos y genéticos. Formas especiales: Es el taxón intraespecífi- co más comúnmente usado para Fusarium. Las formas especiales son definidas en térmi- nos de patogenicidad hacia un hospedero o un grupo de hospederos relacionados (Leslie y Summerell, 2006). En Fusarium los nombres de formas especiales son más comúnmente usados para F. oxysporum, el cual consiste de más de 100 formas especiales (Leslie y Summerell, 2006). Por ejemplo, aunque muchas plantas pue- den ser portadores asintomáticos de F. oxys- porum f. sp. lycopersici (Katan, 1971), este solo causa enfermedad en plantas del género Lycopersicon (Rowe, 1980). Sin embargo, algunas subespecies tienen un rango mas amplio de hospedero, como F. oxysporum f. sp. radicislycopersici, la cual por lo menos en estudios bajo invernadero puede causar en- fermedad en hospederos de varias otras fami- lias de plantas (Menzies et al., 1990; Rowe, 1980). Una suposición frecuente es que los ais- lamientos con rango de hospederos comparti- dos, y por lo tanto dentro de la misma forma especial, son genéticamente más similares que los aislamientos con otros hospederos específicos. La interpretación evolutiva resul- tante de este supuesto es que las formas especiales son monofiléticas y que los aisla- mientos con un rango de hospederos compar- tido son probablemente derivados de un genotipo patogénico único y particularmente exitoso. Sin embargo, estudios recientes de diversidad genética entre aislamientos de F. oxysporum f. sp. lycopersici, radicis- lycopersici, niveum y cubense, sugieren que ciertos aislamientos dentro de una forma especial pueden manifestar menor similitud genética entre sí, que frente a aislamientos pertenecientes a formas especiales. Estas observaciones son sorprendentes y podrían ser controversiales, debido a que ellas cam- bian la hipótesis de que las formas especiales son monofiléticas y sugieren que ciertas formas especiales no deben ser vistas como unidad naturales individuales dentro de la especies (Klister, 1997). Razas fisiológicas: Es de anotar que cada forma especial potencialmente se puede subdividir en razas fisiológicas, las cuales muestran un patrón característico de virulen- cia sobre diferentes variedades de hospede- ros. Para el caso de F. oxysporum f. sp. cubense, se presentan cuatro razas de las cuales la 4 es de gran importancia subtropical ya que causa la enfermedad denominada mal de Panamá en cultivares de banano resistentes a las razas 1 y 2, entre los que se encuentra Cavendish (Ploetz, 2003). HACIA LA IDENTIFICACIÓN DE ES- PECIES DEL GENERO Fusarium Para elaborar estrategias de manejo eficaz, por lo general es necesario comprender la etiología y epidemiología de la enferme- dad. Generalmente, cuando los agentes causa- les son desconocidos, no es posible poner a prueba la eficacia de un tratamiento de mane- ra controlada (Ploetz, 2007). A continuación se describe secuencialmente el proceso para obtener la información necesaria con el fin de realizar una identificación exitosa de diferen- tes especies de Fusarium de acuerdo a lo planteado por Leslie y Summerell, 2006. El primer paso para el proceso de identi- ficación de Fusarium es describir claramente los síntomas observados en la planta enferma, y las condiciones climáticas bajo las cuales la enfermedad ocurre. Después, los protocolos de aislamiento y recuperación son evaluados para determinar el espectro de especies que podrían ser determinados. Finalmente, las cepas de interés son purificadas y luego evaluadas usando criterios morfológicos, moleculares y biológicos. Para facilitar el proceso de identificación, se propone una división de especies de Fusa- rium en tres listados (A, B y C), los cuales son definidos con base a datos colectados de tipo morfológico, biológico o filogenético. La lista A comprende especies que pueden ser diferenciadas por caracteres morfológicos, la lista B incluye especies para las cuales además de la información morfológica es necesaria información biológica de cruces de fertilidad, y la sección C abarca las formas especiales de F. oxysporum y F. solani, así como las especies complejas de Giberella fujikuroi, para las cuales también es necesario el diagnóstico molecular y en algunos casos grupos de compatibilidad vegetatica (VCGs), concepto que se ampliará adelante. La tabla 1 incluye especies de especial importancia como agentes causales de enfermedades en el trópico. Descripción de los síntomas en la planta y ubicación geográfica Las especies de Fusarium pueden causar un amplio espectro de enfermedades. Las más importantes son pudriciones de raíces, tallos y marchitez vascular (Nelson et al 1981, Summerell et al., 2001). La naturaleza de la enfermedad provee pistas importantes de las especies que pueden ser recuperadas, y usualmente limitan el rango de especies que necesitan ser diferenciadas (Summerell et al, 2003). Por ejemplo, F. oxysporum causa principalmente marchitez vascular sobre muchos cultivos, mientras numerosas espe- cies, especialmente F. solani, causa pudrición de raíces, tallos y semillas que son acompa- ñadas de la producción de micotoxinas (Plo- etz, 2006). Los datos de ubicación geográfica cobran importancia, aunados a las descripciones de síntomas, ya que estos datos pueden ayudar a discriminar el rango de especies observadas. En términos generales, hay especies que prefieren climas tropicales, cálidos o templa- dos, y algunas otras presentan un rango cos- mopolita (Summerell et al., 2003). La diver- sidad biológica aumenta con la disminución de latitud, esta tendencia, llamada el Gradien- te de Diversidad Latitudinal (LDG), se ha observada para un amplio rango de niveles tróficos y formas de vida. En general, el número de especies aumenta drásticamente a medida que se avanza desde los polos al Ecuador (Hillebrand, 2004; Jablonski et al., 2006; Willig et al., 2003; Ploetz, 2007). En la tabla 2 se indican enfermedades causadas por Fusarium spp. en cultivos de importancia económica en el trópico. Concepto morfológico de especie El concepto morfológico de especie es basado en la similaridad de caracteres morfológicos observables. Las macroconidias, microconi- dias y clamidosporas son caracteres de impor- tancia en la identificación de especies (Sum- merell et al., 2003). Para el aislamiento de hongos del género Fusarium se recomienda el 2009 Fitopatología Colombiana /Volumen 33 No 2 62 empleo de medios específicos como PPA (Agar PCNB Peptona), Komada y MGA (Agar Verde Malaquita). Los medios CLA (Agar Hojas de Clavel), SNA (Spezieller Nährstoffarmer Agar) y PDA (Agar Dextrosa Papa), son recomendados para crecimiento e identificación (Leslie y Summerell, 2006). Macroconidias: La macroconidia es el carácter morfológico más importante en la identificación de especies de Fusarium (Nel- son et al., 1994). En la observación de la macroconidia debe considerarse el tamaño de la espora y de las células apical y basal, además, de la forma y el número de septos. La macroconidia puede tener tres formas básicas: macroconidia recta, macroconidia con curvatura dorsoventral, y macroconidia con curvatura dorsal (Summerell et al., 2003; Leslie y Summerell, 2005). Microconidias: Es importante determinar el tamaño de la microconidia, determinado por el número de septos que usualmente es de 0 a 1. Las células conidiogénicas son de dos tipos: monofiálides y polifiálides. Las mono- fiálides tienen una sola apertura por célula, mientras que las polifialidestienen más de una apertura. El arreglo en fiálides puede ser de tipo simple, en cadena o en falsas cabezas. (Nelson et al., 1994; Leslie and Summerell, 2005). Clamidosporas: Las clamidosporas tienen una pared gruesa, con apariencia verrucosa, y una coloración usualmente amarilla-café. Las clamidosporas pueden estar formadas indivi- dualmente, dobles, en grupos y en cadenas (Nelson et al., 1994; Summerell et al., 2003; Leslie and Summerell, 2005). Caracteres secundarios: Usualmente son usados caracteres secundarios como el color, tasa de crecimiento y datos fisiológicos sobre toxinas y otros metabolitos producidos, pero estos datos no suelen estar disponibles para diagnósticos de rutina (Leslie and Summerell, 2005). Concepto biológico de especie. Para especies que no pueden ser confiable- mente identificadas solamente sobre las bases morfológicas, es necesaria la adquisición de información adicional. Hay dos técnicas generales que pueden ser usadas: estudios de cruces de fertilidad sexual y estudios de ADN (Summerrell, et al., 2003). A diferencia del concepto morfológico y filogenético, éste trata a las especies como categorías definidas por compartir verdadera o potencialmente un pool genético, más que como un taxón. Las dificultades prácticas para aplicar el concepto biológico en la identificación de las especies de Fusarium, son los altos niveles de repro- ducción asexual, las frecuencias relativas Tabla 1. Especies de Fusarium de importancia en agricultura tropical que pueden ser identificadas con base a diferentes tipos de datos colectados como parte del proceso de evaluación (Leslie y Summerell, 2006, modificada) Solamente morfología (Especies lista A) Cruce sexual -fertilidad + (Espe- cies lista B) Datos basados en ADN+ (Especies lista C) F. oxysporum F. circinatum Muchas formas especiales de F. oxysporum y F. solani. Las especies que quedan del com- plejo Giberella fujikuroi F. solani F. proliferatum F. decemcellurare F. sacchari F. graminearum F. subglutinans F. semitectum F. mangiferae F. verticillioides Tabla 2. Enfermedades causadas por Fusarium spp. en cultivos de importancia económica en el trópico. Agente(s)a Hospedero Enfermedad F. decemcellurare (Albonectria rigidiuscula) Cacao (Theobroma cacao) Agalla del cojín (1, 2, 3) F. graminearum Maíz (Zea mays), trigo (Triticum spp.) y cebada (Hordeum vulgare) Tizón de la espiga (4) F. mangiferae y otros? Mango (Mangifera indica) Malformación (5, 6) F. proliferatum Banano (Musa spp.) Pudrición de la corona (7, 8) F. sacchari (G. sacchari) Caña de azúcar (Saccharum officinarum) Pokkah boeng (9, 10) F. semitectum Banano (Musa spp.) Pudrición de la corona (7, 8) F .solanib Yuca (Manihot esculenta) Pudrición de la raíz (11) F .solanib Pimienta (Piper nigrum) Amarillamiento o decaimiento lento (12) F .solanib Papaya (Carica papaya) Pudrición del cuello de las plántulas (8) F. solanib (Nectria haematococca) Pasifloras (Passiflora spp.) Pudrición del cuello (13, 14, 8), cancro, marchitez repentina (13) F. subglutinans Mango (Mangifera indica) Malformación floral (15) F. verticillioides Maíz (Zea mays) Pudrición del tallo y la mazorca (4). F. oxysporum f. sp. cubense Banano (Musa spp.) Mal de Panamá (Marchitez por Fusarium) (16, 17) F. oxysporum f. sp. elaeidis Palma de aceite (Elaeis guineensis) Marchitez por Fusarium (1, 18) F. oxysporum f. sp. lycopersici Tomate (Lycopersicon esculentum) Marchitez del tomate (1) F. oxysporum f. sp. passiflorae Pasifloras (Passiflora spp.) Marchitez por Fusarium (1, 8, 14) F. oxysporum f. sp. phaseoli Fríjol (Phaseolus vulgaris) Amarillamiento (1) F. oxysporum f. sp. pisi Arveja (Pisum sativum) Marchitez por Fusarium (19) F. oxysporum f. sp. melonis Melón (Cucumis melo) Marchitez por Fusarium (20) F. oxysporum f. sp. radicis-cucumerinum Pepino (Cucumis sativus) Melón (Cucumis melo) Pudrición del tallo y la raíz (20, 21) F. oxysporum f. sp. vasinfectum Algodón (Gossypium spp.) Marchitez por Fusarium (1) F. oxysporum Uchuva (Physalis peruviana) Marchitez por Fusarium (22) (1) Holliday, 1980; (2) Ford et al., 1967; (3) Hansen, 1966; (4) Leslie y Summerell, 2006; (5) Marasas et al., 2006; (6) Britz et al., 2002; (7) Krauss, 2000; (8) Ploetz, 2003; (9) Martin et al., 1989; (10) Whittle et al., 2000; (11) Bandyopadhyay et al., 2006; (12) Pereira, 1983; (13) Ploetz, 1991; (14) Fischer et al., 2008; (15) Zaccaro et al., 2004; (16) Ploetz, 2006; (17) Ploetz, 2006b; (18) Flood, 2006; (19) Hepple, 1963; (20) Vakalounakis, 1996; (21) Vakalounakis et al., 2005; (22) Forero y Quevedo, 2005. aCuando se conocen teleomorfos estos se nombran entre paréntesis después del anamorfo. bF. solani es un complejo de especies que contiene por lo menos 50 taxa diferentes (O`Donell, 1996). Fuente: Ploetz, 2006, modificada. 2009 Fitopatología Colombiana /Volumen 33 No 2 63 desiguales de los alelos de apareamiento (MAT-1/MAT-2), el número limitado de cepas que sean fértiles como hembras (Leslie and Summerrell, 2006), la falta de disponibilidad en algunos casos de cepas test apropiadas y que las condiciones de laboratorio adecuadas para los cruzamientos no se han establecido (Summerell et al., 2003). Si dadas sus características los aislamien- tos forman parte de la sección C; es decir son casos de F. oxysporum y/o F. solani ó espe- cies complejas de G. fujikuroi; entonces se aplican metodologías para identificar formas especiales teniendo en cuenta el grupo de compatibilidad vegetativa (VCGs), diagnósti- co molecular y rango de hospederos. Mor- fológicamente estas cepas son idénticas, y no pueden ser diferenciadas de cepas no patogé- nicas o saprofíticas. La identificación de estas cepas ha involucrado tradicionalmente test de patogenicidad con sets de hospederos dife- renciales apropiados para las formas especia- les en cuestión, sin embargo, estos ensayos requieren largos periodos de tiempo. Grupos de compatibilidad vegetativa (VCG): La compatibilidad vegetativa, cono- cida también como compatibilidad de hetero- carion, ha sido documentada en numerosos ascomicetes diferentes a Fusarium. La com- patibilidad vegetativa significa que dos hifas se anastomosan y se fusionan para formar un heterocarion estable. Las cepas que pueden formar un heterocarion estable pertenecen al mismo VCG, mientras que aquellas que no pueden formar tales heterocariones son in- compatibles vegetativamente y están en diferentes VCGs. Los miembros de una misma forma espe- cial pueden pertenecer a uno, pocos o nume- rosos VCGs. (Leslie and Summerrell, 2006). Entre más genéticamente relacionadas estén dos cepas, es más probable que sean compa- tibles vegetativamente (Klister, 1997). Los fenotipos de compatibilidad vegetativa tienen una base multigénica, y pueden ser usados como un medio de identificación de un set de aislamientos que comparten alelos comunes de estos loci. Sin embargo, la hipótesis de que todas las cepas en el mismo VCG son clona- les no siempre es verdadera y debe ser toma- da con precaución a menos que sea verificada con un set independiente de marcadores (Chulze et al., 2000). La técnica del VCG funciona bien para algunas formas especiales como F. oxyspo- rum f. sp. cubense, pero no para otras como F. oxysporum f. sp. asparagi. Además, hay un amplio número de especies de interés que no han sido evaluadas por VCG, por lo cual estos análisis son más apropiados como una herramienta de trabajo que como un protoco- lo (Summerell et al., 2003). En una población asexual, como la que se cree que existe para F. oxysporum, no debe haber recombinación sexual, y los organismos con patogenicidad similar que surgen a partir de un linaje clonal podrían pertenecer al mismo VCG. Así, esta podría ser una alternativa de identificación mas rápida que los test de patogenicidad (Leslie y Summerrell, 2006). Concepto filogenético de especie El concepto filogenéticoes aplicado para las especies que no producen regularmente un estado sexual ó para aquellas que son homotálicas (Leslie y Summerrell, 2006). Por medio de este concepto es posible revelar especies que no son detectadas por el concep- to morfológico, y en algunos casos por el concepto biológico. El complejo Giberrella fujikuroi provee un buen ejemplo, para su estudio agruparon aislamientos en clusters usando una secuencia de nucleótidos del gen de la beta tubulina y luego adicionaron se- cuencias de nucleótidos para otros dos genes. Los análisis filogenéticos de los tres ge- nes revelaron 45 especies en el complejo, 23 de ellas nuevas para la ciencia (Hsieh et al., 1977; Leslie, 1995). Las especies biológicas y las especies filogenéticas fueron idénticas, lo cual indica que el reconocimiento filogenéti- co de especie puede proveer la misma infor- mación que el reconocimiento biológico (Niremberg y O`Donell, 1998). Para delimitar especies dentro del género Fusarium se han utilizado varios tipos de técnicas moleculares. Éstas incluyen el uso de la tecnología de la isoenzima (Huss et al. 1996, La'day et al. 2000); análisis RAPD (Schilling et al., 1996), análisis RFLP (Ben- yon et al., 2000) y el análisis de AFLP (Ma- rasas et al., 2001). Con el advenimiento de la secuenciación del ADN, la similitud de secuencias de uno o más loci diagnósticos, se ha convertido en un criterio importante para distinguir las espe- cies. Las secuencias más comúnmente utili- zadas para distinguir Fusarium spp. son las regiones de las secuencias genómicas de codificación del factor de elongación translo- cación 1-α (tef1), β - tubulina (tub2), y las regiones ITS1 e ITS2. Las secuencias de tef1 son las más ampliamente utilizadas a través de este género, sin embargo, no todas las secuencias funcionan igualmente bien para todas las especies. Las regiones ITS no re- suelven adecuadamente dentro de la sección Liseola y sus parientes cercanos, y tub2 no funciona bien dentro del complejo de espe- cies F. solani (Leslie et al., 2007). Se plantea la hipótesis que el gen que co- difica para el EF-1α en el complejo Fusarium a pesar de ser altamente conservado, posee la suficiente variabilidad genética para poder establecer diferencias ínterespecíficas e intraespecíficas (Kim et al., 2005 y O'Donnell et al., 1998). Por otra parte, cepas de F. sub- glutinans asociadas con diferentes hospederos son virtualmente indistinguibles usando caracteres morfológicos, pero pueden ser fácilmente diferenciadas usando secuencias de genes de histona y β-tubulina, algunas de las cuales han sido subsecuentemente asigna- das a distintas especies (Steenkamp et al., 2000). Así mismo, aislamientos de los patógenos del maíz Fusarium verticillioides y Fusarium proliferatum los cuales son morfológicamente muy similares y por consiguiente se tienden a confundir, pueden distinguirse por medio de AFLP y los perfiles de ITS-RFLP, y por la secuencia combinación de secuencias ITS y el gen de calmodulina, mostrando concordan- Tabla 3. Iniciadores usados para genotipificación de Fusarium spp. (Visentin et al., 2009) Pares de iniciadores Blanco Especificidad Referencia FUS1 FUS2 Proteína del choque térmi- co Fusarium moniliforme Murillo et al., 1998. VERT1 VERT2 IGS Fusarium verticillioides Patiño et al., 2004. Fp3F Fp4R IGS Fusarium proliferatum Jurado et al., 2006. VER1 VER2 Calmodulina F. verticillioides Mulé et al., 2004. PRO1 PRO2 Calmodulina F. proliferatum Mulé et al., 2004. CL1 CL2A Calmodulina Fusarium spp. O′Donnell et al., 1998. ITS1 ITS4 ITS Todas las especies fungales. White et al., 1990. verITS-F ITS4 ITS F. verticillioides Visentin et al., 2009; White et al., 1990. ITS1 proITS-R ITS F. proliferatum Visentin et al., 2009; White et al., 1990. fusALPHArev fusALPHAfor MAT1 Especies de Fusaria con Calonectria, teleomorfos Gibberella y Nectria. Kerenyi et al. (2004) fusHMGfor fusHMGrev MAT2 Especies de Fusaria con Calonectria, teleomorfos Gibberella y Nectria. Kerenyi et al., 2004. 2009 Fitopatología Colombiana /Volumen 33 No 2 64 cia con las conclusiones basadas en cruces sexuales y morfología vegetativa (Visentin et al., 2009), Lieckfeldt y Seifert (2000) afirman que los ITS no deben ser usadas como región única para caracterización taxonómica en hypocreales, como lo es Fusarium, y deben combinarse con otras, ya que hay copias no ortólogas en regiones ITS, lo cual sugiere que esa no es universalmente aplicable como marcador a nivel de especie, esto también ha sido demostrado por otros autores como O´ Donnell et al., 2000. Finalmente, se han desarrollado diversos primers para la genoti- pificación de Fusarium spp., los cuales se indican en la Tabla 3. CONCLUSIONES Fusarium es un género tan diverso como limitante, por tal razón, requiere de un dia- gnóstico acertado como punto de partida para la recomendación de medidas de manejo apropiadas. Esto implica la aplicación de un concepto de especie robusto, el cual depen- diendo de la especie debe ser soportado por marcadores morfológicos, biológicos y/o moleculares. Teniendo en cuenta la alta variabilidad gené- tica de Fusarium spp., la diversidad de eco- sistemas de Colombia y la presencia de culti- vos promisorios frente a los cuales existe un alto grado de desconocimiento, es perentorio intensificar actividades de caracterización de las poblaciones fitopatógenas que habitan en el país y realizarlo bajo rigurosos criterios técnicos y científicos que permitan tener certeza de los resultados obtenidos. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Agrios, G.N. 2005. Plant Pathology. 5th edition. Elsevier Academic Press Publica- tions. 922p. Armstrong, G. M. y Armstrong, J. K. 1981. Formae speciales and races of Fusarium oxysporum causing wilt diseases. En Nel- son, T. A. Tousson, Cook, R.J. (eds.) Fusarium: Diseases, Biology and Taxon- omy. Pp. 391-399. Toussoun, T.A. y Cook, R. J. 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