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Full Terms & Conditions of access and use can be found at https://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=tcyt20 CyTA – Journal of Food ISSN: 1947-6337 (Print) 1947-6345 (Online) Journal homepage: www.tandfonline.com/journals/tcyt20 Propiedades antioxidantes del maguey morado (Rhoeo discolor) Purple maguey (Rhoeo discolor) antioxidant properties A. Reyes-Munguía, E. Azúara-Nieto, C. I. Beristain, F. Cruz-Sosa & E. J. Vernon- Carter To cite this article: A. Reyes-Munguía, E. Azúara-Nieto, C. I. Beristain, F. Cruz-Sosa & E. J. Vernon-Carter (2009) Propiedades antioxidantes del maguey morado (Rhoeo discolor) Purple maguey (Rhoeo discolor) antioxidant properties, CyTA – Journal of Food, 7:3, 209-216, DOI: 10.1080/19476330903010177 To link to this article: https://doi.org/10.1080/19476330903010177 Published online: 08 Mar 2010. Submit your article to this journal Article views: 28215 View related articles https://www.tandfonline.com/action/journalInformation?journalCode=tcyt20 https://www.tandfonline.com/journals/tcyt20?src=pdf https://www.tandfonline.com/action/showCitFormats?doi=10.1080/19476330903010177 https://doi.org/10.1080/19476330903010177 https://www.tandfonline.com/action/authorSubmission?journalCode=tcyt20&show=instructions&src=pdf https://www.tandfonline.com/action/authorSubmission?journalCode=tcyt20&show=instructions&src=pdf https://www.tandfonline.com/doi/mlt/10.1080/19476330903010177?src=pdf https://www.tandfonline.com/doi/mlt/10.1080/19476330903010177?src=pdf Propiedades antioxidantes del maguey morado (Rhoeo discolor) Purple maguey (Rhoeo discolor) antioxidant properties A. Reyes-Munguı́aa, E. Azúara-Nietoc, C.I. Beristainc*, F. Cruz-Sosaa and E.J. Vernon-Carterb aDepartamento de Biotecnologı́a; y, bDepartamento de Ingenierı́a de Procesos e Hidráulica, Universidad Autónoma Metropolitana- Iztapalapa, San Rafael Atlixco 186, Col. Vicentina, CP. 09340, México, D.F., México; cInstituto de Ciencias Básicas, Universidad Veracruzana, Av. Dr. Rafael Sánchez el Altamirano s/n Km. 3.5 carreteras Xalapa-Las Trancas, Coronel Industrial Las Animas, C.P. 91192, Xalapa, Veracruz, México (Received 12 September 2008; final version received 30 April 2009) In this work the redox potencial, antioxidant capacity, total phenols content and color intensity of aqueous extracts from fresh and blanched-dried leaves of purple maguey (Rhoeo discolor) were monitored. The fresh extract was pasteurized, bottled and stored. The dried leaves were put into tea bags, and two extraction procedures were done: (1) at different storage times (0, 3, 6, 9 and 12 months), and (2) using different infusion times (2, 5, 8, 10 and 12 min). The fresh and dried extracts had high antioxidant content, which was higher in the dried extract. The pasteurized extract had higher initial antioxidant properties than the fresh extract, and these increased with time. Dried extracts exhibited constant antioxidant properties with storage time. Keywords: Rhoeo discolor; aqueous extracts; antioxidant capacity; polyphenols; redox potential En este trabajo se hizo un seguimiento del potencial del redox, de la capacidad antioxidante, del contenido de fenoles totales y de la intensidad de color de extractos acuosos a partir de hojas frescas y de hojas escaldadas-secadas de maguey morado (Rhoeo discolor). El extracto fresco fue pasteurizado, embotellado y almacenado. Las hojas deshidratadas fueron introducidas en bolsas para infusión y se realizaron dos tipos de extractos: (1) a distintos tiempos de almacenamiento (0, 3, 6, 9 y 12 meses), y (2) a distintos tiempos de infusión (2, 5, 8, 10 y 12 min). El extracto fresco y el de hojas secas tuvieron un alto contenido de antioxidantes, que fueron significativamente mayores en el extracto seco. El extracto pasteurizado presentó mejores propiedades antioxidantes iniciales que el extracto fresco, y estas aumentaron en el tiempo. Los extractos de la muestra seca mantuvieron prácticamente constantes sus propiedades antioxidantes en el tiempo. Palabras clave: Rhoeo discolor; extractos acuosos; capacidad antioxidantes; polifenoles; potencial redox Introducción Aparte de las propiedades nutricionales y sensoriales, algunos componentes de los alimentos naturales actúan como agentes antioxidantes (Thomas, 1995). En la actualidad, la industria de los alimentos busca el desarrollo de alimentos funcionales, que son aquellos que contienen o son fortificados con ingredientes que presentan un efecto benéfico en la salud fı́sica y mental de los individuosque los consumen (Beristain et al., 2006). Las infusiones son un producto lı́quido que resulta de extraer las sustancias solubles de ciertas especies vege- tales. Ello se consigue por la acción de poner en contacto agua caliente con estas especies vegetales y su posterior reposo. Hoy en dı́a encontramos una amplia gama de infusiones en el mercado, preparadas o aromatizadas, a partir de frutas, especias y plantas. Las infusiones de plantas (especialmente el té) sonuna fuente importantede antioxidantes (Moraes-de-Souza, Oldoni, Regitano- d’Arce, & Alencar, 2008; Marongiu et al., 2004; Wu, Ng, & Lin, 2004a). Las especies vegetales más comunes para elaborar infusiones son: el té negro (Camellia sinensis), la manzanilla (Matricaria chamomilla), euca- lipto (Eucalyptus globulus Labill), la tila (Tilia cordata) y el romero (Rosmarinus officinalis), entre otros (Klodka, Bonkowski, & Telesinski, 2008). Se estima que el consumo promedio de té negro en el Reino Unido es de dos tazas/persona/dı́a (Karakaya & Kavas, 1999; Yana- gimoto, Ochi, Lee, & Shibamoto, 2003). El té negro ha sido usado durante siglos como bebida medicinal y es consumido por cerca de dos tercios de la población mundial diariamente (Hernández,Rodrı́guez,&Sánchez, 2004). Regularmente esta ingesta de té negro esta asociada con un mejor estado antioxidante in vivo, ya que puede contribuir a la reducción de ciertos tipos de cáncer, entre ellos el cáncer de próstata (Stuart, Scandlyn, & Rosengren, 2006), ateroesclerosis (Geleijnse, Launer, Hofman, Pols, & Witteman, 1999; Hong, Smith, Ho, August, & Yang, 2001; Sano et al., 2004; Uesato et al., 2001; Vinson, Teufel, & Wu, 2004), la mutagenicidad *Corresponding author. Email: cberistain@uv.mx CyTA – Journal of Food Vol. 7, No. 3, November 2009, 209–216 ISSN 1947-6337 print/ISSN 1947-6345 online � 2009 Taylor & Francis DOI: 10.1080/19476330903010177 http://www.informaworld.com (Gupta, Sahaa, & Giri, 2002; Kuroda & Hara, 1999) y la inflamación (Katiyar, Matsui, Elmets, & Muktar, 1999), además de proteger contra las enfermedades neurode- generativas (Choi et al., 2001; Datla et al., 2004), e incrementar la sensibilidad a la insulina (Wu, Juan, Ho, Hsu & Hwang, 2004b). Uno de los efectos más benéficos del té negro es la habilidad de atrapar a los radicales libres debido a la presencia en éste de compuestos fenólicos (Frei & Higdon, 2003). Los antioxidantes de los alimentos (compuestos fenólicos, catequinas, antocianinas, vita- minas) pueden ser significativamente inactivados como consecuencia de su procesamiento, almacenamiento y manejo (Britton, 1996). Estos cambios indeseables, causan una pérdida dramática en la calidad del alimento, debido a la reducción de sus propiedades nutricionales (minerales y vitaminas) (Thomas, 1995). Sin embargo, el procesamiento y almacenamiento no siempre son responsables de una reducción en las propiedades antioxidantes de los alimentos. En algu- nos casos, esos factores pueden inducir la formación de compuestos con nuevas propiedades antioxidantes, que pueden mantener o incluso retardar la actividad antioxidante de los alimentos (Lerici, Manzocco, Anese, & Nicoli, 1997; Nicoli, Anese, Parpinel, Franceschi, & Lerici, 1997). Las hojas frescas del té negro presenta niveles altos de compuestos fenólicos y actividad antioxidante; sin embargo, esta actividad antioxidante disminuye posi- blemente debido a una degradación de los compuestos con actividadantioxidante durante el procesamiento del té (Luximon-Ramma et al., 2005). La presencia de la actividad antioxidante y de compuestos responsables de las caracterı́sticas senso- riales en las infusiones de plantas, puede contribuir a la producción de bebidas con un valor agregado y ası́ estimular el consumo de estos productos. Estas infu- siones se pueden considerar más saludables que las bebidas gaseosas (Bastos, Ishimoto, Ortiz, Fernando, & Torres, 2006). Rhoeo discolor es una planta endémica del sureste mexicanoempleadaen lamedicina tradicionalparaprevenir o tratar problemas de tipo infeccioso, cáncer, gangrena, várices, lavar heridas, tos, etc. (Morton, 1968). González- Ávila et al. (2003) atribuyeron a R. discolor propiedades antioxidantes, antigenotóxicas y antimutagénicas, y encon- traron que el R. discolor contiene carotenos, polifenoles de tipo flavonoide y compuestos cumarı́nicos. Los objetivos de este trabajo fueron estudiar el contenido de fenoles totales, el potencial redox, la intensidad de color y la capacidad antioxidante de R. discolor inmediatamente luego de la extracción y/o siguiendo la evolución de estos parámetros en el tiempo en: (1) el extracto acuoso fresco; (2) el extracto acuoso pasteurizado; y (c) el extracto acuoso a partir de hojas deshidratadas. En este último también se estudió el efecto de distintos tiempos de infusión en las propiedades antioxidantes. Materiales y métodos Preparación de las muestras Las hojas de R. discolor fueron obtenidas en la localidad de Tolome, estado de Veracruz, México. Los extractos de R. discolor fueron obtenidos por extracción sólido–lı́quido usando agua desionizada a 95 8C. Para muestra fresca la proporción de hojas y agua de R. discolor fue de 1:8 (p/p) (Beristain, Garcı́a, & Vázquez, 1993); en muestra seca la proporción fue de 1:100 (p/p) (Manzocco, Anese, Nicoli, 1998). El tiempo de extracción fue de 5 min. Las infusiones fueron filtradas rápidamente a través de papel filtro Whatman no. 2. Para reducir al mı́nimo el contacto de las bebidas con oxı́geno atmosférico, la extracción y la filtración fueron realizadas bajo flujo de nitrógeno (5ml/min). Después de la extracción de muestras frescas, se tomaron volúmenes de 50 ml de extracto de R. discolor y fueron embotellados en frascos color ámbar con tapa de tornillo en presencia de aire y sujetos a pasteuriza- ción a 105 8C por 20 min en autoclave. Las bebidas fueron almacenadas a 25 8C por 30 dı́as. Para la muestra seca, las hojas de R. discolor se sometieron a un proceso de escaldado, para detener la acción enzimática, y minimizar los posibles cambios indeseables en sabor y olor. Para la realización de esta prueba se utilizó la metodologı́a descrita por Meyer, Gaetano,UsamiOlmos, yMedinaFigueroa (1984)donde se requirió de una solución al 1% de guayacol y peróxido de hidrógeno, también al 1%. El material cortado fue depositado en un mortero de porcelana, al cual se le adicionaron 5 ml de la solución de guayacol al 1% cubriendo el material cortado, posteriormente se adicio- naron 5 ml de peróxido de hidrógeno; después de tres minutos, se evaluó el desarrollo del color en las superficies cortadas y en la solución. La efectividad del escaldado se determinó mediante la actividad antioxidante de la enzima peroxidasa. Después del escaldado, las hojas fueron sometidas al proceso de secado con un secador convectivo a 55 8C, hasta obtener un producto con humedadfinalde 6%(base seca), que fue tamizado enuna malla del no. 10 y se envasó en bolsas para infusión. Muestreos para las determinaciones analı́ticas Las determinaciones analı́ticas se realizaron en el extracto acuoso de hojas frescas inmediatamente luego de su extracción; a los extractos acuosos de hojas frescas sometidos a pasteurización, se les hizo un seguimiento en el tiempo; y las extracciones de hojas secas se efectuaron sobre muestras obtenidas a diferentes tiempos de infusión (2, 5, 8, 10 y 12 min) y sobre muestras extraı́das después de distintos tiempos de almacenamiento (0, 3, 6, 9 y 12 meses) por 5 min. Contenido de sólidos totales Se determinó conforme a la metodologı́a de la AOAC (1995). Se pesaron 10 g de hojas de maguey morado y 210 A. Reyes-Munguı́a et al. fueron colocadas en estufa de vacı́o a 55 8C, durante 24 horas. Transcurrido el tiempo se volvió a pesar y por diferencia de peso se calculó la humedad. Contenido de fenoles totales El análisis se realizó conforme a lametodologı́a de Folin- Ciocalteau (Singleton, Orthofer, & Lamuela-Raventos, 1999). Las lecturas de absorbancia fueron realizadas en un espectrofotómetro (SpectronicGenesys 5). El extracto de la muestra fue diluido 1:10 con agua desionizada, se tomó 1 ml de la muestra diluida colocándola en un tubo de ensayo, agregando 5 ml de reactivo diluido (1:10) de Folin-Ciocalteau, dejando reposar durante 8 min y posteriormente se adicionaron 4 ml de la solución de carbonato de sodio 7,5% hasta lograr una mezcla homogénea. Los tubos fueron cubiertos para protegerlos de la luz fuerte e incubados por 2 h a temperatura ambiente. Posteriormente fueron leı́dos a 740 nm. Los resultados se expresan como equivalentes de ácido gálico (EAG)/L. Intensidad de color Las mediciones fueron realizadas usando un espectrofo- tómetro (modelo Spectronic Genesys 5) a una longitud de onda de 390 nm, que corresponde a la región espectral de absorción máxima. Los extractos de maguey morado fueron diluidos (1:10) (Manzocco et al., 1998). Potencial redox Las medidas fueron hechas con un electrodo de platino y un electrodo de referencia de Ag/AgClsat conectado a un potenciómetro (Orion, 720 A). La calibración fue realizada contra una solución estándar redox (E ¼ 420 mV a 25 8C). Los electrodos fueron introducidos dentro de un vaso de precipitado de 50 ml que contenı́a un volumen de 30 ml de muestra. Los valores del potencial redox en mV fueron registrados hasta por lo menos 5 min, para que el potencial redox alcanzara su estabilidad. Un potencial estable fue definido arbitrar- iamente como un cambio de menos de 1 mV en un periodo de 5 min (Manzocco et al., 1998). Actividad antioxidante La actividad del extracto de maguey morado fue medido de acuerdo con la metodologı́a descrita por Brand-Williams, Cuvelier, y Berset (1995), a través de la inhibición del radical es table 2,2 difenil-1-pricrilhi- dracilo (DPPH.) que en soluciones etanólicas presenta una coloración violeta con una absorbancia máxima a una longitud de onda (l) de 515 nm y que una vez que reacciona con un antioxidante, éste se reduce y su absorción a ésta l desaparece. Se colocaron 3,0 mL de una solución metanólica de DPPH. 6,161075 M y se hicieron reaccionar con 0,1 mL del extracto acuoso de maguey morado. La mezcla se dejó reaccionar en oscuridad y se monitoreó el cambio en la absorbancia de las muestras por un periodo de 30 min a 25 8C. La actividad antioxidante fue determinada a partir de la determinación de k de la ecuación propuesta por Manzocco et al. (1998). Ecuación (1) 1 A3 � 1 A3 0 ¼ �3kt ð1Þ donde A0 es la densidad óptica inicial y A es la densidad óptica respecto al tiempo t; la k es una constante cinética de cuarto orden que se toma como medida de la actividad antioxidante expresada como 7D.O.73/min/mgm.s. Todas las determinaciones fue- ron realizadas por triplicado. pH El pH se determinó con un potenciómetro marca Hanna Instruments modelo HI 8424, calibrado con soluciones amortiguadoras de pH 4 y 7 a 25 8C. Posteriormente se realizaron las mediciones en el maguey morado colocando 30 ml de extracto en un vaso de precipitado de 50 ml. Análisis estadı́stico Todos los datos cuantitativos se expresaron como la media + desviación estándar. Se realizó un análisis de varianza (ANDEVA) seguido por la prueba de Tukey usando el software estadı́stico NCSS (2001). Se determinó la significancia con un valor de a � 0,05. Todas las determinaciones experimentales se hicieron por triplicado. Resultadosy discusión Las hojas del maguey morado recién cortadas fueron lavadas y cortadas en trozos de aproximadamente 1 cm y posteriormente se sometieron a un proceso de escaldado en agua, para detener la acción enzimática y conservar los ingredientes activos de la planta (polifenoles), reduciendo además los cambios indese- ables de sabor y color. La efectividad del escaldado se determinó mediante una prueba que evaluó la actividad antioxidante de la enzima peroxidasa. La cual se observa en presencia de guayacol y peróxido de hidrógeno, ambas sustancias hacen que la peroxidasa tome un color rojo-café oscuro, la inactivación térmica de la peroxidasa indica que es un proceso complejo, y se ha sugerido que el grupo hemo (esencial para la actividad de la enzima) y la fracción de carbohidratos, juegan un papel muy importante en este proceso, donde la actividad peroxidásica se manifiesta por la aparición de un color de aspecto parduzco, cuando se pone en contacto con CyTA – Journal of Food 211 el producto guayacol y peróxido de hidrogeno (Meyer et al., 1984). La efectividad del escaldado se midió según el color desarrollado, como lo determina Meyer et al. (1984). En donde ningún cambio de color es una reacción negativa. En el caso de presentar una reacción positiva, se asume que la enzima no habı́a sido inactivada. Esto querı́a decir que el tiempo del escaldado no habı́a sido suficiente (Meyer et al., 1984). Se realizaron pruebas a diferentes tiempos y temperaturas. Las mejores condiciones de escaldado para inactivar a la enzima peroxidasa fueron a una temperatura de 90 8C por un minuto. Extracto de hojas frescas La humedad de las hojas frescas de maguey morado fue de 91,5% (base húmeda) y las propiedades antioxidantes del extracto de la muestra fresca se presentan en la Tabla 1. El coeficiente de correlación obtenido al determinar la actividad antioxidante de las hojas frescas de maguey morado de acuerdo a la Ecuación (1) fue de r2 ¼ 0,993, este valor nos indica que la cinética de cuarto orden es adecuada para obtener el coeficiente cinético k que representa la actividad antioxidante (Tabla 1). El potencial redox fue de 362,2 mV, el contenido de fenoles totales de 2100 mg EAG/L (197,74 mg EAG/gs.s.), la intensidad de color de 0,037 y una actividad antio- xidante de 26,32 7D.O.73/min/mgm.s. González-Ávila et al. (2003) compararon la actividad antioxidante de un extracto etanólico de maguey morado, con el valor de actividad antioxidante del a-tocoferol y ácido ascórbico, observando que la actividad antioxidante de la muestra del extracto etanólico demagueymorado fue similar a la del a-tocoferol y más efectiva que el ácido ascórbico. A diferencia del trabajo de González-Ávila et al. (2003) donde se estudió un extracto etanólico, en el presente trabajo se obtuvo una alta capacidad antioxidante con un extracto acuoso. Extracto de muestra deshidratada Con el fin de comparar los resultados obtenidos de los extractos de maguey morado deshidratado con las propiedades antioxidantes de té verde y té negro se utilizaron las mismas condiciones que las reportadas por Manzocco et al. (1998). Los valores promedio de las propiedades antioxidantes en base seca de los tres extractos se muestran en la Tabla 1. Manzocco et al. (1998) reportaron para el extracto de té negro una energı́a reductora de 180,0 mV, mientras que para el extracto de maguey morado deshidratado fue mayor, con un valor de 383,1 mV. El coeficiente de correlación obtenido con la Ecuación (1) para calcular la actividad antioxidante de la muestra deshidratada fue de r2 ¼ 0,996. La actividad antioxidante por rompimiento de cadena presentó un valor promedio de 29,93 7D.O.73/min/mgm.s., resultado muchı́simo mayor que reportados para té verde (5,60 7D.O.73/min/mgm.s.) y té negro (1.95 7D.O.73/min/mgm.s.). La intensidad de color, que es una medida de los pigmentos presentes en la muestra mas no de su actividad antioxidante, fue menor en el extracto de hoja deshidratada que para el té verde o té negro. Respecto a los fenoles totales, se encontró que el extracto de maguey morado seco contenı́a tres veces más compuestos fenólicos que los reportados por Manzocco et al. (1998) para té verde y té negro. Asimismo, las propiedades antioxidantes del extracto a partir de las hojas deshidratadas (3010 + 20 mg EAG/L ó 320,2 + 2,2 mg EAG/gs.s.) fueron significativamente mayores que la del extracto de hojas frescas (2100 + 17 mg EAG/L ó 197,74 + 0,95 mg EAG/ gs.s.) (Tabla 1), que a su vez tuvo propiedades anti- oxidantes superiores a las del té verde y té negro. Esto resulta relevante, ya que los antioxidantes de muchos alimentos pueden ser significativamente inactivados como consecuencia del procesamiento (Jonsson, 1991), cosa que no ocurrió aquı́, y contrariamente a lo esperado, las propiedades antioxidantes sufrieron un incremento por el procesamiento. En la Tabla 2 se reportan los resultados de las muestras deshidratadas extraı́das después de distintos tiempos de almacenamiento de las bolsas de té a temperatura ambiente. Se puede observar que el potencial redox, la actividad antioxidante, los fenoles totales, y la intensidad de color se mantuvieron sin cambios significativos independientemente del tiempo Tabla 1. Potencial redox, fenoles totales, intensidad de color y actividad antioxidante iniciales de extractos de maguey morado obtenidos de hojas frescas y deshidratadas. Table 1. Initial redox potencial, total phenols, color intensity and antioxidant activity of purple maguey extracts from fresh and dried leaves. Eh (mV) Fenoles totales Intensidad de color Actividad antioxidante Muestra Ag/AgCl, Cl-sat (mg EAG1/L) D.O. 390 nm (7D.O.73/min/mgm.s.) Extracto de hojas frescas 362,2 + 10,1b 2100 + 17b 0,037 + 0,002b 26,3 + 0,4b Extracto de hojas deshidratadas 383,1 + 8,2a 3010 + 20a 0,105 + 0,003a 29,9 + 0,2a Té verde2 n.d. 953,8 0,131 5,6 Té negro2 180,0 801,2 0,160 1,9 1Equivalentes de ácido gálico, 2Resultados de Manzocco et al. (1998), n.d.: no determinado. Diferentes superı́ndices en columnas indican que existen diferencias significativas a p � 0,05. 1Galic acid equivalents. 2Results from Manzocco et al. (1998), n.d.: non-determined. Different superscripts in columns indicate significant differences at p � 0,05. 212 A. Reyes-Munguı́a et al. de almacenamiento que haya transcurrido (hasta 12 meses, tiempo experimental del estudio) antes de efectuar la infusión. Es decir, que el procesamiento de las hojas de maguey morado también logró estabilizar las propiedades antioxidantes de los extractos. Extracto de hojas frescas maguey morado pasteurizado El extracto fresco de maguey morado fue sometido a un proceso de pasteurización y almacenamiento sub- secuente. En las Figuras 1(a) y 1(b) se muestra el contenido de fenoles totales y los cambios en el potencial redox en función del tiempo de almacena- miento, respectivamente. Es importante resaltar que ambos parámetros exhibieron un comportamiento similar caracterizado por un incremento constante en sus valores hasta 24 dı́as de almacenamiento, seguido por un decremento muy marcado en su valor hasta los 30 dı́as (duración de las determinaciones experimen- tales), y en el caso particular del potencial de óxido- reducción, su valor decayó considerablemente por debajo de su valor inicial. Este decremento observado en los fenoles, como en la mayorı́a de los pigmentos naturales, se debe a su inherente inestabilidad. Los pigmentos naturales pueden degradarse por un gran Tabla 2. Potencial redox, fenoles totales, intensidad de color y actividad antioxidante de hojas de maguey morado deshidratadas extraı́das después de diferentes tiempos de almacenamiento. Table 2. Redox potential, total phenols, color intensity and antioxidant activity of purple maguey dried leaves extracted after different storage times. Tiempo almacenamiento (meses) Potencial redox Eh (mV) Fenoles totales Intensidad de color Actividad antioxidante Ag/AgCl, Cl-sat (mgEAG1/L) D.O. 390 nm (7D.O.73/min/mgm.s.) 0 383,1 + 8,2a 3010 + 20a 0,105 + 0,002a 29,9 + 0,9a 3 380,9 + 9,1a 2980 + 17a 0,104 + 0,002a 28,5 + 0,8a 6 381,2 + 9,6a 2990 + 16a 0,105 + 0,003a 28,2 + 0,9a 9 381,6 + 10,7a 2990 + 22a 0,105 + 0,003a 28,2 + 0,9a 12 380,1 + 11,4a 2960 + 20a 0,104 + 0,003a 28,2 + 0,8a 1Equivalentes de ácido gálico. Diferentes superı́ndices en columnas indican que existen diferencias significativas a p � 0,05. 1Galic acid equivalents. Different superscripts in columns indicate significant differences at p � 0.05. Figura 1. Cambios en el tiempo en el extracto pasteurizado de: (a) Fenoles totales; (b) potencial redox; (c) la actividad antioxidante; y (d) la intensidad de color. aEAG ¼ equivalentes de ácido gálico. Figure 1. Changes in time in the pasteurized extract in: (a) Total phenols; (b) redox potencial; antioxidant activity; and (c) color intensity. aGalic acid equivalents. CyTA – Journal of Food 213 número de posibles mecanismos a compuestos inco- loros solubles y/o productos coloreados café insolubles (Jackman & Smith, 1996). Aparentemente la produc- ción competitiva de uno de estos dos tipos de productos ocurrió después de los 24 dı́as, inicialmente se observa un incremento en el contenido de fenoles en los primeros 24 dı́as, seguido por un predominio en la formación de compuestos cafés insolubles después de los 24 dı́as, manifestándose en un decremento en el contenido de fenoles (Figura 1(a)). Adicionalmente, es importante mencionar que los valores inı́ciales de fenoles totales y del potencial redox fueron significativamente menores a los del extracto de hojas frescas sin pasteurizar. Por otro lado, el comportamiento del potencial redox del extracto pasteurizado difirió del reportado por Manzocco et al. (1998) para el té negro pasteurizado y almace- nado a temperatura ambiente, que permaneció sin cambios 30 dı́as. En la Figura 1(c) se observa que la actividad antioxidante por rompimiento de cadena aumentó en forma paulatina hasta los 30 dı́as de almacenamiento. Esto difiere de la actividad antioxidante medida de forma termodinámica a través del potencial redox que disminuye después de los 24 dı́as. Esto es indicativo de que la actividad antioxidante ya no se debe a la presencia de fenoles después de transcurridos 24 dı́as. Este comportamiento se puede relacionar con la intensidad de color (Figura 1(d)) que también incrementó sus valores con respecto al tiempo. De acuerdo a los resultados obtenidos para la intensidad de color se puede observar un comportamiento en tres etapas (Figura 1(d)). La primera del tiempo cero a los seis dı́as, presentó un incremento parcial en forma lineal; la segunda de los seis dı́as hasta los 18 dı́as mostró un perı́odode estabilidad; y la tercera de los 18 dı́as hasta los 30 dı́as, donde la intensidad de color sigue aumentando de forma directamente proporcional al tiempo de almacenamiento. El incremento en la actividad antio- xidante por rompimiento de cadena y la intensidad de color confirman que durante la pasteurización se promueve una polimerización progresiva de los com- puestos fenólicos para formar productos macromolecu- lares de color café marrón (Nicoli, Toniolo, & Anese, 2004). El análisis anterior sugiere que los resultados correspondientes al extracto de maguey morado pas- teurizado concuerdan con esta explicación. La oxida- ción de compuestos fenólicos conduce a la formación de compuestos de color café marrón estables que presentan una fuerte actividad antioxidante, como los productos de la reacción de Maillard. Nicoli et al. (2004) observaron que durante la mayor parte del almacenamiento los valores de potencial redox aumentan progresivamente mientras la actividad antioxidante se incrementa. Este incre- mento de la actividad barredora de radicales libres es atribuida a la oxidación parcial de algunos polifenoles que pueden presentar propiedades antioxidantes más fuertes que las correspondientes a formas no oxidadas, como una consecuencia del incremento en la resonan- cia de deslocalización, ası́ como también de la estabilidad de radicales aryloxyl. Mientras los métodos cinéticos como la actividad antioxidante de rompimiento de cadena estiman la capacidad antioxidante refiriéndose sólo a los com- puestos más reactivos, la medición del potencial redox da información de las propiedades reductoras totales. Estas últimas se deben a la contribución de todos los antioxidantes del alimento, incluyendo los más lentos pero altamente eficientes, que representan la reserva antioxidante del producto. Estos compuestos juegan un papel importante en el mantenimiento de la estabilidad quı́mica de los alimentos durante el almacenamiento y probablemente en la conservación de sus propiedades funcionales (Nicoli et al., 2004). Por lo tanto, en la etapa de decremento ocurre una disminución en la reserva total antioxidante (potencial redox) del maguey morado pasteurizado, pero la actividad antioxidante de rompimiento de cadena sigue aumentando, probablemente debido a que después de este tiempo las sustancias antioxidantes que todavı́a conserva el producto son muy reactivas. Efecto de distintos tiempos de infusión de las hojas deshidratadas Los resultados obtenidos de las propiedades antiox- idantes a los diferentes tiempos de infusión (2, 5, 8, 10 y 12 min) se presentan en la Figura 2. En el caso de la intensidad de color (Figura 2(a)) se observó que a medida que pasa el tiempo de infusión el color púrpura se aprecia más intenso; sin embargo después de los 10 min ya no ocurre un cambio significativo en el color. Con respecto a la actividad antioxidante, medida por el potencial de oxidorreducción (Figura 2(b)), se presentó un aumento pronunciado a tiempos cortos de infusión, que paulatinamente diminuyó hasta alcanzar el equilibrio a los 10 min donde un gran porcentaje del principio activo fue liberado. A partir de este tiempo el contenido de fenoles totales (Figura 2(c)) se incrementó de forma lineal hasta los 10 min de infusión, donde una gran mayorı́a de los compuestos fenólicos se habı́an extraı́do, por lo que a los 12 min la concentración permaneció constante. La actividad antioxidante por rompimiento de cadena presentó un comportamiento similar al contenido de fenoles totales (Figura 2(d)). De acuerdo a los resultados de la extracción de los compuestos activos presentes en el té de maguey morado a diferentes tiempos de infusión, se observó que después de 10 min se liberaron la mayorı́a de estos compuestos con actividad antioxidante. Klodka et al. (2008) reportaron valores de un tiempo de infusión de 5 min para aprovechar al máximo las propiedades del té; sin embargo para el maguey morado se requiere mayor tiempo ya que 5 min son insuficientes para liberar los compuestos activos. 214 A. Reyes-Munguı́a et al. Todos los extractos (fresco, pasteurizado, secado- rehidratado) estudiados mostraron una diferencia no significativa en pH, variando éste entre 5,3 y 5,4. Como el pH permaneció sin cambios significativos la activi- dad antioxidante de las muestras no fue afectada por los cambios iónicos. Conclusiones Las mejores propiedades antioxidantes de maguey morado se lograron cuando las hojas se deshidrataron a 55 8C. Los extractos frescos pasteurizados y embo- tellados presentaron un aumento significativo de polifenoles totales y del potencial redox durante 24 dı́as de almacenamiento, siendo sus valores significa- tivamente mayores superiores a los del producto fresco. La actividad antioxidante y la intensidad de color se incrementaron hasta los 30 dı́as, lo que confirma que, posiblemente después de los 24 dı́as, comienzan a formarse compuestos macromoleculares de color café marrón que presentan una fuerte actividad antioxidante. Las propiedades antioxidantes ocurrieron después del tratamiento térmico y almace- namiento. La medición del potencial redox permite cuantificar en forma rápida el contenido de fenoles totales y además es unbuen indicador de la actividad antioxidante total presente en los alimentos. El producto deshidratado no muestra variaciones significativas en sus propiedades antioxidantes, por lo menos hasta 12 meses de almacenamiento, y constituye una buena opción para el desarrollo de productos comerciales. Agradecimientos Los autores desean agradecer el financiamiento parcial de este proyecto al Consejo Nacional de Ciencia y Tecno- logı́a (CONACyT) a través del convenio U-81157-Z. Referencias AOAC. (1995). Official methods of analysis (16th ed.). Arlington, VA: Association of Official Analytical Chemists. Bastos, M.D.H., Ishimoto, E.Y., Ortiz, M.M.M., Fernando, F.A., & Torres, A.F.S.E. (2006). Essential oil and antioxidant activity of green mate and mate tea (Ilex paraguariensis) infusions. Journal of Food Composition and Analysis, 19, 538–543. Beristain, C.I., Cruz-Sosa, F., Lobato-Calleros, C., Pedroza- Islas, R., Rodriguez-Huezo, M.E., & Verde-Calvo, J.R. (2006). Applications of soluble dietary fibers in bev- erages. Revista Mexicana de Ingenierı́a Quı́mica, 5, 81–95. 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