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Av. Hidalgo 935, Colonia Centro, C.P. 44100, Guadalajara, Jalisco, México bibliotecadigital@redudg.udg.mx - Tel. 31 34 22 77 ext. 11959 UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA COORDINACIÓN GENERAL ACADÉMICA Coordinación de Bibliotecas Biblioteca Digital La presente tesis es publicada a texto completo en virtud de que el autor ha dado su autorización por escrito para la incorporación del documento a la Biblioteca Digital y al Repositorio Institucional de la Universidad de Guadalajara, esto sin sufrir menoscabo sobre sus derechos como autor de la obra y los usos que posteriormente quiera darle a la misma. UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AGROPECUARIAS DIVISIÓN DE CIENCIAS AGRONÓNICAS EVALUACIÓN DE LA EFECTIVIDAD BIOLÓGICA DEL FUNGICIDA FUNGIFREE-AB, EN FRESA (Fragaria spp.) Y FRAMBUESA (Rubus idaeus) TRABAJO DE TITULACIÓN EN LA MODALIDAD DE TESIS E INFORMES OPCIÓN TESIS Que para obtener el título de Ingeniero Agrónomo Presenta: LUIS ALBERTO APOLINAR RAMOS Las Agujas Zapopan, Jalisco, diciembre 2014 AGRADECIMIENTOS A la Universidad de Guadalajara, en especial al Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CUCBA), quien me dio la oportunidad de alcanzar el sueño de obtener un grado de Ingeniero Agrónomo. Mi agradecimiento al Dr. Pedro Posos Ponce por fungir como asesor de este trabajo de tesis, así como por su invaluable apoyo y acertada dirección, también por brindar su enseñanza y amistad desde mi estancia como Universitario hasta la fecha. Al M.C. Benito Monroy Reyes por su amistad y enseñanza así como el apoyo como director de Tesis y consejero durante mi estancia en el Centro Universitario y para la realización de este trabajo de investigación. A mis sinodales los profesores: Mtro. Juan Bojórquez Martínez, Mtro. José Pablo Torres Morán y al Mtro. Gustavo Enciso Cabral; por su invaluable apoyo y acertadas observaciones en la corrección del documento. Mis compañeros durante la Universidad los cuales es difícil acordarse de todos pero tratare de hacerlo Omar Alejandro Posos, Francisco Beas, José Alfredo Estrada y Yesenia Pérez, si olvido a alguien no se ofenda, en verdad fueron parte importante en mi formación como profesional así como persona. Un agradecimiento muy en especial a la Familia Posos Parra y Conviviendo con la Naturaleza A.C. por su apoyo moral, enseñanza y motivación a lo largo de mi formación académica, ya que fueron parte importante en mi desarrollo profesional. DEDICATORIA. A mi madre la Sra. Silvina Ramos García por su confianza, enseñanza y su paciencia hacia conmigo quien le ha dado sentido a mi vida, así como su apoyo moral y la motivación para seguir adelante en el día a día, y Por su incansable lucha en la vida para darme lo que hoy tengo. “Mil Gracia”. A mis hermanos: Ma. Lourdes, Sergio, Jorge, Elías y Carlos. Por su compañía y cariño. CONTENIDO Pag Índice de cuadros ………………………………………….……………………….. iii Índice de figuras …………………………………………………..……………….. iv RESUMEN …………………………………….………………………………..…. v I. INTRODUCCIÓN ………………….…………………………………………… 1 1.1. Objetivo General ……………………………………………..………………... 5 1.2. Hipótesis …………………………………….……..………………………….. 5 II. REVISIÓN DE LITERATURA ………………...………………………………. 6 2.1. Cultivo de la fresa…………………………..………………………………….. 7 2.1.1. Descripción Botánica …………………….…..……………………………… 8 2.1.2. Requerimientos Climáticos y Edafológicos ………………...……………….. 9 2.1.3. Importancia del Cultivo …………………………..…………………………. 10 2.1.4. Enfermedades que afectan el Cultivo de Fresa ……………………..………. 10 2.1.4.1. Antracnosis …………………………..……………………………………. 10 2.1.4.2. Marchitez Seca ………………….…………...…………………………….. 11 2.1.4.3. Pudrición Correosa ………………….…...………………………………... 11 2.1.4.4. Pudrición de la Corona ……………….………...…………………………. 11 2.1.4.5. Pudrición de la Fruta ……………..…………..……………………………. 12 2.1.4.6. Cenicilla ……………………...…...……………………………………….. 12 2.2. Cultivo de la Frambuesa …………….………………………………………… 13 2.2.1.Descripción Botánica ………………….…….……………………………….. 13 2.2.2. Requerimientos Climáticos y Edafológicos …………………………………. 14 2.2.3. Importancia del Cultivo ……………………...……………………………… 14 2.2.4. Enfermedades que afectan el Cultivo de Frambuesa ….…………………….. 15 2.2.4.1. Antracnosis …………………...…………………………………………… 15 2.2.4.2. Marchitez Seca ……………….……………………………………………. 15 2.2.4.3. Pudrición de la Fruta ……………….……………………………………… 16 2.2.4.4. Pudrición de la Raíz ……………..……………………………………….... 16 2.2.4.5. Tizón de la Yema ……………….…………………………………………. 16 2.2.4.6. Cenicilla ………….…………………………………................................... 16 2.2.5. Enfermedad a Evaluar ……………………………………………………….. 17 2.2.5.1. Cenicilla ………………………...…………………………………………. 17 2.2.5.2. Clasificación Taxonómica ………………………………………………… 18 2.2.5.3. Morfología y Ciclo de Vida ……….........…………………………………. 18 2.2.5.4. Control …………….…………..……...…………………………………… 19 2.2.5.5. Manejo Agronómico …………………...………………………………….. 19 2.2.5.6. Control Químico …………………..………………………………………. 20 2.2.5.7. Control Biológico ………………….……………………………………… 20 2.2.5.8. Bacillus subtilis ……………………………………………………………. 20 2.2.5.9. Modo de Acción ……..……………..……………...……………………… 21 2.2.5.10. Ventajas ……………………….…………………………………………. 21 III. MATERIALES Y MÉTODOS ………….……………………………………... 23 3.1. Localización del Área de Estudio …….……………………………….………. 23 3.2. Cultivo, Variedad y Estado Fenológico ………………..………………….…... 23 3.3 Tratamientos a evaluar …………………….…….……………….……………. 23 3.4. Aplicaciones ………………………….……………………………………….. 24 3.5. Distribución de los Tratamientos en Campo ……………...…………………... 24 3.6. Diseños Experimentales ………………..……..……………………………….. 24 3.7. Variables Evaluadas ……………………...…….……………………………… 25 3.8. Frecuencia de Muestreo ……………………….…….………………………… 25 3.9. Análisis Estadísticos …………………….……….……………………………. 26 3.9.1. Porcentaje de Control ………………...…………….……………………….. 26 3.9.2. Severidad ………………..………….………………….................................. 27 IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN …………….…………….…………………... 28 V. CONCLUSIONES ……………………………………………………………… 35 VI. LITERATURA CITADA ……………………………………………………… 36 iii ÍNDICE DE CUADROS Pag Cuadro No. 1. Clasificación Taxonómica de la Cenicilla …………...…………… 18 Cuadro No. 2. Características del Producto Evaluado ………............…………… 22 Cuadro No. 3. Tratamientos a Evaluar en Campo, para el Control de Cenicilla en Fresa y Frambuesa ………………………………………...………………...……. 23 Cuadro No. 4. Distribución de los Tratamientos en Campo para Fresa y Frambuesa ………………………………………….……..……………………… 24 Cuadro No. 5. Escala de Evaluación de la Fitotoxicidad propuesta por la EWRS …………..………………………………………………………………… 26 Cuadro No. 6. Escala Visual de Mendoza y Ponce (1988), citada por Mendoza (1994) para Medir el Daño considerando las siguientes categorías y porcentajes de infección al follaje ………………………………………….…..……………... 27 Cuadro No. 7. Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa en Zamora, Michoacán, 2013. Evaluado en el follaje (Hojas) …..………………..……………………………………………………… 28 Cuadro No. 8. Severidad y Porciento de Control de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa en Zamora, Michoacán, 2013. Evaluado en el follaje (Hojas) ……………………………………………………………………………. 30 Cuadro No. 9. Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa, en Jocotepec, Jalisco, 2013. Evaluado en el follaje (hojas) ……………………………………….……………………………………. 31 Cuadro No. 10. Severidad y Porciento de Control de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa en Jocotepec, Jalisco, 2013. Evaluado en el follaje (Hojas) ……………..……………………………………………………………... 33 iv INDICE DE FIGURAS Pag Figura No. 1. Representación de la Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa en cada tratamiento durante eltiempo establecido ….……... 28 Figura No. 2. Porcentaje de Control registrado de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa durante el tiempo establecido …………………………....… 30 Figura No. 3. Representación de la Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa en cada tratamiento durante el tiempo establecido …...….. 31 Figura No. 4. Porcentaje de Control Registrado de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa durante el tiempo establecido ………..………………….... 33 v RESUMEN Entre los principales problemas que afectan a los cultivos de fresa (Fragaria spp.), y frambuesa (Rubus idaeus). Se encuentran las enfermedades producidas por hongos fitopatógenos. El efecto que ocasionan puede ser la pérdida parcial o total del cultivo o merma en la producción, debido al efecto de las enfermedades fungosas. El objetivo de la presente investigación es proponer diferentes alternativas para el control de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), y (Sphaerotheca humuli), y con esto disminuir el uso excesivo de agroquímicos, evitando daños graves y la residualidad en el ambiente. Se evaluó la efectividad biológica del fungicida biológico a base de una cepa de Bacillus subtilis (Fungi Free-AB), el cual se comparó con un testigo absoluto, en los cultivos de fresa y frambuesa. El presente estudio se realizó en dos localidades diferentes. La primer localidad fue un lote comercial en el Ejido denominado La Presa, Municipio de Zamora, Michoacán y la segunda localidad fue el Rancho denominado Los Ocotes de la empresa Berry-Driscol, en Jocotepec, Jalisco. La evaluación fue visual, muestreando un número determinado de hojas al azar midiendo daño de infección causado por Cenicilla (Sphaerotheca macularis y Sphaerotheca humuli). Los resultados obtenidos de los estudios, nos permiten afirmar que Bacillus subtilis en dosis de 2.0 y 2.5 kilos de P.C./ha. puede formar parte de un manejo integrado para el control de Cenicilla, ya que en los diversos muestreos realizados los porcentajes de control se mostraron superiores al testigo regional a base Bacillus subtilis, el cual se vio reflejado en la prueba de comparación de medias. 1 I. INTRODUCCIÓN Después de la Segunda Guerra Mundial (1940), el combate de plagas se caracterizó por el descubrimiento y posteriormente el desarrollo de insecticidas de síntesis química y los problemas ocasionados por el uso de estos insecticidas fueron inminentes (Molina, 2000; O´Farril, 2012), ya que su intenso uso tuvo complicaciones, como la inducción de resistencia en plagas, la alteración del equilibrio dinámico de los ecosistemas terrestres y acuáticos, acumulación de residuos tóxicos, eliminación de enemigos naturales (Tamez et al., 2001), hasta la muerte de seres humanos y animales domésticos por intoxicación causada por la exposición directa a dichos plaguicidas o por el consumo de alimentos con residuos, también la contaminación de prácticamente todos los componentes de la biósfera y el surgimiento de nuevas plagas (Nicholls, 2008; Fernández et al., 2002). En la agricultura moderna, se ha soslayado la sostenibilidad de la productividad agrícola. El uso de agroquímicos ha permitido obtener incrementos sustanciales en la producción, no obstante, sus efectos adversos están impactando de manera significativa la sostenibilidad de la agricultura (Zavaleta, 2000; INTA, 2013). La práctica del monocultivo y la contaminación por el uso indiscriminado de agroquímicos han reducido la biodiversidad de los agroecosistemas, causando la inestabilidad de los mismos (FAO, 2013), la cual se manifiesta, entre otros efectos nocivos, en una mayor incidencia de plagas y enfermedades en los cultivos. Esto y los problemas de seguridad y salud pública inherentes a la fabricación y uso de agroquímicos han conducido a la búsqueda y establecimiento de nuevas alternativas para el manejo de plagas y enfermedades (Zavaleta, 2000). 2 Aunado a esto, cada vez más aumentan las regulaciones y las restricciones en el uso de un gran número de plaguicidas por el efecto negativo que producen al ambiente y al hombre (Fernández et al., 2002). En los últimos años en la búsqueda de un equilibrio entre el ambiente, la producción y el hombre, se investigan nuevas alternativas sustentables e inocuas para el control de enfermedades que conduzca preferentemente a reducir los costos que representa el uso de agroquímicos, y se ha desarrollado un nuevo concepto de protección de cultivos, mediante productos de acción específica sobre un objetivo, un impacto nulo o bajo en los organismos circundantes y el ambiente, y un impacto bajo o nulo en el cultivo (Brechelt, 2004; Murillo et al., 2011). La tendencia actual va dirigida hacia sistemas integrados y ecológicos que utilicen métodos de control de enfermedades que sean respetuosos con el medio ambiente (Fernández, 2002). Existen diferentes alternativas a los métodos químicos, dentro de las opciones viables se pueden tomar como alternativa para el control de enfermedades de los cultivos agrícolas el uso de los microorganismos benéficos como es el caso de Bacillus subtilis (Villa et al., 2007). Entre los principales problemas que afectan a los cultivos se encuentran las enfermedades producidas por hongos fitopatógenos. El efecto que ocasionan puede ser la pérdida parcial o total del cultivo o merma en la producción, debido al efecto de las enfermedades fungosas, así como por el debilitamiento de la planta, lo cual provoca: ya sea daño de los tejidos, clorosis o bloquea el libre flujo de nutrientes de la planta (Posos, 2006). Las enfermedades de las plantas, constituyen desde hace muchos años una preocupación para el hombre en su búsqueda por adquirir mayores rendimientos por área, y hoy la situación actual se torna más difícil ya que por una parte, la población aumenta, los rendimientos mundiales no siguen a ese ritmo de crecimiento (FAO, 2013), y cada día se hace más nocivo al ecosistema la utilización de productos químicos, por lo que cobra gran interés, el uso de controles biológicos dentro del programa de lucha integrada con vistas a contrarrestar en todo lo posible, la influencia negativa de las enfermedades. 3 Por lo expuesto anteriormente, se requieren métodos alternativos de control donde los productos entomopatógenos u orgánicos son una opción sustentable e inocua. Entre éstos, se incluye el uso de barreras físicas y vivas, insecticidas vegetales, jabones agrícolas, aceites vegetales, hongos entomopatógenos, enemigos naturales y en algunos casos insecticidas sintéticos de acción selectiva que deben ser inocuos para el ser humano (Debach, 1977; Regnault et al., 2004, Fernández et al., 2002). En la búsqueda de alternativas más efectivas, la atención se ha dirigido a las propiedades controladoras observadas en Bacillus subtilis (Albornoz et al., 2011). Las propiedades antagónicas del género Bacillus han sido utilizadas para el control de enfermedades, disminuyendo los riesgos de contaminación del medio ambiente ocasionado por el uso indiscriminado de productos químicos. El Bacillus subtilis está considerada entre las bacterias esporuladas más importante en lo que se refiere a la producción de sustancias antibióticas dada su difusión en la naturaleza. Muestra la capacidad de inhibición del crecimiento micelial a más de 20 especies de hongos de importancia económica (Castellanos et al., 2008). El potencial de Bacillus subtilis para sintetizar metabolitos con actividad antifúngica y antibacteriana se ha utilizado en el control biológico de fitopatógenos (Ragazzo et al., 2011). La bacteria Bacillus subtilis puede servir como una alternativa más para el manejo integrado de enfermedades en frutas y vegetales de manera orgánica, así como en loscultivos del campo, sin tener efectos adversos con la fauna y recursos naturales. La búsqueda de nuevos agentes de biocontrol con actividad frente a patógenos de frutos y con características aptas para su aplicación en pre y postcosecha, es una práctica vigente (Ragazzo et al., 2011), por lo que el presente estudio se basó en la realización de pruebas de efectividad biológica de un fungicida que contiene la cepa de Bacillus subtilis a diferentes dosis, para determinar la que presentó los mejores resultados conforme a el mejor control de la enfermedad; se comparó la efectividad sobre el 4 control del patógeno, con el fungicida comercial Serenade Max que contiene la misma cepa. México es uno de los grandes productores de Fresa (Fragaria spp.), (Orellan, 2010), y día con día aumenta el área cubierta por Frambuesa (Rubus ideaus), ambos cultivos constituyen inversiones considerables en capital (Muñoz et al., 1995). La Fresa y la Frambuesa tienen importancia mundial por las siguientes razones: 1. Su variedad de uso para el consumo fresco. 2. Su variedad de uso como ingrediente principal en jugos. 3. Su sabor universalmente apreciado. 4. Su valor nutritivo, porque contiene una diversidad de vitaminas. 5. Su alto valor comercial por la demanda en países desarrollados. (Conafresa, 2014; CIREN, 1991). Esta situación justifica el desarrollo de opciones innovadoras para resolver los problemas que limitan su producción, en este caso, los daños que causa el hongo Sphaerotheca sp., sobre los cultivos de Fresa y Frambuesa (Sagarpa, 2009; Muñoz, 2011). Con esta investigación se propone el uso de bacterias como lo es Bacillus subtilis, para evitar en lo menos la utilización de agroquímicos debido a los problemas de contaminación al medio ambiente, la resistencia de las poblaciones de insectos plaga y el efecto nocivo sobre los organismos (Tamez et al., 2001; Fernández et al., 2002; O´Farril, 2012). Los productos derivados de los microorganismos son fácilmente biodegradables y su impacto en el medio ambiente es muy pequeño o nulo (Regnault et al., 2004). 5 1.1. OBJETIVO GENERAL a) Evaluar el fungicida Fungifree-AB (Bacillus subtilis) para el control de cenicilla (Sphaerotheca spp.) en el cultivo de Fresa y Frambuesa. b) Establecer la dosis de campo para el control de cenicilla con el fungicida Fungifree-AB. c) Determinar las diferencias del control de cenicilla mediante la aplicación de Fungifree-AB, en comparación con un testigo regional y un testigo sin aplicar. 1.2. HIPÓTESIS El uso del fungicida Fungifree-AB (Bacillus subtilis) controla la cenicilla (Sphaerotheca spp.) en el cultivo Fresa y Frambuesa. 6 II. REVISIÓN DE LITERATURA Existe un importante grupo de frutales cuyo desarrollo podría ampliar en forma por demás interesante el mapa frutícola de México si se les aprovecha. A este grupo de frutales cuya producción es aún muy incipiente, pero potencialmente importante es al que se denomina globalmente como “frutales menores”. Entre ellas encontramos la Fresa y la Frambuesa. Comercialmente la Fresa y la Frambuesa, conjuntamente con el Arándano, la Zarzamora y otros, pertenecen al grupo de los llamados “Berries”, especies poco producidas en México, pero de gran popularidad en Norteamérica y Europa, donde su cultivo constituye inversiones considerables de capital (Muñoz et al., 1995). El cultivo de la Fresa en México se inició a mediados del siglo pasado en el estado de Guanajuato. Sin embargo fue hasta 1950 que cobró mayor importancia por la creciente demanda de los EE.UU. originando que el cultivo de esta fruta se extendiera hasta Michoacán, pasando de cubrir la necesidades del mercado doméstico hasta ser el mayor productor a nivel nacional (Ávila et al., 2012); ya que genera 52.38% de la producción en México (Ramírez, 2010). Las primeras introducciones de cultivares mejorados de Frambuesa se hicieron en 1974 en el área de Chapingo, Estado de México. De ahí se extendió a otros Estados como Puebla, Hidalgo, Michoacán, Jalisco y Guanajuato (Parra et al., 2007), siendo Jalisco el mayor productor de Frambuesa a nivel nacional, aportando 53.9% del total; donde destaca el municipio de Jocotepec como mayor productor del Estado (SIAP, 2011). 7 Desde el comienzo de la agricultura, las generaciones de agricultores han evolucionado prácticas para combatir las diversas plagas sufridas por sus cultivos. Después de nuestro descubrimiento de las causas de las enfermedades de las plantas en los principios del siglo diecinueve, nuestra comprensión creciente de las interacciones del patógeno y hospedero nos ha permitido desarrollar un amplio conjunto de medidas para el control de enfermedades específicas (APS.net, 2013). Las Cenicillas son enfermedades causadas por hongos que infectan hojas, tallos, flores y frutos en casi 10,000 especies de angiospermas. Su control tiene costos altos debido al uso de fungicidas y a la búsqueda de genotipos resistentes (Guzmán et al., 2011). Se sabe que Sphaerotheca humuli ha sido importante en Inglaterra por lo menos desde 1700, causando daños importantes por toda Europa Occidental y Rusia a finales de 1800. En 1912 causó pérdidas importantes en el Estado de Nueva York (USA), (Smith et al., 1991). En Ohio algunas enfermedades de la Cenicilla Polvorienta han causado serias pérdidas en las plantas cultivadas como: trigo, cebada, cucurbitáceas y cultivos de rosas (Wayne, 1966). La Cenicilla (Sphaerotheca macularis), fue reportada en estado conidial en 1962 en Florida en plantas de Fragaria chiloensis que fueron importadas de Bélgica. Desde 1967, la enfermedad ha ocurrido esporádicamente en Florida (Howard et al., 1982). Las bacterias del género Bacillus fueron unas de las primeras en ser descritas. Bacillus subtilis una bacteria gram positiva originalmente llamada Vibrio subtilis en 1835 por Christian Gottfried Ehrenberg, la cual se renombró como Bacillus subtilis en 1872 por Ferdinand Cohn (Márquez, 2007). 2.1. Cultivo de la Fresa La Fresa, cuyo nombre, procede del latín “fragans”, fragante, es una rosácea del género Fragaria Linneo, cuyas especies se encuentran difundidas por todas las zonas templadas y subtropicales (Branzanti, 1989). La familia Rosaceae cuenta con numerosas 8 especies distribuidas en las zonas templadas de América, Europa y Asia y su fruto es muy apreciado por su sabor, aroma y propiedades nutritivas (SAGARPA, 2004). La familia de las rosáceas agrupa unas 3,000 especies de 107 géneros diferentes, es una de las familias de mayor importancia económica en el mundo, ya que, además de la Fresa, incluye otras especies frutales pertenecientes a diversos géneros como Prunus malus (con más de 2000 variedades registradas), Pirus o Rubus, así como especies de uso ornamental como las pertenecientes al género Rosa (con más de 5000 cultivares registrados), Potentilla o Sorbus (Bonet, 2010). 2.1.1. Descripción Botánica Es una planta herbácea, perenne y posee un rizoma cilíndrico de tallos rastreros que al cabo de cierto estado de desarrollo emite ramificaciones de gran longitud (Kessel, 2012). El sistema radicular es fasciculado, se compone de raíces y raicillas. Las raíces presentan cambium vascular y suberoso. En condiciones óptimas pueden alcanzar de 2.0 m a 3.0 m, aunque lo normal es que no sobrepasen los 40 cm, encontrándose la mayor parte (90%), en los primeros 25 cm. Las raicillas carecen de cambium y tienen un periodo de vida corto, de algunos días o semanas (Mendieta, 2011). Gracias a sus tallos estoloníferos con expansión radiada, en cada entrenudo emite raíces adventicias. Las hojas compuestas trifoliadas con forma oval y acorazada dentada y puntiaguda, planas o ligeramente onduladasen sus bordes de un verde claro mate por el haz y más pálido y ligeramente velloso por el envés (Vázquez et al., 1992). El primer nudo es latente por lo general, pero puede dar origen a otro estolón generalmente más pequeño que el primero. Las inflorescencias se pueden desarrollar a partir de una yema terminal de la corona, o de yemas axilares de las hojas. La ramificación de la inflorescencia puede ser basal o distal. En el primer caso aparecen varias flores de porte similar, mientras que en el segundo hay una flor terminal o primaria y otras secundarias de menor tamaño. La flor tiene 5-6 pétalos, de 20 a 35 estambres y varios cientos de pistilos sobre un receptáculo carnoso (Lozada, 2011). 9 Se reproduce sexualmente mediante la formación de inflorescencias. Generalmente hermafroditas, pequeñas, en cima discal o monodiscal, de pétalos blancos y receptáculo amarillo. Los receptáculos terminan desarrollando poliaquenios o “eterios” que contienen los verdaderos frutos (aquenios), en su superficie (Bonet, 2010). Los eterios, denominados fresas, son ovoides o subglobosos, jugosos, dulces y muy aromáticos, con aquenios de 0.6 – 1.5 mm, glabros, no hundidos en alvéolos del pseudocarpo. El fruto de fresa pertenece a la categoría de los no climatéricos, por lo que no completará su madurez comercial una vez recolectada. La forma y tamaño de los frutos es una característica varietal, aunque los factores ambientales afectan en gran medida a este carácter (Muños et al., 2001). 2.1.2. Requerimientos climáticos y edafológicos La Fresa es altamente sensible a factores ambientales tales como la temperatura, fotoperiodo, estación del año, humedad del suelo, salinidad, etc. diferencias en estos factores pueden variar el comportamiento de la planta, y así mismo cada variedad responde diferente a dichos factores por su composición genética (Mendieta, 2011). La temperatura y el fotoperiodo son factores ambientales que influencian la floración e interactúan en la regulación de los diferentes procesos fenológicos de la planta (Taylor, 2002). Días largos y cálidos favorecen el crecimiento de la hoja y la formación de la guía. Días cortos, despejados y fríos, favorecen la floración (Tradecorp, 2014). La parte vegetativa de la fresa es altamente resistente a heladas llegando a soportar temperaturas de hasta -20º C, aunque los órganos florales quedan destruidos con valores a 0º C. Teniéndose como rango de temperatura óptima para el cultivo de la fresa de 16º a 28º C (Maroto et al., 1988). Temperaturas mayores a 28º C pueden estresar las plantas y reducir la floración, o causar flacidez y bajar la calidad de los frutos. La temperatura y la humedad relativa afectan la viabilidad y la germinación de los granos de polen (Hancock, 1999). Según (Leech et al., 2002), hubo una gran reducción en el porcentaje de germinación de polen en cultivares de Fresa cuando estuvieron expuestas a 30º C y a humedad relativa de 75-85 %. 10 La mayor parte de los cultivares de Fresa tienen como pH óptimo entre 5.5 y 5.6, aunque hay algunas que toleran suelos calcáreos. (Bianchi, 1999), menciona que la Fresa es muy exigente en cuanto a las características físicas del suelo, ya que requiere suelos con buena estructura y profundos, debido a la escaza fuerza de penetración de sus raíces. 2.1.3. Importancia del cultivo México se encuentra dentro de los grandes productores mundiales de Fresa junto con EE.UU., España y Polonia, y los principales compradores son el mismo EE.UU., Canadá, China y Japón (Orellan, 2010). Es uno de los frutos altamente apreciados en el mundo por su sabor y por su riqueza en vitaminas y minerales; es rica en hierro y potasio y es un excelente alimento para las personas que sufren de anemia, ya que tiene propiedades diuréticas y antirreumáticas; ayuda contra el ácido úrico, gota y artritis; resulta ideal para disminuir el nivel de colesterol en la sangre, es antinflamatoria y astringente (contra la diarrea). Las hojas jóvenes se emplean para erradicar llagas de la boca; también se utilizan para cocidos en ensaladas o se utilizan en infusiones. Posee bajos niveles de azúcar, es antioxidante, estimula el crecimiento celular y regenera los huesos, cabello y piel, además de reforzar el sistema inmune (vitamina C), y favorece la eliminación de líquidos. A demás, tiene una amplia posibilidad de utilización industrial en la obtención de diferentes productos como mermeladas, purés, concentrados, helados, etc. (Santoyo et al., 2009). 2.1.4. Enfermedades que afectan el cultivo de fresa 2.1.4.1. Antracnosis (Colletotrichum acutatum) Es una enfermedad que causa múltiples problemas en los cultivos de Fresa, empezando porque el inóculo original puede estar presente en la planta madre proveniente de los viveros. Al presentarse las primeras lluvias y con temperaturas 11 cálidas mayores a 25°C, pequeñas manchas hundidas color café oscuro, aparecen en los estolones y pecíolos, posteriormente se torna de color negro llegando a estrangular los tejidos si no son aplicados fungicidas (Vázquez et al., 2008). 2.1.4.2. Marchitez Seca (Verticillium dahliae) Los síntomas iniciales constan de ahincamiento de la planta, desarrollo demorado y el amurallamiento de las hojas. Tal como progrese la enfermedad las hojas más maduras se marchitan y se tornan a un tono marrón (Bolda, 2005). 2.1.4.3. Pudrición Correosa (Phytophthora cactorum) La pudrición correosa es muy común, ya que todas las etapas de la fruta son susceptibles a la enfermedad. Las frutas infectadas manifiestan áreas enfermas que pueden variar de color café a matices de morado, lo que resulta en una fruta correosa de color café. La parte infectada externa se pone dura mientras que el tejido interno está un poco más blando. El corazón hueco de la fruta puede contener el micelio blanco del patógeno, y la fruta sabe amarga (Koike, 2005). 2.1.4.4. Pudrición de la Corona (Phytophthora spp.) Esta enfermedad es conocida también como Colapso Vascular, por la forma de dañar a la planta, debido a que durante las horas frescas del día la planta está turgente y cuando es medio día parece faltarle agua, es decir, se torna por completo marchita, para volver a la normalidad por la tarde y noche, hasta que el tejido sufre daños severos y muere. Las hojas se marchitan repentinamente y a menudo, adquieren una coloración verde azulada. Al realizar un corte longitudinal a la corona, se observa una típica zona necrosada de color pardo cobrizo, que puede estar localizada en cualquiera de sus partes. La infección causada en la planta madre puede transmitirse por medio del estolón a las plantas hijas. (Vázquez et al., 2008; Hernández, 2006). 12 2.1.4.5. Pudrición de la Fruta (Botrytis cinérea) Es una de las enfermedades más importantes que daña al fruto, pero también perjudica a las hojas y pecíolos, yemas, pétalos y pedúnculos florales (Muñoz, 2011). El daño suele ser a los frutos, tanto verdes como maduros e incluso una vez cosechados. La enfermedad aparece como una mancha marrón claro o amarillenta hacia el final del cáliz y a los pocos días cubre de un moho gris, de apariencia polvosa, toda la superficie de la fruta (Chaves, 2004). La infección suele tornarse muy agresiva por su viabilidad dentro de un intervalo amplio de temperaturas, aunque el óptimo se encuentra entre los 15 y 20°C, y ser la humedad el factor desencadenante. En cultivos al aire libre, es suficiente una temperatura ambiental por encima de los 12°C y lluvia o rocío que produzcan agua libre sobre las flores y frutos durante unas horas, para que germinen las esporas y se produzca la infección (Gómez, 2006). La sensibilidad de la flor a la infección varía de acuerdo a su estado de evolución y la variedad. Las flores desnudas son menos susceptibles, los estados defruta verde recién formada son las más sensibles de infectarse. La infección en el fruto se presenta en cualquier parte. Aunque es muy frecuente que ésta se produzca en la inserción del cáliz o en los puntos de contacto con otro fruto atacado o con el suelo en cultivos sin acolchado plástico. Los frutos afectados conservan su conformación y de manera posterior, el hongo produce usualmente un tejido gris aterciopelado muy característico sobre la superficie del fruto (Cassanello, 2008). 2.1.4.6. Cenicilla (Sphaerotheca macularis) Las hojas infectadas con el Mildiú Polvoriento al principio tienen colonias de pequeñas esporas polvorientas de color blanco en el envés de las hojas. Las colonias se agrandan hasta cubrir la superficie entera de la parte inferior de la hoja, causando que los bordes de la hoja se enrollen. Manchas de color morado rojizo aparecen en las superficies superiores e inferiores de las hojas. Las flores infectadas producen fruta deformada o carecen de fruta. Las flores infectadas severamente pueden quedar 13 cubiertas completamente por el micelio y morir. La fruta inmadura infectada se pone dura y desecada. La fruta madura infectada aparenta tener muchas semillas y sustenta colonias que producen esporas de apariencia polvorienta y blanca, (Koike, 2005). 2.2. Cultivo de la Frambuesa La Frambuesa pertenece a la familia de las Rosáceas, género Rubus L.es uno de los más grandes con amplia distribución geográfica dentro de la familia Rosaceae, es un género de gran diversidad con alrededor de 250 especies y unas 3,000 formas apomícticas (Morales et al., 2009). Es un arbusto que forma parte del grupo de las Berries o frutales menores (Jones et al., 2007). Su origen es de regiones templadas del Norte de Asia y de Europa Oriental. Los primeros registros de la especie fueron en Monte Ida en Grecia, de ahí el nombre de Idaeus que significa “Del Monte Ida”, (Morales, 2009). 2.2.1. Descripción Botánica La Frambuesa es un arbusto perenne (CIREN, 1991), que posee un sistema radicular que se extiende a poca profundidad, es fasciculado, de desarrollo horizontal con abundantes ramificaciones y posee tanto raíces primarias como secundarias leñosas (Jones, 2006). Tallos erectos provistos de pequeñas espinas, más o menos fuertes y abundantes según variedades. Se desarrollan el primer año y al segundo florecen y fructifican, muriendo al verano después de la maduración de los frutos (Carrera, 1974). Las hojas son sencillas, alternas compuestas y estipuladas, formadas por 5 ó 7 foliolos ovalados y doblemente aserradas, de color verde ténue en la cara inferior e intenso en la superior. Presentan vellosidad de textura algodonosa (Jones et al., 2007). Las flores son pequeñas, tienen una corola compuesta de cinco pétalos blancos y poseen numerosos estambres y pistilos; de la flor fecundada por el polen se forma el fruto, llamado Frambuesa que corresponde a una polidrupa (Morales, 2009). 14 2.2.2. Requerimientos climáticos y edafológicos La Frambuesa roja es una especie nativa de clima templado, que requiere de 700 a 1,700 horas frío (abajo de 7.2º C), dependiendo de la variedad. Cuando no se cumple con los requerimientos de frío, se observa una baja brotación de yemas en primavera y disminuye la producción. La Frambuesa tolera bien las bajas temperaturas del invierno, ya que la planta al registrar días cortos y frescos, disminuye el crecimiento y se prepara para la entrada del invierno (Parra, 2002; CIREN, 1991). Según (T. Handley, 2006), el cultivo de Frambuesa prefiere suelos con pH de 5.6 a 6.2, bien drenados y con buena aireación. 2.2.3. Importancia del cultivo Este cultivo, por su rapidez para entrar en producción (un año las productoras de otoño y dos las de verano), permite al fruticultor evaluar su potencial económico y decidir sobre su explotación, sin incurrir en una gran inversión inicial (CIREN, 1991). En México, la Frambuesa está aumentando el área cubierta, encontrándose en el Estado de México, Michoacán, Jalisco, Guanajuato, Puebla, Tlaxcala. Algunas de las ventajas que presenta el cultivo de la Frambuesa en México son: mercados compradores de la fruta, excelente respuesta de algunas variedades productoras de otoño en diferentes regiones de climas templados y subtropicales que permiten obtener cosechas en forma escalonada, impidiendo los indeseados picos de producción en una sola temporada, pudiendo ofrecer fruta los 12 meses del año; la rápida entrada a producción (4-6 meses), que estimula a los productores generar empleo permanente, entre otras (Orellan, 2010). Al mercado interno, la Frambuesa agrega un fruto sabroso y nutritivo que además se ha señalado que su consumo puede inhibir el cáncer. . http://www.monografias.com/trabajos12/cntbtres/cntbtres.shtml http://www.monografias.com/trabajos12/elorigest/elorigest.shtml http://www.monografias.com/trabajos12/elorigest/elorigest.shtml 15 Su mercado es principalmente para uso fresco. Tiene gran demanda en países desarrollados, lo que hace de la frambuesa un producto con grandes potenciales de exportación. Su uso industrial es principalmente en mermeladas, vinos, etc. (CIREN, 1991). 2.2.4. Enfermedades que afectan el cultivo de Frambuesa 2.2.4.1. Antracnosis (Elsinoe veneta) El daño se observa cuando se producen pequeñas manchas esféricas, hendidas, en la base de la caña, en un inicio rojiza y luego grisácea rodeadas de un halo rojizo. En ocasiones, provoca desecación de la caña. Se disemina por riego superficial y por salpicado de la lluvia; sobrevive en restos de podas de cañas infectadas. Es preciso mantener una buena ventilación, evitar sobrepoblaciones de plantas y evitar aplicaciones excesivas de nitrógeno, también se debe de eliminar los restos de poda del huerto, aplicar fungicidas repitiendo a los veinte días (Torres, 2006). 2.2.4.2. Marchitez Seca (Verticillium dahliae) El hongo puede vivir en el suelo saprofíticamente por varios años, pero puede atacar las raíces de plantas susceptibles cada vez que se ponen en un suelo infestado. El hongo crece en el xilema donde coloniza la planta a través del crecimiento del micelio y la producción de conidios. Una vez en el xilema, el hongo bloquea parcialmente el movimiento del agua y produce toxinas que provocan síntomas de marchitez (Plant Disease, 2014). El hongo al infectar la planta causa una condición llamada “tallo azul” que resulta en un crecimiento atrofiado, presenta síntomas de deficiencia de nutrientes, marchitado de bastones, y pobre producción en el segundo y tercer año y años posteriores (Elmhirst, 2007). 16 2.2.4.3. Pudrición de la Fruta (Botrytis cinérea) La pudrición de frutos causada por el hongo Botrytis cinérea se origina bajo condiciones de alta humedad y como parásito facultativo, infecta tejidos cuando las condiciones se lo permiten, a temperaturas entre 15°C y 23°C y la humedad relativa alta, los esclerocios germinan produciendo abundantes conidias. Nuevas infecciones ocurren por la penetración de los tubos germinativos de las conidias a través de heridas de la planta. Las flores son fácilmente infectadas debido a la humedad aprisionada entre sus estructuras y a la exudación de jugos azucarados en los estigmas (Cruz, 2001). 2.2.4.4. Pudrición de Raíz (Phytophthora cactorum, P. fragariae) Este patógeno se disemina a través de las esporas flageladas, llamadas zoosporas, que tienen la capacidad de nadar sobre la película de agua. La producción del inoculo se acelera en la medida que se sobrepasa la capacidad de campo del suelo, debido a exceso de riego o lluvia, mal drenaje, compactación del suelo. El inóculo puede provenir de plantas enfermas, el suelo, agua de riego contaminada, implementos agrícolas y calzados con tierra contaminada (Morales, 2009).2.2.4.5. Tizón de la Yema (Didymella applanata) Los síntomas son más evidentes a finales del invierno y el otoño, provocando lesiones necróticas o grisáceas en los tallos, especialmente en los nudos; en las hojas se extienden alrededor hasta al base, las áreas infectadas se vuelven de color gris plateado hasta que mueren (Menzies, 2002). 2.2.4.6. Cenicilla (Sphaerotheca humuli) Este hongo aparece con condiciones climáticas húmedas cubriendo la superficie de las hojas con un polvo blanco. Cuando la enfermedad es muy severa los bordes de las hojas se enrollan y aparecen manchas de color rojizo (Dodge et al., 1941). 17 2.2.5. Enfermedad a evaluar 2.2.5.1. Cenicilla (Sphaerotheca spp.) El Mildiú Polvoriento aparece en hojas, peciolos, yemas jóvenes y frutos (Heffer et al., 2006), como una masa blanca con aspecto de ceniza, compuesta de micelio denso e incontable número de esporas (González et al., 2010); forma colonias que se agrandan hasta cubrir la superficie entera de la parte inferior de la hoja, causando que los bordes de la hoja se enrollen, manchas de color rojizo aparecen en la superficie de las hojas. Las flores infectadas producen fruta deforme o carecen de fruta. Las flores infectadas severamente pueden quedar cubiertas completamente por micelio y morir. La fruta inmadura se pone dura y se deseca. La fruta madura e infectada aparenta tener muchas semillas y sustenta colonias que producen esporas de apariencia polvorienta (Cassanello, 2008; Gómez, 2006). Todos los hongos oídio requieren tejido vegetal vivo para crecer. En los hospederos caducifolios como la vid, frambuesas y los árboles frutales, el patógeno sobrevive de una estación a la siguiente en los tejidos infectados; en fresa el hongo puede sobrevivir en las hojas que quedan en las plantas durante el invierno (Koike, 2011). 18 2.2.5.2. Clasificación taxonómica Cuadro No. 1. Clasificación taxonómica de la Cenicilla (González et al., 2010; Mukerji, 1968). Clasificación Taxonómicas Reino: Fungi Filo: Ascomycota Clase: Pyrenomycetes Orden: Erysiphales Familia: Erysiphaceae Género: Sphaerotheca Especie: S. macularis, S. humuli 2.2.5.3. Morfología y Ciclo de Vida La Cenicilla aparece en hojas, peciolos y yemas jóvenes de las plantas, como una masa blanca con aspecto de ceniza, compuesta de micelio denso e incontable número de esporas. Bajo condiciones medioambientales favorables, la superficie de la hoja puede ser abarcada completamente, incluso llegar a cubrir ambas superficies y además provocar una defoliación prematura en las plantas. La infección puede alcanzar tejidos más profundos y llegar a tal grado que las hojas tomen una coloración amarilla y finalmente secarse (Delgado et al., 2005). Estos hongos son biotróficos. Las hifas presentan paredes finas, son flexuosas, en ocasiones rectas o geniculadas, de 3-4 µm de ancho. Forman apresorios de forma alterna. En su estado sexual, los cleistotecios se desarrollan en la superficie de las hojas del hospedante. Los poco frecuentes cleistotecios que forma miden entre 80 y 140 µm, con apéndices sin ramificaciones y contienen de 10 a 15 ascas (González et al., 2010). El estado asexual produce conidios hialinos, elípticos, de paredes delgadas y nacen en cadena a partir de conidióforos cortos, que no se ramifican y crecen en ángulo recto desde la superficie de la hoja (González et al., 2010; APS.net., 2013). 19 La Cenicilla es favorecida generalmente por condiciones secas de la atmósfera y caliente favorecen la diseminación del patógeno (Vázquez et al., 2008), ya que esto influye positivamente en la colonización, esporulación y dispersión del patógeno. La enfermedad es favorecida por una moderada o alta humedad relativa y una intensidad lumínica baja (Olsen, 2011). Las temperaturas moderadas son propicias para el desarrollo de la enfermedad, su desarrollo óptimo se mantiene entre los 21° y 29° C (Smith, 2001), otro elemento que influye positivamente en la infección es la alta densidad de plantas cultivadas y follaje frondoso crean condiciones de humedad, temperatura y de cercanía entre plantas. 2.2.5.4. Control 2.2.5.5. Manejo Agronómico Dentro de las medidas preventivas y de control se encuentran las prácticas culturales adecuadas como son: eliminar los restos de plantas al final de la cosecha para evitar la preservación del hongo en ausencia de cultivos y con ello disminuir la densidad de inóculo primario para cultivos posteriores, evitar altas densidades de siembra, excesos de fertilización nitrogenada y de agua, realizar dentro de lo posible una correcta rotación de cultivos y óptima densidad de siembra, así como evitar la colindancia de cultivos hospedantes de estos agentes patógenos (Apodaca et al., 2008). El uso de variedades resistentes mediante el mejoramiento genético, ha constituido un logro importante para el control de esta enfermedad desde hace décadas. En ocasiones la intensidad de la enfermedad y/o un diagnóstico tardío de la misma hace necesario que se tenga que recurrir a tratamientos químicos. Estos se aplican con una frecuencia entre 7 y 10 días en dependencia del tipo de producto. De manera general se recomienda el uso de fungicidas químicos sistémicos con ingredientes activos tales como: Triadimefon, Benomyl, Tiofanato de metilo, en combinación con productos de contacto como por ejemplo formulados a partir de Clorotalonilo (Orellan, 2010). 20 2.2.5.6. Control Químico Productos químicos para el control de Sphaerotheca spp. Ingredientes activos: Benomilo Bupirimato Captan Clorotalonil Dinocap Ditalinfos Fenarimol Maneb Mancozeb Oxicloruro de cobre Azufre Thiabendazol Tebuconazole Trifuconazol (Casanello, 2008; Cisternas et al., 2000; Vázquez et al., 2008; Orellan, 2010) 2.2.5.7. Control Biológico 2.2.5.8. Bacillus subtilis Bacillus subtilis es un bacilo gram positivo aerobio, autóctono del suelo, prospera en la naturaleza donde se encuentra ampliamente distribuido en muy diversos hábitats, los cuales ha colonizado eficientemente debido a sus cualidades, entre las cuales podemos mencionar las siguientes: el tener un programa genético que le permite formar esporas, crecer en un amplio rango de temperaturas, mostrar velocidades de crecimiento altas, producir enzimas extracelulares y una variedad de antibióticos, está potencializada para el control de patógenos resistentes a los fungicidas de uso común. (Montero, 2005; Obregón, 2000). Bacillus subtilis es conocido por ser antagonista de muchos hongos y patógenos vegetales entre ellas las que pertenecen a los géneros Rhyzoctonia, Pythium, Phytophthora, Fusarium, Rhizopus, Mucor, Oidium, Botrytis, Colletotrichum, Erwinia, Pseudomonas y Xanthomonas y muchos géneros más; además puede reducir la incidencia de nemátodos (Lisboa, 2003; Carreras, 2011). 21 Las esporas de Bacillus subtilis cubren la superficie de la hoja previniendo la penetración de las esporas del hongo e infección de la planta; generando metabolitos lipopéptidos que rompen las membranas celulares del patógeno, causando un colapso y muerte (Manker, 2006). Se puede reducir al mínimo la incidencia y severidad de la enfermedad plantando la frambuesa en un suelo con buen drenaje, plantando manualmente con trasplantes certificados. 2.2.5.9. Modo de acción 1. Producción de Sideróforos que son compuestos extracelulares de bajo peso molecular con una elevada afinidad por el ión hierro con lo que previene la germinación de las esporas de los hongos patógenos. 2. Compite por sustrato en la rizósfera y filósfera con los patógenos de las plantas. 3. Produce antibióticos del tipo Bacilysin e Iturin que son altamente fungo tóxicos. 4. Promotor de crecimiento.La bacteria al establecerse en el sistema radical lo protege y estimula la absorción de nutrientes. 5. Inducción a resistencia. Al instalarse en las raíces y hojas induce a la planta a producir fitoalexinas que le dan resistencia a las plantas al ataque de hongos, bacterias y nemátodos patógenos (Calvo et al., 2010; Freeman et al., 2002; Obregón, 2000). 2.2.5.10. Ventajas 1. No contamina el ambiente. 2. No es tóxico en humanos, animales y plantas. 3. Al establecerse en el campo constituye un reservorio benéfico de inóculo. 4. Puede usarse en la agricultura orgánica y convencional. 5. Puede aplicarse con insecticidas, fertilizantes foliares, bactericidas y algunos funguicidas sistémicos (Obregón, 2000). 22 Cuadro No. 2. Características del producto evaluado. Nombre comercial Fungifree-AB Nombre común Contenido Bacillus subtilis No menos de 1x109 UFC/ % de peso del i.a. 1% Equivalente 10 g i.a./kg Formulación Polvo Humectable 23 III MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. Localización del Área de Estudio Los presentes estudios quedaron establecidos el día 08 de febrero de 2013, en un lote comercial de Fresa propiedad del Agricultor Alejandro Melgoza en el Ejido denominado La Presa, Municipio de Zamora, Michoacán; y el día 09 de febrero de 2013, quedó establecido el estudio de Frambuesa en un cultivo comercial de Frambuesa, en el Rancho denominado Los Ocotes, de la Empresa BERRYMEX-DRISCOL, en la localidad de Jocotepec, Jalisco. 3.2. Cultivo, Variedad y Estado Fenológico Dichos estudios se realizaron en un cultivar con la variedad de Fresa San Andrés, y en un cultivar de Frambuesa de variedad Ambrosia, los dos se establecieron en etapa de floración/fructificación para consumo fresco. 3.3. Tratamientos a Evaluar Cuadro No. 3. Tratamientos a evaluar en campo, para el control de Cenicilla en Fresa y Frambuesa. Tratamiento Ingrediente Activo Dosis kg ha-1 1. Fungifree-AB Bacillus subtilis 1.5 kg 2. Fungifree-AB Bacillus subtilis 2.0 kg 3. Fungifree-AB Bacillus subtilis 2.5 kg 4. Serenade Max Bacillus subtilis QST 713 5 kg 5. Testigo sin aplicar N.A. N.A. 24 3.4. Aplicaciones En el cultivo de Fresa se realizaron tres aplicaciones de los fungicidas a intervalos de 6-7 días. El equipo utilizado para la aplicación fue un aspersor de CO2 con una boquilla de cono lleno, utilizando el Equipo de Protección Personal necesario. En el cultivo de Frambuesa se realizaron tres aplicaciones de los fungicidas a intervalos de 7 días. El equipo utilizado fue un aspersor de espalda motorizado marca Honda Modelo Stroke WJR 2525, utilizando el equipo de protección personal necesario. 3.5. Distribución de los Tratamientos en Campo Cuadro No. 4. Distribución de los tratamientos en campo para Fresa y Frambuesa. Rep. I Rep. II Rep. III Rep. IV (105)* 5 (205) 1** (305) 1 (405) 2 (104) 4 (204) 4 (304) 4 (404) 3 (103) 3 (203) 5 (303) 3 (403) 1 (102) 2 (202) 2 (302) 2 (402) 5 (101) 1 (201) 3 (301) 5 (401) 4 *Unidad experimental **Número de Tratamiento. La numeración 1 – 5 se refiere a los tratamientos aplicados descritos en el cuadro 5. 3.6. Diseños experimentales Para el cultivo de Fresa se empleó Diseño de Bloques Completos al Azar con cuatro repeticiones y cinco tratamientos, incluyendo un testigo sin aplicar. La unidad experimental quedó conformada por tres camas de 1.0 metros de ancho por 8 metros de largo para así tener 24 metros cuadrados y 192 plantas por unidad experimental. En total por tratamiento 96 metros cuadrados y en total del experimento 480 metros cuadrados. 25 Para el cultivo de Frambuesa se empleó Diseño de Bloques Completos al Azar con cuatro repeticiones y cinco tratamientos, incluyendo un testigo sin aplicar. La unidad experimental quedó conformada por tres camas de 2.33 metros de ancho por 7.00 metros de largo para así tener 49 metros cuadrados y 23.5 plantas por unidad experimental. En total por tratamiento 196 metros cuadrados y en total del experimento 980 metros cuadrados. 3.7. Variables Evaluadas Presencia en Follaje: Incidencia de la enfermedad: 20 hojas de la parcela útil tomados al azar. Severidad de la enfermedad: 20 hojas de la parcela útil tomadas al azar. 3.8. Frecuencia del Muestreo En total se realizaron 4 muestreos: uno previo al inicio de las aplicaciones y el resto en promedio a los 7 días después de cada aplicación, justo antes de la aplicación siguiente. En caso de que se presenten efectos fitotóxicos al cultivo, éstos se evaluarán mediante el empleo de la escala la EWRS (Chiaravalle et al. 2011). 26 Cuadro No. 5. Escala de la evaluación de fitotoxicidad propuesta por la EWRS. Valor Puntual Efecto Sobre el Cultivo % de Fitotoxicidad al Cultivo 1 Sin efecto 0 2 Síntomas muy ligeros 1.0 - 3.5 3 Síntomas ligeros 3.5 – 7.0 4 Síntomas que no se reflejan en el rendimiento 7.0 – 12.5 5 Daños medio 12.5 – 20 6 Daños elevados 20 – 30 7 Daños muy elevados 30 – 50 8 Daños severos 50 – 99 9 Muerte completa 100 3.9. Análisis Estadísticos Para el registro de los datos de Incidencia y Severidad de control de cada muestreo, se le aplicó su respectivo Análisis de Varianza y Prueba de Separación de Medias de Tukey al 5% (Juárez, 2010), así como las Pruebas de Homogeneidad de Varianzas de Bartlett, utilizando el Software de computación ARM, (AGRICULTURAL RESEARCH MANAGEMENT). 3.9.1. Porcentaje de control El porcentaje de control fue estimado mediante la fórmula de Abbott siguiente: % de eficacia= A: Valor del testigo absoluto B: Valor del tratamiento 27 3.9.2. Severidad El método de evaluación consistió en muestrear 20 hojas al azar por unidad experimental y se determinó el porcentaje de daño o infección en las hojas de acuerdo a la escala visual de Mendoza y Ponce para determinar el % de infección mediante la fórmula de Towsend y Heuberger citada por Mendoza 1994, y posteriormente se agruparon en la categoría que correspondió de acuerdo a la escala propuesta. Cuadro No. 6. Escala visual de Mendoza y Ponce (1988), citada por Mendoza (1994), para medir el grado de daño considerando las siguientes categorías y porcentajes de infección al follaje. Categoría Descripción % de Infección 0 Sin infección foliar 0% 1 Trazas de infección foliar 1-5% 2 Hasta el 12.5% de área foliar dañada 6-12.5% 3 Hasta 25% de área foliar dañada 12.6-25.0% 4 Hasta 50 % de área foliar dañada 26-50% 5 Hasta 75% del área foliar dañada 51-75% 6 Hasta 100% del área foliar dañada 76-100% Los datos obtenidos se transformaron a porcentaje de infección mediante la siguiente fórmula de Towsend and Heuberger (Delgado et al. 2005): % de infección = Donde: Ni = Número de hojas en cada categoría Vi = Valor numérico de cada categoría N = Número total de hojas V = Valor de la categoría más alta de la escala 28 lV RESULTADOS Y DISCUSIÓN En el Cuadro 7 se observa que la Incidencia en el testigo sin aplicar creció de 0% en el muestreo previo a 98.75% en el último muestreo, lo que significa que la presión de la enfermedad fue significativa en el testigo sin aplicar, lo cual sirvió para poner a prueba los compuestos a evaluar. Cuadro No. 7. Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa en Zamora, Michoacán, 2013. Evaluadoen el follaje (Hojas). Tratamiento Dosis PC/ha. Previo 6DD1A 7DD2A 7DD3A 1. Fungifree-AB 1.5 kg 0.0 a 32.50 b 31.25 b 47.50 b 2. Fungifree-AB 2.0 kg 0.0 a 31.25 b 23.75 b 46.25 b 3. Fungifree-AB 2.5 kg 0.0 a 32.50 b 23.75 b 36.25 b 4. Serenade Max 5 kg 0.0 a 47.50 b 28.75 b 43.75 b 5. Testigo sin aplicar 0.0 0.0 a 82.50 a 100.0 a 98.75 a Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Frambuesa Medias dentro de cada columna con diferente letra difieren estadísticamente según Tukey (p≤0.05) Figura No. 1. Representación de la incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa en cada tratamiento durante el tiempo establecido. 29 En este caso, se observa que en los primeros muestreos la Incidencia de la enfermedad se mantuvo en 82% en el testigo sin aplicar; a partir del tercer muestreo la Incidencia aumentó a 98.75% en promedio en el último muestreo. A partir del primer muestreo se observaron diferencias claras entre los tratamientos y el testigo sin aplicar, como se muestra en el Cuadro 7 y Figura 1, donde se observa que no hay diferencias significativas entre los tratamientos, siendo los mejores tratamientos durante el desarrollo del ensayo el Tratamiento 3 Fungifree-AB (2.5 kg/ha), con 32%, 23%, y 36% de Incidencia a través de las tres aplicaciones y el Tratamiento 2 Fungifree-AB (2.0 kg/ha.), con Incidencia de 31%, 23%, y 46%, respectivamente en cada muestreo; seguido del Tratamiento 1 Fungifree-AB (1.5 kg/ha.), con incidencia de 32%, 31%, y 47% a los cuatro muestreos realizados; posteriormente el Tratamiento 4 Serenade Max ( 5.0 kg/ha), con 47%, 28% y 43%. Hay que señalar que aunque estadísticamente fueron iguales, solo se presentaron diferencias entre los tratamientos y el testigo sin aplicar. El testigo sin aplicar llegó a 100% de Incidencia. En el Cuadro 8 y la Figura 2, se observa que después de tres aplicaciones la eficacia de los tratamientos es clara con respecto al testigo sin aplicar; así mismo se observa que sí hay diferencias significativas entre los tratamientos y el testigo sin aplicar. Hay que señalar que entre los tratamientos no hubo diferencias significativas, y aunque sí hubo diferencias numéricas en cuanto al porcentaje de control, se considera que después de cuatro aplicaciones todos los tratamientos tuvieron un control aceptable. Los tratamientos que menor control ofrecieron después de tres aplicaciones fueron: • Tratamiento 1 Fungifree-AB (1.5 kg/ha.), con 81% de control promedio. • Tratamiento 4 Serenade Max (5.0 kg/ha), con 81% de control promedio. • Tratamiento 2 Fungifree-AB (2.0 kg/ha), con 83% de control promedio. • Tratamiento 3 Fungifree-AB (2.5 kg/ha), con 84% de control promedio. 30 Hay que hacer notar que el testigo sin aplicar presentó hasta 48% de severidad de la enfermedad después de 3 aplicaciones y cuatro muestreos realizados en hojas de Fresa. Cuadro No. 8. Severidad y Porciento de control de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa en Zamora, Michoacán, 2013. Evaluado en el follaje (Hojas). Tratamiento Dosis PC/ha Previo 6DD1A 7DD2A 7DD3A 1. Fungifree-AB 1.5 kg 0.0 a 7.25*/77.68** b 5.57/85.98b 8.50/82.48 b 2. Fungifree-AB 2.0 kg 0.0 a 8.70/73.21 b 3.92/90.13b 7.68/84.18 b 3. Fungifree-AB 2.5 kg 0.0 a 6.63/79.60 b 4.15/89.57b 7.45/84.65 b 4. Serenade Max 5 kg 0.0 a 8.50/73.33 b 4.78/87.99b 7.97/83.57 b 5. Testigo sin aplicar 0.0 0.0 a 32.47/0.00 a 39.78/0.0 a 48.53/0.0 a *Severidad de la enfermedad **Porciento de control de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa Medias dentro de cada columna con diferente letra difieren estadísticamente según Tukey (p≤0.05) Figura No. 2. Porcentaje de control registrado de Cenicilla (Sphaerotheca macularis), en Fresa durante el tiempo establecido. Hay que señalar que ninguno de los tratamientos a base de Fungifree-AB causó fitotoxicidad al cultivo. En el Cuadro 9 y la Figura 3 se observa que la Incidencia en el testigo sin aplicar creció de 0% en el muestreo previo a 100% en el último muestreo, lo que indica que la 31 presión de la enfermedad fue significativa en el testigo sin aplicar, lo cual sirvió para poner a prueba los compuestos a evaluar. En este caso, se observa que en los primeros muestreos la Incidencia de la enfermedad se mantuvo en 100% en el testigo sin aplicar; a partir del segundo muestreo la incidencia aumentó a 100% en promedio en el último muestreo. Cuadro No. 9. Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa en Jocotepec, Jalisco, 2013. Evaluado en el follaje (Hojas). Tratamiento Dosis PC kg/ha Previo 7DD1A 6DD2A 8DD3A 1. Fungifree-AB 1.5 kg 0.0 a 26.25 b 35.00 b 60.00 b 2. Fungifree-AB 2.0 kg 0.0 a 23.75 b 32.50 b 42.50 bc 3. Fungifree-AB 2.5 kg 0.0 a 17.50 b 31.25 b 38.75 c 4. Serenade Max 5 kg 0.0 a 18.75 b 35.00 b 58.75 b 5. Testigo sin aplicar 0.0 0.0 a 83.75 a 100.0 a 100.0 a *Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa Medias dentro de cada columna con diferente letra difieren estadísticamente según Tukey (p≤0.05) Figura No. 3. Representación de la Incidencia de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa en cada tratamiento durante el tiempo establecido. 32 A partir del primer muestreo se observaron diferencias claras entre los tratamientos y el testigo sin aplicar, como se muestra en el Cuadro 10 y la Grafica 3. No hay diferencias significativas entre los Tratamientos, siendo los mejores Tratamientos durante el desarrollo del ensayo el Tratamiento 3 Fungifree-AB (2.5 kg/ha), con Incidencia de 17%, 31%, y 38% a través de las tres aplicaciones y el Tratamiento 2 Fungifree-AB (2.0 kg/ha), 23%, 32% y 42% de Incidencia respectivamente en cada muestreo; seguido del Tratamiento 4 Serenade Max (5.0 Kg/ha), con 18%, 35% y 58%, de Incidencia en los cuatro muestreos realizados; posteriormente el Tratamiento 1 Fungifree-AB (1.5 Kg/ha), con 26%, 35%, y 60% de Incidencia y finalmente el Tratamiento 4 Serenade Max (5.0 kg/ha), con Incidencia de 18%, 35% y 58% en los cuatro muestreos llevados a cabo. Hay que señalar que aunque estadísticamente fueron iguales, solo se presentaron diferencias entre los tratamientos y el testigo sin aplicar. El testigo sin aplicar llegó a 100% de Incidencia. En el Cuadro 10 y en la Figura 4 se observa que después de tres aplicaciones la eficacia de los Tratamientos es clara con respecto al testigo sin aplicar; así mismo se observa que sí hay diferencias significativas entre los Tratamientos y el testigo sin aplicar. Hay que señalar que entre los Tratamientos hubo diferencias significativas, al igual que con el testigo sin aplicar y aunque sí hubo diferencias numéricas en cuanto al porcentaje de control, se considera que después de tres aplicaciones todos los tratamientos tuvieron un control aceptable. Los tratamientos que menor control ofrecieron después de tres aplicaciones fue el Tratamiento 4 Serenade Max (5.0 kg/ha), con 87%, 87% y 78% de control respectivamente después de tres aplicaciones el control disminuye; el Tratamiento 1 Fungifree-AB (1.5 kg/ha), con 81%, 88% y 78%de control respectivamente, en este caso después de la segunda aplicación, el control disminuyó. Seguidos por el Tratamiento 2 Fungifree-AB (2.0 Kg/ha), con 83%, 88% y 85% respectivamente y el Tratamiento 3 Fungifree-AB (2.5 kg/ha), con 88%, 90% y 87% de control después de tres aplicaciones. Hay que hacer notar que el testigo sin aplicar 33 presentó hasta 60% de severidad de la enfermedad después de 3 aplicaciones y cuatro muestreos realizados en hojas de Frambuesa considerándose una severidad alta. Cuadro No. 10. Severidad y Porciento de Control de Cenicilla (Sphaerothecahumuli), en Frambuesa en Jocotepec, Jalisco, 2013. Evaluado en el follaje (Hojas). Tratamiento Dosis kg/ha Previo 7DD1A 6DD2A 8DD3A 1. Fungifree-AB 1.5 kg 0.0 a 4.78*/81.18** b 6.40/88.44 b 12.90/78.56 b 2. Fungifree-AB 2.0 kg 0.0 a 4.13/83.71 b 6.20/88.80 b 8.73/85.50 b 3. Fungifree-AB 2.5 kg 0.0 a 2.88/88.67 b 5.40/90.25 b 7.28/87.91 b 4. Serenade Max 5 kg 0.0 a 3.12/87.72 b 6.85/87.63 b 13.10/78.23 b 5. Testigo sin aplicar 0.0 0.0 a 25.38/0.0 a 55.38/0.00 a 60.17/0.00 a *Severidad de la enfermedad **Porciento de control, de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa Medias dentro de cada columna con diferente letra difieren estadísticamente según Tukey (p≤0.05) Figura No. 4. Porcentaje de control registrado de Cenicilla (Sphaerotheca humuli), en Frambuesa durante el tiempo establecido. Hay que señalar que ninguno de los tratamientos a base de Fungifree-AB causó fitotoxicidad al cultivo. 34 En el muestreo previo, los resultados obtenidos muestran más del 98% de presencia del patógeno a controlar, esto nos permitió darnos cuenta que se podía establecer el ensayo, ya que estaba presente el patógeno a controlar. El tratamiento que presentó control nulo fue el testigo sin aplicar; esto se debe a que este tratamiento no recibió ningún tipo de control quedando totalmente expuesto y vulnerable. Por otro lado los Tratamientos con menor presencia de Sphaerotheca sp fueron el Tratamiento 3, 2.5 kg/ha con 84% de control y el Tratamiento 2, 2.0 kg/ha con 83% de control y el Tratamiento 4 Serenade Max 5.0 kg/ha y el Tratamiento 1, 1.5 kg/ha con un porcentaje de control de 81%. En el trabajo realizado para control de Cenicilla en Calabaza (Wagner, 2012), menciona que las aplicaciones de Bacillus sp. con intervalos de 6 días reducen el número de lesiones hasta 85%. Se manejaron dosis diferentes de Fungifree para cada Tratamiento, las cuales fueron: Fungifree 1.5 kg/ha, 2.O kg/ha y 2.5 kg/ha y el Tratamiento 4 Serenade Max 5 kg/ha, teniendo como resultado que los mejores controles fueron con 2.5 kg/ha y 2.0 kg/ha de Fungifree. Amsalem, 2004 trabajó con diferentes controles para Sphaerotheca sp y sus resultados arrojaron que Bacillus sp en dosis de 2.5 kg/ha tienen un control del 90%. Los resultados que se obtuvieron en esta investigación en el Tratamiento 3 son muy similares a los obtenidos por Amsalem. Manker, 2006 aplicó Bacillus para el manejo integrado de control de Cenicilla, teniendo como resultados la inhibición del crecimiento de micelio hasta en 90%; por su parte Freeman, 2002 menciona que la aplicación de Bacillus en dosis bajas mantuvieron un control del 50% al 80%; similares resultados a los obtenidos en la presente investigación con controles del 81%. 35 V. CONCLUSIONES Derivado de los resultados que se obtuvieron en el presente estudio, el uso del fungicida FUNGIFREE-AB (Bacillus subtilis), sí controla la cenicilla (Sphaerotheca spp.), en cultivo de Fresa y Frambuesa y se concluye con lo siguiente: 1. Los mejores tratamientos para controlar Cenicilla (Sphaerotheca spp.), en Fresa y Frambuesa fueron el Tratamiento 2 y Tratamiento 3 Fungifree-AB, en dosis de 2.0 kg de P.C./ha y 2.5 kilos de P.C./ha. con 84% de control promedio después de tres aplicaciones, comportándose de forma superior al testigo comercial a base de Serenade Max. 2. El Tratamiento 1, Fungifree-AB (1.5 kg/ha.), presentó el menor control con aproximadamente 81% en promedio durante el desarrollo del experimento, después de tres aplicaciones evaluado en hojas; su comportamiento fue similar al testigo regional, el Tratamiento 4 Serenade Max, en dosis de 5.0 kg/ha. 3. Los tratamientos de Fungifree-AB en el rango de 2.0 a 2.50 kilos de producto comercial por hectárea, en aplicaciones con intervalos de 7 días cuando se presenten las condiciones favorables para el desarrollo de la enfermedad de Cenicilla (Sphaerotheca spp.), en los cultivos de Fresa y Frambuesa fueron las que obtuvieron un mejor control de la enfermedad. 4. Ninguno de los tratamientos a base de Fungifree-AB causó síntomas de fitotoxicidad en el cultivo después de cuatro aplicaciones. 36 VI. LITERATURA CITADA Albornoz F., Salinas M. 2011. Resultados y Lecciones en Controladores Biológicos: Bacillus subtilis y B. Thuringiensis, Fundación para la Innovación Agraria, Ministerio de Agricultura. Chile. En línea. 17 abril 2013 http://bibliotecadigital.fia.cl/gsdl/collect/publicac/index/assoc/HASH9de5.dir/83 _Libro_Bacillus.pdf?ie=UTF-8&oe=UTF- 8&q=prettyphoto&iframe=true&width=90%&height=90% Apodaca-Sánchez M. A., Barreras-Soto M. A., Cortez-Mondaca E., Quintero-Benítez J.A. 2008. Enfermedades del Tomate de Cáscara en Sinaloa. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Folleto Técnico No. 31. México. (En línea). 25 Octubre 2014. http://biblioteca.inifap.gob.mx:8080/jspui/bitstream/handle/123456789/1641/Enf ermedades%20del%20tomate%20de%20cascara%20en%20Sinaloa.pdf?sequenc e=1 APSnet. 2013. 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