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SUMINISTRO DE REACTIVOS PARA BIOLOGÍA MOLECULAR Y REACTIVOS PARA ENSAYOS BASADOS EN SISTEMAS DE LUCIFERASA Nº Expdte. 12/18 ALCANCE DEL CONTRATO Y PLIEGO DE PRESCRIPCIONES TÉCNICAS Pág. 2 de 18 INDICE 1 OBJETO DEL CONTRATO .............................................................................. 3 2 ALCANCE DEL SUMINISTRO ......................................................................... 3 3 PRESENTACIÓN DE LA OFERTA ................................................................... 4 4 INFORMACIÓN ADICIONAL .......................................................................... 5 ANEXO I ............................................................................................................. 6 Pág. 3 de 18 1 OBJETO DEL CONTRATO El presente Pliego de Prescripciones Técnicas tiene por objeto definir las características y requisitos técnicos para la contratación del “Suministro de Reactivos para Biología Molecular y Reactivos para Ensayos basados en Sistemas de Luciferasa” con destino a la Fundación del Sector Público Estatal Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas Carlos III (en adelante, F.S.P. CNIO). Este suministro consta de dos lotes: Lote 1: Suministro de Reactivos para Biología Molecular. Este lote incluye reactivos utilizados en una variedad de aplicaciones en biología molecular, tales como purificación y cuantificación de DNA y RNA, sistemas de clonaje, trasncriptasas reversas, kits para PCR y RT-qPCR, reactivos de transfección y otras. Lote 2: Suministro de Reactivos para Ensayos basados en Sistemas de Luciferasa. Este lote incluye reactivos que se basan en el sistema luciferina-luciferasa, y que son de aplicación tanto en ensayos enzimáticos como en ensayos de viabilidad celular, traducción in vitro, expresión génica y otros tipos. 2 ALCANCE DEL SUMINISTRO Son objeto del contrato los suministros que se describen en el Anexo 1 de este PPT. Este listado se basa en consumos anteriores junto con las previsiones de necesidades futuras, pero en ningún caso el listado de materiales aquí descrito supone un compromiso de adquisición de los citados artículos, ya que las necesidades futuras dependerán de las actividades científicas que se desarrollen en el centro. El periodo de adquisición de los elementos a continuación descritos, dependerá de las necesidades de trabajo de los distintos grupos y unidades de investigación del centro. El listado de materiales que se desea licitar y que están descritos en el Anexo 1, posee distintas columnas con la siguiente información: Número: Identificador numérico del material para el concurso Nº referencia fabricante: Indica el número de referencia del fabricante del artículo solicitado para así facilitar al licitador, junto con la descripción del mismo, que pueda ofertar un artículo igual o equivalente al referenciado. Descripción: En este campo se detallan las especificaciones técnicas del material. ALCANCE DEL CONTRATO Y PLIEGO DE PRESCRIPCIONES TÉCNICAS Expdt. Nº 12/18 SUMINISTRO DE REACTIVOS PARA BIOLOGÍA MOLECULAR Y REACTIVOS PARA ENSAYOS BASADOS EN SISTEMAS DE LUCIFERASA Pág. 4 de 18 Formato de presentación: Indica el formato de presentación a ofertar, ya sean en unidades (UD), en número de unidades por bolsas o por caja – ejemplo 5/bolsa, 120/caja: 5 unidades por bolsa, 120 unidades por caja-; en viales, garrafas o cualquier otro formato que se especifique. Consumo Estimado (Uds): Indica una estimación de las necesidades futuras que puedan ser necesarias, pero en ningún caso supone una cifra cerrada o compromiso de adquisición de las citadas unidades. El número estimado de unidades que se muestran en el Anexo I viene determinado por el formato de presentación indicado. 3 PRESENTACIÓN DE LA OFERTA A la hora de presentar la oferta, el licitador debe indicar el precio según el formato indicado y el importe total, siendo este la cantidad estimada multiplicada por el precio unitario según formato. Los licitadores deberán ofertar un precio para todas las referencias correspondiente al Lote al que se refiera la oferta. En caso de que no se ofertara precio para alguna de las referencias, la oferta para dicho Lote será automáticamente descartada. Los licitadores podrán presentar ofertas a uno, a varios o a todos los lotes independientes. Cada licitador no podrá suscribir más de una proposición para un mismo Lote. Tampoco podrá suscribir, para un mismo Lote, ninguna propuesta en unión temporal con otros si lo ha hecho individualmente para dicho Lote o figurar en más de una unión temporal para licitar a un determinado Lote. En el caso de licitar a varios Lotes, la forma de presentación de las proposiciones, por parte de los licitadores, será la siguiente: - Presentación de un único sobre nº1 “Documentación general”. En el exterior del sobre deberán figurar relacionados, en todo caso, los Lotes a los que se licita. - Presentación de un sobre nº 3 “Proposición relativa a los criterios evaluables mediante fórmulas”, por cada uno de los Lotes a los que se licita. En el exterior de cada uno de los sobres deberá figurar, en todo caso, el Lote al que corresponde dicho sobre. Adicionalmente, en el Sobre 3 debe incluir la documentación técnica acreditativa (descripciones, fotografías, fichas técnicas, etc.) en soporte electrónico en las que se pueda verificar el cumplimiento de las características específicas descritas en el Anexo I. En caso de que el articulo ofertado no sea equivalente a las especificaciones técnicas descritas podrá ser descartado del concurso. Pág. 5 de 18 4 INFORMACIÓN ADICIONAL En caso de que las empresas licitadoras requieran información adicional para la elaboración de sus ofertas, el F.SP. CNIO se pone a su disposición a través de: Contacto para dudas Administrativas: licitaciones@cnio.es Contacto para dudas Técnicas: D. Fernando Peláez (fpelaez@cnio.es) con copia a licitaciones@cnio.es Responsable del Departamento de Dirección de Programa BT Director Gerente D. Fernando Peláez D. Juan Arroyo Muñoz mailto:licitaciones@cnio.es mailto:fpelaez@cnio.es mailto:licitaciones@cnio.es https://intranet.cnio.es/home/directorio/default.asp https://intranet.cnio.es/home/directorio/default.asp Pág. 6 de 18 ANEXO I Lote 1: Suministro de Reactivos para Biología Molecular Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 1 A1330 Sistema de purificación de DNA para minipreparaciones dando un alto rendimiento en DNA plasmidico con una calidad constante a partir de cultivos bacterianos en un tiempo menor de 45 minutos. Debe contener proteasa alcalina que permita el aislamiento de DNA consistente de EndA+ y cepas bacterianas EndA-. 1 Kit para 50 reacciones, incluyendo una solución de resuspensión celular, una solución de lisis celular, una solución de neutralización, una solución de lavado de columnas, una solución de proteasa alcalina, agua libre de nucleasa y minicolumnas tipo Wizard SV y tubos de recogida para 50 reacciones. 8 2 A1360 Kit de vectores de clonación compuesto por vectores linealizados con un único extremo timidina terminal 3' tipo pGEMT EASY. Deben tener un alto número de réplicas que contengan los promotores T7 y SP6 de la RNA polimerasa, escoltando un región de clonación múltiple sin la región de código del péptido α de la enzima β-galactosidasa. La inactivación insercional del péptido α permite la identificación de recombinación por un sistema de identificación blanco/azul en placas indicadoras. También debe contener numerosos sitios de restricción sin contar el sitio de clonación múltiple. Este último sitio de clonación múltiple debe estar flanqueado por sitios de restricción reconocidospor las enzimas EcoRI, BstZI and NotI. Debe venir suministrado con tampón de ligamiento rápido 2X. 1 kit que incluye 1.2 ug del vector a una concentración de 50 ng/uL, control de inserción de DNA a una concentracion de 4 ng/uL, 200 uL de tampón de ligamiento rápido(2x) y 100 U de ligasa T4. 25 3 A2791 Sistema de transcriptasa reversa tipo GoScript, para la síntesis de cDNA para la detección sensible de la expresión génica, debe transcribir transcritos largos y cortos y procesar a través de la estructura secundaria de mRNA. Debe contener una mezcla de enzima transcriptasa reversa tipo GoScript e inhibidor de RNasa tipo RNasina y un tampón de ensayo con oligo(dT), MgCl2 y dNTPs, optimizado para la síntesis eficiente de cDNA. Kit para 100 reacciones, conteniendo la mezcla del enzima (2 x 100 uL) y el tampón de reaccin oligo(dT) (2 x 200 uL) y agua libre de nucleasas (2 x 1.25 mL). 9 4 A2801 Sistema de transcriptasa reversa tipo GoScript, para la síntesis de cDNA para la detección sensible de la expresión génica, debe transcribir transcritos largos y cortos y procesar a través de la estructura secundaria de mRNA. Debe contener una mezcla de enzima transcriptasa reversa tipo GoScript e inhibidor de RNasa tipo RNasina y un tampón de ensayo con cebadores al azar, MgCl2 y dNTPs, optimizado para la síntesis eficiente de cDNA. Kit para 100 reacciones, conteniendo la mezcla del enzima (2 x 100 uL) y el tampón de reacción con cebadores al azar (2 x 200 uL) y agua libre de nucleasas (2 x 1.25 mL). 5 Pág. 7 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 5 A5001 Sistema de transcriptasa reversa tipo GoScript, para la síntesis de cDNA para la detección sensible de la expresión génica, debe transcribir transcritos largos y cortos y procesar a través de la estructura secundaria de mRNA. Debe contener una mezcla de enzima transcriptasa reversa tipo GoScript e inhibidor de RNasa tipo RNasina y un tampón de ensayo con oligo(dT), cebadores al azar, MgCl2 y dNTPs, optimizado para la síntesis eficientede cDNA. Kit para 100 reacciones, inlcuyendo transcriptasa reversa (100 uL), tampón de reacción (600 uL), MgCl2 25 mM (1.2 mL), mezcla de nucleótidos para PCR (200 uL), primer oligo(dT)15 (50 ug), cebadores al azar (50 ug), agua libre de nucleasas (1.25 mL) e inhibidore de RNasa tipo RNAsina recombinante (2.500 unidades) 15 6 A6001 Mezcla universal (Master mix) de componentes necesarios para la amplificación por RT-qPCR de fragmentos de DNA con alta especifidad en modo “hot start” y altos niveles de fiabilidad, reproducibilidad y sensibilidad. Debe contener una Taq DNA polimerasa tipo GoTaq DNA polimerasa (con “Hot start”), una sonda que mejora la fluorescencia tras la unión al dsDNA (tipo BRYT GREEN), una sonda de referencia CXR (carboxi-X-rodamina), MgCl2 y dNTPs. 1 botella de 5 mL de mezcla maestra a concentración 2X, suficiente para 200 reacciones, incluyendo también 100 uL de CXR y 2 botellas de 13 mL de agua libre de nucleasas. 5 7 A6002 Mezcla universal (Master mix) de componentes necesarios para la amplificación por RT-qPCR de fragmentos de DNA con alta especifidad en modo “hot start” y altos niveles de fiabilidad, reproducibilidad y sensibilidad. Debe contener una Taq DNA polimerasa tipo GoTaq DNA polimerasa (con “Hot start”), una sonda que mejora la fluorescencia tras la unión al dsDNA (tipo BRYT GREEN), una sonda de referencia CXR (carboxi-X-rodamina), MgCl2 y dNTPs. Kit incluyendo 1 botella de 25 mL de mezcla maestra a concentración 2X, suficiente para 1000 reacciones, incluyendo también 5 viales x 100 uL de la sonda CXR y 10 botellas de 13 mL de agua libre de nucleasas. 74 8 A7953 Solución para la precipitación de proteínas, para usar con sistemas de purificación de DNA genómico tipo Wizard. Aplicaciones: aislamiento de DNA a partir de células blancas de la sangre, células de cultivo de tejido, tejido animal, tejido vegetal, levaduras y bacterias Gram + y Gram -. Vial de 350 mL. 1 9 AS1440 Kit para la purificación automatizada de RNA de muestras de tejido de mamífero fijado en formol e incluido en parafina (FFPE) compatible con el equipo Maxwell RSC, sin requerir el uso de xileno ni otros solventes orgánicos. Debe permitir extraer RNA de alta pureza de hasta 16 muestras en una sola carrera. Debe incluir tampón de lisis, cartuchos compatibles con el Maxwell RSC, émbolos, tubos de elución, proteinasa K, DNasa A, agua libre de nucleasa, aceite mineral y colorante azul. Kit incluyendo tampón de lisis (20 mL), 48 cartuchos de extracción, 1 paquete de 48 émbolos, 50 tubos de elución (0.5 mL), proteinasa K (2 x 1 mL), agua libre de nucleasa (25 mL), aceite mineral (25 mL), y colorante azul (100 uL), MnCl2 (2 x 1 mL), tampón de DNasa (1 mL), DNasa I liofilizada (3 viales), 7 10 AS1450 Kit para la purificación automatizada de DNA genómico de muestras de tejido de mamífero fijado en formol e incluido en parafina (FFPE) compatible con el equipo Maxwell RSC, sin requerir el uso de xileno ni otros solventes orgánicos. Debe permitir extraer gDNA de alta pureza de hasta 16 muestras en una sola carrera. Debe incluir tampón de lisis, cartuchos compatibles con el Maxwell RSC, émbolos CSC/RSC, tubos de elución, proteinasa K, RNasa A, agua libre de nucleasa, aceite mineral y colorante azul. Kit incluyendo tampón de lisis (20 mL), 48 cartuchos CSC/RSC, 50 émbolos, 50 tubos de elución (0.5 mL), proteinasa K (2 x 1 mL), agua libre de nucleasa (25 mL), solución de RNasa A (1 mL), aceite mineral (25 mL), y colorante azul (100 uL). 6 Pág. 8 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 11 AS1520 Kit para la extracción automatizada de DNA a partir de muestras de 50-500 uL de sangre completa, compatible con el equipo Maxwell RSC, eluyendo en 60-150 uL de tampón de elución para maximizar el rendimiento y la concentración. Debe permitir la extracción de DNA tras añadir la muestra de sangre directamente al cartucho (sin necesidad de preprocesamiento), obteniendo en menos de 40 minutos un DNA de alta calidad, libre de inhibidores de PCR. Debe incluir cartuchos RSC, embolos CSC/RSC, tubos de elución y tampón de elución. Kit incluyendo 50 embolos CSC/RSC, 48 cartuchos RSC, 50 tubos de elución (0.5 mL) y tampón de elución (20 mL) 64 12 B9510 Kit para la co-amplificación y la detección en tres colores de 9 loci humanos, incluyendo el ASN-0002 (H01, TPOX, vWA, amelogenina, CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317 y D5S818), así como D21S11, siendo compatible con los analizadores genéticos 3100 y Avant-3100 ABI PRISM® y los analizadores genéticos 3130, 3130xl, 3500 y 3500xL Applied Biosystems®. Debe contener lo necesario para amplificar los perfiles STR de DNA genómico humano, incluyendo una DNA polimerasa termoestable “Hot Start”, una mezcla de estándar de carril interno (ILS) y la escalera alélica para identificar positivamente cada alelo y un DNA Control 2800M para verificar la exactitud de la genotipificación. Kit para 50 reacciones, incluyendo 250 uL mezcla Primer Pair 5X, 250 uL mezcla universal 5X, 50 uL mezcla escala alélica, 25 uL DNA Control 2800M, 150 uL mezcla de estándar de carril interno 600 y 1,250 uL agua (Amplificación de calidad). 1 13 DG1071 Marcador de peso molecular para determinar el tamaño de fragmentos de DNA separados por electroforesis y detectado usando instrumentos con capacidad de detección de fluorescencia. El patrón debe ser DNA de doble banda, marcado asimétricamente con carboxi-X-rodamina (CXR), permitiendo la detección a 597 nm tras excitación a 576 nm. Debe consistir en 22 bandas de tamaño entre 60 y 600 bp, con un espaciado de 20 bp entre fragmentos de 60-200 bp, de 25 bp en el rango 200-500 bp, y de 50 bp en el rangode 500-600 bp. Los fragmentos múltiplo de 100 bp deben tener intensidades de fluorescencia aproximadamente doble del resto. Debe contener aditivos para prevenir la formación de artefactos "split peak" y "n-10" en el locus vWA usando diversos ABI PRISM 3100 y otros instrumentos. Kit incluyendo el standard 600 (150 uL), solución de carga de azul de dextrano (1 mL) y solución de carga azul de bromofenol (1 mL) 1 14 E2311 Reactivo no liposómico para la transfección de DNA en una amplia variedad de líneas celulares (incluyedo cultivos primarios y stem cells) con alta eficiencia y baja toxicidad sin el requerimiento de la eliminación del suero o el medio de cultivo ni el lavado o el cambio del medio tras introducir el DNA, tipo FuGENE HD. Debe funcionar en medios químicamente definidos, y no contener productos derivados de animales. Aplicaciones: ensayos de cuantificación de expresión génica con sistemas reporter basados en Luciferasa. 1 vial de 1 mL 15 15 E2312 Reactivo no liposómico para la transfección de DNA en una amplia variedad de líneas celulares (incluyedo cultivos primarios y stem cells) con alta eficiencia y baja toxicidad sin el requerimiento de la eliminación del suero o el medio de cultivo ni el lavado o el cambio del medio tras introducir el DNA, tipo FuGENE HD. Debe funcionar en medios químicamente definidos, y no contener productos derivados de animales. Aplicaciones: ensayos de cuantificación de expresión génica con sistemas reporter basados en Luciferasa. 5 viales de 1 mL 3 Pág. 9 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 16 E2692 Reactivo no liposómico para la transfección de DNA plasmidico en una amplia gama de líneas celulares con alta eficiencia y baja toxicidad sin el requerimiento de la eliminación del suero o el medio de cultivo ni el lavado o el cambio de medio cuando se introduce el complejo de DNA y el reactivo, tipo FuGENE 6. 5 viales de 1 mL. 9 17 E3310 Kit conteniendo un sistema de cuantificación de cantidades pequeñas de RNA basado en una sonda fluorescente (492nm Excitación/540nm Emisión), tipo QuantiFluor RNA, que une específicamente RNA. Utilizable con cualquier fluorímetro capaz de medir fluorescencia a las longitudes de onda señaladas.Debe permitir medir la concentración de RNA en un rango de 0.1-500 ng/uL de RNA (de 1 uL en 200 uL de ensayo), proporcionando mayor sensibilidad que los sistemas espectrofotométricos basados en A260. Kit para 2.000 reacciones en ensayos de 200 uL, incluyendo la sonda fluorescente (1 mL), tampón TE pH 7.5 (25 mL) y RNA control 100 ug/mL (100 ug) 1 18 E4870 Kit conteniendo un sistema de cuantificación de cantidades pequeñas de dsDNA basado en una sonda fluorescente (504nm Excitación/531nm Emisión) que se une específicamente a DNA de doble banda (dsDNA), tipo QuantiFluor ONE. Utilizable con cualquier fluorímetro capaz de medir fluorescencia a las longitudes de onda señaladas. Proporciona mayor sensibilidad que los sistemas espectrofotométricos basados en A260nm, permitiendo cuantificar concentraciones muy bajas. Debe tener muy baja unión a ssDNA, RNA, proteína y otros compuestos. Kit para 500 reacciones, incluyendo la sonda fluorescente (5 x 20 mL), DNA labmda (400 ug) y tampón TE pH 7.5 (25 mL). 5 19 G1711 Marcador de peso molecular para la determinación del tamaño y cuantificación de fragmentos de DNA y RNA en electroforesis, basado en fragmentos de lambda-DNA digerido con Hindlll. Debe contener 8 fragmentos de DNA precipitados y purificados en etanol y que varíen en tamaño desde 125 pb a 23.130 pb, y un colorante de carga azul/naranja a concentración 6X. Debe contener la cantidad necesaria para realizar 200 pruebas. Kit para 200 pruebas, incluyendo 1 vial de 100 ug de marcadores DNA Lambda/HindIII a concentración de 0,5 ug/uL y 1 botella de 1 ml de colorante de carga naranja/azul a concentración 6X. 2 20 G2101 Marcador de peso molecular para determinar el tamaño del DNA en electroforesis, conteniendo 11 fragmentos de DNA que cubran el rango de 100 a 1000 pb (múltiplos de 100 pb) y una banda adicional de 1500 pb. La banda de 500 bp debe estar a mayor concentración para facilitar su identificación. Debe contener además un colorante de carga azul/naranja a concentración 6X. Kit incluyendo 250 ul de marcador de peso molecular de DNA a concentración de 0.13 μg/uL y 1 mL de colorante de carga azul/naranja a concentración 6X. 5 21 G3250 Kit para la detección y cuantificación de fragmentos de DNA de células apoptóticas a nivel individual o en suspensión mediante la técnica de "TUNEL", basada en la incorporación de fluoresceína-12-dUTP en el extremo 3´-OH del DNA usando el enzima recombinante TdT. Una vez marcados los fragmentos se visualizan por microscopía de fluorescencia o se cuantifican por citometría de flujo. Debe incluir además láminas cubreobjetos de plástico, tampón de equilibrado, mezcla de nucleótidos, SSC al 20X y proteinasa K. Kit para 60 reacciones a pH 6,8, incluyendo 60 láminas cubreobjetos de plástico, tampón equilibrado (9,6 mL), mezcla de nucleótidos (6 × 50 uL), SSC al 20X (70 mL), TdT (recombinante) (3 x 600 U) y proteinasa K (10 mg). 1 Pág. 10 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 22 G5711 Marcador de peso molecular para determinar el tamaño del DNA en electroforesis, conteniendo 13 fragmentos de DNA que cubran el rango de 250 a 10.000 pb (250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 4000, 5000, 6000, 8000 y 10000). Las bandas de 1000 y 3000 pb deben estar a mayor concentración para facilitar su identificación. Debe contener además un colorante de carga azul/naranga a concentración 6X. Kit incluyendo 500 uL de marcador de peso molecular de DNA a concentración 0.1 ug/uL, 1 mL de colorante de carga naranja/azul a concentración 6X. 15 23 M5005 Kit enzimático para la amplificación de DNA a partir de moldes genómicos complejos, clonación con el vector-T, RT-PCR de dos pasos y PCR “Hot Start”. Debe contener una Taq DNA polimerasa tipo GoTaq (con “Hot Start”). El enzima debe estar suministrado con un vial de MgCl2 25 mM, y con un tampón verde que sirve como tampón de reacción y la solución de carga del gel (con un componente para incrementar la densidad de la muestra). La mezcla tiene que tener un volumen suficiente para 100 reacciones. Kit de 500 unidades, incluyendo Taq DNA Polimerasa (500 u, a 5U/μL), MgCl2 (3 x 1.2 mL), tampón flexi sin color (4 x 1 mL), tampón flexi verde al 5X (4 x 1mL). 45 24 M6101 Kit enzimático de DNasa RQ1 libre de RNasa, para su uso en aplicaciones donde el mantenimiento de la integridad del RNA es esencial. Debe contener un tampón de reacción con una concentración de 10X formado por Tris-HCl 400 mM (pH 8,0), MgSO4 100 mM y CaCl2 10 mM, un tampón de parada formado por EGTA 20 mM (pH 8,0) y 1000U de DNasa RQ1 I libre de RNasa procedente de pancreas bovino, en un tampón HEPES 20 mM (pH 7,5), CaCl2 10 mM, MgCl2 10 mM y glicerol 50%. Kit conteniendo 1 vial de 1000u de enzima (a una concentración aproximada de 1U/uL), 1 vial de tampón de reacción (1 mL) y 1 vial de solución stop (1 ml). 2 25 M7502 Mezcla universal (master mix) para la amplificación por PCR rutinaria de fragmentos de DNA con un rango de 0,2 a 2 kb a partir de tan sólo 2 copias del DNA molde. Debe contener una Taq DNA polimerasa, dNTPs, MgCl2 y tampones de reacción con concentraciones óptimas en un solo tubo. 2 viales de 1250 uL de mezcla universal a concentración 2X y 2 de 1250 uL de agua libre de nucleasas, para 100 reacciones 5 26 M7808 DNA polimerasa tipo GoTaq G2 Flexi con sistema de tampón libre de Mg, para la amplificación de un amplio rango de productos de PCR, proporcionando resultado de alto rendimiento, incluyendofiabilidad y consistencia. Debe contener una TaqDNA polimerasa completa con actividad exonucleasa 5'->3'. Debe inlcuir un tampón de reacción tipo Green GoTaq, con un sistemsa de dos colorantes (azul y amarillo) que se separan durante la electroforesis para indicar el progreso de la migración, así como un compuesto que aumenta la densidad de las muestras para poder cargar las muestras en el gel sin necesidad de añadir colorante de carga. También debe incluir un tampón sin color para su uso cuando se requiere medir fluorescencia directa o absorbancia sin previa purifiación del DNA amplificado. Kit incluyendo la Taq polimerasa (20 x 500 unid), tampón coloreado (80 x 1 mL), tampón sin color (80 x 1 mL) y MgCl2 (60 x 1.2 mL) 18 Pág. 11 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 27 N2111 Solución de Inhibidores naturales de ribonucleasas extraídos de placenta humana. Debe inactivar un amplio espectro de RNasas (RNasaA, RNasa B, RNasa C y RNasa de placenta humana) y no inactivar RNasa T1, nucleasa S1, RNasa de Aspergillus, RNasa H o RNase ONE™ ribonucleasa. Debe ser compatible con el uso de otras enzimas (RNA polimerasa SP6, T7 o T3, ImProm-II™, transcriptasa inversa AMV o M-MLV y Taq DNA polimerasa). Aplicaciones: RT-PCR, para protección de los mRNA en las reacciones de síntesis de DNAc, transcripción/traducción in vitro, aumentar el rendimiento y la actividad de polisomas, para la mejora de la replicación de virus in vitro, la mejora de la traducción del RNA en sistemas homólogos. 2500 unidades con una concentración de 20 a 40 U/uL. Tampón de almacenamiento: HEPES-KOH 20 mM (pH 7,6 al 4ºC), KCl 50 mM, DTT 8 mM y glicerol (v/v) 50%. Formulación: la cantidad requerida de inhibidor de RNasas necesaria para inactivar 5 ng de RNasa A al 50 % se mide por la inhibición de la hidrólisis de Citidina 2,3´-ciclo Monofosfato por RNasa A. 15 28 N2115 Solución de Inhibidores naturales de ribonucleasas extraídos de placenta humana. Debe inactivar un amplio espectro de RNasas (RNasaA, RNasa B, RNasa C y RNasa de placenta humana) y no inactivar RNasa T1, nucleasa S1, RNasa de Aspergillus, RNasa H o RNase ONE™ ribonucleasa. Debe ser compatible con el uso de otras enzimas (RNA polimerasa SP6, T7 o T3, ImProm-II™, transcriptasa inversa AMV o M-MLV y Taq DNA polimerasa). Aplicaciones: RT-PCR, para protección de los mRNA en las reacciones de síntesis de DNAc, transcripción/traducción in vitro, aumentar el rendimiento y la actividad de polisomas, para la mejora de la replicación de virus in vitro, la mejora de la traducción del RNA en sistemas homólogos. 10000 unidades con una concentración de 20 a 40 U/uL. Tampón de almacenamiento: HEPES-KOH 20 mM (pH 7,6 al 4ºC), KCl 50 mM, DTT 8 mM y glicerol (v/v) 50%. Formulación: la cantidad requerida de inhibidor de RNasas necesaria para inactivar 5 ng de RNasa A al 50 % se mide por la inhibición de la hidrólisis de Citidina 2,3´-ciclo Monofosfato por RNasa A. 10 29 R7103 Enzima de restricción Sgf1 de Streptomyces fulvissimis. Inactivable por congelación a -70ºC. En tampón 10mM Tris-HCl (pH 7.4), 300mM KCl, 0.1% Thesit, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.5mg/ml BSA, 50% glicerol. Kit incluyendo 1 vial de 250 unidades (8-12 unidades/uL), tampón de reacción 10 X (1 mL) y BSA acetilada (150 uL). 1 30 V3941 X-Gal (5-Bromo-4-cloro-3-indolil-ßD-galactopiranósido). Peso molecular: 408.63 g/mol. Vial de 100 mg 1 31 V5280 Tripsina modificada (Grado de espectrometría de masas, tipo Trypsin Gold) usada para la digestión con tripsina de las proteínas a partir de geles 1D o 2D y digestión tríptica de solución de proteínas. Generada a partir de autolisis de tripsina de origen porcina para generar pseudotripsina. Los residuos de lisina están modificados mediante metilación reductora, produciendo una molécula altamente activa y estable que muy resistente a la digestión autolítica. Mejorada por el tratamiento TPCK seguida de una purificación por afinidad para eliminar la actividad de la quimiotripsina, y proporcionar una estabilidad que asegure hasta cinco ciclos de hielo-deshielo minimizando los reactivos sobrantes. Liofilizada (color blanco). Vial de 100 ug. Liofilizada en tampón de resuspensión de ácido acético 50 mM. 13 Pág. 12 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 32 Z6012 Sistema de purificación de RNA en minipreparaciones tipo ReliaPrep, debe permitir purificar RNA de hasta 100 células o 0.25 mg de tejido, con un protocolo sencillo factible en 30 minutos, sin utilizar fenol/cloroformo or beta-mercaptoetanol. Debe permitir realizar hasta 250 preparaciones. Kit para 250 preparaciones, incluyendo tubos de colección (250), minicolumnas (5x 50), tioglicerol (2 x 900 uL), solución de lavado de la columna (24 mL), agua libre de nucleasas (13 mL), tampón (150 mL), tubos de elución (5 x 50), solución de lavado de RNA (206 mL), tampón amarillo (11 mL), MnCl2 0.09M (2 x 750 uL), DNasa I liofilizada (3 viales). 3 Pág. 13 de 18 Lote 2: Suministro de Reactivos para Ensayos basados en Sistemas de Luciferasa Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 1 E1500 Kit para ensayos de cuantificación de luciferasa de luciérnaga y la cuantificación de reporter en células de mamíferos de forma extremadamente sensible y rápida. Debe contener el sustrato para el ensayo, un tampón de ensayo y un reactivo de lisis del cultivo celular, a una concentración aproximada de 5X. Debe proporcionar resultados lineales en un rango de 8 órdenes de magnitud de concentración de enzima. Kit para 100 reacciones incluyendo 1 vial de sustrato para el ensayo de la luciferasa, tampón de ensayo de luciferasa (10 mL) y reactivo para la lisis de cultivo celular 5X, a pH 4.6. 5 2 E1501 Kit para ensayos de cuantificación de luciferasa de luciérnaga y la cuantificación de reporter en células de mamíferos de forma extremadamente sensible y rápida. Debe contener el sustrato para el ensayo, un tampón de ensayo y un reactivo de lisis del cultivo celular, a una concentración aproximada de 5X. Debe proporcionar resultados lineales en un rango de 8 órdenes de magnitud de concentración de enzima. Paquete de 10 Kits para 100 reacciones incluyendo 1 vial de sustrato para el ensayo de la luciferasa, tampón de ensayo de luciferasa (10 mL) y reactivo para la lisis de cultivo celular 5X, a pH 4.6. 1 3 E1605 Luciferina de escarabajo (d-luciferina), en forma de sal monopotásica, sustrato para sistemas reporter de luciferasa de escarabajo. Fórmula empírica C11H7N2O3S2•K, peso molecular 318.4 (forma anhidra). Vial de 1 gramo 10 4 E1910 Kit para la cuantificación de la expresión génica por medio de sistemas reporter basados en la actividad de la luciferasa de luciérnaga (Photinus pyralis) y de Renilla (Renilla reniformis) para realizar dos ensayos de reporter a la vez. Debe tener la cantidad de tampón de lisis pasiva suficiente para preparar rápidamente los lisados celulares a partir de células en placas de luminometría de 96 pocillos, para 100 reacciones. 1 Kit para 100 reacciones, incluyendo 1 vial de sustrato de luciferasa liofilizado, 30 mL de tampón para lisis pasiva a concentración 5X, 10 mL de tampón, 200 ul de sustrato "Stop & Glo" y 10 mL de tampón "Stop & Glo". 9 5 E1960 Kit para la cuantificación de la expresión génica por medio de sistemas reporter basados en la actividad de la luciferasa de luciérnaga (Photinus pyralis) y de Renilla (Renilla reniformis) para realizar dos ensayos de reporter a la vez. Debe tener la cantidad de tampón de lisis pasiva para preparar rápidamente los lisados celulares a partir de células en placas de luminometría de 96pocillos, para 1000 reacciones Kit para 1000 reacciones, incluyendo 10 viales de sustrato de luciferasa, 1 botella de 30 mL de tampón para lisis pasiva, 10 x 10 mL de tampón II, 10 x 200 μl de sustrato "Stop & Glo" y 10 x 10 mL de tampón "Stop & Glo". 1 Pág. 14 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 6 E2920 Kit para la cuantificación de la expresión génica por medio de sistemas rerporter basados en la actividad de la luciferasa de luciernaga y Renilla que permite la cuantificación rápida y simple de una señal luminiscente estable a partir de dos genes reporter en una sola muestra a partir de células que no han sido pre-acondicionadas o pre-lisadas. Debe proporcionar un rango lineal para al menos 6 logs de concentración de enzima de cada reporter. Debe contener sustrato de luciferasa, tampón luciferasa, un sustrato Stop&Glo y un tampón Stop&Glo. La señal estable debe poder medirse hasta 2 horas después de la adición de los reacivos. Debe de tener un formato apropiado para ensayos en placas de 96 y 384 pocillos. 1 botella de 10 mL. 2 7 E2940 Kit para la cuantificación de la expresión génica por medio de sistemas rerporter basados en la actividad de la luciferasa de luciernaga y Renilla que permite la cuantificación rápida y simple de una señal luminiscente estable a partir de dos genes reporter en una sola muestra a partir de células que no han sido pre-acondicionadas o pre-lisadas. Debe proporcionar un rango lineal para al menos 6 logs de concentración de enzima de cada reporter. Debe contener sustrato de luciferasa, tampón luciferasa, un sustrato Stop&Glo y un tampón Stop&Glo. La señal estable debe poder medirse hasta 2 horas después de la adición de los reacivos. Debe de tener un formato apropiado para ensayos en placas de 96 y 384 pocillos. 1 botella de 100 mL. 1 8 G3580 Kit para ensayos colorimétricos homogéneos para determinar el número de células viables en ensayos de proliferación, citotoxicidad y quimiosensibilidad. El reactivo debe contener un un compuesto de tetrazolio (MTS) y un reactivo de acoplamiento de electrones (etosulfato de fenazina/PES), y la cantidad de formazan generado (proporcional a las células viables) se se detecta por medida de la absorbancia a 490 nm tras 1-4 horas de incubacón.Debe contener la cantidad suficiente para 1000 ensayos en placas multipocillo. 1 botella de 20 mL para 1000 reacciones. 10 9 G3582 Kit para ensayos colorimétricos homogéneos para determinar el número de células viables en ensayos de proliferación, citotoxicidad y quimiosensibilidad. El reactivo debe contener un un compuesto de tetrazolio (MTS) y un reactivo de acoplamiento de electrones (etosulfato de fenazina/PES), y la cantidad de formazan generado (proporcional a las células viables) se se detecta por medida de la absorbancia a 490 nm tras 1-4 horas de incubacón.Debe contener la cantidad suficiente para 1000 ensayos en placas multipocillo. 1 botella de 4 mL para 200 reacciones. 3 Pág. 15 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 10 G7570 Kit para la determinación del número de células viables en cultivo por un método luminiscente basado en la medida de la cantidad de ATP, para su uso en high throughput screening, ensayos de proliferación celular y de citotoxicidad, en placas de 96 o 384 pocillos sin requerir el lavado de las células o múltiples pipeteados. La señal de luminiscencia debe tener una vida media mayor de 5 horas. Aplicaciones: ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y viabilidad celular. Debe contener volumen suficiente para 100 ensayos en placas de 96 pocillos. Kit para 100 reacciones, incluyendo 1 vial del sustrato y una botella de 10 mL de tamón de reacción 1 11 G7571 Kit para la determinación del número de células viables en cultivo por un método luminiscente basado en la medida de la cantidad de ATP, para su uso en high throughput screening, ensayos de proliferación celular y de citotoxicidad, en placas de 96 o 384 pocillos sin requerir el lavado de las células o múltiples pipeteados. La señal de luminiscencia debe tener una vida media mayor de 5 horas. Aplicaciones: ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y viabilidad celular. Debe contener volumen suficiente para 1000 ensayos en placas de 96 pocillos. Kit para 1000 reacciones, incluyendo 10 viales del sustrato y 10 botellas de 10 mL de tampón de reacción 40 12 G7572 Kit para la determinación del número de células viables en cultivo por un método luminiscente basado en la medida de la cantidad de ATP, para su uso en high throughput screening, ensayos de proliferación celular y de citotoxicidad, en placas de 96 o 384 pocillos sin requerir el lavado de las células o múltiples pipeteados. La señal de luminiscencia debe tener una vida media mayor de 5 horas. Aplicaciones: ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y viabilidad celular. Debe contener volumen suficiente para 1000 ensayos en placas de 96 pocillos. Kit para 100 reacciones, incluyendo 1 vial del sustrato y una botella de 100 mL de tamón de reacción 8 13 G8091 Kit para la medición de actividad caspasa 3/7 utilizando un ensayo homogéneo luminiscente tipo Caspase-Glo 3/7. Debe incluir un substrato DEVD-aminoluciferina y una luciferasa termoestable, así como un tampón de lisis, para la realización del ensayo en formato homogéneo, alcanzando la máxima sensibilidad en 0.25-1 hora, permitiendo la lectura en modo batch durante 3 horas. Compatible con formatos de placa de 96 y 384 pocillos. Kit incluyendo 1 botella de sustrato y 1 botella de tampón (10 mL), suficiente para 100 ensayos en placa de 96 pocillos usando 100 uL de reactivo por ensayo. 1 14 G8202 Kit para la medición de actividad caspasa 8 utilizando un ensayo homogéneo luminiscente tipo Caspase-Glo 8. Debe inlcuir un substrato optimizado Z-LETD-aminoluciferina y una luciferasa termoestable, así como un tampón de lisis y un inhibidor de la proteasa (MG-132) para reducir el fondo, permitiendo la realización del ensayo en formato homogéneo, alcanzando la máxima sensibilidad en 0.5-1 hora. Compatible con formatos de placa de 96 y 384 pocillos. Kit incluyendo 1 botella de sustrato (liofilizado) y 1 botella de tampón (100 mL) y un vial de inhibidor MG-132 (300 uL), suficiente para 1000 ensayos en placa de 96 pocillos usando 100 uL de reactivo por ensayo. 1 Pág. 16 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 15 J1341 Kit para la realización de ensayos no-radioactivos de medición de la absorción de glucosa en células en cultivo, tipo Glucose Uptake-Glo, basado en la medida de la conversión de 2-deoxiglucosa en 2- deoxiglucosa-6-fosfato empleando un sistema de luciferasa que mide la producción de luciferina a partir de proluciferina por una reductasa dependiente de NADPH. Kit incluyendo reactivos para 50 reacciones en placas de 96 pocillos, incluyendo reactivo de luciferasa (5 mL), tampón de parada (15 mL), tampón de neutralización (15 mL), NADP+ 20 mM (50 ul), G6PDH (125 uL), reductasa (25 mL), sustrato de reductasa (55 uL), 2-deoxiglucosa 100 mM (250 uL), 2DG6P control (50 uL). 2 16 L4561 RNA de luciferesa control para la monitorización de ensayos de traducción in vitro Vial de 20 ug (1 mg/mL) 1 17 L4610 Sistema acoplado transcripción/traducción de lisado reticulocitos de conejo, para el estudio de interacciones proteína-proteína, protéina-ácidos nucleicos y expresión de proteínas, basado en el promotor T7. Debe permitir genera proteínas en 1 hora. Kit para 40 reacciones. Kit para 40 reacciones de traducción en (50 uL), incluyendo lisado de reticulocitos de conejo (5 x 200 uL), bufferde reacción (90 uL), T7 RNApolimerasa (2 x 30 uL), mezcla de aminoácidos 1 mM sin metionina (50 uL), sin leucina (50 uL) o sin cisteína (50 uL), reactivo de ensayo de luciferasa (250 uL), pocillos de ensayo de luciferasa (paquete de 3), acetato de magnesio (100 uL). 1 18 L4960 Sistema de lisado de reticulocito de conejo tratado con nucleasa para la traducción in vitro de mRNA y la caracterización de productos de mRNA, optimizado para la traducción y conteniendo un sistema de regeneración de energía, mezcla de tRNAs, hemina, KCl y acetato de Mg. El kit incluye además mezclas de aminoácidos y RNA de luciferasa de control. Kit conteniendo 5 viales de 200 uL de lisado, y mezclas de aminoácidos 1 mM sin metionina (50 uL), sin leucina (50 uL) y sin cisteína (50 uL), y RNA de luciferasa de control (10 uL) 2 19 V6611 Kit para la detección y cuantificación de la proporción de glutation GSH/GSSG utilizando un sistema basado en luminiscencia mediante la conversión de luciferina-Nten luciferina por una glutation-S- transferasa acoplada a la reacción de la luciferasa. El kit debe permitir hacer 100 reacciones. Kit para 100 reacciones conteniendo NEM 25 mM (50 uL), tampón de lisis 5x (1 mL), DTT 10 mM (250 uL), reactivo de detección de luciferina liofilizada, tampón de reconstitución con esteresa (10 mL), tampón de reacción de glutation (10 mL), luciferina-NT (100 uL), glutation 5mM (100 uL), glutation S-transferasa (500 uL). 1 Pág. 17 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 20 V9770 Kit enzimático para ensayos luminiscentes para medir la actividad del citocromo P450 CYP1A2 (para probar el efecto de drogas y nuevas entidades químicas). Kit para 1000 reacciones, incluye una preparación de membranas que contiene el enzima recombinante CYP1A2 de humano, sustrato luminogénico apropiado para el enzima (luciferin-ME), sistema de regeneración de NADPH, tampón de reacción, reactivo de detección de Luciferina y agua libre de luciferina. Las membranas están preparadas a partir de células de insecto infectadas con baculovirus, y contienen el citocromo humano P450 y la P450 reductasa. Además debe contener una fracción de membrana sin actividad P450, como control negativo. Kit para 1000 reacciones, incluyendo CYP1A2 + reductasa (500 uL, 1pmol/uL), membranas control (100 uL), reactivo de detección de luciferina, luciferina-ME 5 mM (1 mL), sistema de regeneración de NADPH (2.75 mL), tampón de reconstitución (50 mL), tampón fosfato 1 M (5 mL) y agua libre de luciferina (50 mL). 2 21 V9790 Kit enzimático para ensayos luminiscentes para medir la actividad del citocromo P450 CYP2C9 (para probar el efecto de drogas y nuevas entidades químicas). Kit para 1000 reacciones, incluye una preparación de membranas que contiene el enzima recombinante CYP2C9 de humano, sustrato luminogénico apropiado para el enzima (luciferin-H), sistema de regeneración de NADPH, tampón de reacción, reactivo de detección de Luciferina y agua libre de luciferina. Las membranas están preparadas a partir de células de insecto infectadas con baculovirus, y contienen el citocromo humano P450 y la P450 reductasa. Además debe contener una fracción de membrana sin actividad P450, como control negativo. Kit para 1000 reacciones, incluyendo CYP2C9 + reductasa (500 uL, 1pmol/uL), membranas control (100 uL), reactivo de detección de luciferina, luciferina-H 5 mM (1 mL), sistema de regeneración de NADPH (2.75 mL), tampón de reconstitución (50 mL), tampón fosfato 1 M (5 mL) y agua libre de luciferina (50 mL). 2 22 V9880 Kit enzimático para ensayos luminiscentes para medir la actividad del citocromo P450 CYP2C19 (para probar el efecto de drogas y nuevas entidades químicas). Kit para 1000 reacciones, incluye una preparación de membranas que contiene el enzima recombinante CYP2C19 de humano, sustrato luminogénico apropiado para el enzima (luciferin-H EGE), sistema de regeneración de NADPH, tampón de reacción, reactivo de detección de Luciferina y agua libre de luciferina. Las membranas están preparadas a partir de células de insecto infectadas con baculovirus, y contienen el citocromo humano P450 y la P450 reductasa. Además debe contener una fracción de membrana sin actividad P450, como control negativo. Kit para 1000 reacciones, incluyendo CYP2C19 + reductasa (500 uL, 1pmol/uL), membranas control (100 uL), reactivo de detección de luciferina, luciferina-H EGE 5 mM (1 mL), sistema de regeneración de NADPH (2.75 mL), tampón de reconstitución (50 mL), tampón fosfato 1 M (5 mL) y agua libre de luciferina (50 mL). 2 23 V9890 Kit enzimático para ensayos luminiscentes para medir la actividad del citocromo P450 CYP2D6 (para probar el efecto de drogas y nuevas entidades químicas). Kit para 1000 reacciones, incluye una preparación de membranas que contiene el enzima recombinante CYP2D6 de humano, sustrato luminogénico apropiado para el enzima (luciferin-ME EGE), sistema de regeneración de NADPH, tampón de reacción, reactivo de detección de Luciferina y agua libre de luciferina. Las membranas están preparadas a partir de células de insecto infectadas con baculovirus, y contienen el citocromo humano P450 y la P450 reductasa. Además debe contener una fracción de membrana sin actividad P450, como control negativo. Kit para 1000 reacciones, incluyendo CYP2D6 + reductasa (500 uL, 1pmol/uL), membranas control (100 uL), reactivo de detección de luciferina, luciferina-ME EGE 5 mM (1 mL), sistema de regeneración de NADPH (2.75 mL), tampón de reconstitución (50 mL), tampón fosfato 1 M (5 mL) y agua libre de luciferina (50 mL). 2 Pág. 18 de 18 Número Nº referencia fabricante Descripción Formato de Presentación Consumo Estimado (Uds) (Según formato de presentación) 24 V9910 Kit enzimático para ensayos luminiscentes para medir la actividad del citocromo P450 CYP3A4 (para probar el efecto de drogas y nuevas entidades químicas). Kit para 1000 reacciones, incluye una preparación de membranas que contiene el enzima recombinante CYP3A4 de humano, sustrato luminogénico apropiado para el enzima (luciferin-PPXE), sistema de regeneración de NADPH, tampón de reacción, reactivo de detección de Luciferina y agua libre de luciferina. Debe contener membranas preparadas a partir de células de insecto infectadas con baculovirus y que contengan el citocromo P450, la reductasa P450 y el citocromo b5 para CYP344. Kit para 1000 reacciones, incluyendo CYP3A4 + reductasa + b5 (500 uL, 1pmol/uL), membranas control (100 uL), reactivo de detección de luciferina, luciferina-PPXE 5 (2 x 15 uL), sistema de regeneración de NADPH A (2.75 mL), sistema de regeneración de NADPH B (600 uL), tampón de reconstitución (50 mL), tampón fosfato 1 M (5 mL), tampón Tris-HCl 2 M pH 7.5, 20X (1 mL) y agua libre de luciferina (50 mL). 2