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Transcripción y traducción: la expresión de la información genética Del ADN a las proteínas La actividad celular depende de la presencia y del correcto funcionamiento de las enzimas. La gran mayoría de las enzimas que intervienen en la actividad celular son proteínas. El funcionamiento de las enzimas depende de su estructura. La estructura de una enzima está determinada por la secuencia de aminoácidos. Un gen, una proteína (o una cadena polipeptídica) Cuando se inducen mutaciones en el moho Neurospora, algunos de los mutantes pierden la capacidad de sintetizar distintos aminoácidos. El cambio en un gen implica el cese de una ruta metabólica por la alteración de una enzima (Beadle y Tatum 1941). La información genética va del ADN a las proteínas (Crick 1957) ADN PROTEÍNAS PROTEÍNAS La expresión de la información genética El ARN (ácido ribonucleico) es el intermediario entre el ADN y su expresión molecular, las proteínas (Jacob y Monod, 1960). El ARN es una polímero de nucleótidos de cadena simple. En el ARN el uracilo reemplaza a la timina. Hay tres tipos de ARN involucrados en la expresión de la información genética: ARNm (ARN mensajero), ARNt (de transferencia) y ARNr (ribosomal o ribosómico). Diferencias entre ADN y ARN Un gen una cadena polipeptídica (o una molécula de ARN…) El "dogma" central de la genética molecular: "La información fluye del ADN al ARN y de éste a las proteínas". La replicación del ADN ocurre sólo una vez en cada ciclo celular, durante la fase S previa a la mitosis o a la meiosis. La transcripción y la traducción, sin embargo, ocurren repetidamente a través de toda la interfase del ciclo celular. RETROVIRUS ¿Cuatro nucleótidos para veinte aminoácidos? Las proteínas contienen 20 (22) aminoácidos diferentes, pero el ADN y el ARN contienen, cada uno, sólo cuatro nucleótidos distintos. Si un solo nucleótido "codificara" un aminoácido, entonces sólo cuatro aminoácidos podían ser especificados por las cuatro bases nitrogenadas. Si dos nucleótidos especificaran un aminoácido, entonces podría haber, usando todas las combinaciones posibles, un número máximo de 4 x 4, o sea 16 aminoácidos, lo cual es insuficiente para codificar los veinte aminoácidos. Por lo tanto, por lo menos tres nucleótidos en secuencia deben especificar cada aminoácido. Esto resulta en 4 x 4 x 4, o sea, 64 combinaciones posibles. El código genético consiste en el sistema de tripletes de nucleótidos en el ARNm («codones», copiados a partir del ADN) que especifica el orden de los aminoácidos en una proteína. El código genético: tripletes - aminoácidos De los 64 codones, 60 (61) especifican aminoácidos particulares. Los otros cuatro (tres) codones son señales que determinan la finalización de la cadena. Dado que los 60 (61) tripletes codifican para 20 (ó 22) aminoácidos, hay "sinónimos" como, por ejemplo, los seis codones diferentes para la leucina. trp Transcripción: ADN ARNm Las moléculas de ARNm se copian (se transcriben) de una de las dos cadenas de ADN (la cadena molde) según el mismo principio de apareamiento de bases que gobierna la replicación del ADN. Los ribonucleótidos, que están presentes en la célula como trifosfatos, se añaden al extremo 3' de la cadena en crecimiento de ARNm. El proceso es catalizado por la ARN polimerasa. Esta enzima opera de la misma forma que la ADN polimerasa, moviéndose en dirección 3' a 5' a lo largo de la cadena molde de ADN, sintetizando una nueva cadena de ribonucleótidos en la dirección 5' a 3'. Transcripción: ADN ARNm Cuando va a iniciar la transcripción, la ARN polimerasa se une al ADN en una secuencia específica denominada secuencia promotora o promotor. El proceso continúa hasta que la enzima encuentra otra secuencia especial, la señal de terminación. En este momento, la polimerasa se detiene y libera la cadena de ARNm recién sintetizada . En eucariotas cada molécula de ARNm corresponde a un gen. Luego de transcripto, el ARNm sufre modificaciones, incluyendo la adición de un nucleótido modificado al extremo 5', la eliminación de intrones y la fusión de los exones. Los cortes y fusiones pueden variar y dar entonces distintos ARNm y distintas proteínas. Exones: región codificante del gen. Transcripción: ADN ARNm ADN A – G – C – G – G – T – A – C – G ARN U – C – G – C – C – A – U – G – C Transcripción: ADN ARNm La doble hélice de ADN se abre en el punto de unión de la ARN polimerasa. Los ribonucleótidos se ensamblan en dirección 5' a 3' a medida que la enzima lee la cadena molde de ADN en la dirección 3' a 5'. Según el gen se transcribe una cadena o la otra, nunca las dos. La cadena de ARNm recién sintetizada es complementaria, no idéntica, a la cadena molde. Su secuencia, sin embargo, sí es idéntica a la cadena inactiva de DNA (no transcripta), excepto en lo que respecta al reemplazo de timina (T) por uracilo (U). (no requiere cebador) Comienza en un promotor (TATA) Traducción: ARNm proteínas La síntesis de proteínas ocurre en los ribosomas, que consisten de dos subunidades, una grande y una pequeña, cada una formada por ARN ribosómico (ARNr) y proteínas. Para la síntesis de proteínas, también se requieren moléculas de ARN de transferencia (ARNt). Las moléculas de ARNt pueden llevar un aminoácido en un extremo y tienen un triplete de bases, el anticodón en el extremo opuesto de la molécula. Hay al menos un tipo de molécula de ARNt para cada tipo de aminoácido presente en las células. ARN de transferencia (ARNt) Aminoácido Traducción: ARNm proteínas La molécula de ARNt “lee” los codones (tripletes de nucleótidos) del ARNm y añade el aminoácido “correcto” al polipéptido que se está sintetizando. En procariotas la traducción se inicia mientras se está sintetizando el ARNm. En eucariotas sólo ocurre cuando la transcripción ha finalizado y el ARNm sale del núcleo. La síntesis de proteínas (traducción) tiene tres etapas: iniciación, elongación y terminación. Iniciación: se forma un complejo entre el ARNm, la subunidad menor del ribosoma y un ARNt iniciador que lleva un aminoácido modificado fMet. Elongación: los ARNt unidos al aminoácido correspondiente (aminoacil ARNt), a proteínas (factor de elongación) y a GTP ocupan, sucesivamente, el sitio A del ribosoma. La enzima peptidiltransferasa cataliza la formación de los enlaces peptídicos. Terminación: al final de la secuencia que codifica para la proteína el ARNm incluye un codón de terminación (UAG, UAA o UGA). No existen ARNt con un anticodón complementario (pero…), de manera que la síntesis del polipéptido se detiene. El factor de liberación altera la peptidiltransferasa y el polipéptido se libera. Proteínas de uso interno y de exportación En eucariotas la síntesis de proteínas comienza siempre en ribosomas libres del citoplasma. En el caso de las proteínas que la célula sintetiza para exportar o para formar parte de la membrana plasmática, luego de iniciada la síntesis son dirigidas a los ribosomas del RER.