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UNIVERSIDAD CENTRAL Dr. José Luis Gonzales Flores COCHABAMBA - BOLIVIA ASIGNATURA: Microbiología I CARRERA (S): Medicina CÓDIGO: MED933 SEMESTRE: 3er TURNO: Diurno CARGA HOR.: 114 MODALIDAD: PRESENCIAL PRE-REQUISITOS: GENÉTICA AREAS DE COORDINACIÓN CURRICULAR PROGRAMACIÓN SEMANAL VERTICAL HORIZONTAL DIA HORARIO AULA 1) Fisiologia I 1) Fisiologia II Lunes 14:00-18:40 5.3 2) Bioquimica I 2) Bioquimica II Martes 14:00-17:10 5.3 3) 3) Microbiología II 4) 4) 5) 6) NOMBRE DEL DOCENTE: Dr. José Luis Gonzales Flores PROFESIÓN: BIOQUIMICO FARMACEUTICO ESPECIALIDAD(ES): Maestría en Microbiología Telf./celular: 4790629 - 70341755 email : jlgonzalesflores@yahoo.com JAWETZ, Melnick y Adelberg’s. Microbiología Médica, LANGE Editorial: McGraw-Hill. 27 edición. Año 2016. MURRAY, Rosenthal, Pfaller. Microbiología Medica, Editorial ELSEVIER S.A, Edición Octava, Barcelona, España. 2017. BIBLIOGRAFÍA TEMA 1 EL MUNDO MICROBIANO Criterios-Estándares Describe los conceptos sobre mundo microbiano. Explica la relación de la microbiología y el medio ambiente. Contenido temático Introducción al mundo microbiano Microbiología y medio ambiente Microbiología y Biología Molecular TEMA 2 ESTRUCTURA CELULAR BACTERIANA Criterios-Estándares Describe las características de la estructura bacteriana. Explica la estructura y funciones que cumple la pared celular bacteriana. Explica las funciones que cumple la membrana celular bacteriana, Ribosomas, Nucleoide. Describe el fundamento de las tinciones microbianas. Contenido temático Estructura de células eucariotas Estructura de células procariotas Nucleoide Estructuras citoplasmáticas Envoltura celular Membrana celular Pared celular bacteriana Capsula y glucocaliz Flagelos, pilis, endosporas Tinciones MICROBIOLOGIA Bacteriología Virología Micología Parasitología BACTERIOLOGIA Las células son las unidades fundamentales de los organismos vivos, desde la bacteria más pequeña hasta las plantas y animales de mayor tamaño. Las bacterias, las células de menor tamaño, son visibles tan sólo con la ayuda de un microscopio. Mientras que las bacterias más pequeñas (Chlamydia y Rickettsia) miden tan sólo 0,1 - 0,2 (um. de diámetro, las más grandes pueden tener una longitud de muchas micras. BACTERIOLOGIA PRINCIPIOS BIOLÓGICOS La diversidad biológica es más evidente en los microorganismos que en ninguna otra parte. La bioquímica, biología molecular y genética proporcionan los recursos necesarios para el análisis de los microorganismos. A su vez, la microbiología amplía el horizonte de estas disciplinas científicas. BACTERIOLOGIA PRINCIPIOS BIOLÓGICOS Mutualismo, esto es, algo que beneficia a todas las partes que contribuyen. En biología, el mutualismo se denomina simbiosis, que es una relación continua de distintos organismos. Cuando el intercambio opera principalmente en beneficio de una de las partes, la relación se describe como parasitismo, en la que el hospedador proporciona el beneficio principal al parásito. BACTERIOLOGIA PRINCIPIOS BIOLÓGICOS Las propiedades de los virus los colocan en un sitio aparte de las criaturas vivientes. Las eucariotas y procariotas son microorganismos puesto que contienen todas las enzimas necesarias para su multiplicación y poseen el equipo biológico necesario para la producción de energía metabólica. Por lo tanto, éstos se distinguen de los virus, que dependen de las células hospedadoras para estas funciones necesarias. MÉTODOS ÓPTICOS MICROSCOPIO DE LUZ MICROSCOPIO ELECTRÓNICO MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE MICROSCOPIA LASER CONFOCAL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA MICROSCOPIO DE SONDA DE BARRIDO MICROBIOLOGIA Bacteriología Virología Micología Parasitología Bacteriología DIFERENCIAS ENTRE EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS Bacteriología EUCARIOTAS Bacteriología EUCARIOTAS Núcleo: DNA lineal (doble hélice) Estructuras citoplásmicas Retículo endoplásmico Aparato de Golgi Plástidos (mitocondrias y cloroplastos) Lisosomas Peroxisoma Complejo citosqueleto (microtúbulos, microfilamentos y filamentos intermedios) Bacteriología DIFERENCIAS ENTRE EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS Bacteriología PROCARIOTAS Bacteriología ULTRAESTRUCTURA DE LAS BACTERIAS MORFOLOGIA BACTERIANA Bacteriología ULTRAESTRUCTURA DE LAS BACTERIAS MORFOLOGIA BACTERIANA Bacteriología PROCARIOTAS Bacteriología PROCARIOTAS ENVOLTURA CELULAR Membrana celular PARED CELULAR CÁPSULA Y GLUCOCÁLIZ FLAGELOS PILI (Fimbrias) NUCLEOIDE ESTRUCTURAS CITOPLÁSMICAS Bacteriología PROCARIOTAS •Llena de fibrillas de DNA (Una sola molécula circular continua). •Cantidades menores de RNA, RNA polimerasa y otras proteínas. •Puede considerarse que es un cromosoma haploide. •Ausencia de membrana nuclear. Feulgen (Positivo): indica presencia de DNA. NUCLEOIDE Bacteriología PROCARIOTAS NUCLEOIDE Bacteriología PROCARIOTAS •Carecen de plástidos autónomos (Mitocondrias y cloroplastos), Carecen de microtubulos Presentan: Pigmentos fotosintéticos (carotenoides, bacterioclorofila) Gránulos que almacenen materiales de reserva: Fuente: Nitrógeno, azufre o fósforo es limitada. Almidón y glucógeno Reservas de fosfato inorgánico (Síntesis de ATP). ESTRUCTURAS CITOPLÁSMICAS ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULAR GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULAR ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULAR GRAM POSITIVAS Bacterias grampositívas Estructura Constituyentes químicos Peptidoglucano Cadenas de N-acetilglucosamina y ácido N-acetilmurámico, unidas mediante un puente peptídico. Ácido teicoico Fosfato de polirribitol o glicerol-fosfato. Acido teicoico de la pared: unidos al peptidoglucano. Acido teicoico de la membrana: (Acido lipoteicoicounido). Ácido teicurónico Polimeros N-acetilmanosurónico o ácido D-glucosurónico) en lugar de ácido fosfórico. PARED CELULAR GRAM POSITIVAS ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULAR GRAM POSITIVAS Bacteria grampositiva posee una pared celular gruesa. Consta de varias capas, formada principalmente por peptidoglucano que rodea la membrana citoplásmica. El peptidoglucano es un exoesqueleto en forma de malla, es lo suficientemente poroso como para permitir la difusión de los metabolitos a la membrana plasmática. El peptidoglucano es un elemento clave para la estructura, la replicación y la supervivencia de las células. ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULAR GRAM POSITIVAS ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULAR GRAM POSITIVAS Peptidoglucano puede degradarse mediante el tratamiento con lisozima, esta enzima es capaz de degradar el esqueleto de glucano del peptidoglucano. La célula grampositiva puede poseer también otros componentes, como los ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos complejos (generalmente denominados «polisacáridos C»). Durante una infección, el peptidoglucano puede interferir en la fagocitosis y estimular diversas respuestas inmmunitarias, como procesos pirogénicos. ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULARGRAM POSITIVAS El término ácido teicoico abarca la totalidad de la pared celular, membrana o polímeros capsulares que contienen glicerofosfato o residuos de ribitol fosfato. Hay dos tipos de ácidos teicoico: Acido teicoico de la pared que tiene unión covalente con los peptidoglucanos. Acido teicoico de la membrana que tiene unión covalente con glucolípidos de la membrana. Como estos últimos tienen asociación estrecha con los lípidos, también se han denominado ácidos lipoteicoicos. En conjunto constituyen una red polianiónica o matriz que proporciona funciones relacionadas con la elasticidad, porosidad, fuerza tensil y propiedades electrostáticas de la envoltura. ÁCIDOS TEICOICO Y TEICURÓNICO PARED CELULAR GRAM POSITIVAS La mayor parte de las paredes celulares de las bacterias grampositivas contienen cantidades considerables de ácidos teicoico y teicurónico, los cuales pueden constituir hasta 50 % del peso seco de la pared y 10% del peso seco de la totalidad de la célula. Acidos teicoicos constituyen la principal superficie de los antígenos de bacterias grampositivas y su accesibilidad para los anticuerpos. Gran parte del ácido teicoico puede encontrarse entre la membrana citoplásmica y la capa del peptidoglucano. ÁCIDOS TEICOICO Y TEICURÓNICO PARED CELULAR GRAM POSITIVAS – GRAM NEGATIVAS CAPA DE PEPTIDOGLUCANO Grampositivas pueden haber hasta 40 capas de peptidoglucano, el cual representa más de 50% del material de la pared celular. Gramnegativas sólo existen 1 o 2 capas que constituyen de 5 a 10% del material de la pared. PARED CELULAR GRAM NEGATIVAS Bacterias gramnegativas Estructura Constituyentes químicos Peptidoglucano Versión más delgada del peptidoglucano que se encuentra en las bacterias grampositivas. Espacio periplásmico Enzimas que participan en los mecanismos de transporte, degradación y síntesis. Membrana externa Fosfolípidos con ácidos grasos saturados Proteínas Porinas, lipoproteínas, proteínas de transporte Lipopolisacárido Lípido A, polisacárido central (core), antígeno 0 PARED CELULAR GRAM NEGATIVAS ENVOLTURAS CELULARES ESTRUCTURAS DE LAS MEMBRANAS BACTERIANAS PARED CELULAR GRAM NEGATIVAS Pared celular gramnegativa contiene dos capas situadas en el exterior de la membrana citoplásmica. Inmediatamente por fuera de la membrana citoplásmica se encuentra una delgada capa de peptidoglucano. NO contiene ácidos teicoicos ni lipoteicoicos. En la parte externa de la capa de peptidoglucano se halla la MEMBRANA EXTERNA, la cual es exclusiva de las bacterias gramnegativas. PARED CELULAR GRAM NEGATIVAS La zona entre la superficie externa de la membrana citoplásmica y la superficie interna de la membrana externa se conoce como ESPACIO PERIPLÁSMICO. Este espacio es un compartimento que contiene enzimas hidrolíticas importantes para la degradación (proteasas, fosfatasas, lipasas, nucleasas y enzimas metabolizadoras de hidratos de carbono (Ej. betalactamasa). Además, contiene también componentes de los sistemas de transporte de azúcares. ENVOLTURAS CELULARES ESTRUCTURAS DE LAS MEMBRANAS BACTERIANAS PARED CELULAR GRAM NEGATIVAS PARED CELULAR GRAM NEGATIVAS La membrana externa posee una configuración asimétrica y es una bicapa lipídica. La zona interna de esta membrana externa contiene los fosfolípidos. La zona externa está formada fundamentalmente por una molécula anfipática (tanto hidrófobas como hidrófilas) denominada lipopolisacárido (LPS). El LPS también es conocido como endotoxina y constituye un potente estimulador de las respuestas inmunitarias. El lipopolisacárido se encarga de activar a los linfocitos B y de inducir la liberación de interleucina-1, interleucina-6, factor de necrosis tumoral y otros factores por parte de los macrófagos, las células dendríticas y otras células. ENVOLTURAS CELULARES PARED CELULAR GRAM NEGATIVAS PORINAS, que forman poros, permiten la difusión a través de la membrana de moléculas hidrófilas. Estas interacciones producen una membrana rígida y fuerte que puede verse afectada por la acción de antibióticos. La alteración de la membrana externa debilita a la bacteria y favorece el paso de moléculas hidrófobas de gran tamaño. PARED CELULAR GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS ENVOLTURAS CELULARES El ribosoma bacteriano consta de dos subunidades 3OS y 5OS que forman un ribosoma 70S. Las proteínas y el ARN del ribosoma bacteriano constituyen un señalado objetivo de los fármacos antibacterianos. Por otra parte la ausencia de membrana nuclear simplifica las necesidades y los mecanismos de control de la síntesis de proteínas, que conlleva el acoplamiento de los procesos de transcripción y de traducción; en otras palabras, los ribosomas se fijan al ARNm y fabrican proteínas a medida que se está sintetizando el ARNm aún unido al ADN. RIBOSOMAS La membrana celular bacteriana, también denominada membrana Citoplásmica. Es una “unidad de membrana” típica compuesta por fosfolípidos y hasta 200 diferentes tipos de proteínas. Se diferencia de las células eucariotas por la ausencia de esteroles. Algunas membranas celulares están constituidas por una monocapa de lípidos formada por lípidos grandes con éteres de glicerol en ambos extremos. MEMBRANA CELULAR MEMBRANA CELULAR Tapizada de filamentos proteicos tipo actina, participan en la determinación de la forma de la bacteria y el lugar de formación del tabique en la división celular. Transporte y la producción de energía. Contiene proteínas de transporte, permiten la captación de metabolitos y liberación, de otras sustancias, así como bombas de iones y enzimas. Contiene proteínas de transporte, permiten la captación de metabolitos y liberación, de otras sustancias, así como bombas de iones y enzimas. MEMBRANA CELULAR 1.- Permeabilidad selectiva y transporte de solutos. 2.- Transporte de electrones y fosforilación oxidativa en especies aerobias. 3.- Excreción de exoenzimas hidrolíticas. 4.- Transporte de enzimas y moléculas que participan en la biosíntesis de DNA, polímeros de la pared celular y lípidos de la membrana. 5.- Portar receptores y otras proteínas quimiotácticas y otros sistemas sensoriales de transducción. Las principales funciones de la membrana citoplásmica son: PERMEABILIDAD SELECTIVA Y TRANSPORTE DE SOLUTOS La membrana citoplásmica forma una barrera hidrófoba impermeable a la mayor parte de las moléculas hidrofílicas. Sin embargo, existen varios mecanismos (sistemas de transporte) que permiten que la célula transporte nutrientes hacia el interior de la misma y productos de desecho hacia el exterior. Hay tres mecanismos de transporte generales que participan en el transporte de membrana: Transporte pasivo. Transporte activo Translocación de grupo. TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA Los citocromos y otras enzimas y componentes de la cadena respiratoria incluyen ciertas deshidrogenasas que se ubican en la membrana celular. La membrana celular bacteriana es un análogo funcional a la membrana mitocondrial, una relación que muchos biólogos han considerado como la base para la teoría de que las mitocondrias evolucionaron a partir de bacterias simbióticas. Todos los organismos que dependen de polímeros orgánicos macromolecularescomo fuente energética (Ej. proteínas, polisacáridos, lípidos), excretan enzimas hidrolíticas que desdoblan los polímeros hasta subunidades lo suficientemente pequeñas para penetrar la membrana celular. Las bacterias (grampositivas como gramnegativas) las secretan directamente al medio externo o en el espacio periplasmático entre la capa de peptidoglucano y la membrana externa de la pared celular en el caso de las bacterias gramnegativas. Se han descrito seis vías de secreción de proteínas en las bacterias: sistemas de secreción tipos I, II, III, IV, V y VI EXCRECIÓN DE EXOENZIMAS HIDROLÍTICAS Y PATOGENIA DE LAS PROTEÍNAS. EXCRECIÓN DE EXOENZIMAS HIDROLÍTICAS Y PATOGENIA DE LAS PROTEÍNAS. FUNCIONES DE BIOSÍNTESIS La membrana celular es el sitio de los lípidos transportadores sobre los cuales se ensamblan las subunidades de la pared celular, así como de la biosíntesis de las enzimas de la pared celular. Las enzimas para la síntesis de fosfolípidos también se ubican en la membrana celular. SISTEMAS QUIMIOTÁCTICOS Las sustancias con capacidad de atracción y repulsión se unen a receptores específicos en la membrana bacteriana. Hay al menos 20 quimiorreceptores diferentes en la membrana de Escherichia coli, algunos de los cuales también actúan como el primer paso en el proceso de transporte. PROTOPLASTOS, ESFEROPLASTOS Y FORMAS L La eliminación de la pared bacteriana puede lograrse con hidrólisis con lisozimas o al bloquear la síntesis de peptidoglucano con un antibiótico como penicilinas. En los medios de cultivo con protección osmótica, tales tratamientos liberan protoplastos en las células bacterianas grampositivas y esferoplastos de las gramnegativas. Si tales células son capaces de crecer y dividirse, se denominan formas L, y son difíciles de cultivar, por lo común requieren un medio de cultivo sólido con agar, además de encontrarse en un medio con la concentración osmótica adecuada. PROTOPLASTOS, ESFEROPLASTOS Y FORMAS L Las formas L se producen con mayor facilidad con la administración de penicilina que con lisozimas, lo que sugiere la necesidad de peptidoglucanos residuales. Algunos géneros bacterianos producen formas L de manera espontánea. La formación espontánea o inducida por antibióticos de formas L en el hospedador puede producir infecciones crónicas, en la cual los microorganismos persistentes son secuestrados en regiones protegidas del cuerpo. Como las infecciones por formas L son relativamente resistentes al tratamiento con antibióticos, constituyen problemas especiales en la quimioterapia. CÁPSULA Y GLUCOCÁLIZ • Muchas bacterias sintetizan grandes cantidades de un polímero extracelular (polisacárido), cuando se desarrollan en su ambiente natural. • El polímero extracelular se sintetiza por enzimas localizadas en la superficie externa de las células bacterianas. CÁPSULA Y GLUCOCÁLIZ La cápsula contribuye a la capacidad de invasión de la bacteria patógena; las células encapsuladas están protegidas de la fagocitosis a menos que estén cubiertas con anticuerpos anticapsulares. El glucocáliz participa en la adherencia bacteriana a las superficies en su entorno, lo que incluye células hospedadoras vegetales y animales. Como las capas de polisacáridos externas se unen a una cantidad significativa de agua, la capa de glucocáliz puede participar en la resistencia a la desecación. • Son apéndices filiformes compuestos en su totalidad por proteína. Miden de 12 a 30 nm de diámetro. • Son los órganos de la locomoción. Un flagelo bacteriano está constituido por varios millares de moléculas de una subunidad proteínica denominada flagelina. Son altamente antigénicas. Se conocen tres tipos de ordenamientos: • Monotrico (flagelo polar único) • Lofotrico (flagelos polares múltiples) • Perítrico (flagelos distribuidos en la totalidad de la célula) FLAGELOS FLAGELOS • Pili (del latín, “pelos”) o fimbrias (del latín, “flecos”). Son apéndices rígidos en la superficie (Gramnegativas). • Son más cortos y más delgados que los flagelos. Constituidos por subunidades proteínicas estructuradas llamadas pilinas. • Las fimbrias de bacterias diferentes son distintas antigénicamente e inducen la formación de anticuerpos por el huésped. PILI (Fimbrias) Característica taxonómica importante de las bacterias es su respuesta a la tinción de Gram. La base de la reacción diferencial de Gram es la estructura de la pared celular. TINCIONES TINCIÓN DE GRAM TINCIÓN DE GRAM
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