PRACTICA 9 BIO

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INSTITUTO TECNOLOGICO DE ZACATEPEC 
 
Nombre del laboratorio: Laboratorio de Bioquímica 
Numero de práctica: 9 
Nombre de la práctica: Determinación de azúcares 
reductores. 
Fecha de entrega del reporte: 7 de Mayo del 2018 
Integrantes: 
 Rangel Ramos Rocío Esther 100% 
 Rodríguez Guevara Alan 100% 
 Rodríguez Noguerón Ricardo 100% 
 Batalla López Alan Joseph 100% 
 Medrano Nava María Teresa 100% 
 
 
INTRODUCCION: 
La determinación de azúcares totales (simples) es lo que se requiere en la realización de dicha 
práctica ya que está nos dirá la cantidad adecuada del contenido en nuestra jugó. Éstos producen 
alzas bruscas de glicemia posteriormente a la digestión. 
Las azúcares totales son aquellos tales como los monosacáridos (glucosa, fructosa, galactosa, 
manosa, etc.) y algunos disacáridos (sacarosa, lactosa, maltosa, trehalosa, etc.). Para reducir 
los azúcares totales se debe seleccionar los ingredientes bajos o libres de azúcares totales y 
reemplazarlo por otro tipo de endulzantes. 
 
OBJETIVO GENERAL: 
Analizar y observar el contenido de azúcares totales en el jugo. 
 
MARCO TEORICO: 
En presencia de ácido sulfúrico del reactivo de Antrona, los carbohidratos experimentan 
deshidratación convirtiéndose en furfural 6-hidroximetilfurfural. Estos productos pueden 
condensarse con aminas aromáticas, fenoles, antrona, etc; produciendo compuestos coloreados. 
La formación del furfural y sus derivados acomplejados con estas sustancias puede utilizarse 
como método cualitativo y cuantitativo para estimar azucares, ya que la intensidad de color 
desarrollado durante la condensación va a estar en la función de la concentración de carbohidrato 
presente en la muestra. 
Los polisacáridos por acción del ácido son primeramente hidrolizados a monosacáridos los 
cuales se deshidratan formando furfural y hidroximetilfurfural. Estos anteriormente se condensan 
con la antrona generando complejos coloreados. 
La cuantificación de azucares se hace en base al coloreado desarrollado por la muestra, 
utilizando espectrofotómetros y fotocolorímetros para determinar la intensidad o la energía de la 
luz que ha pasado a través de la celda y tubo de fotocolorímetro contenido en la solución 
coloreada. Para esta determinación se debe fiar un valor de longitud de onda que es donde el 
complejo colorido muestra en su máxima absorción y además disponer de un blanco para calibrar 
el aparato, esta solución solamente contiene agua destilada y reactivo de antrona sometido al 
protocolo indicado. 
La cantidad de luz que absorbe la muestra se denomina absorbancia, y la luz que pasa a través 
de la solución se llama transmitancia. Para cuantificar la cantidad de azúcar presente en una 
muestra primeramente se prepara una curva de calibración con los valores de absorbancia 
mostrados por distintas soluciones de concentración conocida. Estos valores se ajustan a una 
recta usando regresión lineal y con la ecuación de la recta se determina la concentración de 
azúcar según haya sido el valor de absorbancia ue mostro. 
 
 
 
 
 
 
MATERIALES 
 Vasos de precipitado 
 Matraces Erlenmeyer 
 Agitador de vidrio 
 Pipetas 
 Probetas 
 Tubos de ensayo 
 Perilla 3 vías 
 Piceta 
 Espátula de acero 
 Vidrios de reloj 
 Celda para espectrofotómetro 
 Gradilla roja 
 Micropipeta 
 Caja de puntas azules 
 Matraces aforados 
 Barra de agitación magnética 
 Agitador magnético 
 Extractor de barras magnéticas 
 Termómetro 
 Guantes de látex 
 Jeringa para pipetear 
 Protector facial 
EQUIPO 
 Balanza analítica 
 Espectrofotómetro 
 Baño María Eléctrico 
 Vortex 
REACTIVOS 
 Dextrosa anhidra 
 Antrona 
 Ácido sulfúrico 
 Acetona 
 
 
PROCEDIMIENTO 
Se lavó el material de manera meticulosa, finalizando el lavado con un enjuague con agua 
destilada; se dejó secar el material mientras se continuó con la limpieza de la mesa de trabajo. 
Se inició con la preparación de la disolución de Antrona y ácido sulfúrico usando el material de 
protección necesario para su manipulación; se tomaron 180 mL de ácido sulfúrico y se le agrego 
0.36 g de Antrona sólida, los reactivos fueron colocados en un recipiente color ámbar para evitar 
su reacción. La mezcla se agito de manera constante hasta obtener una solución homogénea. 
Para la preparación de la solución problema se usó un jugo comercial; en un tubo de ensayo se 
agregó 1 mL de jugo con 9 mL de agua destilada, en el siguiente tubo se vertió 1 mL de la 
solución del primer tubo y 9 mL de agua destilada. Se repitió este proceso con otros dos tubos 
de ensayo, y se usaron los últimos dos tubos como muestras problema (1/1000 y 1/10000). Para 
la elaboración de la solución madre se pesó 0.25 g de glucosa y se llevó a un volumen de 50 mL, 
se tomó una alícuota de 0.5 mL y en un matraz aforado se llevó a un volumen final de 50 mL. Se 
comenzó a realizar las diferentes soluciones a diferentes concentraciones, agregando a los tubos 
de ensayo un volumen de la solución madre y de agua destilada. Cuando se concluyó con la 
preparación de los tubos de ensayo se agregó a cada uno 3 mL de Antrona y se agitó en el 
vortex. Se llevaron los tubos a un baño de hielo por 10 minutos y, posteriormente, se llevó a un 
baño maría a una temperatura de 80-90 °C durante 10 minutos. Se concluyó con la lectura de 
las absorbancias de todas las soluciones a 625 nm en el espectrofotómetro. 
 
MEMORIA FOTOGRÁFICA 
 
 
 
Se lavó y seco de manera meticulosa todo el material de 
laboratorio. 
 
 
 
 
 
 
 
Pipeteo del jugo comercial para preparación de muestras 
problemas. 
 
 
 
 
 
 
 
Fig. 1. Material usado en la 
práctica. 
Fig. 2. Jugo comercial. 
 
 
 
Preparación de la solución madre en un matraz aforado de 50 mL. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tubos de ensayo con las soluciones, después del 
baño en hielo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Se agitó en el vortex los tubos de ensayo hasta obtener una 
mezcla homogénea. 
 
 
 
 
 
 
Fig. 3. Solución madre. 
 
ráctica. 
Fig. 4.1. Agitación de los tubos 
de ensayo. 
Fig. 4. Tubos de 
ensayo. 
 
ráctica. 
 
 
Se realizó el baño maría de los tubos de ensayo 
simultáneamente y tomando el tiempo de 10 minutos. 
 
 
 
 
 
 
 
Medición de las absorbancias a 625 nm de todos los tubos de 
ensayo. 
 
 
 
 
 
RESULTADOS: 
Solución 
Concentración 
[g/L] (x) 
Volumen de 
solución 
madre 
Volumen de agua 
destilada (mL) 
Absorbancia 
(y) 
Blanco 0 0 1.5 0 
1 0.005 0.15 1.35 0.063 
2 0.01 0.30 1.20 0.236 
3 0.015 0.45 1.05 0.363 
4 0.02 0.60 0.90 0.628 
5 0.025 0.75 0.75 0.564 
6 0.03 0.90 0.60 0.704 
7 0.035 1.05 0.45 0.838 
8 0.04 1.20 0.30 0.846 
9 0.045 1.35 0.15 0.858 
10 0.05 1.50 0 1.160 
Muestra 
Problema 1 
X1 1.5 mL de muestra problema 1 0.282 
Muestra 
problema 2 
X2 1.5 mL de muestra problema 2 1.590 
Fig. 4.2. Baño María de los 
tubos de ensayo 
Fig. 5. Espectrofotómetro. 
 
Ecuación: 
Y=0.0416+20.8145X 
X1= 0.0155 g/L X2=0.0783 g/L 
 
CONCLUSIONES: 
Con esta práctica observamos las diferentes absorbancias de cada muestra diluida con Antrona, 
se vio un incremento irregular conforme a cada muestra con un concentrado mayor hasta 
alcanzar la última muestra pasando por varias milésimas a las anteriores. 
 
BIBLIOGRAFIA: 
 Juan Antonio Rodriguez Arzave. (1987). manual de prácticas de bioquimica. S/F, de 
facultad de ciencias biologicas Sitio web: 
http://cdigital.dgb.uanl.mx/la/1020111502/1020111502_001.pdf 
 Rodríguez-Gámez, Odalys; Vilasó-Cadre, Javier E.; Aguilera-Rodríguez, Isabel; 
PérezSilva, Rosa M.; Ábalos-Rodríguez, Arelis. (2013). Validación por verificación del 
método colorimétrico de la antrona para la cuantificación de ramnolípidos. S/F, de Revista 
Cubana de Química Sitio web: http://www.redalyc.org/pdf/4435/443543736004.pdf