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Resumen- La vinificación se produce por la fermentación de los azúcares contenidos en las frutas utilizadas, acción que se realiza por levaduras. El proceso se realiza en ausencia de oxígeno. Esta fermentación alcohólica se lleva a cabo por el medio de las levaduras que se encuentran en la superficie de las moras que al quedarse sin aire van metabolizando el azúcar en alcohol y gas carbónico, el medio de cultivo utilizado es la combinación del Kiwi y el azúcar; GLUCOSA → ALCOHOL + GAS CARBÓNICO (CO2) Esta fermentación también es impulsada en gran medida por inoculación de una sola cepa pura de Saccharomyces Cerevisiae, que se añade al mosto de kiwi, después de la molienda, para asegurar un mayor control de la vinificación, y disminuir el riesgo de deterioros por microorganismos. Industrialmente el vino de kiwi no es muy explotados, ya que lo que más se consume es el vino de uva. Pero, a nivel artesanal se puede intentar hacer este tipo de bebidas, con un equipo mínimo y tratando de aplicar los principios básicos de esta técnica para tener un vino de buena calidad. Finalmente el vino de kiwi establecerá la cinética de producción de CO2, así también la determinación de la ecuación estequiometria del proceso de producción y el diseño del biorreactor. Palabras Clave: Vinificación, cinética, producción, levaduras, proceso. Abstract- Vinification is produced by the fermentation of the sugars contained in the fruits used, an action that is carried out by yeasts. The process is carried out in the absence of oxygen. This alcoholic fermentation is carried out by means of the yeasts that are found on the surface of the blackberries that, when they run out of air, metabolize the sugar into alcohol and carbon dioxide, the culture medium used is the combination of Kiwi and sugar ; GLUCOSE → ALCOHOL + CARBON GAS This fermentation is also driven largely by inoculation of a single pure strain of Saccharomyces Cerevisiae, which is added to the kiwi must, after grinding, to ensure greater control of vinification, and reduce the risk of spoilage by microorganisms. Industrially, kiwi wine is not very exploited, since what is most consumed is grape wine. But, at the artisanal level, you can try to make this type of drink, with minimal equipment and trying to apply the basic principles of this technique to have a good quality wine. Finally, the kiwi wine will establish the kinetics of CO2 production, as well as the determination of the stoichiometry equation of the production process and the design of the bioreactor. Keywords: Vinification, kinetics, production, yeasts, process. Producción de Vino de Kiwi a partir de una fermentación anaerobia, utilizando Saccharomyces cerevisiae como agente biológico. Barreiro Cherrez Monica Andrea Universidad Técnica de Manabí, Ecuador Av. Urbina y Che Guevara, 130105, Portoviejo Ecuador. mbarreiro1836@utm.edu.ec I. INTRODUCCIÓN El proceso se fundamenta en la síntesis de Materia viva es decir, un gasto de energía. La importancia de este proyecto radica en el conocer y definir el proceso de fermentación necesario para la obtención de vino de kiwi, el tipo de actividades a seguir para cumplir de manera eficiente y eficaz uno de los procesos de bioprocesos más utilizados en la industria alimenticia. Para la producción de vino de kiwi se tomaron muestras durante dos días con un intervalo de tiempo de 6 horas, finalmente a las 42 horas el crecimiento del gas de 𝐶𝑂2 finalizo. La fermentación alcohólica es una reacción exotérmica. La fermentación alcohólica se realiza gracias a las levaduras que son hongos que se encuentran en estado natural en la capa superficial del suelo de los viñedos y actúan como verdaderos agentes de la fermentación, produce gran cantidad de 𝐶𝑂2. Las levaduras, obtienen energía por la degradación de materia orgánica. Sustrato • Concentración de sustrato. El mosto de Kiwi para fermentación alcohólica debe tener una concentración entre 10 a 15 ºBrix, pues si la concentración de ºBrix es muy bajo el grado alcohólico obtenido será pobre, por lo contrario, si la concentración de ºBrix es muy alto la fermentación no se efectúa • pH. La levadura trabaja mejor en medio relativamente ácido por lo que el pH debe mantenerse entre 3.0 y 5.0, por lo que deberá ajustarse el mosto a este requerimiento. (WARD, O.P, 1991) • Temperatura. La temperatura durante la fermentación debe controlarse pues durante la misma se produce un relativo aumento de esta, pues la descomposición de los azúcares produce una reacción exotérmica es decir con desprendimiento de calor. La temperatura óptima para la fermentación oscila entre 24 y 35°C siendo 34 º C la más adecuada. Si la temperatura es muy baja la fermentación es lenta, si la temperatura excede de los 35°C disminuye la acción de las levaduras y si esta aumenta por encima de los 40 esta se puede detener. (Manual de FAO, 296-2009). • Nutrientes. La levadura necesita la presencia de nutrientes para que la fermentación sea correcta, pues como ser vivo necesita alimentarse para poder trabajar. Los nutrientes más importantes para las levaduras son el nitrógeno y el fósforo, para ello debemos utilizar la urea y el fosfato de amonio, el primero como suministro de nitrógeno y el segundo de fósforo. En Ecuador, la Norma Ecuatoriana (NTE- INEN-0374, 2010), define los vinos de frutas de la siguiente manera: El vino obtenido por fermentación alcohólica de mostos constituidos por jugos de frutas convenientemente corregidos en lo que se refiere a contenido de azúcar y acidez” (graduación alcohólica entre 8-18%) Microorganismo El microorganismo utilizado para obtener vino desde el mosto de kiwi, es la Saccharomyces cerevisiae, ante esta fruta los hongo levaduriformes se puede encontrar en células alargadas, globosas o elipsoidales, así mismo pudiendo agruparse de dos, en cadenas cortas, racimos o bien sin agruparse. La apariencia de las colonias es muy diversa: de color crema a ligeramente café, de lisas a rugosas, en ocasiones sectorizadas y brillantes u opacas. Esta levadura crece de forma óptima en pH ácido fermenta la glucosa y fructosa. (WARD, O.P, 1991). II. MATERIALES Y MÉTODOS En esta investigación se emplearon varios materiales y métodos para poder obtener los resultados que se muestran. I. Materiales. – Pulpa de fruta Kiwi, botella de vidrio, un globo para la trampa se C𝑂2, levadura Saccharomyces Cerevisiae, azúcar como aditivo y agua. II. Métodos. Configuración del sistema de trabajo En los bioprocesos a considerar la configuración del sistema a trabajar es fundamental ya que aplica las condiciones del procesos y a partir de ahí la calidad del producto final. El sistema seleccionado para el proceso es anaerobio este sistema convencional está basado principalmente en la ausencia de oxigeno formándose así una oxidación incompleta ideal para la producción de una fermentación alcohólica. Está configurado por un envase de vidrio que contiene un volumen de sustrato para el desarrollo práctico de producción de vino de kiwi, una trampa de 𝐶𝑂2 (Globo de goma). PARÁMETRO VALOR UNIDAD Altura del biorreactor 35 cm Diámetro del biorreactor 9,23 cm Espacio de cabeza 15,5 cm Volumen efectivo 1060,9 cm3 Flujo de aire (si aplica) - - Tamaño equivalente de las partículas en suspensión 0 0 Inóculo (volumen o masa) 0,3 g/l Tabla 1. Valores reales del Biorreactor. Inoculo (cantidad en g de levadura utilizada) La levadura Saccharomyces cerevisiae que fue agregada fue de 0,3g/l de mosto aproximadamente. En un recipiente con agua hervida tibia, diluir pocoa poco la levadura. Se cubre la mezcla y se deja en reposo de 15 a 20 minutos para su activación. Resultados Sobre el crecimiento de gas, se tomaron muestras durante 2 días llegando al último punto de crecimiento de CO2 a las 42 horas, considerando que desde t=0 a t=42 hubieron varios cambios físicos, en el color y en el crecimiento de biomasa. Fig. 2. Volumen máximo de crecimiento de gas calculado por medio de globo durante el periodo de tiempo de 42 horas. Mediante la ecuación, estequiométrica general del proceso de fermentación se realizaron los cálculos. 𝐶12𝐻22𝑂11 + 𝑏𝑁𝐻3 → 𝑐𝐶𝐻1.54𝑂0,52𝑁0,16 + 𝑑𝐶𝑂2 + 𝑒𝐻2𝑂 + 𝑓𝐶2𝐻6𝑂 Nueva reacción: 𝐶12𝐻22𝑂11 + 1,77𝑁𝐻3 → 11,11𝐶𝐻1.54𝑂0,52𝑁0,16 + 0,33𝐶𝑂2 + 4,29𝐻2𝑂 + 0,27𝐶2𝐻6𝑂 42; 2301,12 -500 0 500 1000 1500 2000 2500 0 20 40 60 C re ci m ie n to d e C O 2 en c m 3 Tiempo (h) Volumen de gas generado cm3/h Volumen de gas generado cm3 Ilustración 1. Configuración del Biorreactor. COEFICIENTES DETERMINADOS MEDIANTE BALANCE 𝑌𝑋/𝑆 = 11,11 𝑚𝑜𝑙 𝑏𝑖𝑜 𝑚𝑜𝑙 𝑠𝑢𝑠𝑡 ∗ 1 𝑚𝑜𝑙 𝑠𝑢𝑠𝑡 342 𝑔 ∗ 24.6 𝑔 𝑚𝑜𝑙 𝑏𝑖𝑜 = 0,8 𝑔 𝑏𝑖𝑜 𝑔 𝑠𝑢𝑠𝑡 𝒀𝑿 𝑺⁄ = 𝟎. 𝟖 𝒈𝒓 ∗ 𝒈𝒓 −𝟏 𝒀𝑷 𝑺⁄ =0,27 𝑚𝑜𝑙𝐶2𝐻6𝑂 𝑚𝑜𝑙𝐶12𝐻22𝑂11 ∗ 46𝑔𝑟𝐶2𝐻6𝑂 1𝑚𝑜𝑙𝐶2𝐻6𝑂 ∗ 1𝑚𝑜𝑙𝐶12𝐻22𝑂11 342𝑔𝐶12𝐻22𝑂11 = 0,036 𝑔 𝑏𝑖𝑜 𝑔 𝑠𝑢𝑠𝑡 𝒀𝑷 𝑺⁄ =𝟎. 𝟎𝟑𝟔 𝒈𝒓 ∗ 𝒈𝒓 −𝟏 Grafica 1. Comparación de los rendimientos máximos en el producto y la biomasa respeto al sustrato. III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Para la producción de vino de Kiwi se llevó a cabo primeramente con la activación de la levadura Saccharomyces Cerevisiae como fuente de nitrógeno, una fermentación a una temperatura ambiente de 25ºC, la composición de la mezcla está compuesta de (agua, pulpa de fruta, azúcar y levadura). Se llevó a cabo en un biorreactor de 1.5 L con un volumen de trabajo de 1,06L, Se inoculo 3%, 0,3g/l de levadura a la mezcla, calculando el CO2 generado en la fermentación como el máximo de 𝑉𝑚á𝑥 = 2301,12 𝑐𝑚3 = 2,30𝐿, por la ley de los gases ideales el volumen máximo de la producción de 𝐶𝑂2 en el globo es de 0,095 mol de 𝐶𝑂2 por cada gramo compuesto en 44g, total 4,18g . Tabla 2. Cálculos del biorreactor Ilustración 2. Vistas del Biorreactor. Biomasa respecto al sustrato; 0,82; 61% Producto respecto al producto; 0,53; 39% RENDIMIENTO MAXIMO Espacio ocupado de cabeza 35 cm (h del biorreactor) – 19,5 cm (h ocupado por el vino)=15,5 cm Diámetro 𝐿 = 𝜋𝐷 𝐷 = 𝐿 𝜋 = 29𝑐𝑚 3,1416 = 9,23 𝑐𝑚 Radio 𝑅 = 𝐷 2 = 9,23𝑐𝑚 2 = 4,615𝑐𝑚 Volumen de un cilindro 𝑉 = 𝜋𝑅2ℎ 𝑉 = 𝜋(4,615𝑐𝑚)2(19,5𝑐𝑚) = 1060,92𝑐𝑚3 Conversión de 𝑐𝑚3𝑎 𝐿 1060,92𝑐𝑚3𝑥 1𝐿 1000𝑐𝑚3 = 1,06𝐿 Tamaño equivalente de las partículas en suspensión No considerado. Inoculo (cantidad en g de levadura utilizada) La levadura Saccharomyces cerevisiae que fue agregada fue de 0,3g/l de mosto aproximadamente. En un recipiente con agua hervida tibia, diluir poco a poco la levadura. Se cubre la mezcla y se deja en reposo de 15 a 20 minutos para su activación. Imagen 1. Vista superior del Biorreactor. Imagen 2. Vista lateral derecho del Biorreactor. Imagen 3. Vista frontal del Biorreactor. IV. CONCLUSIÓN De acuerdo a la producción de Vino de Kiwi podemos considerar que por ser el kiwi una fruta con un sabor subácido a bastante ácido se debe utilizar en condiciones maduras la elaboración básicamente dependió de un proceso estandarizado por etapas como la preparación, mezcla, fermentación y obtención del vino. Al observar y medir durante 2 días aproximadamente cada 6 horas el crecimiento del volumen a través de la trampa de la trampa de gas podemos concluir que el crecimiento eso beneficioso obteniendo un valor de Volumen máximo de la producción de 𝐶𝑂2en el globo de 2301,12 𝑐𝑚3, evidenciando así que la dosis de la levadura Saccharomyces Cerevisiae es óptima para este tipo de procedimiento pues presenta gran poder de acción en la obtención producto. Finalmente en cuanto a los rendimientos máximos en relación al sustrato teniendo resultados 0,82 g biomasa/g de sustrato y 0,53 g producto/g de sustrato. De este rendimiento calculado teóricamente con el valor real de etanol obtenido en la fermentación, podemos deducir que la reacción favoreció a la producción de biomasa y no tanto a la de etanol, atribuyendo esto a variables como la temperatura de incubación, la agitación y la calidad del cultivo. V. REFERENCIAS [1] WARD, O.P. (1991). Biotecnología de la Fermentación. Zaragoza: Primera edición, Editorial Acribia S.A. [2]NTE-INEN-0374.(2010).Bebidasalcoholicas. vino de frutas. requisitos. quito: república ecuatoriana. [3] MANUAL DE FAO. (296-2009). Norma del codex. codex stan. Barreiro Cherrez M.A. Estudiante del noveno semestre de la Escuela de Ingeniería Química de la Facultad de Ciencias Matemáticas, Física y Quimicas de la Universidad Técnica de Manabí.
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