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MEDIOS DE
CULTIVO
CONCEPTO
Los Medios de cultivo son sustratos o soluciones de nutrientes
en los que crecen y se multiplican, los microorganismos en el
laboratorio con el objeto de aislar las diferentes especies
bacterianas.
COMPOSICION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
- Macronutrientes
- Micronutrientes o elementos en traza
- Factores de crecimiento
1. COMPOSICION
Peptona 1.7.g
Extracto de carne 0.3 g
Cloruro de sodio 0.5 g
Agar - Agar 1.5 g
Agua destilada 100 ml
CALDO NUTRITIVO O CALDO BASE
Peptona 1.7.g
Extracto de carne 0.3 g
Cloruro de sodio 0.5 g
Agua destilada 100 ml
AGAR NUTRITIVO O AGAR BASE
CONSTITUYENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
BACTERIOLÓGICO
1. Fuentes de energía: carbono, nitrógeno.
2. Fuentes no energéticas:
 Sales minerales: Azufre y fósforo,
 Iones metálicos: Sodio, potasio, magnesio. A concentraciones mas
bajas: zinc, manganeso, cobre, cobalto, molibdeno.
 Factores de crecimiento: Cierto tipo de aminoácidos ejemplo cistina,
sangre, suero, extracto de levadura.
 Factores de arranque: Sustancias que permiten a la bacteria salir de
la fase latente y comenzar con la fase de crecimiento exponencial Ejm.
Algún ion que estimula el crecimiento.
 Factores Inhibidores: Sirven para inhibir el crecimiento de
determinadas especies bacterianas no deseadas ejemplo colorantes
de anilina (Ejm. verde brillante o eosina), metales pesados (Ejm.
bismuto) sustancias químicas (Ejm. azidas, citrato, selenito). Agentes
antimicrobianos (p.ej. neomicina , colistina, vancomicina,
cloranfenicol).
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
Entre los requerimientos no energéticos de los medios de
cultivo tenemos:
• 1. Fuente de azufre
• 2. Fuente de fósforo
• 3. Iones metálicos
• 4. Factores de crecimiento
• 5. Factores de arranque
• 6. Factores inhibidores
CLASIFICACION
Por su origen
- Naturales
- Artificiales o Sintéticos :
Por su consistencia:
- Líquidos: soluciones acuosas, ejm. Caldos nutritivos)
- Sólidos : Son los medios líquidos más agar agar: agr nutritivo y agr sangre.
- Semisólidos: Son los medios que se hallan en un estado entre los dos primeros,
ejm, estudios de motilidad.
Por su objetivo
- Medios de transporte:Cary-Blayr, Hajna, Stuard.
- Medios enriquecidos o mejorados.
- Medios de aislamiento
CLASIFICACION
1. Por su origen
- Naturales: no hay modificación Ejm. leche, papa
- Artificiales o Sintéticos :donde ha habido transformación por medios químicos y mecánicos
Ejm. Todos los medios comerciales
2. Por su consistencia:
- Líquidos: soluciones acuosas, ejm. Caldos nutritivos
- Sólidos : Son medios líquidos añadiendo el agar agar: agar nutritivo y agar sangre.
- Semisólidos: Son los medios que se hallan en un estado entre los dos primeros, ejm,
estudios de motilidad.
3. Medios de cultivo según su uso o utilización :
Por su objetivo
a) Medios de transporte: son aquellos que mantienen viables a los
microorganismos Cary-Blayr, Hajna, Stuard.
Contiene buffer + sustancias criopreservantes (glicerol)
-b)Medio de enriquecimiento (caldos) : sirven para
multiplicar bacterias antes de su siembra Ejm.Caldo selenito
para salmonellas, caldo tetrationato, caldo lactosado.
b)Medios enriquecidos son medios , se les añade además de los
componentes básicos, uno o varios elementos sustancias ricas proteínas,
aminoácidos o sustancias nutritivas, sirve para aislar y cultivar
microorganismos con exigencias en nutrientes
Agar sangre: Contiene Agar nutritivo con 5% al 10% de sangre de
carnero desfibrinada. El Agar debe estar a 37º C cuando se añade sangre.
En este medio se desarrollan todas las bacterias heterótrofas y se aprecia
la hemólisis alfa y beta
Agar chocolate: Consiste en un medio de Agar Sangre de lo que ha sido
llevado a 50°C en un baño de agua por 5 minutos, produciéndose así la
ruptura de los eritrocitos que aportan nuevos factores para el crecimiento
bacteriano. El factor X (o hemina termoestable) y el factor V (o
fospiririna termolabil).
AGAR CHOCOLATE AGAR SANGRE
C) MEDIOS SELECTIVOS DE AISLAMIENTO
Selecciona grupos bacterianos al contener sustancias que inhiben el
crecimiento de algunas bacterias, favoreciendo el crecimiento de otras.
1. Pocos selectivos: agar MacConkey, agar EMB, ENDO (enterobacterias)
2. Medianamente selectivos: Agar SS para Salmonella y Shigellas
3. Altamente selectivos: Agar. Chapman y Manitol Salado
D)MEDIOS DIFERENCIALES O BIOQUÍMICOS
son aquellos medios que llevan un medio corriente, caldo o agar nutritivo al
que se le ha añadido un sustrato conocido, además llevan inhibidor de
pH. Aquí se estudiarán desdoblamiento de sustratos por acción de las
enzimas bacterianas: TSI, SIM, LIA, Urea, Citrato de Sinmons, Caldo MR-VP,
que sirven para pruebas específicas.
AGAR Mac CONKEY AGAR EMB (EOSINA AZUL METILENO
AGAR MAC CONKEY
Se basa en la formación de la lactosa, las colonias que fermentan la lactosa
producen caída del pH, seguido por la absorción del rojo neutro,
apareciendo en las colonias el color rojo y se les denomina lactosa
positivas . Las colonias que no fermentan lactosa permanecen incoloras.
La presencia de cristal de violeta y sales biliares, inhiben el crecimiento de
bacterias Gram positivas
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
El medio EMB contiene
Eosina y azul de metileno
que son colorantes de anilina
y van a inhibir el crecimiento
de los microorganismos
Grampositivos, permitiendo
el crecimiento de todas las
Enterobacterias.
Las colonias que fermentan
la lactosa y/o sacarosa se
observan de un color
púrpura. Las que no
fermentan lactosa ni sacarosa
se observan incoloras.
Escherichia coli se observa
de color púrpura y con brillo
metálico.
Medios diferenciales: Es aquel al que se le ha adicionado un
indicador de una clase comúnmente como un colorante que permite
diferenciar reacciones químicas efectuadas durante el desarrollo.
Tenemos TSI, LIA, SIM, Urea, Citrato de Simmons,
MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU PRESENTACION
A. Líquidos en tubo.
B. Semisólidos en tubo.
C. Sólidos en tubo.
C.1. Inclinado
C.2. Semi-inclinado (pico de flauta)
.
POR SU CONSISTENCIA
2. MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que también se denominan caldos, no contienen agar
y su composición, además de agua suele contener al menos una fuente de
carbono, sales minerales, y, en algunas ocasiones según las características
del medio, factores de crecimiento, vitaminas, peptonas, ciertos
aminoácidos, etc. Son de gran utilidad para la realización de recuentos
bacteriológicos por turbidimetría, especialmente útil en levaduras, para la
realización de inóculos, para obtener productos metabolitos primarios o
secundarios, creados por los propios microorganismos como, por ejemplo,
antibióticos, ácidos lácticos, etc.
POR SU CONSISTENCIA
3. MEDIOS SEMISÓLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios líquidos y los sólidos donde su
proporción en agar suele ser inferrior al 5% pero siempre suelen presentar
una cierta cantidad que le proporcione una consistencia semisólida.
Son útiles para ciertas pruebas bioquímicas como por ejemplo, la prueba
de oxidación- fermentación, que permiter conocer el tipo de metabolismo
oxidativo o fermentativo de la bacteria problema.
.
1. COMPOSICION
Fosfato monopotásico 4.0 g
Sulfato de magnesio 0.4 g
Citrato de magnesio 1.0 g
Asparragina 6.0 g
Glicerol 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. PREPARACION
Disolver los ingredientes y hervir durante 2 horas.
Luego añadir 50 g de almidón de papa.
Cascar 5 huevos en condiciones asépticas en un
matraz y con ayuda de perlas de vidrio.
Agregar 50 ml de verde malaquita en solución al 2%
Distribuir en condiciones asépticas en tubos con tapa
de rosca y dejar solidificar.
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
MEDIOS ESPECIALES
LOWENSTEIN JENSSEN
1. COMPOSICION
Peptona 17.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada 1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en aguaD. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR NUTRITIVO
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR Mac CONKEY
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR EMB
1. COMPOSICION
Extracto de levadura 3.0 g Rojo fenol 0.08 g
Peptona o polipeptona 10.0 g Verde brillante 0.0125 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 20.0 g
Sacarosa 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR VERDE BRILLANTE
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR MAC CONKEY
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Dextrosa 40.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada 1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR SABAURAUD
1. COMPOSICION
Citrato de sodio 2.0 g Azul de bromotimol 0.08 g
Fosfato monoamónico 1.0 g Fosfato dipotásico 1.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sulfato de magnesio 0.2 g Agua destilada 1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR CITRATO SIMMONS
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 20.0 g
Peptona de carne 6.6 g
Tiosulfato de sodio 0.2 g
Citrato hierro(III) amonio 0.2 g
Agar - agar 3.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
AGAR SIM
1. COMPOSICION
Extracto de carnena 1.0 g Rojo de fenol 0.025 g
Cloruro de sodio 75.0 g Agar - Agar 12.5 g
D- Manitol 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Peptona 10.0 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR MANITOL ROJO FENOL
1. COMPOSICION
Extracto de carne 3.0 g Sulfato de hierro 0.2 g
Extracto de levadura 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.3 g
Peptona 20.0 g Rojo de Fenol 24 mg
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12 g
Glucosa 1.0 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR KIA (kliger)
1. COMPOSICION
Peptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 g
Extracto de levadura 3.0 g Púrpura de bromocresol 0.02g
Dextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Citrato amonio férrico 0.5g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona de caseina 7.0 g
Dextrosa 5.0 g
Fosfato dipotásico 5.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
CALDO MRVP
1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g Fosfato disódico 2.5 g
Infusión corazón de res 25.0 g Glucosa 2.0 g
Peptonas 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)
GRACIAS POR SU ATENCION