Práctica 1 equipo 2

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERÍA CAMPUS 
GUANAJUATO 
 
INGENIERÍA FARMACÉUTICA 
 
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA 
 
IDENTIFICACIÓN DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS MEDIANTE DIVERSAS 
REACCIONES 
 
PROFESOR: 
ANASTACIO CORTES MENDOZA 
MARIA DEL ROSARIO LEON REYES 
SILVIA DIAZ SANDOVAL 
 
3FM1 
 
EQUIPO 2: 
PALACIOS CARRILLO BRENDA JAZMIN 
PÉREZ GUTIÉRREZ LILIA VANESSA 
TERRONES LIRA JUAN ISRAEL 
VENEGAS MEJIA MERCEDES ESTEFANIA 
SILVA JUÁREZ ANGEL DAVID 
OROZCO PADILLA MARIEL 
 
 
 
 
 
Contenido 
Objetivos ................................................................................................................................................ 3 
Objetivo general .............................................................................................................................. 3 
Objetivos específicos .................................................................................................................... 3 
Introducción ........................................................................................................................................... 3 
Proteínas .......................................................................................................................................... 3 
Estructuras de las proteínas ........................................................................................................ 3 
Caseína ............................................................................................................................................. 5 
Aminoácidos .................................................................................................................................... 5 
Reacciones de identificación de aminoácidos y proteínas. ................................................... 7 
Reacción de Biuret. ............................................................................................................................ 7 
Materiales .............................................................................................................................................. 8 
Reactivos ............................................................................................................................................... 8 
Materiales para extracción de caseína ............................................................................................... 9 
Metodología......................................................................................................................................... 10 
Resultados .......................................................................................................................................... 11 
Discusión ............................................................................................................................................. 13 
Conclusión ........................................................................................................................................... 15 
Bibliografía .......................................................................................................................................... 15 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Objetivos 
Objetivo general 
 Realizar la identificación de proteínas y aminoácidos por medio de reacciones 
químicas. 
Objetivos específicos 
 Realizar las pruebas de biuret, ninhidrina y millón para la identificación de 
aminoácidos y proteínas. 
 Obtener una proteína específica (caseína) mediante la precipitación de esta a 
partir de leche. 
Introducción 
Proteínas 
En los seres vivos se pueden encontrar diferentes tipos de macromoléculas, entre ellas 
las proteínas, las cuales se encuentran en grandes cantidades, incluso llegando a 
representar la mitad del total de peso de ser vivo. 
Estas macromoléculas poseen una masa molecular grande, debido principalmente a su 
conformación estructural, ya que poseen cadenas de aminoácidos que se unen por 
medio de los llamados enlaces peptídicos, el punto de unión entre los grupos alfa 
carboxilo y amino de los aminoácidos. 
Podemos encontrar más de 300 aminoácidos, sin embargo, en las proteínas solo se 
presentan 20 diferentes tipos de aminoácidos que tienen distintas características que 
los identifican en cuanto a su forma, carga, reactividad química, etc. 
Hay dos tipos de aminoácidos, los esenciales y no esenciales, los esenciales son los que 
el organismo no tiene la capacidad de sintetizar por lo que se necesitan ingerir, mientras 
que a los llamados no esenciales el cuerpo humano sí es capaz de sintetizarlos. 
 
Estructuras de las proteínas 
Estructura primaria: Se va a describir como la conformación de la cadena unida por 
enlaces covalentes, es decir, enlaces peptídicos y puentes disulfuro que su función va a 
ser unir a los distintos aminoácidos que conformen a la proteína formando una cadena 
polipeptídica. 
Dado la formación de esta estructura de aminoácidos que se constituyen a la proteína 
dará como origen una cadena o un esqueleto en el cual van a brotar las cadenas laterales 
de los aminoácidos. 
 
 
 
 
El conocer esta estructura en primera instancia no solo nos va a ayudar a entender el 
funcionamiento de una proteína, sino que además también es objeto de estudio de 
enfermedades genéticas dado que alguna de esta enfermad radique en el mal acomodo 
de los diferentes aminoácidos de la cadena polipeptídica. 
 
Estructura secundaria: Es la colocación estable de los distintos aminoácidos, que como 
consecuencia van a dar una estructura repetitiva de la cadena. 
Involucra el plegamiento de la estructura primaria, esto mediante la formación de puentes 
de hidrogeno entre la partícula que forma el enlace peptídico, por lo que de esta mamera 
la cadena polipeptídica va a formar conformaciones que van a ser de menor energía y 
por lo tanto más estables, dichas conformaciones pueden ser: 
 Hélice alfa. 
 Hoja beta. 
Estructura terciaria: Este tipo de estructura va a ser la conformación tridimensional que 
involucra el plegamiento de la proteína. 
Este tipo de estructura va a ser la encargada de darle todas sus propiedades biológicas 
a la proteína, debido a que esta disposición espacial va a ser la responsable de la 
interacción con varios ligandos. 
Estructura cuaternaria: Esta conformación se va a dar cuando una proteína posee dos 
o en su caso más subunidades polipeptídicas. 
Tabla 1. Representación de las estructuras de las proteínas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Caseína 
Comúnmente se denomina a la caseína como una mezcla que es heterogénea en 
proteínas, dada esta vaga idea es difícil concretar una definición concreta de ella. La 
composición de esta proteína tiene un rasgo característico, y que la mayoría de los 
componentes suelen precipitar a un pH de 4.6, debido a esta característica, se define 
como una proteína que es insoluble en la leche. 
Se considera a la caseína como una fosfoproteína que se localiza en la leche que de 
acuerdo con la reacción está se forma por la separación con el resto de los componentes 
en un medio ácido de tal forma que forman una masa blanca. Estas fosfoproteínas se 
llamarán de esta forma debido a que se encuentran enlazadas con un grupo de ácido 
fosfórico, dado a esto, encontraremos un elemento fosforo en su estructura. 
Cuando hacemos que la renina en conjunto con la caseína coagules vamos a tener un 
compuesto denominado paracaseína, sin embargo, cuando se hace que coagula por 
medio de su pH la vamos a denominar caseína ácida. Y cuando no se encuentra 
coagulada la vamos a denominar caseinógeno. 
Podemos encontrar a la caseína como un sólido que tiene un color entre blanco y 
amarillento, no va a presentar tanto sabor ni olor, el compuesto va a ser insoluble en 
agua y por lo tanto vamos a tener una buena disociaciónen un medio alcalino. 
Aminoácidos 
Tabla 2. Estructura de aminoácidos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Reacciones de identificación de aminoácidos y proteínas. 
Reacción de Biuret. 
En esta reacción se forma una sustancia con cobre (II) y con los grupos aminos, este 
último grupo de los enlaces peptídicos, ya que la intensidad de coloración de la reacción 
es totalmente proporcional a la cantidad de proteínas presentes en la muestra, por lo que 
este método es recomendable para la cuantificación de proteínas, así como también 
puede identificar péptidos y algunos otros compuestos con varios enlaces peptídicos 
 
Reacción de ninhidrina. 
La ninhidrina es un reactivo muy utilizado en el estudio e identificación de aminoácidos 
por medio de la cromatografía, también puede ser utilizado cuando se quiere identificar 
de manera cuantitativa los aminoácidos presentes en las proteínas. 
La ninhidrina tiene la capacidad de reaccionar con los alfa aminoácidos que poseen un 
pH que varía entre 4 y 8, por lo que dependiendo del pH será el color que resulte de la 
reacción. Para la prueba con reactivo de ninhidrina la coloración predominante en las 
reacciones consideradas positivas será violeta, llamada también púrpura de Ruhemann. 
 
 
 
 
 
Reacción de millón. 
Esta prueba tiene importancia en la detección de radicales hidroxilbenceno en los 
aminoácidos, un claro ejemplo lo podemos encontrar en el aminoácido tirosina y los que 
se originan de este. El reactivo de millón se involucra en la reacción de tal manera que 
debido a que contiene nitritos y nitratos mercúricos va a actuar de tal manera que 
ocasionan una nitración y mercuración o nitrosación de los grupos fenólicos libres, de tal 
manera que se va a dar la formación de un precipitado que suele ser de color blanco y 
para finalmente virar a un color rosa o rojo. 
Materiales 
 1 gradilla 
 21 tubos de ensayo 
 Pipetas graduadas 
 1 propipeta 
 1 vaso de precipitados 
 1 pinza para sujetar los tubos 
 1 placa calefactora 
 1 plumón no permanente 
 Campana de extracción 
 
Reactivos 
 Reactivo de Biuret 
 Reactivo de Ninhidrina 
 Reactivo de Millon 
 Tirosina 
 Gelatina 
 Valina 
 Leucina 
 Metionina 
 Prolina 
 Caseína 
 Alanina 
 Aspargina 
 Albúmina 
 Glicina 
 Ovoalbúmina 
 Fenol 
 Agua 
 
 
 
 
 
Materiales para extracción de caseína 
 400 ml de leche 
 80 ml de vinagre 
 80 ml de jugo de limón 
 1 calentador (estufa) 
 1 olla para hervir la leche 
 2 recipientes pequeños 
 1 trozo de tela blanca 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Metodología 
 
 
 
 
 
 
Resultados 
Tabla 3. Prueba de biuret 
PRUEBA DE BIURET 
 ABREVIATURA ¿CAMBIO DE COLOR? COLOR AL QUE CAMBIO 
TIROSINA TIR (Y) NO N/A 
VALINA VAL (V) NO N/A 
LEUCINA LEU(L) NO N/A 
METIONINA MET(M) NO N/A 
PROLINA PRO(P) NO N/A 
CASEINA N/A SI MORADO 
GELATINA N/A SI MORADO 
 
Tabla 4. Prueba de ninhidrina 
PRUEBA DE NINHIDRINA 
 ABREVIATURA ¿CAMBIO DE COLOR? 
COLOR AL QUE 
CAMBIO 
ALANINA ALA(A) SI MORADO 
ASPARAGINA ASP(D) SI AMARILLO 
ALBUMINA BSA SI MORADO 
GLICINA GLY(G) SI MORADO 
OVOALBUMINA OVA SI MORADO 
PROLINA PRO(P) SI AMARILLO 
AGUA N/A NO N/A 
 
 
 
 
 
Tabla 5. Prueba de millón 
PRUEBA DE MILLON 
 ABREVIATURA ¿CAMBIO DE COLOR? COLOR AL QUE CAMBIO 
ALBUMINA BSA SI ROSA C/ PRECIPITADO 
FENOL 𝐶6𝐻6𝑂 SI ROJIZO 
TIROSINA Y SI ROSA/ANARANJADO 
AGUA 𝐻2𝑂 NO NO 
 
 
Tabla 6. Precipitación de caseína 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Discusión 
 
PRECIPITACIÓN DE CASEÍNA 
La leche contiene 4 componentes que son esenciales en ella como lo son los triglicéridos, 
proteínas, glúcidos y sales minerales. Entre las proteínas que se encuentran en la leche 
tenemos la caseína, albumina y globulinas, la que en esta ocasión se está analizando es 
la caseína que en la literatura se menciona que este tipo de proteína va a precipitar a un 
pH de 4.6. 
Para la muestra en donde se utilizó jugo de limón, sabemos que la caseína en este caso 
es una fosfoproteína por lo que al añadir el jugo de limón la micela de caseína va a pasar 
de una carga negativa a estar neutralizada, es decir, los grupos fosfatos de la proteína 
se protonan y la proteína va a precipitar. 
Para la muestra donde se utilizó vinagre, es decir ácido acético, tenemos un protón de 
hidrogeno que puede estar fácilmente en el medio, este protón va a ser fácilmente 
aprovechado por las cargas negativas de los grupos fosfatos de la caseína, por lo tanto, 
esta va a precipitar. 
 
PRUEBA DE BIURET 
La prueba de Biuret funciona para detectar el contenido de proteínas ya que percibe 
enlaces peptídicos, los resultados de esta prueba son positivos cuando la muestra se 
torna de color morado o violeta, esto ocurre debido a que el reactivo de Biuret está 
compuesto por sulfato cúprico (CuSO4) e hidróxido de sodio (NaOH) este último para 
alcalinizar el medio, el reactivo actúa sobre polipéptidos o proteínas formando un 
complejo entre los electrones del nitrógeno que se encuentra en los enlaces peptídicos 
y los cationes del cobre encontrado en este reactivo. 
Por lo cual la reacción que se presenta por esta prueba ocurre en proteínas, más no en 
aminoácidos ya que estos no cuentan con enlaces peptídicos, por lo tanto, no 
presentaran el color violeta. 
Los resultados obtenidos en este experimento sí eran los esperados debido a que de las 
muestras utilizadas se encontró que con la tirosina, valina, leucina, metionina y prolina 
no ocurrió ningún cambio de color debido a que todas estas son aminoácidos, así que el 
reactivo de Biuret no actuó sobre estas por la inexistencia de enlaces peptídicos. 
Sin embargo, en las muestras de caseína y gelatina si hubo un cambio a color violeta, 
justamente porque ambas son proteínas, por lo cual poseen enlaces peptídicos que dan 
lugar a que ocurra la reacción y por lo tanto la coloración. 
 
PRUEBA DE NINHIDRINA 
 
 
 
 
La prueba con reactivo de Ninhidrina nos permite principalmente identificar compuestos 
que poseen grupos aminos libres como los alfa-aminoácidos, aminas primarias y 
amoniaco. Las reacciones serán positivas si se obtiene como resultado una coloración 
violeta. 
La coloración violeta aparece como resultado de la reacción entre los grupos amino libres 
de aminoácidos y el reactivo de ninhidrina, estos al reaccionar formarán amoniaco y 
anhidrido carbónico, la ninhidrina se reducirá a hidrindantina, la cual va a reaccionar con 
el amoniaco y otra molécula de ninhidrina dando como resultado la coloración violeta. 
Algunos otros aminoácidos no van a presentar una coloración violeta al agregar el 
reactivo de Ninhidrina, por ejemplo, la prolina y la asparagina que presentarán una 
coloración amarilla, esto se debe a que poseen un grupo amino sustituido en la cadena 
lateral, es decir, en lugar de tener un grupo amino, tienen un imino (-NH-), lo cual provoca 
un color rojo que de manera casi instantánea pasará a ser de una coloración amarilla. 
Los resultados que se obtuvieron de la prueba si fueron los esperados de acuerdo con 
lo que la teoría establece,ya que, para las muestras de alanina, albúmina de suero 
bovino, glicina y ovoalbúmina, se obtuvieron coloraciones violetas debido a que todos 
son aminoácidos que contienen grupos amino libres; por otro lado, para las muestras de 
prolina y asparagina se obtuvieron coloraciones amarillas por el hecho de poseer un 
grupo imino en lugar de uno amino. 
 
 
PRUEBA DE MILLON 
La prueba que conlleva esta reacción nos ayuda a la detección de radicales 
hidroxibenceno en las proteínas, por lo cual darán positivo todas aquellas moléculas que 
contengan tal radical en su estructura. Esta reacción se basa primeramente en una 
nitración de anillo fenólico de la molécula, el cual reaccionara con el ácido nítrico del 
reactivo. 
Para la reacción con el reactivo BSA que consiste en una albúmina de suero bovino la 
muestra es una estructura proteica terciará que consta de aproximadamente de 607 
aminoácidos, por lo cual la literatura nos menciona que esta prueba dará positiva para 
todas aquellas estructuras que tengan radicales hidroxibenceno o bien aquellas que 
tengan un compuesto fenólico no sustituido en la posición 3,5 el cual formaran un 
complejo oxido de mercurio-fenol, por lo cual podemos decir que algunos de los 
aminoácidos de la proteína contienen este grupo fenólico y que por otro lado se observó 
un precipitado de color blanco para el cual se le debe de suministrar más calor para que 
ayude a la formación de complejos y vire completamente a la coloración roja. 
Para el fenol se obtuvo una coloración rojiza el cual nos demuestra que la formación del 
complejo oxido de mercurio-fenol se llevó de manera correcta puesto que este fenol no 
 
 
 
 
está sustituido en la posición 2,3,4,5,6 y a lo que la literatura nos menciona que se llevará 
la formación del complejo en la posición 3,5 y al no tener un sustituyente en tal posición 
en las aledañas decimos que no habrá un impedimento estérico para que se lleve la 
reacción. 
Esta prueba principalmente detecta el aminoácido tirosina debido a su estructura por lo 
que al realizar la reacción con el reactivo de millón y el aminoácido como era de 
esperarse se formó el complejo de manera exitosa. 
Por último, para el agua no se obtuvo reacción ya que esta no cuenta con un radical 
hidroxibenceno o un anillo fenólico para que el reactivo de millón reaccione con ella. 
Conclusión 
Se logaron los objetivos ya que identificamos mediante distintas técnicas colorimétricas 
la presencia de proteínas y aminoácidos. 
Se realizaron las 3 diferentes pruebas de tal manera que se identificaron de manera 
cualitativa los aminoácidos y proteínas presentes en las muestras, y se obtuvo un 
precipitado que se identificó como caseína mediante el uso del pH en la leche. 
 
Bibliografía 
 
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https://www.lifeder.com/biuret/
https://biblioteca.unirioja.es/biba/mas_info.php?-titn=203027
https://biblioteca.unirioja.es/biba/mas_info.php?-titn=203027
	Objetivos
	Objetivo general
	Objetivos específicos
	Introducción
	Proteínas
	Estructuras de las proteínas
	Caseína
	Aminoácidos
	Reacciones de identificación de aminoácidos y proteínas.
	Reacción de Biuret.
	Materiales
	Reactivos
	Materiales para extracción de caseína
	Metodología
	Resultados
	Discusión
	Conclusión
	Bibliografía