2. Puede dar resultados inconstantes debido a que, cuando existen alteraciones morfológicas, el plasma que queda atrapado entre las células se incrementa. TÉCNICA PARA EL MICROMÉTODO: 1 .Mezclar la sangre por inversión, por lo menos durante 5 minutos. No agitarla. 2. Llenar las dos terceras partes de un tubo capilar por el lado no marcado. 3. Sellar el extremo opuesto (marcado con una banda azul) con la flama del mechero. Esto se hace girando el tubo capilar para lograr el sellado uniforme y el fondo quede redondeado y no en punta. Una alternativa más práctica para el sellado es obturar el extremo distal con plastilina. Ver figura 6. 4. Centrifugar en la microcentrífuga a 12,000 r.p.m. durante 5-8 minutos. 5. Se lee, usando una regla o lector para microhematócrito, las alturas del volumen de eritrocitos y del volumen total de la muestra. Calcular el microhematócrito de la siguiente manera: Elaborado por: Dr. Eduardo Rivadeneyra Domínguez, M. en C. Ricardo Galán Zamora, Q.F.B. Isaac Zamora Bello 33 Hematócrito= Altura de eritrocitos (mm) X 100 Altura del volumen total (mm) VENTAJAS: 1. El plasma atrapado entre las células es mínimo (1%). 2. Resultados muy reproducibles. DESVENTAJAS: 1. Relativamente más difícil de realizar, sobre todo el sellado y dominar la lectura. INTERVALOS DE REFERENCIA: Al igual que con la hemoglobina y los eritrocitos, se modifican con la edad, el sexo y la altura sobre el nivel del mar. En la Ciudad de Xalapa, Ver., a 1,400 metros sobre el nivel del mar son los que se observan en la siguiente tabla: EDAD SEXO INTERVALOS Recién nacido F/M 44-62% 1 mes a 2 años F/M 33-37% 3 a 10 años F/M 37-45% 11 a 60 años Fem. 36-48% 11 a 60 años Masc. 42-54% Más de 60 años F/M 37-45% En la siguiente tabla, se muestran los valores promedio de hematócrito a diferentes alturas sobre el nivel del mar: ALTURA EN METROS MUJERES % HOMBRES % MEDIA RANGO MEDIA RANGO Nivel del mar 43.9 37.5-50.2 49.3 45.4-56.2 1000 42.4 37.4-47.4 48.1 43.0-53.2 1860 45.0 39.1-50.9 51.3 45.1-57.5 2220 44.6 39.2-50.0 51.5 46.3-56.7 2670 46.9 40.7-53.1 53.0 46.5-59.5 NOTA: Por su estandarización y por su reproducibilidad, el hematócrito ha sido considerado el mejor parámetro para evaluar la anemia, cuando se hace por métodos manuales. Elaborado por: Dr. Eduardo Rivadeneyra Domínguez, M. en C. Ricardo Galán Zamora, Q.F.B. Isaac Zamora Bello 34 FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA PRÁCTICA N0. 6 Figura 6 Figura 5 Elaborado por: Dr. Eduardo Rivadeneyra Domínguez, M. en C. Ricardo Galán Zamora, Q.F.B. Isaac Zamora Bello 35 “RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS” DURACION: 02 HR OBJETIVO(S): Que el alumno aprenda a efectuar correctamente el recuento de glóbulos rojos en muestras de sangre por el método manual (hemacitómetro), el cual es una determinación básica en el laboratorio de hematología, así como también que identifique la importancia y utilidad clínica del recuento de eritrocitos. FUNDAMENTO: El recuento de eritrocitos consiste en diluir la sangre con un diluyente apropiado, el cual debe ser isotónico para evitar la lisis y la estructura dentada de los eritrocitos, además debe prevenir su aglutinación, la dilución deberá hacerse en proporción exacta y posteriormente se examinará al microscopio un volumen conocido de la muestra colocada en el hemacitómetro (Cámara de Neubauer), contando el número de elementos que se encuentran en la retícula de la cámara y mediante una operación matemática se obtiene la cifra total de células. GENERALIDADES: Los eritrocitos constituyen cerca de 45% del volumen sanguíneo. Las cuentas más altas de eritrocitos se presentan al nacer. La población de eritrocitos neonatales es macrocítica y contiene entre 2 y 6% de reticulocitos. Además, pueden observarse de 3 a 10 eritrocitos en la sangre periférica durante la primera semana de vida; durante los dos meses siguientes se produce una disminución gradual de eritrocitos. Esta declinación va seguida por un aumento gradual hasta que se alcanzan los valores normales de adulto, hacia los 14 años de edad. Durante la pubertad se percibe una diferencia en el valor de los eritrocitos entre los sexos, con valores más bajos en las mujeres que en los varones. Esto se explica en parte por la teoría de que la hormona masculina estimula la eritropoyesis. La cuenta de eritrocitos varía muy poco en adultos normales de edad avanzada e incrementa un poco después de la menopausia. En altitudes elevadas se nota un incremento fisiológico compensador en los eritrocitos que es proporcional con la disminución de la saturación de oxígeno arterial de la hemoglobina. En los fumadores intensos también es posible compensar la disminución en la saturación de oxígeno mediante un aumento en el número de eritrocitos. Los recuentos de eritrocitos se expresan como concentraciones células por unidad de volumen de sangre). La unidad de volumen para los recuentos celulares se expresa originalmente como milímetros cúbicos (mm3) debido a las dimensiones lineales de la cámara hemacitométrica (recuento celular). El International Committe for Standardization in hematology recomienda que la unidad de volumen sea el litro. Puesto que 1 mm3= 1,00003 l. Cualquier método de recuento de células incluye tres fases: dilución de la sangre, toma de muestra de la suspensión diluida en un volumen determinado y recuento de las células en este volumen. cio y comida y han sido expuestas anteriormente y afectan todos los recuentos celulares tanto como el hemátocrito. El fallo en la mezcla total de la sangre inmediatamente antes de succionar la muestra con la pipeta introduce un error que depende del grado de sedimentación durante el intervalo transcurrido desde que se mezcló la sangre. Los errores causados por técnica defectuosa pueden ocurrir cuando la sangre y el líquido disolvente se succionan con la pipeta, cuando se llena la cámara y cuando se levanta por la introducción de un exceso de sangre diluida, su movimiento después de llenar la cámara de recuento o bien el rebosamiento de la suspensión en el foso. Las inexactitudes en las graduaciones de las pipetas y de las áreas rotuladas y en la profundidad de las cámaras de recuento son causas frecuentes de error. Se pueden disminuir utilizando pipetas y hemacitómetros certificados por el U.S. Bureau of Standards. Incluso en una muestra perfectamente Elaborado por: Dr. Eduardo Rivadeneyra Domínguez, M. en C. Ricardo Galán Zamora, Q.F.B. Isaac Zamora Bello 37 mezclada se produce variación en el número de células suspendidas que se distribuyen en un volumen dado. Según la ley de Poisson de la distribución, la variación entre los diferentes cuadrados en la cámara viene dada por la fórmula DE=  m, donde m es el número medio de células por unidad de área y DE es la desviación estándar de los recuentos en estas áreas. TRASTORNOS VINCULADOS COMUNMENTE CON CAMBIOS EN LAS CONCENTRACIONES DE ERITROCITOS:  CONCENTRACIÓN AUMENTADA: policitemia, trastornos mieloproliferativos, deshidratación.  CONCENTRACIÓN DISMINUIDA: anemia, leucemia aguda, síndromes mielodisplásicos, hemorragia, hemólisis. EQUIPO: Agitador eléctrico para pipetas de Thoma Reloj de laboratorio Microscopio Contador de células MATERIAL: a) Biológico: Sangre obtenida con EDTA b) De laboratorio: Pipetas de Thoma para glóbulos rojos con boquilla Cámara de Neubauer Líquido diluyente de Gower Tubos de ensayo de 13 x 100 mm Pipetas serológicas de 5 ml