Métodos para medir el crecimiento microbiano Directos 1) Recuento en placa: es uno de los métodos más utilizados para determinar cuál es el número ...

Métodos para medir el crecimiento microbiano Directos 1) Recuento en placa: es uno de los métodos más utilizados para determinar cuál es el número de microorganismos viables en un medio líquido. Cuando la concentración es baja se procede a filtrar la muestra a través de una membrana que será pasada al medio de cultivo, en una placa de Petri. Los microorganismos retenidos en la membrana se desarrollarán formando colonias, permitiendo su cuantificación. Cuando la concentración es alta, se procede a la preparación de diluciones seriadas en una secuencia de 1:10, alcanzándose diluciones de 10-7 o mayores. Pequeñas alícuotas de esas diluciones son sembradas en medio nutritivo en placa, donde las bacterias se desarrollan formando colonias. En las placas donde la concentración de la alícuota sembrada es muy alta, las bacterias formarán crecimiento masivo, pero si la concentración es muy baja, el número de UFC podrá ser muy bajo. Entre los dos extremos de las diluciones, alguna de las placas contendrá un número de colonias entre 30 y 300, permitiendo la cuantificación (6,7). 2) Número más probable: La técnica de Número más probable o también llamada técnica de dilución en tubo, proporciona una estimación estadística de la densidad microbiana presente en donde los límites de confianza (Bajo y Alto) son valores que no se suman ni restan al resultado, solamente son un dato de Calidad. 3) Conteo por Cámara Neubauer: La cámara de recuento, Neubauer, es un dispositivo de precisión hecho de vidrio óptico especial. Se utiliza para contar células u otras partículas en suspensiones bajo el microscopio. Las cámaras de recuento se utilizan principalmente para el análisis de sangre (recuento de leucocitos, eritrocitos, trombocitos). Indirectos 1) Recuento de masa por peso húmedo y seco: Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de líquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de células bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular. Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan soluciones de polímeros no iónicos (como el Dextrano) que pueden ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas. 2) Recuento de masa por filtración: Consiste en hacer pasar un volumen determinado de una muestra líquida a través de un filtro de membrana microporosa en cuya superficie quedarán retenidos los microorganismos, colocado en un equipo de filtración. Tras la filtración, el filtro se coloca sobre la superficie de una placa de Petri con el medio de cultivo apropiado y se incuba el tiempo/temperatura adecuados según el tipo de microorganismos que se necesite analizar. Las bacterias formarán colonias sobre la superficie de los filtros. 3) Turbidimetría: La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida. Estudios teóricos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamaño celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son diferentes. Por esta razón, para estimar el número de microorganismos totales o el número de microorganismos viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo de microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica) con el número de microorganismos totales o con UFC.