Técnicas. Varias técnicas han sido desarrolladas para separar, la adhesión, o romper ácido nucleico moléculas. La separación de las cadenas complem...

Técnicas. Varias técnicas han sido desarrolladas para separar, la adhesión, o romper ácido nucleico moléculas. La separación de las cadenas complementarias de una molécula de ADN se conoce como desnaturalización. ADN se desnaturaliza si se colocan en álcali (0,2A / NaOH) o cuando se hierve. Este último proceso se denomina como de fusión. La separación de las hebras de ADN se puede detectar mediante instrumentos espectrofotométricos; óptico densidad (OD) o absorbancia a 260 nanómetros aumenta durante el proceso de fusión. La temperatura de en el que el aumento de la OD ^ o es 50% de la obtenida cuando la línea de separación es completa se conoce como la temperatura de fusión (T m). Debido a G y C de pares de bases por tres honds de hidrógeno, mientras que A y T pares de bases por dos enlaces de hidrógeno, a mayor contenido de GC en el ADN de fusión más alto es el la temperatura. La fusión se realza cuando hay son grupos de A y T, y también cuando los purines (A, G) están en una hebra y todos las pirimidinas (T, C) están en la otra cadena. Si el ADN se hierve y se enfría luego rápidamente, las hebras se mantendrán único; si se enfría lentamente, hebras complementarias de aparearse y reformar las moléculas de ADN de doble hélice. Este proceso es llamado renaturalización o recocido. Moléculas de DNA-RNA híbridos pueden ser producidos por análoga procesos a partir de hebras individuales. ARN puede ser totalmente hidrolizado a los nucleótidos por la exposición a alta pH (alcalino). Esta propiedad puede utilizarse para purificar ADN a partir de una mezcla de ADN y ARN. Escoger ADN de cadena se unirá a los filtros de membranas hechas a partir de nitrocelulosa; ARN pasará por tales filtros. Sin embargo, si el ARN monocatenario es complementario a nitrocelulosa unida a cadenas simples de ADN, formará ADN-ARN moléculas híbridas y ser retenido por un filtro de este tipo. Hay tres métodos principales para romper las moléculas de ADN largas en fragmentos de tamaño adecuado para la secuenciación de base o para la ingeniería recombinante: (1) la degradación de corte, (2) de ultrasonidos, y (3) tratamiento con endonucleasas de restricción. Si una solución de ADN se somete a las fuerzas de agitación de una Waring o fuerza a través de un tubo u orificio estrecho, los extremos de hebras largas de ADN por lo general avanzar a diferentes velocidades; este se extiende ADN IHE y tiende a romperse cerca de la media. Este fenómeno se llama degradación de cizallamiento. Cuanto mayor sea la velocidad de agitación o la velocidad de cómo a través de un orificio, IHE mayor es la fuerza de cizallamiento. La eficacia de cualquier fuerza de cizallamiento aumenta con el tamaño molecular del ADN, pero disminuye con la concentración (porque el entrelazamiento de las moléculas de ADN reduce la estiramiento eficaz).