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Escuela de Medicina PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA 2 PRÁCTICA N° 04 DIFUSIÓN, DIÁLISIS Y ÓSMOSIS I. INTRODUCCIÓN Cada célula se encuentra rodeada por una membrana plasmática que la rodea, le da forma, es específica de la función de esta y la relaciona con el medio extracelular. Debido a su interior hidrofóbico, la bicapa lipídica de una célula constituye una barrera altamente impermeable a la mayoría de moléculas polares que permite a la célula mantener una composición citoplasmática distinta del medio extracelular. Sin embargo, para poder utilizar esta barrera las células han tenido que desarrollar sistemas para transportar específicamente moléculas hidrosolubles a través de la membrana y así poder ingerir los nutrientes esenciales, excretar los productos residuales del metabolismo y regular las concentraciones intracelulares de iones. Los mecanismos que permiten a las sustancias cruzar las membranas plasmáticas son esenciales para la vida y la comunicación de las células. Para ello, la célula dispone de diferentes procesos como, entre ellos tenemos: Difusión: mecanismo pasivo a favor del gradiente de concentración que facilita el transporte de determinadas sustancias que en general son insolubles en lípidos, monosacáridos, ácidos grasos, aminoácidos. Requiere transportadores especiales. Diálisis: Separación de pequeñas moléculas (cristaloides) de grandes moléculas (coloides) por medio de difusión a través de una membrana selectivamente permeable. Si se observan hematíes en soluciones de cloruro de sodio de diversas concentraciones se evidencian que su volumen está en estrecha relación con el medio en que se encuentran. Así, se les puede ver aumentar su volumen progresivamente si se les diluye este medio por adición de agua destilada. Más allá de una cierta dilución su distensión es tal que dejan escapar la hemoglobina y las sales que contienen. Este proceso se llama hemólisis y tiene lugar para concentraciones de NaCl inferiores al 0.5%. para soluciones de NaCl al 0.9%, por el contrario, el volumen de las células es el mismo que se puede observar en la sangre. Finalmente, si se utilizan soluciones más concentradas, las células disminuyen de volumen por perdida de agua, y toman progresivamente un aspecto arrugado, fenómeno que recibe el nombre de crenación. FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA 3 II. COMPETENCIAS: Identifica y valora los procesos de difusión, diálisis y ósmosis, así como estable diferencias, hace uso adecuado y responsable de los materiales del Laboratorio y manipula materiales biológicos; ejerciendo un pensamiento crítico y reflexivo III. MATERIAL Material biológico: - 1 huevo - 3 buches secos de pollo - 3 ml de sangre. Reactivos: - Fenolftaleína - NaOH 10%, - Nitrato de plata 2% - Reactivo de Biuret - Lugol - Solución de almidón al 30 %. - Agua destilada. Instrumental y equipos de laboratorio: - 5 Laminas porta objetos - 5 Laminillas cubreobjetos - 2 Jeringas hipodérmica de 5ml - Alcohol etílico de 96° - Torundas de Algodón - 3 vasos de precipitación de 250 ml - 4 tubos de ensayo de 13x100mm - 2 Pipetas de 10 ml - Microscopio óptico. IV. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA 4.1 PROCEDIMIENTO: A. DIFUSIÓN: - Preparar dos buches de pollo deshidratados, dejando un extremo cerrado y el otro extremo abierto. - Colocar dentro de los buches de pollo y de los vasos de precipitación, lo siguiente: Buche 1 Buche 2 Vaso 1 Vaso 2 Agua destilada (20 ml) + Fenolftaleína (5 gotas) Solución de almidón (20 ml) Agua de caño (150 ml) + NaOH (10 ml) Agua de caño (150 ml) + Lugol (20 gotas) FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA 4 - Lavar con agua de caño el buche 1 y sumergirlo dentro del vaso 1. Dejar actuar por 15 minutos. Observar, esquematizar e interpretar. - Lavar con agua de caño el buche 2 y sumergirlo dentro del vaso 2. Dejar actuar por 15 minutos. Observar, esquematizar e interpretar. B. DIÁLISIS: - Dentro de un buche de pollo deshidratado, colocar solución de albúmina disuelta en cloruro de sodio. - Sumergirlo en un vaso con 150 ml de agua destilada. Dejar actuar por 30 minutos. - Pasado este tiempo, colocar dentro de 2 tubos de ensayo de 15x150mm, lo siguiente: Tubo 1 Tubo 2 Líquido del vaso (5 ml) + Nitrato de Plata (3 gotas) Líquido del vaso (5 ml) + BIURET (1ml NaOH + 5 gotas de CuSO4) - Observar, esquematizar e interpretar. C. ÓSMOSIS (HEMÓLISIS Y CRENACIÓN) - Coloque 3 tubos de ensayo de 13x100 mm, en una gradilla, y agregue lo siguiente: Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 NaCl al 0,5% (4 ml) + Sangre (5 gotas) NaCl al 0,9% (4 ml) + Sangre (5 gotas) NaCl al 2,5% (4 ml) + Sangre (5 gotas) - Cada uno de los tubos, tapar con parafilm y mezclar la solución invirtiendo suavemente el tubo dos veces. - Inmediatamente, con una pipeta Pasteur, transferir 1 gota de la mezcla a una lámina portaobjetos limpia, y desengrasada con alcohol. - Colocar una laminilla cubreobjetos limpia, y desengrasada con alcohol. FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA 5 - Proceder para los 3 tubos de forma similar. - Observar al microscopio a 40X, esquematizar e interpretar 4.2 Resultados: análisis e interpretación DIFUSIÓN: Interpretación: ……………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… DIÁLISIS: Interpretación: ……………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA 6 ÓSMOSIS (HEMÓLISIS Y CRENACIÓN): Interpretación: ……………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… V. CONCLUSIONES FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA 7 VI. PREGUNTAS DE APLICACIÓN 1) Investigue sobre la importancia biomédica de la difusión, diálisis y ósmosis en el ser humano. a. Difusión b. Diálisis c. Ósmosis 2) La piel es una membrana histológica, que recubre nuestro cuerpo cuya epidermis no es vascularizada ¿Cómo crees que este tejido obtiene sus nutrientes para poder realizar sus funciones vitales? Fundamenta.
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