Practica 4

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Universidad Autónoma De Baja California 
Facultad de Ciencias Químicas e Ingeniería 
Laboratorio de Microbiología General 
 
Practica 4: 
Morfología Microscópica 
Alumna: 
Flores Zapotl Gladiz Berenisse 
 
Grupo: 
452 
 
Fecha de entrega: 
1-Abril-2022 
 
Docente: 
Dra. Bertha Landeros Sánchez 
 
 
 
 
 
COMPETENCIA 
Caracterizar los diversos microorganismos, así como sus estructuras internas y externas 
realizando diferentes preparaciones húmedas y fijas para la observación y clasificación de los 
microorganismos por sus propiedades tintorales y su morfología microscópica, con apego a las 
normas de bioseguridado 
FUNDAMENTO TÉORICO 
Para el estudio de las características morfológicas de los microorganismos, es necesario 
observarlas al microscopio, y así mismo, hacer contrastes con colorantes para poder observar 
con claridad sus diferencias, a esta técnica se le denomina tinción, las cuales pueden ser de 
diversos tipos. 
CLASIFICACION DE LAS TINCIONES SEGÚN EL NÚMERO DE COLORANTES USADOS 
TINCIONES SIMPLES: Son aquellas en las que sólo se adiciona un colorante, en preparaciones 
fijas y teñidas. El frotis fijo se inunda con la solución colorante durante un periodo de tiempo 
establecido, después del cual se lava con agua, y se coloca en papel secante. Ej. Negrosina y 
Azul de Metileno. 
TINCIONES DIFERENCIALES: Es cuando dos o más colorantes son aplicados para impartir 
color a la célula o a sus partes específicas. Y son coloraciones que proporcionan diferencias 
entre las células bacterianas o entre sus partes. Ej. Tinción de Gram. 
TINCIONES POSITIVAS Y NEGATIVAS: Según se tiña el microorganismo sobre un fondo claro 
(Positiva) o el fondo oscuro y la estructura del microorganismo transparente (Negativa) 
TINCIONES ESPECIALES O ESTRUCTURALES: Son aquellas que ponen en de manifiesto 
alguna de las estructuras de microorganismo (Esporas, Flagelos, Cuerpos de inclusión, etc.) 
Los procedimientos de coloración que ponen de manifiesto diferencias entre células bacterianas 
o en partes de una célula bacteriana se conocen como técnicas de tinción diferencial. Las 
técnicas diferenciales más usadas son: la tinción de Gram y la tinción de Ziehl -Neelsen. Ambas 
tinciones se emplean para distinguir entre un grupo de organismo y otro. Usando cualquiera de 
estas dos tinciones es posible clasificar todas las células en por lo menos dos categorías, ya 
que una célula dará positiva o negativa con respecto a la tinción empleada. 
TINCIÓN DE GRAM 
La tinción de Gram es de gran valor taxonómico, ya que se utiliza para demostrar las 
propiedades tintorales de todos los tipos de bacterias. Al utilizarla automáticamente se divide el 
reino de los microorganismos en dos categorías (Gram positivo y Gram negativo), además 
observando la forma de la célula se puede hacer dos o más subdivisiones bien definidas. Esta 
tinción constituye el punto inicial de identificación de una bacteria. 
La tinción de Gram se compone de 4 reactivos diferentes con un fin cada uno de ellos. 
Cristal Violeta: Colorante primario imparte color a todos los microorganismos en frotis. 
Yodo o Lugol: El segundo reactivo es una solución diluida de yodo que actúa como mordente. 
Alcohol-Acetona: El tercer reactivo es un decolorante porque disuelve y arrastra fuera el 
colorante primario de las células que no lo retienen con fuerza. 
Safranina: Es un colorante usado como contra-tinción, aquellos organismos que se destiñeron 
con el decolorante quedaron incoloros, por lo tanto, toman el color de la safranina. 
TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN 
También se le conoce como tinción acidorresistente, llamada así debido a la naturaleza ácida 
del agente decolorante empleado (Solución de HCl al 3% en alcohol 95%). Los organismos 
acidorresistentes son capaces de retener el colorante primario debido a que este colorante es 
más soluble en las substancias lipoides presentes en el microorganismo, que la solución 
decolorante. Otra de las características de la tinción es el empleo de calor como agente 
intensificador del colorante primario. 
La tinción acidorresistente encuentra gran aplicación en medicina, debido a que algunos 
miembros del género Mycobacterium se asocian con infecciones y que por ser de las pocas 
bacterias que son acidorresistentes. 
PARTE EXPERIMENTAL 
MATERIAL 
 
Asa de nicromo 
Mecheros Meker. 
Mechero Bunsen 
Portaobjetos. 
Puente de coloración 
Microscópio. 
Solución MICRO al 5%. 
Solución de Alcohol isopropílico al 70%. 
Agua destilada. 
Colorantes de Tinción de Gram Cultivos de microorganismos. 
 
TÉCNICA 
TÉCNICA DE TINCIÓN DE GRAM 
A). Hacer 1 frotis de cada una de las cepas proporcionadas y dejar secar al a aire. 
B). Fijar el frotis con calor. 
C). Cubrir con cristal violeta y dejar actuar 1 minuto. Escurrir y lavar con agua corriente en chorro 
suave. 
D). Cubrir el frotis con lugol y dejar actuar 1 minuto. Escurrir y lavar con agua. 
E). Decolorar con alcohol-acetona de 5 a 15 segundos. Escurrir y lavar con agua. 
F). Cubrir el frotis con safranina y dejar actuar 1 minuto. Escurrir y lavar con agua. 
G). Secar al aire. Observar al microscópio con objetivo de inmersión. 
 
TÉCNICA DE GRAM, PASO POR PASO. 
A. Hacer 4 frotis de cada una de las cepas proporcionadas 
B. Teñir los cuatro frotis como se indica en la tabla siguiente. 
C. Lavar los frotis después de cada adición de los reactivos como se indicó en la técnica 
de Gram. 
D. Dejar secar al aire y observar al microscopio con objetivo de inmersión. 
 
 
RESULTADOS 
Se utilizo agar Mac Conkey para sembrar la muestra, es un agar selectivo para Bacilos Gram 
Negativas. 
 
 
Colonia: Incoloras 
Gram: Negativas 
Forma: Bacilos 
FROTIS REACTIVOS 
1 CRISTAL VIOLETA 
2 CRISTAL VIOLETA + LUGOL 
3 CRISTAL VIOLETA+ LUGOL + ALCOHOL-ACETONA 
4 CRISTALVIOLETA+LUGOL+ALCOHOLACETONA+SAFRANINA 
Colonia: De color rosa 
Gram: Negativas 
Forma: Bacilos 
 
 
 
 
 
 
Colonia: Incoloras 
Gram: Negativas 
Forma: Bacilos 
 
OBSERVACIONES 
 
Debido a que nuestros cultivos no crecieron, un equipo nos compartió uno de sus cultivos 
 
 
CONCLUSIONES 
Mediante un frotis, y aplicando la técnica de tinción diferencial mediante la “Tinción Gram” se 
identificaron en tres muestras bacterias Bacilos Gram Negativas (coloración roja e incolora). 
El agar Mac Conkey utilizado para sembrar la muestra, es un agar selectivo para Bacilos Gram 
Negativas. 
 
INVESTIGACIÓN 
Tipos de morfología microscópica que existen, con dibujo y explicación, y de ejemplos de ellas. 
Cocos (esféricas u ovaladas): Bacterias que se caracteriza por tener una envoltura celular 
de forma esférica. 
 
 
Diplococo: Conjunto de bacterias que se caracterizan por ser cocos que tienen típicamente la 
forma de dos células unidas. 
Ejemplos: Neisseria gonorrhoeae diplococo Gram Positiva; Moraxella catarrhalis diplococo 
Gram Negativo 
 
 
 
Diplococo encapsulado: Son dos cocos unidos, que se encuentran encapsulados. 
Ejemplo: Streptococcus pneumoniae (neumococo) 
Estreptococo: Se agrupa en cadenas 
 
 
 
 
Ejemplos: 
Estreptococos del grupo A: Streptococcus pyogenes producen amigdalitis e impétigo. 
Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producen meningitis en neonatos y 
trastornos del embarazo en la mujer. 
 
Estafilococo: Son bacterias esféricas de casi 1 μm de diámetro dispuestas en racimos 
irregulares parecidos a las uvas. 
Ejemplos: 
Staphylococcus aureus 
Staphylococcus epidermidis 
Staphylococcus lugdunensis 
Staphylococcus saprophyticus 
Bacilo (cilíndrica o de bastones; rectos o curvos): Pueden ser muy cortos o largos. Sus 
extremos pueden ser redondeados o rectos; pueden estar aislados, en cadenas, en filamentos 
o formando letras chinas. 
 
 
 
Ejemplo: 
Bacilo de Aertrycke: Salmonella. 
Bacilo de Bang: B. abortus. 
Bacilo de Ducrey: H. ducreyi. 
 
Cocobacilo: Forma intermedia entre los cocos (bacterias esféricas) y los bacilos(bacterias en 
forma de varilla). Los cocobacilos por tanto, tienen forma de bastoncillos muy cortos que pueden 
confundirse con los típicos cocos. 
 
 
 
 
Ejemplos: 
Haemophilus influenzae, 
Gardnerella vaginalis 
Chlamydia trachomati 
Empalizada: Se caracterizan por ser uniones entre bacterias, bacilos, de forma vertical. 
 
 
 
 
Ejemplo: Simonsiella muelleri 
Espirilos (espiral): Bacterias que poseen una configuración helicoidal, semejante a la de un 
tirabuzón, cuyos cuerpos son relativamente rígidos. Se desplazan con la ayuda de apéndices 
externos llamados flagelos. 
Ejemplos: 
Treponema pallidum (sífilis) 
Leptospira (leptospirosis o ictericia de Weill). 
 
 
 
 
 
 
Vibrio: Tienen forma de coma; son bacterias comunes en los medios acuáticos. Tienen muchas 
propiedades metabólicas y estructurales comunes con enterobacterias y pseudomonas. 
Ejemplos: 
Vibrio cholerae, agente etiológico del Colera asiático 
V. parahaemolyticus produce gastroenteritis 
V. fischeri se encuentra entre las pocas bacterias que producen bioluminiscencia 
 
Espiroqueta: Son muy delgadas, flexibles, de cuerpo espiralado que se mueven por medio de 
una estructura llamada filamento axial o endoflagelo. 
Ejemplos: 
Treponema pallidum, produce la sífilis 
Borrelia burgdorferi, produce la enfermedad de Lyme 
 
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
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2022, 
van http://www.biologia.edu.ar/bacterias/Bacteriasrelavantes.htm 
[2] Ucv.ve. Recuperado el 31 de marzo de 2022, de 
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_2_morfolo
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Recuperado el 31 de marzo de 2022, de 
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https://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:7K8QBjvdbMIJ:https://www.bd.com
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