Chopita - lipidos 2

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LIPIDOS 2
LIPOPROTEINAS PLASMATICAS
En un corte transversal de la estructura formada por las lipoproteínas encontramos:
· Capa anfipatica de fosfolipidos (cuya cabeza polar mira hacia el lado hidrofilico y su cola no polar hacia el lado hidrofobico) y colesterol libre (ya que el hidroxilo polar favorece su solubilidad).
· Capa hidrofobica de TAGs y colesterol esterificado con AG.
· Para reforzar aun mas la solubilidad, se asocian proteinas a los lípidos, llamadas apoproteinas. 
Dicho conjunto se denomina lipoproteínas plasmáticas.
Si nosotros tomamos una alícuota de plasma sanguíneo de un animal EN AYUNO y lo centrifugamos nos van a aparecer en el tuvo de ensayo 3 bandas bien definidas de mas profundas a mas superficiales (de mas a menos densidad):
· HDL: Lipoproteína de alta densidad. 55% de lípidos (predomina PL)
· LDL: Lipoproteína de baja densidad.
· VLDL: Lipoproteína de muy baja densidad.
Si el animal NO estuvo en ayuno aparece una 4ta capa:
· Quilomicrones (Q): La mas superficial. Formada por 99% lípidos (TAGs predominantes) y 1% proteinas. 
	Lipoproteina
	Lipido predominante
	Origen
	Función 
	Q
	TAG exógeno (consumido)
	Intestinal
	Llevar TAG exógeno a los tejidos
	VLDL
	TAG endógeno (producido)
	Hepático 
	Llevar TAG endógeno a los tejidos
	LDL
	Colesterol esterificado
	IDL
	Llevar colesterol a los tejidos
	HDL
	PL
	Hepático e intestinal 
	Remover colesterol de los tejidos
QUILOMICRON
La vellosidad intestinal posee e su parte central un quilífero (vaso linfático de alto calibre) que permite que los quilomicrones entren a él y vayan por via linfática mesentérica hasta la cisterna de quilo, el cual hacia craneal se continua con el conducto torácico que desemboca en la vena subclavia izquierda. Asi los quilomicrones pasan a circulación general salteándose el filtro hepático.
Este quilomicrón naciente sintetizado en el intestino y rico en TAG exógeno, posee la Apo A y Apo B 48. 
A él se le adsorben partículas HDL que le ceden apoproteinas E y C (principalmente C2) para constituir los quilomicrones maduros. La apo C2 activa a la lipoproteinlipasa que cataliza la hidrólisis de los TAG del Q maduro a AG y glicerol (el glicerol va al hígado y los AG son incorporados a los tejidos para obtener energía o para síntesis de TAG o PL). Por lo tanto, a medida que la lipoproteinlipasa vaya trabajando los niveles de TAG del Q van a ir bajando.
Además, la HDL posee una proteina transportadora de esteres de colesterol (CETP), la cual toma los TAG del Q y los intercambia por esteres de colesterol de la HDL haciendo que los niveles de TAG del Q bajen aun mas. Por lo tanto, queda un remanente de Q empobrecido en TAG y enrriquecido en esteres de colesterol. Luego la apo C es devuelta a la HDL, sin embargo la apo E queda en el Q, el cual gracias a esta apoproteina es reconocido y captado por el hígado para que los TAG sean degradados a AG y glicerol y los esteres de colesterol a colesterol para la síntesis de sales biliares (siendo el excedente eliminado por heces). 
VLDL
Sintetizadas por el hígado, ricas en TAG endocrino y su apoproteina característica es la apo B100.
A los VLDL nacientes se les adsorben HDL de superficie las cuales le ceden apo E y C2 para convertirlas en VLDL maduras. La apo C2 activa la lipoproteinlipasa que cataliza la hidrólisis de los TAG a AG y glicerol. Aca también actua la CETP de la HDL, intercambiando lo TAG por esteres de colesterol y quedando un remanente de VLDL, también llamada IDL. Si la IDL expresa apo E, es reconocida y captada por el hígado para ser degradada a AG y colesterol. En cambio, si la apo E es recaptada por la HDL, el hígado no puede reconocer la IDL. Sin embargo, en el endotelio vascular hepático hay una lipasa hepática que actua sobre la IDL degradando los TAG y quedando una particula rica en esteres de colesterol: las LDL.
LDL (malo)
Por lo tanto estas se originan de las IDL, siendo ricas en esteres de colesterol. Ejemplo: Linoleato de colesterilo.
Llevan el colesterol hacia los tejidos que expresan receptores para LDL los cuales reconocen la apo B100, haciendo que las LDL sean internalizadas en vesículas endociticas a las cuales se le adosan lisosomas que liberan en ellas su contenido de enzimas hidroliticas, proteasas (proteinas degradadas a aminoácidos) y colesterolesterasa, el cual cataliza la hidrólisis de los esteres de colesterol en colesterol libre y AG. El colesterol libre es utilizado por la celula para, por ejemplo, la síntesis de colesterol de membrana. Además, altos niveles colesterol libre:
· Inhiben la HMGCoA reductasa. 
· Van a ser reesterificado por la AcilCoA colesterol aciltransferasa que es guardado en gotitas lipidicas.
· Inhiben la síntesis de receptores de LDL ya que la celula esta “satisfecha” de colesterol libre. Al quedar mucha LDL en circulación (hipercolesterolemia), estas colonizan la intima vascular formando un ateroma (ateroesclorosis). Asi el flujo laminar, al chocar con el atoroma se convierte en flujo turbulento. Si la placa sobre el ateroma se rompe, debido al flujo turbulento las plaquetas no pueden actuar debidamente y se forman trombos, causando asi ACV o infarto de miocardio.
Dato cheto: El fitoesterol ayuda a reducir el colesterol ya que, al ser una molecula hidrófoba, compite con el colesterol esterificado de la dieta por el centro hidrófobo de la lipoproteína. Asi el colesterol queda fuera de la lipoproteína y no puede ser absorbido, mientras tanto el fitoesterol tampoco es absorbido por los enterocitos ya que estos últimos no poseen receptores para dicha molecula. Por lo tanto, para que el fitoesterol compita con el colesterol de la dieta NO hay que tomarlo en ayuna, sino justamente cuando uno consume las grasas.
HDL (bueno) Chapulín colorado de las lipoproteínas ;) 
Son de origen mixto (hepático e intestinal), ricas en PL, los cuales al ser anfipaticos quedan todos en superficie, por lo que la forma de la HDL va a ser discoide (ya que no tiene nada hidrófobo adentro que lo rellene).
Expresan en su superficie la LCAT (lecitin colesterol acil transferasa). Esta remueve el colesterol libre que se encuentra en la membrana de las celulas y, a medida que los esterifica con los AG poli-insaturados (omegas) de la lecitina, los incorpora a la HDL, por lo que esta ultima va “engordando” pasando de una forma discoide a esferoidal y quedando lisolecitina en lugar de lecitina, la cual es tranferida a la albumina del plasma. A medida que desaparece el colesterol libre de la membrana, éste tiene que ser reemplazado, por lo que la colesterolesterasa intracelular desesterifica el colesterol esterificado de adentro de la celula para que vaya a superficie como colesterol libre. Este colesterol libre es tomado nuevamente por la LCAT y asi sucesivamente.
Cuando la HDL se carga de colesterol esterificado decimos que se forma la HDL 3. Esta es la que produce el intercambio del colesterol esterificado por TAG a través del CETP con los Q y VLDL. Luego de este intercambio la llamamos HDL 2, la cual es rica en TAG. Al pasar por el hígado, por acción de la lipasa hepática, los TAG son degradados a AG. Asi la HDL 2 queda pobre en TAG y se vuelve a formar HDL 3. 
Dato cheto: La lecitina ayuda a reducir el colesterol.
ESEPCIES
LDL: 
· Lipoproteina predominante: LDL. 
· Humano, camélido, cerdo, conejo, mono en estos últimos 3 hay un equilbrio de LDL y HDL, pero cuando tienen una dieta rica en lípidos TIENDEN a LDL.
HDL: 
· Lipoproteína predominante: HDL.
· Canino, felino, bovino, equino, rata.
· Presentan baja o nula actividad de la CETP, por lo tanto no hay intercambio de TAG y esteres de colesterol entre la HDL y remanentes de Q y VLDL. Esto implica que la HDL carga esteres de colesterol sin poder cederlos, por lo que se forma una nueva particula HDL 1 rica en esteres de colesterol. Esta ultima es captada con gran eficacia por el hígado para que el colesterol sea degradado en el hígado.
Esto hace que IDL y LDL sigan siendo ricas en TAG y vayan a degradarse al hígado. 
Además la HDL 3 es una lipoproteína es fugaz.
	EspeciesLDL
	Especies HDL
	Predominio de LDL
	Predominio de HDL
	LDL ricas en colesterol
	LDL ricas en TAG
	Alta actividad de CETP
	Baja actividad de CETP
Toda la regulación de la lipemia esta en el TP integrador!!! Pero aclaro aca la formación de cuerpos cetonicos, teniendo en cuenta el HIGADO y AYUNO PROLONGADO (y diabetes no tratada):
Ingresa AG al higado y forma acilCoA. Éste, al entrar a la mitocondria, junto con CoASH, va a producir Acetil-CoA al entrar en β-oxidación. Mientras tanto, el oxalacetato esta siendo derivado a la via gluconeogenica para producir glucosa, por lo que el Ciclo de Krebs esta FRENADO (frenado y no enlentecido como en el ayuno fisiológico, ya que en este ultimo, si bien se produce gluconeogenesis, la via que principalmente aumenta glucemia es la glucogenolisis. Por lo que el Ciclo de Krebs sigue funcionando de manera catabólica pero en menor medida, ya que hay una cantidad importante de metabolitos que están siendo derivados hacia la gluconeo. En cambio, en el ayuno prolongado, lo único que sustenta la elevación de la glucemia es la gluconeogenesis, por lo que tooodoos los metabolitos (oxalacetatos al fin y al cabo) del Ciclo de Krebs son derivados, y éste en su sentido catabólico es FRENADO). Por lo tanto, el AcetilCoA al no entrar en Ciclo de Krebs se acumularía y no se regeneraría el CoASH, por lo que también se frenaría la β-oxidación. Entonces, para poder regenerar el CoASH y que la en β-oxidación siga funcionando, el AcetilCoA va a sintesis de cuerpos cetonicos o cetogenesis.
Cetogénesis:
Via hepatoespecifica. Se da en la mitocondria.
Los cuerpos cetonicos son acetoacetato, acetona y β-hidroxibutirato. Podemos pensar que el acetoacetato en su mayoría es reducido a β-hidroxibutirato, ya que dicha reaccion consume NADH y, debido a la β-oxidación hay gran cantidad de NADH circulante. Sino también, al ser descarboxilado, el acetoacetato es transformado a acetona, la cual al ser muy volátil es eliminada por vías respiratorias (por eso el olor a acetona en el aliento de anoréxicas). Tambien, al el elevarse tanto la cetonemia, los cuerpos cetonicos en exceso se eliminan por orina.
Cetólisis:
Se da en la mitocondria.
Los cuerpos cetonicos desde el higado son exportados a circulación (cetonemia) y van a ser captados por tejidos extrahepaticos, especialmente por el musculo esquelético, cardiaco y riñon, y ser degradados. En estos tejidos, la oxidación del β-hidroxibutirato da 2 moleculas de AcetilCoA que entran a Ciclo de Krebs. En el riñon, el ritmo gluconeogénico no es elevado como para carecer por completo de ciclo de Krebs, por lo que puede utilizar cuerpos cetónicos para obtener energía.
Teniendo en cuenta que solo la glucosa y los cuerpos cetonicos pueden atravesar la barrera hematoencefalica, el SNC al estar sometido a una falta de glucosa en un ayuno prolongado se adapta a esta situación. Pero esto solo ocurre con la presencia de glucocorticoides en el SNC, sin ellos por mas de que los cuerpos cetonicos puedan pasar la barrera, no tiene posibilidades metabólicas de utilizarlos debido a la falta de la enzima β-cetoacil-CoA transferasa. Ante la llegada de glucocorticoides y la derivada síntesis inducida de las enzimas en cuestión, recién ahí el SNC es capaz de utilizar los cuerpos cetonicos.
TRABAJO PRACTICO EXPERIMENTAL: LIPIDOGRAMA ELECTROFORETICO.
No olvidar del primer parcial!!!!
La electroforesis es el movimiento de partículas cargadas, presentes en una solución, bajo la influencia de un campo eléctrico. Estas partículas cargadas pueden ser enzimas, ácidos nucleicos, lipoproteínas, glucoproteínas o elementos organizados como virus, bacterias, espermatozoides, etc.
La velocidad de una partícula cargada (v) es directamente proporcional al campo eléctrico (H) aplicado y la constante de proporcionalidad es llamada movilidad (m).
La movilidad depende de la carga neta de la partícula, de su radio, la viscosidad del medio liquido en que se mueve y de la trama microcapilar del soporte sólido sobre el cual migra.
En condiciones de trabajo estándar (cubeta, soporte, soluciones buffer y voltaje definidos) los factores que hacen diferir la movilidad de las distintas fracciones proteicas son su tamaño y carga eléctrica neta.
Algunas enfermedades que sufren los caninos y en las cuales se observa hiperlipemia son: diabetes mellitus, pancreatitis aguda, hipotiroidismo, hiperglucocorticoitismo, enfermedad hepática colestatica, hiperlipemia idiopática.
· En sueros humano y canino no se observan quilomicrones debido al ayuno (no menos a 12 hs).
· En sueros canino y humano los lípidos predominantes de las HDL son los fosfolipidos y el colesterol, pero solo en caninos las α lipoproteínas (HDL2 Y HDL3) constituyen la fracción mas abundante.
· En humanos las β lipoproteínas (LDL) son las que se encuentran en mayor concentracion relativa y transportan especialmente colesterol mientras que la misma fracción en suero canino es mas rica en TAG y PL que en colesterol.
Objetivo: determinar semicuantitativamente las lipoproteínas de una muestra de suero canino.
Fundamento: Las lipoproteínas a PH de buffer utilizado (8,6) van a estar cargadas negativamente. Sometidos a un campo eléctrico (electroforesis) van a migrar hacia el polo positivo a distintas velocidades, quedando a diferentes distancias con respecto a la línea de siembra, según su tamaño y principalmente la carga neta de cada una. 
Resultados: Comparar un lipidograma normal con el de la muestra. En nuestro caso también dio normal.
Un lipidograma normal estaría representado de la siguiente manera:
Conclusion: El lipidograma se asemeja (o no) al lipidograma normal.
Técnica: Sobre un portaobjetos limpio y desengrasado con alcohol se derrama solución de agarosa calentada a baño maria. Inmediatamente antes de que se solidifique el gel, colocar a 2 cm del borde una aguja. Luego de 10 minutos retirarla con un iman. En la canaleta que quedo formada en el gel de agarosa se realiza la siembra de suero (la cual antes debe ser preteñida con azul de bromofenol).Luego se coloca el portaobjetos en la cuba electroforética, estando en contacto con el buffer a través de puentes de papel filtro. 
Una vez cumplida la corrida, se sumerge el portaobjetos en solución fijadora por 2 horas. Luego se lo cubre con papel filtro mojado en agua y se lo coloca en estufa a 70° por media hora. 
Luego se lo sumerge en colorante 2 horas mas, después se lava con agua destilada y se deja secar para poder compararlo con el lipidograma normal.
Comparación de proteinograma y lipidograma:
	
	PROTEINOGRAMA
	LIPIDOGRAMA
	Soporte
	Acetato de celulosa
	Gel de agarosa
	Solución Buffer
	Veronal sódico (PH=9,2)
	Veronal-veronal sódico (PH=8,6)
	Pre teñido
	Azul de bromofenol
	Azul de bromofenol
	Solución lavadora
	· Metano + acido acético 
	X
	Solución fijadora
	X
	· Mezcla de alcoholes
	Colorante
	Amido de Schwarz
	Sudán Black
	Solución eluyente
	· 
	X
	Valoración 
	Cuantitativo
	Semicuantitativo