Descarga la aplicación para disfrutar aún más
Vista previa del material en texto
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES IZTACALA EVALUACIÓN DE LAS PROPIEDADES AFRODISÍACAS DEL EXTRACTO POLAR DE Tribulus terrestris L. NACIONAL Y EUROPEO EN RATAS MACHO T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: B I Ó L O G O P R E S E N T A : C U E V A S L O P E Z J U A N DIRECTOR DE TESIS: BIÓL. GABRIEL MARTÍNEZ CORTÉS TLANEPANTLA, ESTADO DE MÉXICO 2008 Neevia docConverter 5.1 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. DEDICATORIA A mis padres, Navora López y Camilo Cuevas A mis hijos Edith Citlalli y Juan Ángel A mi esposa Clara Soto Soria A todos mis Amigos. POR TODO SU APOYO Y COMPRENSION YA QUE SIEMPRE ESTAN CONMIGO EN TODOS LOS MOMENTOS DE MI VIDA. A ELLOS CON MUCHO CARIÑO POR ESTO QUE LOGRAMOS JUNTOS. El éxito consiste en obtener lo que se desea, la felicidad, en disfrutar lo que se obtiene. Neevia docConverter 5.1 AGRADECIMIENTOS El desarrollo experimental de este trabajo se llevó a cabo en la Facultad de Estudios Superiores Iztacala de la UNAM, bajo la dirección del Biólogo Gabriel Martínez Cortes y con la asesoría del Dr. Miguel Carro Juárez del Departamento de Agrobiología de la Universidad Autónoma de Tlaxcala. Agradezco al Doctor Miguel Carro Juárez por su valiosa ayuda para la realización del presente trabajo. Al Ingeniero Andrés Manuel Flores Acosta por su aportación económica para la realización de esta tesis. Neevia docConverter 5.1 ÍNDICE Página 1. Introducción 1 2. Antecedentes 9 3. Objetivos 15 4. Material y métodos 16 5. Resultados 27 6. Discusión 32 7. Conclusiones 33 8. Bibliografía 34 Apéndice 1. Glosario 39 Apéndice 2. Conducta copulatoria de la rata macho 41 Apéndice 3. Tabla de polaridad de solventes 42 Apéndice 4. Saponinas: generalidades 43 Apéndice 5. Saponinas: obtención y ensayos 46 Apéndice 6. Saponinas: acciones y usos 48 Apéndice 7. Principales especies con saponinas esteroídales 49 Apéndice 8. Vías metabólicas de algunos compuestos secundarios 50 Neevia docConverter 5.1 RESUMEN. En el presente trabajo empleamos Tribulus terrestris nacional, se evaluó el comportamiento sexual de las ratas macho sexualmente activas, que recibieron tratamientos de 36, 72, 143 y 186 mg/Kg respectivamente del extracto etanólico. Los resultados mostraron que la administración mas alta del extracto de Tribulus terrestris nacional no facilita la motivación y desarrollo sexual de las ratas macho sexualmente activas. Los presentes resultados proveen la evidencia experimental de que la preparación del extracto etanólico de Tribulus terrestris de la zona de San Rafael Coxcatlán, Municipio de Puebla no puede ser considerada como una planta pro-eréctil o afrodisíaca. Neevia docConverter 5.1 1. INTRODUCCIÓN. La flora de México incluye un gran número de especies procedentes tanto del hemisferio norte como del hemisferio sur (Rzedowski, 1992). Los recursos vegetales se han utilizado en forma intensiva para solventar necesidades de alimento, vestido, vivienda y salud entre otros. El gran interés suscitado en la actualidad en torno a la fitoterapia no obedece a un hecho puntual o a una moda. Nuestra época está marcada por la búsqueda de una vida más sana y una mejora de la calidad de vida, para conseguirlo, el hombre se ha dado cuenta de la necesidad de volver los ojos a los valores esenciales que siguen estando básicamente en la naturaleza. Desde épocas ancestrales, las plantas han jugado un papel importante como remedios o tratamientos contra enfermedades. Desde entonces y hasta la actualidad han sido varios los estudios encaminados a conocer las propiedades que la medicina tradicional mexicana atribuye a las plantas. En este sentido, el programa IMSS-COPLAMAR (hoy IMSS oportunidad) dio a conocer un total aproximado de 2000 plantas curativas, (Gali, 1985). En la medicina tradicional, las plantas tienen gran demanda ya que se consideran importantes por su eficacia y sencillez de preparación así como por su bajo costo y fácil adquisición por la gente de escasos recursos económicos (Bautista y González, 1996). En México, el término herbolaria se refiere a las plantas utilizadas por la población como recurso natural médico para aliviar sus padecimientos. Las plantas medicinales son empleadas básicamente en dos formas: 1) como mezclas complejas que contienen un amplio número de constituyentes (infusiones, tés, aceites esenciales, tinturas, extractos, etc.) y 2) como compuestos químicos definidos como principios activos (Ávila, 1996), que en muchos casos, son los constituyentes principales de los fármacos empleados en la medicina alópata. Además, estos sirven como base en la investigación y síntesis de nuevos fármacos (Cordell, 2000). Uno de los muchos problemas de salud en nuestro país es sin duda la disfunción sexual, que solía ser, y aun lo es en muchas sociedades, un tabú, por lo que su estudio científico no ha sido realizado tan ampliamente como en otros campos médicos. Esta situación no había cambiado, hasta la introducción del fármaco para el tratamiento de la disfunción eréctil (DE): SILDENAFIL (Viagra). Desde que estuvo disponible un fármaco oral para el tratamiento de la DE, los tratamientos que involucran inyecciones intracavernosas o intrauretrales de sustancias vasoactivas o implantes en el pene como mecanismos de ayuda ya no desempeñan un papel importante en el tratamiento de esta disfunción (Quinzaños, 2002). Neevia docConverter 5.1 De acuerdo con la definición internacionalmente reconocida del Instituto Nacional de Salud NIH, por sus siglas en inglés en 1993, la DE se define como la incapacidad persistente de un hombre para alcanzar y/o mantener una erección suficiente para un desenvolvimiento sexual satisfactorio, (NIH consenso de impotencia, 1993). La disfunción eréctil en la mayoría de los casos, se debe a diversas causas, siendo las más importantes los factores de riesgo cardiovascular. De acuerdo con el estudio Cologne (Braun et al. 2000), 20% de los pacientes con DE tienen diabetes mellitus, 30% hipertensión arterial, 30% son fumadores y 38% consumen alcohol en forma regular. Otro estudio encontró resultados similares (Roumeguére et al, 2001): 20% de los pacientes con DE tienen diabetes mellitus no diagnosticada; 48%, hipertensión y 76% niveles de colesterol elevados. La sexualidad es una parte fundamental del estado de salud del sujeto, lo que ha conducido a la aceptación de que la disfunción eréctil es un problema serio de salud. El 55% de los mexicanos mayores de 40 años sufren disfunción eréctil (Aguilar, 2004). El estudio de Massachussets de hombres de edad (Feldmanet al, 1994) encontró una prevalecía de 52% en hombres de 40 a 70 años. Otro estudio estadounidense (Laumann et al, 1999), el estudio de Salud Nacional y Vida Social, notó que 31% de los hombres del grupo de 18 a 60 años ya habían experimentado DE. Estudios en Inglaterra y Francia han encontrado resultados similares (Spector and Boyle, 1986, Giuliano et al., 1996). En la actualidad, se ofrecen varias opciones para superar este padecimiento entre ellas, algunos fármacos que han comprobado científicamente su seguridad y eficacia. Hasta el mes de abril del 2005 se habían aprobado ocho registros sanitarios (Tabla 1). El mercado de medicamentos para la disfunción eréctil en México está valuado en 70 millones de dólares y crece a razón de 20% anual (Marrón, 2004). (Figura 1). Sin embargo los fármacos no son la única opción, ya que contamos con la “medicina alternativa” la que se considera natural y más económica. El uso de estos productos llamados también fitomedicamentos va en aumento. Se estima que en Estados Unidos un 18-40% de los adultos utilizan un tratamiento alternativo junto a un tratamiento clásico (Benvuto y Garay, 2002). La tendencia actual en Europa, EE.UU. y Japón donde los consumidores se preocupan mucho por el cuidado de la salud, es el consumo de productos naturales lo que permite que plantas con alto valor energético y nutracéutico, puedan tener una gran demanda. (INDECOPI, 2003). Dentro del grupo de los productos naturales nos encontramos con los afrodisíacos. Estos son elaborados de plantas, que han sido empleadas en forma tradicional por diferentes culturas para mejorar el desempeño Neevia docConverter 5.1 sexual (Arletti et al, 1999). Aunque no hay suficientes estudios experimentales en estas plantas para asegurar su total eficacia (De Smet, 1997). En México se han encontrado diversas plantas con estas propiedades (Arletti et al., 1999). Los afrodisíacos se pueden clasificar de acuerdo a su modo de acción dentro de tres grupos; substancias que incrementan el líbido (son aquellas que despiertan el deseo sexual), substancias que incrementan la potencia sexual (erecciones eficaces) y substancias que incrementan el placer sexual (Carro- Juárez et al., 2004 ) (tabla 1). Una de estas plantas con mayor demanda por el mercado internacional es sin duda la maca (Lepidium meyenii W), (figura 2). Es muy conocida en el Sur de América, Se cultiva en los Andes, los mayores centros de producción son Junín y Pazco, sin embargo, debido al auge que tiene ahora, se cultiva en casi todos los departamentos del Perú. Esta planta crece en una altitud de 3800 a 4800 msnm, con temperaturas muy bajas (4° a 7°C) y fuertes vientos. La maca es una planta bienal de la familia de las crucíferas, de la cual la parte subterránea (hipocótilo) es comestible y altamente valorada por su contenido nutricional especialmente proteínas y minerales. La comunidad rural está firmemente convencida que aquellas parejas que no han tenido hijos por infertilidad, comiendo maca pueden concebirlos. (Quiroz et al., 1996 y Toledo et al., 1998). Otro uso que se le da es contra problemas de menopausia y recientemente los atletas son alimentados con maca por ser una alternativa para sustituir a los esteroides anabólicos (aunque la eficacia de esta planta tiene que ser totalmente probada), (Grunewald and Bailey, 1993). Química Suiza, la distribuidora peruana del gigante farmacéutico AstraZeneca, invirtió más de un millón de dólares en investigación y desarrollo de maca trabajando en estrecha colaboración con el Centro Internacional de Papa (CIP) desde 1994. En 1999 Química Suiza ya exportaba tabletas de maca al Japón promoviéndolas como “viagra natural”. Los funcionarios de la compañía afirman que la maca no sólo mejora la fertilidad masculina y femenina, sino también incrementa la energía y libera el estrés. (Chauvin, 1999). Por otro lado, en el análisis químico realizado por Johns en 1981, sugiere que las posibilidades potenciadoras de la maca (Lepidium meyenii W.) pueden ser debido a la presencia de la macaridina (1), isotiosanatos aromáticos biológicamente activos y específicamente, debido al N-bencil-oxo -6E-8E- Octadecadienamida (2), bencilisotiosanato y al p-metoxibencil isotiosanato. La propiedad afrodisíaca de esta planta también pueden ser atribuidos a la presencia de prostaglandinas y esteroles en los hipocotilos (tabla 3), (Dini, 1994). Este autor también reporta los diferentes aminoácidos encontrados en la maca andina). Neevia docConverter 5.1 Macaridina (1) N-bencil-5-oxo-6E, 8E-Octadecadienamida (2) La damiana de California (Turnera diffusa Wild) (figura 3) Es considerada como afrodisíaco desde épocas antiguas, en particular por los indígenas de México (Bradley, 1992). Otras aplicaciones populares han incluido asma, promotor de la fertilidad, bronquitis, neurosis, y varios desórdenes sexuales (Duke,1985), y como inductora de euforia en varias épocas. Las hojas de Turnera diffusa contienen un aceite esencial en el que se ha identificado los monoterpenos 1-8-cineol, paracimeno, alfa y beta-pineno. Además se ha encontrado en las hojas el componente fenílico arbutína el compuesto alicíclico tetrafilína B y el alcaloide cafeína, este último también presente en las ramas, donde se han identificado además el flavonoide gonzalistosína, el esteroide beta-sitosterol y los alcanos hexacosanol. N-triacontano y tricosan-2-ona. Las hojas contienen un aceite esencial, resina, taninos y un principio amargo, (Argueta, 1994). Para este uso se considera también a la L-arginina el cual es un aminoácido que interviene en la primera fase de la respuesta de erección y, por acción de la enzima sintetasa del óxido nítrico, se convierte en óxido nítrico (es un gas vasodilatador que produce el comienzo del proceso de vasodilatación en los cuerpos cavernosos del pene) logrando de esta manera la erección (Moreland et al., 2001). Neevia docConverter 5.1 Otra planta para este fin muy empleada es Tríbulus terrestris (figura 4), de la familia de las Zygophyllaceae, utilizada durante siglos en Europa para el tratamiento de la infertilidad e impotencia y como estimulante: para aumentar el libido y desempeño sexual, tanto en hombres como en mujeres. Los frutos y raíces de Tríbulus contienen principios activos importantes tales como fitoesteroides, flavonoides, alcaloides y glucósidos, saponinas esteroídales del tipo furostanol con una cantidad predominante de protodioscina (45% o más), que parece ser la que produce los efectos clínicos relacionados al ámbito sexual y reproductivo, además de brindar vigor y resistencia. Adimoelja (2000) en Indonesia y Adaikan et al. (2000) en Singapur atrajeron la atención hacia los extractos de Tríbulus terrestris ya que sugirieron que la protodioscina puede mejorar el deseo sexual e incrementar la erección. Adimoelja sugiere que la protodioscina produce el efecto reportado por su conversión a dihidroepiandrosterona (DHEA). Químicamente la protodioscina es una molécula compleja (C15 H 84O 22 ) y tiene la estructura como se aprecia (3). Furo-5-ene-3,22,26-triol, Protodioscina (3) Neevia docConverter 5.1 1 Tabla. Hasta abril del 2005 se habían aprobado ocho registros sanitarios para la disfunción eréctil. MEDICAMENTOS AUTORIZADOS REGISTRO SANITARIO Apodefil Reg. No. 342M2003 SSA Cialis Reg. No. 181M2002 SSA Levitra Reg. No. 241M2002 SSA Maxifort-Zimax Reg. No. 599M2003 SSA Proviron Reg. No. 70642 SSA Taluvian Reg. No. 024M2002 SSA Uprima Reg. No. 009M2002 SSA Viagra Reg. No. 213M98 SSA EL PASTEL DE LA DISFUNCIÓN ERÉCTIL OTROS: 3% CIALIS: 10%LEVITRA: 15% VIAGRA: 72% Figura 1. El mercado de medicamentos para disfunción eréctil en México está valuado en más de 70 millones de dólares. Neevia docConverter 5.1 Tabla 2. Clasificación de los afrodisíacos de acuerdo a su modo de acción (Carro Juárez, 2004). SUBSTANCIAS QUE INCREMENTAN EL LIBIDO DESPIERTAN EL DESEO SEXUAL SUBSTANCIAS QUE INCREMENTAN LA POTENCIA SEXUAL ERECCIONES EFICACES SUBSTANCIAS QUE INCREMENTAN EL PLACER SEXUAL Figura 2. Figura 3. Familia: Cruciferaceae Familia: Turneraceae Género: Lepidium Género: Turnera Especie: Lepidium meyenii Walp. Especie: Turnera diffusa Wild Nombre común: Maca Nombre común: Damiana Neevia docConverter 5.1 Tabla 3. Muestra los esteroles de Lepidium meyenii. Figura 4. Familia: Zigophyllaceae Género: Tribulus Especie: Tribulus terrestris L Nombre comum: abrojo, torito Esteroles en la Maca Andina Esterol % Sitosterol 45,5 Campesterol 27,3 Ergosterol 13,6 Brassicasterol 9,1 Ergostadienol 4,5 Neevia docConverter 5.1 2. ANTECEDENTES NOMBRE CIENTÍFICO Tribulus terrestris L. NOMBRES POPULARES Español: abrojo, abrojo terrestre, abrojo grande, tríbulo, roseta, cuernos de chivo, enredadera espinosa. Portugués: abrolho, Inglés: thistle, thorn, puncture vine. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA Se trata de una planta herbácea rastrera, anual, perteneciente a la familia de las Zigofiláceas, caracterizada por presentar tallos pubescentes cilíndricos, finamente surcados y decumbentes que forman matas, con abundante cantidad de espinas y frutos redondeados también espinosos. Sus ramas extendidas pueden alcanzar de 30 a 50 cm de longitud, presentan hojas pequeñas, compuestas, paripinadas, de inserción opuesta. Las flores solitarias y amarillas son muy pequeñas con 5 sépalos imbrincados, nacen en la axila de las hojas (figura 5). Florece en primavera y verano. En tanto los frutos son secos, deprimidos, y al madurar presentan 5 fructículos o nuececillas alargadas, bicornes y muy punzantes. En ocasiones toma un aspecto blanquecino debido a la pilosidad que suele presentar. Neevia docConverter 5.1 Figura 5. Flor de Tribulus terrestris con cinco sépalos. HÁBITAT El abrojo es oriundo de Europa meridional (probablemente de Bulgaria), pero actualmente habita en casi todas las regiones del mundo, y crece fácilmente en la orilla de los caminos, potreros, terrenos de cultivo; es considerado frecuentemente como planta invasora, especialmente de cultivos forrajeros. Existen muchas variedades tanto en Europa como en América. En Argentina, Chile y Uruguay crece la variedad llamada abrojo grande. (Rzedowski y Rzedowski, 2001). DISTRIBUCIÓN EN MÉXICO Se ha registrado en Aguascalientes, Baja California Norte, Baja California Sur, Chihuahua, Coahuila, Durango, Guanajuato, Morelos, Sonora, Tamaulipas, Veracruz y Puebla. (Villaseñor y Espinosa, 1998). Neevia docConverter 5.1 PARTES UTILIZADAS Semillas y frutos (figura 6 y 7). También las subunidades aéreas Figura 6. Vista frontal del fruto de Tribulus terrestris Figura 7. Vista lateral del fruto de Tribulus terrestris Neevia docConverter 5.1 COMPOSICIÓN QUÍMICA Sapogeninas y saponinas esteroídales: diosgenina, hecogenina, neohecogeninas, ruscogenina, terrestrosinas A, B, C, D y E. Saponinas de tipo furostanol (protodioscina, metilprotodioscina, metilprototribestina) y espirostanol (tribulosina, protogracillina). Aceite esencial: ácido linolénico, ácido oleico y ácido elaídico. Otros: flobafeno, flavonoides (kaempferol, quercitrósido), espirosta-3,5-dieno, trazas de alcaloides (harmano, norharmano), tribulusamidas A y B, polisacáridos (hojas y corteza). ACCIONES FARMACOLÓGICAS Actividad Diurética El extracto acuoso administrado junto a un glicolato de sodio en ratas demostró incrementar la eliminación de oxalatos por vía urinaria, en concordancia con su uso popular como diurético y urolitiásico (Kumari G y Lyer G., 1967. El extracto acuoso de hojas y frutos en dosis 5 g/kg produjo en ratas efectos diuréticos (levemente superiores a furosemida y estigmas de maíz, con incremento en la eliminación del sodio, cloruros y potasio) y efectos contráctiles sobre íleon aislado, lo que coincide con su empleo popular para eliminar cálculos urinarios (Al Ali et al., 2003). Actividad Cardiovascular Estudios realizados en animales de laboratorio demostraron que la planta entera (incluyendo las semillas) incrementan la fuerza de contracción cardiaca (Seth y Jagadeesh,1976). Los investigadores concuerdan en que las saponinas de Tríbulus terrestris tendrían un efecto dilatador de las coronarias con incremento de flujo sanguíneo. Neevia docConverter 5.1 Actividad afrodisíaca Estudios en conejos evidenciaron un efecto proeréctil de la protodioscina luego de ocho semanas de administración oral de extractos de Tríbulus terrestris. El efecto relajante observado en los cuerpos cavernosos podría ser atribuido entre otros, a un incremento en la liberación de óxido nítrico desde el endotelio vascular (Adaikan et al., 2000). En un estudio reciente se tomaron al azar a las ratas macho. Se usó para el control un placebo. Probándose dos extractos con protodioscina por vía oral en 40 ratas macho. Se demostró que la dosis de 5 y 10 mg/kg genera un incremento de la presión intracavernosa (26% y 43%, respectivamente), aumentándose la frecuencia de intromisión de los animales, con descenso de latencia de la eyaculación y en el intervalo post-eyaculatorio (Gauthman et al., 2003). Otros estudios determinaron que la protodioscina genera un efecto pro-eréctil por medio de su conversión a DHEA (dihidro-epiandrosterona). No obstante, la concentración de este principio activo varía mucho en cada planta lo cual podría estar en relación al tipo de suelo donde crece (Adimoelja, 2000). La producción de DHEA en el organismo comienza a declinar a medida que se envejece, lográndose a los 60 años tan solo una producción de un 5- 15% de lo habitual. Algunos estudios realizados en doble ciego, controlados con placebo, confirmaron los beneficios del suministro de DHEA en casos de disfunción eréctil (Reiter et al., 2000). Extractos de abrojo forman parte de un suplemento dietario que se expende en Estados Unidos como afrodisíaco, el cual contiene androstenediona, (dihidro epiandrostenediona), crisina, Sabal serrulata e indol-3-carbinol. A partir del mismo se han comenzado a hacer algunos ensayos clínicos (Brown et al., 2000). EFECTOS ADVERSOS Y/O TÓXICOS Los tratamientos en base a tisanas deben ser cortos y discontinuos ya que se han observado efectos hemolíticos in vivo en corderos debido a la presencia de saponinas, por lo que se aconseja un uso muy prudente en adultos y evitar el consumo por los niños. Los alcaloides del abrojo cuando son administrados repentinamente en animales de experimentación ejercen una acción neurotóxica de carácter irreversible, por bloqueo de las neuronas asociadas a la triptamina. La DL50 de la mezcla liofilizada de saponinas del abrojo fue estimada en ratas entre 739-894 mg/Kg (Arcasoy et al., 1999). Neevia docConverter 5.1 Se han reportado algunos casos de fotosensibilidad en ovinos que han ingerido la planta, dando un aspecto agrandado de la cabeza (por inflamación), lo cual ha hecho que se conociera este fenómeno en los Estados Unidos como big-head. Asimismo,los animales pueden presentar ceguera, necrosis y erupciones en la piel, caída de labios y orejas, lesiones hepáticas y renales con alta mortandad en ejemplares jóvenes. El mecanismo de acción estaría vinculado a una alta acumulación de nitratos en esta planta (Tapia et al., 1994; Aslani et al., 2003). USOS ETNOMEDICINALES Es muy usado popularmente como diurético y por ello, en la eliminación de cálculos renales. En China son empleados los frutos con múltiples indicaciones: como tónicos, afrodisíacos, inductores de aborto, incrementadores del flujo menstrual y de la lactancia, antijaquecosos, antiinflamatorios oculares y sedantes. También muy usado en el tratamiento de la eyaculación precoz. La decocción de las semillas por vía externa como astringente en heridas, eczemas; y por vía interna como laxante suave y espasmolítico. Asimismo, también es eficaz en forma de gárgaras o buches para aliviar encías sangrantes y aftas bucales (Alonso, 2004). En nuestro país esta planta es comúnmente recomendada para trastornos renales. En Sonora, se emplea para enfermedades del riñón. En Puebla y Michoacán, para el mal de orín o inflamación de la vejiga. Recomiendan, tomar en ayunas la infusión del tallo (Argueta, 1994). Neevia docConverter 5.1 3. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Evaluar las propiedades afrodisíacas de Tribulus terrestris en ratas macho bajo el modelo usado por Dewsvury D. A. (1972), para el comportamiento sexual. Objetivos particulares Obtener los extractos etanólicos (polares) de Tribulus terrestris nacional y Tribulus terrestris Europeo. Determinar la concentración del extracto de Tribulus terrestris donde la rata presenta mayor actividad sexual. Evaluación de las propiedades afrodisíacas de Tribulus terrestris Nacional y Tribulus terrestris Europeo en ratas macho. Neevia docConverter 5.1 4. MATERIAL Y MÉTODOS 4.1 Animales. Se utilizaron un total de 80 ratas de la cepa Wistar de ambos sexos 60 machos y 20 hembras. Las cuales fueron obtenidas del bioterio de la FES Iztacala, UNAM. Estas fueron alojadas en grupos de 4 machos o hembras por separado en cajas (plexiglás) de 40x30x20 cm. En un cuarto especial libre de ruido con un clima de 21°C y 60% de humedad, con ciclos de luz- oscuridad de 12 h. Las ratas de 3 a 5 meses de edad y con un peso aproximado de 300-350 g (machos) y de 200-250 g (hembras), con alimento y agua ad libitum. Antes de las pruebas experimentales, a todas las ratas macho se les practicó una prueba de comportamiento sexual para seleccionar a las copuladoras y no copuladoras (Rochford y Chatigny, 1993). Esta prueba consistió en seleccionar a las ratas macho y ver si son activamente sexuales o inactivos. Los machos activamente sexuales son los que muestran eyaculación latente más corta (menos de 15 min), siendo seleccionados aquellos que por lo menos las últimas tres sesiones de cinco tienen un buen desempeño, los cuales son considerados sexualmente experimentados. Los animales sexualmente inactivos son los que fracasaron para mostrar actividad sexual en 5 pruebas consecutivas y son clasificados como no copuladores o impotentes. Durante los trabajos experimentales, fueron respetados los procedimientos de regulación, establecidos por el Comité Local de Ética, que dicta el manejo a realizar sobre animales de experimentación, así como de la Norma Oficial Mexicana de uso y cuidado de animales de laboratorio ¨NOM-062-1999¨. 4.2 Grupos. En el experimento 1, los animales fueron divididos en cinco grupos de ratas macho cada uno, considerados sexualmente vigorosos (G1- G5; n= 8). A los animales de cada grupo se les asignó un tratamiento. El G1 recibió la solución que se usó como vehículo (agua destilada + glicerina) por vía oral (2 ml) y se le tomó como control. Del G2 al G5 se les administró por vía oral (2 ml de solución) con una concentración 12.5 para el G2, 25 para el G3, 50 para el G4 y G-5 100 mg/animal (36, 72, 143 y 186 mg/Kg respectivamente) de Tribulus terrestris nacional, preparada previamente en extracto. En el experimento 2 empleamos, el G-1 como control y formamos dos grupos el G6 y G7; n=8) que recibieron un tratamiento por vía oral de 100 mg/animal (186 mg/Kg) del extracto de Tribulus terrestris nacional y comercial respectivamente. Neevia docConverter 5.1 4.3 Tratamientos. OBTENCIÓN de Tribulus terrestris. La planta Tribulus terrestris europea, fue adquirida en forma comercial donde nos proporcionaron un certificado de autenticidad. Los ejemplares de Tribulus nacional fueron colectados en el Municipio de San Rafael Coxcatlán localizado en la porción suroeste de la reserva de la biósfera del Valle de Tehuacán-Cuicatlán (18ºººº12״ y 18ºººº11114״N;;;; 97ºººº07״ y 97ºººº00009״O), en el municipio de Coxcatlán, Puebla. Posteriormente se Identificó por la Bióloga Ma. Edith López Villafranco responsable del Herbario IZTA, de la FES-Iztacala UNAM, donde se integro a la colección científica con el siguiente número de registro: NOMBRE CIENTÍFICO FAMILIA No. REGISTRO Tribulus terrestris L. ZYGOPHYLLACEAE IZTA 41679 OBTENCION DE LOS EXTRACTOS Los extractos fueron preparados de acuerdo al procedimiento estandarizado (European Pharmacopoeia, 1997). Se pesaron 20 g de cada una de las especies. La planta se secó y pulverizó. Posteriormente se extrajeron con una mezcla de etanol-agua 70-30 (V:V) a una temperatura de 40°C con agitación por 8 h. Se realizó el filtrado con un papel filtro Watman N° 2 y se llevó a destilación en un rotavapor al vacío (figuras 8 y 9). Neevia docConverter 5.1 Figura 8. Obtención del extracto de Tribulus terrestris. Figura 9. Rotavapor empleado para concentrar el extracto. Neevia docConverter 5.1 Las ratas macho sexualmente vigorosas fueron asignadas aleatoriamente para cada grupo (n=8). El grupo 1 fue el control y recibió el vehículo oralmente (agua destilada+ glicerina) 2 ml (figura 10). Los grupos 2-3-4-5 recibieron una dosis de 12.5, 25, 50 y 100 mg/animal (36, 72, 143 y 186 mg/kg) del extracto de Tribulus terrestris nacional (figuras 11,12, 13 y 14). Una vez preparadas las diferentes concentraciones fueron administrados vía catéter una hora después de iniciada la oscuridad. Después de 60 min de la aplicación de cada dosis, las ratas macho estuvieron listas para la prueba de comportamiento sexual. Figura 10. Grupo G-1 control (agua destilada+glicerina) 2 ml/animal Neevia docConverter 5.1 Figura 11. Grupo G-2 con dosis de 12.5 mg/animal (36 mg/kg) de T. terrestris. Figura 12. Grupo G-3 con dosis de 25 mg/animal (72 mg/kg) de T. terrestris. Neevia docConverter 5.1 Figura 13. Grupo G-4 con dosis de 50 mg/animal (143 mg/kg) T. terrestris. Figura 14. Grupo G-5 con dosis de 100 mg/animal (186 mg/kg) de T. terrestris. Neevia docConverter 5.1 4.4 Protocolo para el examen de comportamiento sexual Todos los exámenes de comportamiento sexual fueron conducidos 2 horas después de iniciada la oscuridad, en un cuarto libre de ruido y bajo una luz roja tenue, (focos rojos de 40 watts), de acuerdo al procedimiento estandarizado, (Dewsbury 1972; Clark et al., 1987). Los machos fueron colocados dentro de una arena de observación, cilindro (con un diámetro de 55 y una altura de 40 cm), y se le dio un tiempo de 10 minutos para su adaptación. Enseguida se introdujo una hembra receptiva-estimulada y se registró el comportamiento sexual durante 15 minutos. Las hembras receptivas fueron inducidas por la administración subcutánea de 0.2 ml de ciclopentil propionato de estradiol (forestro) y 24 horas después se registraron los siguientes parámetros.Los parámetros de comportamiento sexual observados fueron analizados como: Latencia de Montas (LM): Tiempo de introducción de la hembra a la arena de observación hasta la primer monta por el macho con empuje pélvico (figura 15, 16 17). Latencia de Intromisión (LI): Tiempo de introducción de la hembra a la arena de observación hasta la primer monta con empuje pélvico y penetración vaginal (intromisión) (figura 18). Latencia de Eyaculación (LE): Tiempo de la primer intromisión hasta la eyaculación (figura 19). Intervalo Posteyaculatorio o refractario, desde la primera eyaculación, hasta la siguiente intromisión (figura 20). Además, fueron examinadas el número de montas e intromisiones desplegado en series eyaculatorias. En el presente estudio, el criterio considerado fue que las series eyaculatorias se definen como todos los eventos que se presentan desde la primera intromisión, hasta la eyaculación, considerando todos los eventos copulatorios, incluyendo el intervalo posteyaculatorio, desde la primera intromisión de la serie, hasta la primer intromisión de la segunda serie. Además, el número de montas y las intromisiones exhibidas en una serie eyaculatoria fueron registradas. Los datos de latencia fueron expresados en minutos como promedios + S.E.M. y el número de montas e intromisiones como el número promedio. Neevia docConverter 5.1 Figura 15. Etapa de reconocimiento del macho con la hembra. Figura 16. LM Tiempo de introducción de la hembra a la arena de observación hasta la primer monta con empuje pélvico. Neevia docConverter 5.1 Figura 17. Rata macho acicalándose los genitales después de una monta Figura 18. LI Tiempo de introducción de la hembra a la arena hasta la primer monta con empuje pélvico y penetración vaginal (intromisión). Neevia docConverter 5.1 Figura 19. LE, tiempo de la primer intromisión hasta la eyaculación. Figura 20. IP, o refractario, desde la primera eyaculación, hasta la siguiente intromisión. Neevia docConverter 5.1 Análisis estadístico Para determinar las diferencias significativas entre los tratamientos, los datos de comportamiento sexual fueron analizados por medio de análisis de la varianza ANOVA de una vía seguida por el examen de la T de Dunnett. Las comparaciones fueron conducidas mediante el uso del examen de la U de Mann-Whitney. El porcentaje de animales que presentaron comportamiento sexual fueron analizados con el examen de Fisher. El programa Stat Sigma (versión 2.03) se empleó para todos los análisis estadísticos. Neevia docConverter 5.1 5. RESULTADOS. En la primera parte del estudio, se examinó el comportamiento copulatorio de las ratas macho, que fueron tratadas con el vehículo G-1 (agua destilada+glicerina), y las ratas macho que fueron sujetas al los diferentes tratamientos agudos G-2 12.5, G-3 25, G-4 50 y G-5 100 mg/animal (36, 72, 143 y 186 mg/kg) respectivamente de Tribulus terrestris nacional. Los efectos de Tribulus terrestris nacional sobre el comportamiento sexual de la rata macho, tuvieron una manifestación más marcada con la dosis de 100 mg/animal (186 mg/kg). Así, fue seleccionada esta dosis del extracto de Tribulus terrestris nacional y fue comparada con Tribulus terrestris europea. Los datos obtenidos se pueden apreciar en la tabla 4. Estos datos son graficados para tener una mejor apreciación (figuras 21, 22, 23 y 24). Tabla 4. Resumen de los parámetros de la conducta sexual masculina de las ratas tratadas con el Control, Tribulus terrestris nacional y Tribulus terrestris europeo. LM (Latencia de Monta), LI (Latencia de Intromisión), NM (Número de Montas), NI (Número de Intromisiones), LE (Latencia de Eyaculación), IPP (Intervalo Post Eyaculatorio). PARÁMETRO CONTROL Tribulus terrestris nacional Tribulus terrestris europeo L M 16.29±1.10 15.857±0.75 22.71±3.98 L I 23.00 35.00 21.00 N M 3.85±0.34 3.71±0.68 4.0±0.43 N I 14.00 14.00 18.00 L E 10.00 10.00 12.00 IPP 6.90 7.70 7.10 Neevia docConverter 5.1 Figura 21. Gráfica del control. Muestra los parámetros de la conducta sexuales específicos de la rata macho sexualmente activos, tratados con agua destilada + glicerina Neevia docConverter 5.1 Figura 22. Gráfica de Tribulus terrestris nacional. Muestra los parámetros de la conducta sexuales específicos de la rata macho sexualmente activos, con la dosis de 100 mg/animal (186 mg/kg). Neevia docConverter 5.1 Figura 23. Gráfica de Tribulus terrestris europeo. Muestra los parámetros de la conducta sexuales específicos de la rata macho sexualmente activos, con la dosis de 100 mg/animal (186 mg/kg). Neevia docConverter 5.1 Figura 24. Grafica donde se pueden comparar los parámetros de la conducta sexuales, tratados con la dosis 100 mg/animal (186 mg/kg) de Tribulus terrestris Europeo, Tribulus terrestris Nacional y el Control. Neevia docConverter 5.1 6. DISCUSIÓN La información que se obtuvo en la serie de experimentos que se ensayaron, demostró que no hubo un aumento significativo en la actividad sexual del macho. Se observó en el experimento que las ratas sometidas al tratamiento agudo con la administración oral de 100 mg/animal (186 mg/kg) de Tribulus terrestris nacional, no reforzó significativamente la excitación de la rata macho. El mayor número de montas revela la existencia de un aumento en la excitación o motivación. Sin embargo el estudio revela la existencia de un aumento mínimo en las montas. En el tratamiento con Tribulus terrestris europeo hay un aumento de un 28% en el número de intromisiones. También la latencia de montas es considerada como otra medida de motivación sexual (Agmo, 1970). En el estudio no se registró una reducción significativa en la latencia de monta de las ratas macho vigorosas sexualmente, que se les administró la dosis de 100 mg/animal de Tribulus terrestris europeo comparado con Tribulus terrestris nacional, pues el nacional es muy parecido al control. Cuando existe una reducción en la latencia de montas, refleja una influencia positiva de los compuestos contenidos en la planta, y que tienen acción sobre los componentes de la excitación del comportamiento sexual de la rata macho (Carro- Juárez et al., 2004). Además, se observó que la dosis de la planta, probada en ratas macho sexualmente vigorosas, no redujo el intervalo post-eyaculatorio, que es un parámetro considerado en relación con la excitación sexual (Everitt, 1990). Se ha sugerido que la facilitación de la cópula en las ratas macho, incluye una disminución en el número de intromisiones previas a la eyaculación. En el presente estudio, con las dosis probadas de Tribulus terrestris nacional en las ratas macho se observa que no hay una facilitación del comportamiento copulatorio. Por todo lo anterior, se revela que existe evidencia considerable de que la planta de Tribulus terrestris nacional colectada en San Rafael Coxcatlán, Municipio de Puebla, no tiene efectos relacionados con la reproducción. Es decir no mejoraron significativamente la expresión del comportamiento sexual masculino y proporciona pruebas de que la planta no posee propiedades afrodisíacas. Esto se debe posiblemente a la concentración del principio activo (protodioscina) el cual varia en diferentes poblaciones de plantas ya que mantiene una relación con el tipo de suelo donde crece (Adimoelja, 2000). Además conocemos que los metabolitos secundarios de las plantas están determinados por diversos factores ambientales (agua, luz, temperatura, etc.). Existen depredadores o plagas que también influyen para que estos metabolitosse sinteticen. Por todo lo anterior propongo que se realicen más trabajos con esta planta pero considerando aquellas que contengan la concentración más alta de protodioscina. Neevia docConverter 5.1 7. CONCLUSIONES La planta de Tribulus terrestris nacional a la dosis empleada en este estudio no muestra ningún efecto afrodisíaco sobre la rata macho. Con el tratamiento del extracto etanólico de Tribulus terrestris nacional a la dosis empleada en este estudio (100 mg/animal), se demostró que la planta no posee un efecto afrodisíaco sobre el comportamiento sexual. La planta de Tribulus terrestris de San Rafael Coxcatlán, Municipio de Puebla no puede ser considerada como una planta pro-eréctil o afrodisíaca. Se recomienda realizar una investigación con plantas de Tribulus terrestris de otros estados de la República Mexicana para esta finalidad, pues estos podrían presentar mayor actividad, que la de esta zona. Neevia docConverter 5.1 8. BIBLIOGRAFÍA Adaikan, P.G., Gauthaman, K., Prasad,R.N., 2000. Pro-erectile pharmacological effects of Tribulus terrestris extracts on rabbit corpus cavernosum. Ann. Acad. Med. Singapore 29: 22-26. Adimoelja, A., 2000. Phytochemicals and the breakthrough of traditional herbs in the management of sexual dysfunction. Inl. J. Androl. 23: 82-84. Agmo, A., 1997. Male rat sexual behavior. Brain Res. Prot. 1:203-209 Aguilar, J. A.,2004. Productos contra la disfunción eréctil. Revista del Consumidor México junio 328: 51-56 Al Ali., Wahbi S., Twaij., Al Badr A., 2003. Tribulus terrestris: preliminary study of its diuretic and contractile effects and comparison with Zea mayz. J. Ethnopharmacology.. 85(2-3): 257-260. Alonso Jorge, 2004 Tratado de fitofármacos y nutracéuticos. 1a edición, Argentina Rosario. Ed. Corpus 25-27 Arcasoy H., Erenmemisoglu A., Tecol Y., Kuruku S. and Kartal M., 1999. Effect of Tribulus terrestris saponin mixture on some smooth muscle preparations: a preliminary study. Red Medlinea PMID 10077881. Argueta Villamar Arturo 1994. Atlas de las plantas de la medicina tradicional mexicana 38: 566-567. Arletti, R., Benelli, A., Cavazzuti, E., Scarpetta, G. and Bertolini, A., 1999. Stimulating property of Turnera diffusa and Pfaffia paniculata extracts on the sexual Behavior of male rats. Psichopharmacology 143: 15-19 Aslani M., Movassagji A., Mohri M., Pedram M. and Abavisani A. 2003. Experimental Tribulus terrestris poisoning in sheep: clinical, laboratory and Pathological findings. Vet. Res. Commun. 27(1): 53-62. Avila, J.G. 1996. Actividad anti-Vibrio cholerae de dos plantas utilizadas en la medicina tradicional purépecha. Tesis de Maestría en Microbiología. Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán. UNAM. México. Neevia docConverter 5.1 Bautista, C.I. y González. P. 1996. La salud en las comunidades indígenas En: E. Estrada (comp.). Plantas medicinales de México Introducción a su estudio U.A.CH. México, 37-41. Benelli A., Bertolini A., Poggioli R., Cavazzuti E., Calza L., Giardino L., Arletti R. 1995. Nitric oxide is involved in male sexual Behavior of rats. Eur J Pharmacol. 29;294(2-3):505-510. Bradley P, R., 1992. British Herbal Compendium, vol Boumemouth, UK: British Herbal Medicine Association, 71-72. Braun M., Wassmer G., Klotz. 2000 Epideminology of erectile dysfunction: results of the “Cologne Male Suervery “. Int. J Imp Res .12: 305-311. Benvuto T.R., Garay J. 2002. Fronteras en Obstetricia y Ginecología julio; 2 (1):49-60. Carro-Juárez, M., Cervantes E., Cervantes-Méndez M., Rodríguez-Mazo G. 2004 Aphrodisiac properties of Montanoa tomentosa aqueous crude extrac in male rats. Pharmacology, Biochemistry and Behavior (78):129-134. Clark J.T., Kalra S.P., Kalra D.S, 1987 Effects of a selective alpha l – adrenoceptor agonist, methoxamine, on sexual behavior and penile reflexes. Physiol Behavior 40:743-753 Cordell, G. A. 2000. Biodiversity and drug discovery-a sinbiotic relationship Phytochemistry 55:463-480. Chauvin, L. 1999 “Peru’s Natural Viagra Leads List of Unusual Crops With potential,” Miami Herald, January 11, 13 De Smet, P.A.G.M., 1997. (a) The role of plant-derived drugs and herbal medicines in healthcare. Drugs 54(6):801- 840. De Smet, P.A.G.M., 1997. (b) Yohimbe alkaloids-general discussion. In: De Smet, P.A.G.M., Keller, Haensel, R. et al., 1997. Adverse Effects of Herbal Drugs 3, Springer-Verlag, Heidelberg, pp. 181-195. Dewsbury, D.A. 1972 Effect of tetrabenazine on the copulatory behavior of male rats. European Journal of Pharmacol 17: 221-226. Dini, A. 1994. “Chemical composition of Lepidium meyenii”. Food Chemistry 49 (4):347-349 Neevia docConverter 5.1 Duke, J.A. 1985. CRC Handbook of Medicinal Herbs. Boca Raton, FL. CRC Press, 492 Everitt B. J. 1990. Sexual motivation: a neural and behavioral analysis of mechanisms underlying appetitive and copulatory responses of male rats. Neurosci Biobehav Rev 14: 217-232. European Pharmacopoeia, third edition (1997) Council of Europe, Strasburg, p- 87 Feldman HA, Goldstein I, Hatzichristou DG. 1994. Impotence and its medical and psychosocial correlates: results of the Massachusetts Male Aging Study. J Urol. 151: 54-61 Gali, H. 1985. Las hierbas del indio. Gómez Editores, México Gauthaman K., Adaikan, P.G., Prasad, R.N.V., Goh V.H.H., and Ng. S. C., 2000. Changes in hormonal parameters secondary to intravenous administration of Tríbulus terrestris extracts in primates. International Journal of Impotence Research 12 Supplement 2, p. 6 Abstract. Gauthaman K., Ganesan A. and Prasad R. 2003. Sexual effects of puncturevine (Tribulus terrestris) extrac (protodioscin): an evaluation using a rat model. J. Altern. Complement. Med. 9 (2): 257-265. Giuliano F.A., Knelleson S., Paturaud JP. 1996 Epidemiologic study of erectile dysfunction in France. Eur Urol 30: (Suppl. 2): 250 Grunewald, K.K, and Bailey, R.S. 1993. Comercially marketed supplements for bodybuilding athletes. Sports Medicine 15 (2):90-103. INDECOPI. 2003. Informe de Patentes referidas al Lepidium meyenii (maca): Respuesta del Perú- segunda parte http://www.indecopi.gob.pe Johns T. 1981. “The Anu and the maca.,,,,” Journal of Ethnobiology 1 (2):208- 212 Kumari G. and Lyer G., 1967. Preliminary studies on the diuretic effects of Hygrophila spinosa and Tribulus terrestris. Indian J. Med. Res. 55(7): 714-716. Laumann E.O., Paik A., Rosen R.C. 1999. The epidemiology of erectile dysfunction: results from the National Health and Social Life Survery. Int J Impot Res 11 (suppl.1): S60-64. Neevia docConverter 5.1 Lozoya, L. X. 1989. La medicina tradicional en la realidad político- social de México. Ciencias. 14:27-33. Marrón, G.I. 2004. Recuperar la potencia perdida Revista del Consumidor México junio 328: 58-59. Moreland RB, Hsich G, Nekane M., 2001 The biochemical and neurologic basis for the treatment of male erectile dysfunction. JPET;296:225-234. NIH., 1993 Consensos Statement of Impotente. Int J Impot Res 5: 181-199. Quinzaños Sordo L.F. 2002. Revisión de la literatura: Gresser, U., and Gleiter, CH: Disfunción eréctil: comparación de la eficacia y efectos colaterales de los inhibidores de la FDE-5, Sildenafil, Vardenafil y Tadalafil. Europan Journal of Medical Research 7: 435-446. Quiroz, C.F., Epperson, A., Hu, J. and Miguel., 1996 Physiological and cytogenetical characterization of Maca, Lepidium meyenii Walp. Economical Botany 50: 216-223. Reiter W., Pycha A. and Schatzi G., 2000. Dehydroepiandrosterona (DHEA) sulfate, and aging contribution of the DHEA age study to a sociobiomedical issue. Proc. Natl.Acad. Sci. USA. 97: 4279-4284. Rochford J. and Chatigny S. 1993. Male rats classified as copulators and noncopulators respond differentially on the hot plate test. Physiology Behavior, 53(2):409-411. Roumeguére T., B ollens R., Wespes E., 2001. Prevalence of hyperlipidemia and risk of coronay heart disease in a population with erectile dysfunction. J Urol : 165: (5) (supp) 700. Rzndowski. J 1992. Diversidad y Orígenes de la flora fanerogámica de México Ciencias número especial 6: 47-56. Rzedowski, G. C. de, J. Rzedowski y colaboradores, 2001. Flora fanerogámica del Valle de México. 2a ed. Instituto de Ecología y Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad, Pátzcuaro, Michoacán, México. Seth S. and Jagadeesh G. 1976. Cardiac action of Tribulus terrestris. Indian J. Medicine Res. 64(12):1821-1825. Spector K,R., and Boyle M. 1986. The prevalence and perceived aetiology of male sexual problems in a non-clinical sample. Br J Med Psychol 59: 351-358. Neevia docConverter 5.1 Tapia M., Giordano M. and Gueper H. 1994. An outbreak of epatogenous photosensitization in sheep grazing Tribulus terrestris in Argentina. Veter. Hum. Toxicol. 36 (4) : 311-313 Toledo, J., Dehal, P., Jarrin, F., Hu, J., Hermann, M., Al-Shehbaz, A. and Quiroz, C.F. 1998.Genetic variability of Lepidium meyenii and to other Andean Lepidium species (Brassicaceae) assessed by molecular markers. Annals of Botany 82:523-530. Villaseñor Ríos, J. L. y F. J. Espinosa García. 1998. Catálogo de malezas de México. Universidad Nacional Autónoma de México, Consejo Nacional Consultivo Fitosanitario y Fondo de Cultura Económica, México, D.F. Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 1. GLOSARIO GLOSARIO ACEITE ESENCIAL: son productos volátiles de naturaleza compleja, elaborado por ciertos vegetales a los que confieren un aroma agradable. ADAPTÓGENO: sustancia que estimula inespecíficamente el cuerpo humano, aumentando la resistencia física, psíquica y las defensas inmunitarias, dando energía. AFRODISÍACO: sustancia que estimula el deseo sexual. ALCALOIDES: sustancias orgánicas nitrogenadas complejas de origen vegetal, conteniendo la mayor parte en su molécula uno o varios anillos cíclicos nitrogenados, de reacción más o menos básica. Con acción fisiológica en el ser humano y otros animales. ANUAL (bot.): planta que cumple su ciclo vital en un tiempo no superior a un año. DE: Disfunción eréctil, se define como la incapacidad persistente de un hombre para alcanzar y/o mantener una erección suficiente para un desenvolvimiento sexual satisfactorio. DEPURATIVO: sustancia que facilita la eliminación de toxinas de la sangre a través de la orina y el sudor. DIURÉTICO: sustancia que aumenta la producción de orina. ENURESIS: incontinencia urinaria. ESTIMULANTE: sustancia que mejora las funciones, que excita ligera y temporalmente. Principalmente actúa sobre el sistema nervioso. EXTRACCIÓN: La extracción es el proceso de separación de los principios solubles de las materias primas de origen natural, mediante la acción de un disolvente. HEMOLÍTICO: sustancia que produce la destrucción de los hematíes (glóbulos rojos) de la sangre. Neevia docConverter 5.1 METABOLISMO PRIMARIO: se considera a los compuestos orgánicos esenciales para la vida y es común a todos los seres vivos del mundo. METABOLISMO SECUNDARIO: se considera a los compuestos orgánicos esenciales para la vida y únicamente se produce en ciertos grupos vegetales. La mayoría de los principios activos que se obtienen de plantas medicinales, proceden del metabolismo secundario. NUTRACÉUTICO: se refiere a substancias que pueden ser consideradas como un alimento los cuales pueden proporcionar beneficios médicos y para la salud. “Nutra” deriva de nutrición y céutico de farmacéutico. SAPONINA: son heterósidos (azúcar + aglicón) que se caracterizan por su capacidad para producir espuma cuando se agita una solución acuosa que las contiene. SAPOGENINA: la parte no glucídica (aglicón) es considerado como sapogenina SINERGIA: efecto que resulta de asociar sustancias que incrementan y potencian su acción por el hecho de ser administradas conjuntamente. TANINOS: amplio grupo de compuestos hidrosolubles con estructura polifenólica, capaces de precipitar ciertas moléculas (proteínas, alcaloides, celulosa, gelatina). Esta capacidad para precipitarlas es la base de sus dos propiedades principales; su capacidad para curtir la piel y su poder astringente. TENSOACTIVOS: son sustancias como las saponinas que disminuyen la tensión superficial del agua. TUBÉRCULO (bot.): órgano subterráneo de la planta donde se acumulan sustancias de reserva (ejemplo, patata). UROLITIÁSICO: sustancia que incrementa la eliminación de oxalatos por vía urinaria. URICOSÚRICO: sustancia que favorece la eliminación de ácido úrico. También se denomina antigotoso. VENOTÓNICO: sustancia que favorece la circulación sanguínea de las venas. Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 2. CONDUCTA COPULATORIA DE LA RATA MACHO Uno de los modelos experimentales más utilizados para el estudio de la eyaculación es el análisis de la conducta copulatoria. Con esta aproximación se ha estudiado la regulación del proceso eyaculatorio, básicamente en roedores, empleando lesiones específicas a zonas discretas del cerebro, estimulación eléctrica directa a esas áreas cerebrales, manipulaciones hormonales o tratamiento con drogas específicas para distintos sistemas de neurotransmisión. El análisis de la conducta sexual ofrece la ventaja de permitir el examen de la fisiología eyaculatoria en el contexto normal de la conducta sexual. Sin embargo, tiene la limitante de dificultar el análisis del evento eyaculatorio mismo que en muchas ocasiones es interpretado y la mayoría de las veces difícilmente medible. La conducta sexual de la rata macho es estereotipada. Consiste en una serie intermitente de montas sin intromisión alternadas con montas con intromisión, en las cuales el macho inserta brevemente el pene dentro de la vagina de la hembra. Durante la última intromisión de la serie, el macho eyacula. Sigue un periodo breve de refractoriedad a la estimulación sexual, después del cual el macho puede iniciar la cópula. En una hora de cópula una rata macho es capaz de eyacular varias veces. Entre las respuestas conductuales que presenta una rata macho durante la cópula está la monta a la hembra durante la cual el macho trata de insertar el pene en la vagina por medio de movimientos pélvicos. Si no ocurre la inserción peneana intravaginal, el acto es referido como una monta. Después de ésta, el macho desmonta a la hembra y usualmente se acicala los genitales. La intromisión consiste de una monta en la cual el macho logra la inserción peneana intravaginal; se puede identificar por la presentación de un embite pélvico largo y profundo y una retirada posterior rápida del macho respecto de la hembra. Una vez que ocurre la intromisión, el macho se acicala el área genital invariablemente. Después de un número variable de intromisiones, el macho monta otra vez a la hembra, logra una inserción vaginal (intromisión) y eyacula dentro de la vagina. La conducta eyaculatoria es fácil de identificar pues se caracteriza por un embite pélvico más profundo y de mayor duración que el de una intromisión y una elevación de las patas anteriores, acompañada en la mayoría de las ocasiones de una caída lateral. Debemos hacer la distinción entre eyaculación y patrón conductual eyaculatorio ya que durante el registro conductual se asume que ha ocurrido la eyaculación cuando se presenta el patrón motor conductual asociado a dicho evento. Sin embargo, para decir que ocurrió la eyaculación se requiere además de la presencia de un tapón seminal de la vagina de la hembra.Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 3. TABLA DE POLARIDAD DE LOS SOLVENTES Polaridad de los solventes Éter de petróleo Hexano n-Heptano Ciclohexano Tetracloruro de carbono Tricloro-etileno Benceno Diclorometano Cloroformo Dietil éter Acetato de etilo Piridina Acetona n-Propanol Etanol Metanol AguaPolaridad Polaridad baja Polaridad media Polaridad alta Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 3. SAPONINAS GENERALIDADES GENERALIDADES DE SAPONINAS CARACTERÍSTICAS: las saponinas son heterósidos (azúcar + aglicón) que se caracterizan por su capacidad para producir espuma cuando se agita una solución acuosa que las contiene. Se forma espuma debido a que las saponinas disminuyen la tensión superficial del agua. Son por lo tanto tensoactivos naturales. ESTRUCTURA QUÍMICA Y CLASIFICACIÓN: las saponinas son estructuras formadas por una parte glucídica (azúcar) y una parte no glucídica (aglicón) denominada sapogenina. Son heterósidos. Las unidades de azúcar pueden ser neutras o ácidas. Según el número de uniones de las unidades glucídicas al aglicón se denominan: Saponinas monodesmosídicas: el azúcar o azúcares se unen por una única posición al aglicón: el OH de la posición 3. Saponinas bidesmosídicas: el azúcar o azúcares se unen por dos puntos al aglicón. Según la naturaleza del aglicón se clasifican en: Las que tienen aglicón triterpénico se denominan saponinas triterpénicas y las que lo tienen con estructura esteroídica se denominan saponinas esteroídicas. Neevia docConverter 5.1 Saponinas esteroídicas: se biosintetizan también por la ruta del ácido mevalónico y son en general menos frecuentes que las saponinas triterpénicas pentacíclicas. Se pueden clasificar en: Derivados del espirostano: son estructuras hexacíclicas de 27 átomos de carbono. Su estructura deriva del ciclopentanoperhidrofenantreno con dos heterociclos de 5 y 6 miembros y con una cadena lateral en la posición 17. Derivados del furostanol: poseen un ciclo menos que el espirostano pero también tienen un esqueleto de 27 átomos de carbono. Generalmente las saponinas tienen en el vegetal núcleo de furostanol y durante la extracción se produce una ciclación que da lugar al ciclo de espirostanol. . Distribución: se encuentran saponinas tanto en vegetales inferiores (algas, líquenes, musgos, helechos) como en vegetales superiores. En dicotiledóneas hay principalmente saponinas triterpénicas y ocasionalmente saponinas esteroídicas. En monocotiledóneas, rara vez se encuentran saponinas triterpénicas y hay casi exclusivamente saponinas esteroídicas. Las saponinas pueden estar localizadas en cualquier órgano del vegetal, pero tienen tendencia a acumularse en mayor concentración en las partes subterráneas (raíz, rizoma). También se han encontrado saponinas en animales inferiores. Neevia docConverter 5.1 PROPIEDADES DE LAS SAPONINAS. Tensoactivos: como ya se ha comentado, la principal propiedad física de las saponinas es que son agentes tensoactivos, capaces de formar espuma (poder afrógeno) y formar emulsiones (emulgentes). Poder hemolítico: las saponinas tienen también una acción hemolítica. El poder hemolítico es característico de las saponinas triterpénicas pero es variable según los sustituyentes de la estructura (por ejemplo, los grupos carboxílicos COOH disminuyen el poder hemolítico). Las saponinas esteroídicas monodesmosídicas son hemolíticas mientras que las bidesmosídicas no lo son. Debido a su poder hemolítico resultan muy tóxicas si se administran por vía intravenosa (contactan directamente con la sangre) mientras que por vía oral su toxicidad es muy baja. Ictiotóxicas: muchas saponinas resultan tóxicas para los animales de sangre fría (peces). Solubilidad: al ser heterósidos, son solubles en agua y en disolventes orgánicos polares (etanol, metanol) e insolubles en disolventes orgánicos apolares (éter de petróleo, cloroformo, hexano). Los aglicones libres (sapogeninas) no son solubles en agua y sí en disolventes orgánicos apolares. Solubilidad Saponinas(heterósidos) Sapogeninas (aglicones) En agua En alcohol diluido En disolventes orgánicos apolares. Solubles Solubles insolubles Insolubles Insolubles solubles Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 5. SAPONINAS OBTENCIÓN Y ENSAYOS OBTENCION Y ENSAYOS EXTRACCIÓN: para su extracción se utilizan mezclas hidroalcohólicas de elevada graduación (60-70º) con objeto de evitar ciertos problemas que se producen cuando se extraen con agua o mezclas hidroalcohólicas de baja graduación. Durante el proceso, se puede producir una pérdida de la unidad de azúcar y la ciclación del furostanol a espirostanol o el paso de saponinas bidesmosídicas a mono desmosídicas. La extracción con mezclas hidroalcohólicas de elevada graduación permite evitar en gran parte estos problemas. ENSAYO: Cualitativos: para la detección de saponinas se pueden realizar diferentes ensayos como observar la aparición de espuma (no es concluyente) o detectar su efecto hemolítico. También se pueden observar las reacciones coloreadas con el reactivo de Libermann–Burchard (anhídrido acético/ácido sulfúrico), con el reactivo de Carr-Price (tricloruro de antimonio) y con aldehídos aromáticos en ácido sulfúrico (vainilla, anisaldehído). Se pueden analizar los extractos por cromatografía de capa fina (CCF) revelándolos con los reactivos de coloración anteriormente mencionados, que son reactivos inespecíficos, o revelándolos con un reactivo específico de saponinas (reactivo de sangre). Por cromatografía de alta definición (CLAR) y utilizando patrones de referencia se pueden detectar también las saponinas. A continuación se resumen las principales pruebas cualitativas para su detección: ENSAYO APLICACIÓN Aparición de espuma Saponinas en general Efecto hemolítico (Reactivo de sangre, BL) Saponinas triterpénicas Saponinas esteroídicas monodesmosídicas Reactivo de Libermann-Burchard (Ac2O/H2SO4)(LB) Diferencia entre saponinas triterpénicas y esteroídicas Las triterpénicas dan coloración rosada-púrpura; Las esteroídicas dan coloración azul–verde Reactivo de Carr-Price (SbCl3) Saponinas triterpénicas Vainilla (H2SO4) Saponinas triterpénicas Anisaldehído Saponinas triterpénicas Neevia docConverter 5.1 Cuantitativos: para las saponinas se pueden establecer dos parámetros que permiten su valoración si se comparan con saponinas patrón : Índice de espuma: es la máxima dilución del extracto de la droga a la que se produce una espuma persistente en determinadas condiciones. Se determina utilizando una serie de tubos donde se coloca el extracto acuoso y agua haciendo diferentes diluciones. Se agita cada tubo durante 15 segundos y se deja en reposo 15 minutos. Debido a la agitación se forma espuma y al reposar el nivel de espuma desciende. Se considera espuma persistente, si transcurridos los 15 minutos, la espuma tiene una altura superior a 1 centímetro. Índice de hemólisis: es la máxima dilución del extracto de la droga a la cual se produce hemólisis total. Se determina haciendo diferentes diluciones del extracto y se añade una suspensión de sangre citrada. Además, las saponinas se pueden determinar por: Gravimetría: se parte de la solución acuosa de las saponinas y se realiza una hidrólisis, con lo que se obtienen las saponinas (aglicones) libres que precipitan y se determinan por pesada. Cromatografía de alta resolución (CLAR, HPLC). Según las características particulares de la saponina objeto de valoración, hay otros posibles métodos. A continuación, se esquematizan en la siguiente tabla: Valoración Aplicación Índice de espuma Saponinas en general Índice de hemólisis Saponinas hemolíticas Gravimetría Saponinas en general CLAR, (HPLC) Saponinas en general Acidimetría Saponinas con función COOH Espectrofotometríaultravioleta Saponinas con función carbonilo conjugado (C=C-C=O) Valoración colorimétrica Determinadas saponinas Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 6. SAPONINAS ACCIONES Y USOS. ACCIONES FARMACOLÓGICAS E INTERÉS EN FARMACIA: Las drogas con saponinas pueden presentar diferentes aplicaciones farmacológicas. Las principales acciones reconocidas para saponinas de diferentes especies son: Acción irritante de las células, que se manifiesta principalmente a tres niveles: Pulmonar: producen un aumento de las secreciones y, por consiguiente, tienen un efecto expectorante y antitusivo. Renal: aumentan la circulación sanguínea a nivel renal, aumentando consecuentemente la filtración glomerular y surtiendo un efecto diurético. Hemático: lisan los hematíes, lo cual resulta tóxico si se administran por vía intravenosa. Por vía oral la toxicidad es prácticamente despreciable. Efecto antiedematoso y antiinflamatorio, sobre todo a nivel de insuficiencia venosa en las extremidades inferiores. Acción antihemorroidal y cicatrizante. Acción adaptógena: es decir, surten un efecto que puede resultar estimulante, tonificante y antiestrés. Las saponinas se utilizan en farmacia como expectorantes, diuréticas y venótropas. En la industria farmacéutica se emplean como agentes espumantes y emulgentes. Las saponinas esteroídicas se utilizan sobre todo industrialmente para obtener los aglicones esteroídicos, que son precursores por hemisíntesis de los fármacos esteroídales (hormonas sexuales, glucocorticoides, etc.). Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 7. PRINCIPALES ESPECIES CON SAPONINAS ESTEROÍDICAS PRINCIPALES ESPECIES CON SAPONINAS ESTEROÍDICAS Droga y especie Componentes Aplicaciones Raíz y rizoma de Smilax sp. Zarzaparrilla Saponinas esteroídicas (sarsaponina) Fuente de esteroides, Depurativo, digestivo Rizoma de Ruscus aculeatus Rusco Saponinas esteroídicas (Ruscogenina), flavonoides Protector vascular, venotónico Rizoma de Dioscorea sp. Dioscorea, ñame Saponinas esteroídicas (diosgenina) Fuente de esteroides Hoja y raíz de Agave sp. Sisal, agave Saponinas esteroídicas (Hecogenina) Fuente de esteroides, Depurativo, diurético Neevia docConverter 5.1 APÉNDICE 8. VÍAS METABÓLICAS DE ALGUNOS COMPUESTOS SECUNDARIOS Neevia docConverter 5.1 Portada Índice Resumen 2. Antecedentes 3. Objetivos 4. Material y Métodos 5. Resultados 7. Conclusiones 8. Bibliografía Apéndice
Compartir