Diagnostico de Leptospirosis

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• Enfermedad infecciosa
rural y urbana
de animales
domésticos y silvestres
transmisible al hombre
• Enfermedad Profesional
ISSN 2469-2123
Enfermedad bi / trifásica
aguda o crónica
 FASE 1: luego del ingreso, las leptospiras están presentes en sangre,
 FASE 2: 5 a 10 días después se inicia la producción de los anticuerpos (Ac) 
circulantes inicialmente IgM, luego IgG y
 FASE 3: las bacterias migran al riñón, eliminándose por orina durante
tiempos variables, según las especies
Diagnóstico:
se basa en métodos:
 DIRECTOS Detección de leptospiras
en sangre (primeros días) y en orina (a partir de los 7 – 10 días): 
IF; IHQ; Warthin Starry (WS); real-time PCR validada; observaciones
en fresco y cultivo.
 INDIRECTOS Detección de Ac anti-Leptospira, entre muchos otros:
M-ELISA: alta sensibilidad recomendable para diagnóstico temprano.
“Micro Aglutination Test” (MAT) para : 
- Determinar la prevalencia en rodeos, o
- Confirmar infección en individuos sospechosos, mediante
seroconversión del título de Ac. 
MAT: prueba de Referencia
Internacional, según la OPS (1968) 
Ventajas:
 Alta sensibilidad
 Valor serovar / serogrupo específica
 Importancia epidemiológica
Limitaciones:
 Detecta tardíamente los anticuerpos
 Requiere muestras pareadas de suero para confirmar (seroconversión) casos
 No identifica animales que liberan leptospiras al medio (orina, semen, 
secreciones cervicovaginales)
 Interferida por los anticuerpos vacunales
MAT. 
Se hace en 2 pasos:
 1 cualitativo (“Screening”)
 Detecta si hay o no Ac 
aglutinantes, en suero, contra 
determinados serovares de 
Leptospira spp, con resultados:
 Positivo, o 
 Negativo
 2 cuantitativo (titulación)
 Mide hasta que dilución del 
suero positivo, sigue habiendo 
aglutinación del antígeno
 1/100 hasta 1/6400 o seguir 
hasta encontrar el criterio de 
lectura
MAT 
¿Qué se necesita para hacerla?
 Personal entrenado
 Sueros problema
 Ficha epidemiológica del animal
 Antígenos (cepas)
 Medios de cultivo
 Estufa 28-30ºC
 Cabina Seguridad Biológica
 Guantes
 Alcohol 70%
 Tubos, Pipetas (triple enjuague destilada) 
 propipetas
 Policubetas de fondo en “U” 96 pocillos
 vortex
 Solución bufer fosfato (PBS) pH 7.2-7.3
 Pipetas automáticas 
 Simples o multicanal
 Tips (50-100µl) / racks
 Cinta adhesiva par sellar
 Estufa 37ºC
 Microscopio de Campo Oscuro (MCO)
 Aceite de inmersión
 Portas nuevos
 Mango de Kolle con asa
MAT. Preparación de sueros, según 
recomendaciones de la Asociación 
Argentina de Veterinarios de 
Laboratorios de Diagnóstico (AAVLD) 
Diluciones iniciales de 
los sueros problema, 
en PBS
 Bovinos 1/100
 Otras especies 1/50
 Hombre 1/25
 Silvestres 1/12,5
MAT:
Preparación de antígenos
Antígenos (cepas recomendadas, 
cultivadas en EMJH líquido)
 vivas
 Edad (7-15 días)
 Densidad (1-2 x 10 8 leptospiras
/ ml) obtenida por dilución del 
cultivo en PBS
Las CEPAS recomendadas para MAT de sueros 
CANINOS AAVLD
especie Serogrupo Serovar Cepa
L. borgpetersenii Ballum Castellonis Castellon 3
L. interrogans 
Icterohae-
morrhagiae
Copenhageni M 20
Canicola Canicola Hond Utrecht IV
Pomona Pomona Pomona
Pyrogenes Pyrogenes Salinem
Las CEPAS recomendadas para MAT
de sueros de OTRAS ESPECIES AAVLD
especie Serogrupo Serovar Cepa
L. borgpetersenii Ballum Castellonis Castellon 3
L. interrogans 
Icterohaemorrhagiae Copenhageni M 20
Canicola Canicola Hond Utrecht IV
Pomona Pomona Pomona
Pyrogenes Pyrogenes Salinem
Tarassovi Tarassovi Perepelicin
Sejroe* Wolffi 3705
L. kirschneri Grippotyphosa Grippotyphosa Moskva V
* para sueros bovinos agregar 
otro Ag más: Sejroe Hardjo Hardjoprajitno
MAT. Montaje del Screening en 
policubetas
- Partes iguales (50 μl) de la dilución inicial del suero y de cada 
antígeno recomendado, 
- Y un control de cada antígeno. PBS (50 μl) 
+
Antígeno (50 μl) 
 Determinará frente a qué 
serovar es reactivo el suero a 
las diluciones iniciales
control
MAT: Montaje del Screening
 1º: Dispensar 50 μl PBS en los 5 pocillos C (para control).
 2º: Dispensar 50 μl de dilución inicial del suero en los 5 pocillos B.
 3º: Girar policubeta 90º.
 4º: Dispensar 50 μl de cada 
antígeno en los pocillos C y B.
 5º: Sellar pocillos.
Cast Can Ict Po Pyr
B 
C
C B
Cast
Can
Ict
Pom
Pyr
MAT: Incubación
Opciones:
• 37 º C, 1 hora.
• 28-30º C, 2-4 horas.
• 4-8 º C, una noche.
MAT: Lectura en M. Campo Oscuro (MCO)
comparando pocillos C y suero de cada Ag 
 Colocar aceite sobre condensador MCO
 Apoyar porta evitando burbujas
 Buscar el plano de enfoque 150X
 Descargar gota con asa bacteriológica (sin cubre) y mirar
Clickear sobre imagen 
Para dar play a video
Suero reactivo + Ag
Portas nuevos
1º control 2º Suero + Ag
MAT: Interpretación
 Se considera reactivo o 
Positivo (+) cuando hay 
Reducción ≥50 % de 
leptospiras libres en 
pocillo de suero vs control 
(en Figura: c, d, e, f y g)
 Negativo cuando los 2 
pocillos son iguales o la 
reducción de leptospiras
libres no alcanza el 50% 
(en Figura: b)
Céspedes, 2005
MAT: Titulación de los +
Dispensar en pocillos
 1º: 50 μl de 7 Diluciones sucesivas base 
2, del suero + en PBS (1/100 hasta 
1/6400)
 2º: 50 μl PBS en pocillo 8 para Control ©
 3º: 50 μl del antígeno reactivo + (ej. 
Canicola) a todos los pocillos
 4º: Sellar
 5º: Incubar 
 6º: Leer en MCO
 Título: última Dilución con Reducción 
≥50 % de leptospiras libres en pocillo de 
suero vs control ©
Título Canicola 1/100=última dilución positiva
MAT: Lectura en M. Campo Oscuro (MCO)
comparando pocillos diluciones y control Ag 
+ 1/400
Bibliografía
 AAVLD, Comisión Científica Permanente
Sobre Leptospirosis. Manual de
Leptospirosis, 1994.
 Céspedes Z. Manuel, 2005. Leptospirosis:
una enfermedad zoonótica reemergente.
Rev Peru Med Exp Salud Publica 22(4),
2005.
 Faine S., Adler B., Bolin C., Perolat P.
Reprinted 2000. Leptospira and
Leptospirosis. Second Edition. Melbourne
Australia, 1999.
 http://www.oie.int/es/normas-
internacionales/manual-terrestre/acceso-
en-linea/
 http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/H
ealth_standards/tahm/2.01.09_Leptospiro
sis.pdf
 Organización Mundial de la Salud.
Leptospirosis humana: guía para el
diagnóstico, vigilancia y control /
Organización Mundial de la Salud;
traducción del Centro Panamericano de
Fiebre Aftosa. - Rio de Janeiro: Centro
Panamericano de Fiebre Aftosa –
VP/OPS/OMS, 2008.
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