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HONGOS Dra. María Helena Gauto Lesme “La micología es la ciencia que se ocupa del estudio de los hongos” Los hongos son organismos eucariotas Núcleo Membrana nuclear Retículo endoplasmico Mitocondrias Aparato secretor No son móviles Poseen una pared no rígida No son fotosintéticas Muchos son aerobios obligados o facultativos Hongos Micosis = infección por hongos +++ Son exógenos Hábitat : agua, suelo y desechos orgánicos Forman parte de la flora normal Hongos ■ Están en la naturaleza y son esenciales para la degradación y el reciclado de materia orgánica. ■ Contribuyen a la producción de alimentos y bebidas Ejemplos: Agaricus bisporus: champiñones Penicillium citrinum: hongo de la vid empleado en la obtención de vinos. Saccharomyces cerevisiae: levadura de la cerveza y de la elaboración del pan (aunque de cepas diferentes). Mohos del género Penicillium: son un ejemplo del reino Fungi que sirven para la elaboración del queso azul. ■ Utilidad en la medicina como los antibióticos (penicilina), y los inmunodepresores (como las ciclosporinas). MORFOLOGIA Unicelular Filamentoso Pseudofilamentoso Unicelular ■ Células redondeadas, ovoides o alargadas, que pueden reproducirse por gemación, cisiparidad o por otro proceso. Caracteriza las levaduras. Filamentosos Puede presentarse con o sin septos. Las hifas se pueden diferenciar en diferentes estructuras, recibiendo diferentes nombres: rizoides, anastomosis, artrosporas, etc. Pseudofilamentoso ■ Algunas levaduras bajo ciertas condiciones forman, por gemación sucesiva, una estructura filamentosa conocida como pseudomicelio. Contiene algunas levaduras del género Candida. Reproducción sexual (teleomórfico) Liberación de feromonas Plasmogamia y Cariogamia Reproducción asexual (anamórfico ) Esporas Conidios y Esporangiosporas Conidios (Reproducción asexual) Esporas (Reproducción asexual) 5 Filos ■ Basidiomicetos: hongos con basidiosporas y cuerpo fructífero en forma de seta. ■ Ascomicetos: estos hongos contienen ascosporas dentro de las estructuras reproductoras denominadas ascas. 60% de los hongos conocidos de los cuales 85% son patógenos para humanos. ■ Glomeromicetos: la principal característica que define a este grupo de hongos es la formación de micorrizas, estructuras que establecen una relación interespecífica de simbiosis con plantas, contando además con glomerosporas. ■ Zigomicetos: es el grupo de los comúnmente conocidos como mohos, en el que se incluyen alrededor de 1000 especies. Sus esporas reciben el nombre de zigosporas. ■ Quitridiomicetos: este último grupo de la clasificación actual de los hongos incluye a todos aquellos organismos microscópicos del reino Fungi, con zoosporas o gametos flagelados como células reproductoras. Técnica de Microcultivo de Hongos ■ Materiales: Placa de petri ; portaobjetos; cubreobjetos; doblar una barra de vidrio ( V de vidrio); pinzas de disección; lanceta de siembra; agua destilada; placas con medio de cultivo (Saboureaud glucosa o Saboureaud cloranfenicol o un medio morfológico adecuado) Técnica de Microcultivo de Hongos ■ 1.- Fabricación de la V de vidrio - Cortar una varilla de vidrio de longitud algo inferior al diámetro de la placa de petri - Calentar la parte central de la varilla con la llama del mechero Bunsen - Doblar en forma de V Técnica de Microcultivo de Hongos ■ Esterilización -Esterilizar en el autoclave el material (portaobjetos, cubreobjetos, V de vidrio, agua destilada y medio de cultivo) Técnica de Microcultivo de Hongos ■ Cultivo: -Introducir la barra de vidrio en la placa -Colocar el portaobjetos sobre la barra de vidrio -Recortar un cuadradito de medio de cultivo(superficie = ¼ de la del cubreobjetos). Colocarlo sobre el portaobjetos -Tomar un fragmento de micelio e inocular en los cuatro lados del medio de cultivo - Colocar el cubreobjetos sobre el medio de cultivo inoculado. -Añadir el agua destilada estéril en la placa. -Cerrar la placa y sellar con parafilm e incubar 7 dias a 25ºC Técnica de Microcultivo de Hongos ■ Observacion -Colocar una gota de lactofenol sobre un portaobjetos limpio -Flamear las pinzas -Retirar el cubreobjetos -Colocar el cubreobjetos sobre el portaobjetos y esperar unos instantes para que actúe el lactofenol -Observar al microscopio con el objetivo “seco fuerte” (x40) -Localizar estructuras características del hongo (conidioforos, esporangios,...) Antifungigrama Las técnicas más utilizadas son: técnica de dilución en caldo [protocolos M27-A3 (2008) para levaduras y M38-A2 (2008) para hongos filamentosos] y disco de difusión [protocolo M44-A (2004)] Conceptos fundamentales de Interpretación: CIM – Concentración mínima inhibitoria: es la concentración más baja de antifúngico capaz de inhibir el crecimiento del hongo. CFM – Concentración mínima de fungicida: es la concentración más baja de antifúngico capaz de matar el hongo. Fungistático: es la capacidad del antifúngico de inhibir el crecimiento del hongo. Fungicida: es la capacidad del antifúngico para matar el hongo. micosis Micosis superficiales Pitiríasis versicolor-Malassezia furfur. Piedra preta- Piedraia hortae. Piedra branca- Trichosporon beigelii Micosis Cutáneas Dermatofitoses- Trichophyton, Microsporum e Epidermophyton Candidíase-Candida spp. Micosis Subcutáneas Esporotricose- Sporothrix spp. Cromomicose-Phialophora, Cladosporium e Fonsecaea Micetomas- Pseudoallescheria, Madurella, Acremonium Doença de Jorge Lobo-Paracoccidioides loboi Micosis Sistémicas endémicas Paracoccidioidomicose- Paracoccidioides brasiliensis Histoplasmose- Histoplasma capsulatum, Candidíase – Candida spp. Criptococose- Cryptococcus spp. Aspergilose – Aspergillus spp. Métodos Directos 1- Examen directo en fresco - blanqueo con KOH (hidróxido de potasio) después de la tinción: Gram, Giemsa 2- Histopatológico - La tinción de hematoxilina y eosina (HE), Gomory, PAS 3- Cultivo: Sabouraud Sabouraud + antibióticos Medios específicos: selectivos e indicadores Examen macroscópico y microscópico 4- Ensayos bioquímicos para identificación Auxonograma: ensayo de asimilación de fuentes de carbono y nitrógeno. Zimograma: prueba de fermentación de carbohidratos y otros. 5- Pruebas inmunológicas para identificar el agente Métodos Indirectos ■ Reacción de Fijación del Complemento Inmune, Aglutinación, Precipitación, Inmunodifusión, Contrainmunoelectroforesis, Inmunofluorescencia, Intradérmica, etc
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