INFORME DE SALIDA DE CAMPO

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INFORME DE SALIDA DE CAMPO:
AISLAMIENTO DE ADN HUMANO Y ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
REALIZADO POR:
JOHANNA RONDON LUBO
MARÍA ALEJANDRA PONTÓN DAZA
JOSEPHINE IBARRA
ERIKA VILORIA
PRESENTADO A:
ANDERSON RAMÍREZ AYALA
DOCENTE.-
UNIVERSIDAD DE LA GUAJIRA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y APLICADAS
PROGRAMA: BIOLOGÍA
MATERIA: GENÉTICA II
VII SEMESTRE
RIOHACHA, 04 DE DICIEMBRE DE 2013.
ÍNDICE
INTRODUCCIÓN
MARCO TEÓRICO
OBJETIVOS
METODOLOGÍA
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA
ANEXOS
INTRODUCCIÓN
La biología molecular ha aparecido como una necesidad de explicar, a nivel molecular los fenómenos relacionados con la vida. Algunos de los aportes científicos más relevantes en la aparición de la biología molecular fueron los resultados de los trabajos de Avery y colaboradores, Martha Chase y Watson y Crick, entre otros.
A través de la genética mendeliana se pueden predecir mediante cálculos probabilísticos los valores de riesgo de padecimiento de una patología genética, identificando los genotipos de los individuos necesarios para el análisis. 
El ADN tiene la ventaja de ser idéntico a nivel molecular en cada estructura que se encuentre, sin importar sin son virus (con algunas excepciones), organismos procarioticos o eucarióticos, lo cual permite la aplicación de una serie de técnicas que logran su identificación a nivel de secuencias específicas que caracterizan especies e incluso individuos.
A nivel humano, existe la necesidad de obtener ADN de un amplio espectro de muestras biológicas tales como sangre, hueso, músculo, piel, semen o saliva, etc.
En la sangre se pueden encontrar secuencias de ADN correspondientes al individuo donador de la muestra o algunos parásitos que suelen encontrarse en el torrente sanguíneo tales como el tripanozoma y la leishmania, entre otras.
MARCO TEÓRICO
Todas las células, a excepción de las células anucleadas de los eritrocitos maduros en humanos, contienen ADN en sus núcleos celulares. También podemos encontrar ADN dentro de otros compartimentos celulares diferentes al núcleo, como las mitocondrias y los cloroplastos. La cantidad de ADN presente en algunos tejidos es muy pequeña; por este motivo no representa una fuente conveniente de extracción, aislamiento y purificación, para ser empleado en diferentes estudios de carácter genético, biológico. y/o bioquímico.
Muchos tejidos contienen alta actividad de desoxirribonucleasa (DNAasa) que rompe la macromolécula en pequeños fragmentos. Para seleccionar un tejido como fuente de ADN debe reunir dos condiciones: contener gran cantidad de material genético y poseer baja actividad de DNAasa.
El tejido linfoide, y en este caso el timo y el bazo representan materiales biológicos que son utilizados con mucha frecuencia como fuente de cantidades considerables de ADN para diferentes estudios. 
Después de extraído el ADN suele ser rápidamente desnaturalizado y por lo tanto se debe tener mucho cuidado en su remoción, aislamiento y purificación con el fin de obtener un producto que conserve la identidad e integridad estructural con el ADN de la célula de la cual proviene. El estrés o tensión mecánica o físico química, que acompañan los procesos de purificación de las moléculas de ADN deben ser evitadas al máximo y las nucleasas inhibidas.
Factores como los iones Ca2+ y Mg2 son importantes para la actividad de las DNAasas .El citrato de sodio presente en las soluciones empleadas para la extracción y purificación del ADN, atrapa estos iones e impide, de esta forma, la acción de las enzimas que digieren estas moléculas. Con el fin de eliminar en forma definitiva la actividad de las nucleasas, las etapas de remoción de las proteínas deben ser llevadas a cabo tan rápido como sea posible y en frío.
Las nucleoproteínas, son proteínas que aparecen asociadas con los ácidos nucleicos de las células eucariotas; son insolubles en agua y en soluciones de baja fuerza iónica pero solubles en soluciones de alta fuerza iónica; propiedad que debe ser tenida en cuenta durante los procesos de extracción inicial.
El objetivo de un proceso de aislamiento y purificación de DNA es conseguir separar esta molécula del resto de las macromoléculas (proteínas, lípidos y polisacáridos) presentes en el interior de las células.
La reacción en cadena de la polimerasa (conocida como PCR por sus siglas en inglés, Polymerase Chain Reaction) permite amplificar más de un millón de veces un ADN obtenido a partir de una región seleccionada del genoma, siempre y cuando se conozca una parte de su secuencia de nucleótidos. Esta técnica fue ideada en 1989 por Kary B. Mullis que obtuvo el premio Nobel de Química en 1993 por dicho invento.
Para la PCR se utilizan dos oligonucleótidos sintéticos de unos 15-20 nucleótidos que son complementarios a las zonas flanqueantes de la región que se quiere amplificar. Estos oligonucleótidos (habitualmente conocidos por su nombre en inglés, "primers") actúan como cebadores para la síntesis in vitro de ADN la cual está habitualmente catalizada por una enzima llamada Taq polimerasa. Dicha enzima se aísla de una bacteria termófila, denominada Thermus Aquáticus, que es capaz de crecer a temperaturas elevadas (79 - 85 º C). A esta temperatura dicha enzima es capaz de mantener una media de extensión de más de 60 nucleótidos por segundo en regiones ricas en uniones G-C. 
La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.
Fue empleado por primera vez por en el año 1937, pero su importancia vino a incrementarse cuando en los años cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K. Tiselius , impulsaron la electroforesis de zona, nombre que se asignó a la separación de materiales en un campo eléctrico en presencia de algún tipo de soporte; aunque este término se limitó originalmente al análisis de coloides y partículas submicroscopicas , se ha convertido en estos últimos años en una metodología aplicada a sustancias de bajo peso molecular.
Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo). 
El movimiento de las moléculas está gobernado también por dos fuerzas adicionales; inicialmente la fricción con el solvente dificultará este movimiento originando una fuerza que se opone , por otro lado las moléculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen energía cinética propia denominado difusión. La energía cinética de las moléculas aumenta con la temperatura, por ello a mayor temperatura mayor difusión. 
La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no migren de una manera homogénea, de tal manera que, si las moléculas son colocadas en un cierto lugar de solución, los iones comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo. 
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las moléculas empleando un medio que oponga más resistencia a dicho movimiento. Una forma común de hacer esto es formar un gel. El gel consiste de un polímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos, consecuentemente, la migración electroforética de las moléculas será más lenta, pero el ensanchamiento del frente se verá reducido también.
OBJETIVOS
· Obtener ADN a partir de una muestra de sangre periférica humana empleando el kit comercial, Wizard Genomic de Promega.
· Observar las bandas de DNA humano, obtenido a partir de sangre periférica producidas por la luminiscencia emitida por el colorante bromuro de etidio.
METODOLOGÍA
MATERIALESY EQUIPOS
Solución de lisis celular
Solución de lisis nuclear
Solución de precipitación de proteínas
Solución de rehidratación de ADN
Solución de RNAsa
Isopropanol
Etanol
Agarosa
Buffer TBE
Bromuro de etidio
EDTA
Tubos de Ependorff
Centrifugadora
Vortex
Incubadora
Micropipeta
Cámara de electroforesis
Transiluminador
	Cámara de Bioseguridad
PROCEDIMIENTO
	AISLAMIENTO DE ADN
Lisis de glóbulos rojos
1. Usando los volúmenes de la tabla anterior combine los volúmenes apropiados de solución de lisis celular y sangre. Mezcle por inversión.
2. Incubar por 10 minutos.
3. Centrifugar: < 300 ul de la muestra 13.000 – 16.0000 rpm. 20 segundos.
 – 10 ml. de muestra 2.000 rpm. 10 minutos.
4. Descartar el sobrenadante. Llevar el pellet al vortex.
Lisis nuclear y precipitación de proteínas
5. Usando los volúmenes de la tabla anterior adicionar solución de lisis nuclear y mezclar por inversión.
6. Adicionar la solución de precipitación de proteínas; llevar al vortex por 20 segundos.
7. Centrifugar:< 300 ul de la muestra 13.000 – 16.0000 rpm. 3 minutos. 1 – 10 ml. de muestra 2.000 rpm. 10 minutos.
 8. Transferir el sobrenadante a un nuevo tubo.
Precipitación y rehidratación del DNA
9. Usando los volúmenes de la tabla anterior adicionar isopropanol a temperatura ambiente. Mezclar.
10. Centrifugar como en el paso 7.
11. Descartar el sobrenadante. Adicionar etanol al 70% (el mismo volumen del isopropanol).
12. Centrifugar como en el paso 7.
13. Aspirar el etanol y secar el pellet al vacío. Si no se dispone de la campana indispensable para esto, deje escurrir el tubo sobre un papel absorbente por algunos minutos.
14. Rehidratar el DNA en el volumen apropiado de solución de rehidratación del DNA por una hora a 65ºC o toda la noche a 4ºC.
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAR
1. Medir 1g de agarosa.
2. Adicionar 5ml buffer TBE (solución stock 5X de concentración por litro: 54 grs. de trisma base, 27,5 grs. de ácido bórico, 20 ml. de EDTA 0,5 M pH 8). Y llevar hasta 100ml con agua destilada.
3. Fundir la agarosa por calentamiento a ebullición o en horno microondas.
4. mezclar bien la solución.
5. Agregar 5 ul de bromuro de etidio por cada 100 ml de buffer.
6. Dejar reposar algunos minutos hasta soportar el grado de calor en la palma de la mano.
7. Transferir a una cámara de gelificación el volumen apropiado de gel.
8. Colocar los peines o peinillas con el número de pocillos apropiados.
9. Dejar enfriar hasta que la agarosa gelifique (no mover durante este lapso de tiempo).
10. Adicionar la cantidad apropiada de buffer en la cámara de electroforesis 
11. Añadir 5 ul de bromuro de etidio por cada 100 ml de buffer a la cámara de electroforesis.
12. Una vez gelificada, colocar el gel en la cámara de electroforesis.
13. Si es necesario adicionar por los extremos de la cámara el buffer necesario para cubrir el gel.
14. Para facilitar la visualización de los pocillos coloque un papel oscuro debajo de la cámara.
15. Una vez hecho esto el gel está listo para recibir las muestras de ADN.
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
1. Preparar un ml. de buffer de carga 2X a partir de uno de 6X.
2. Centrifugar durante 1 minuto los tubos Ependorff a 10.000 rpm. 
3. Mezclar en una placa de 96 pozos, 5 ul de ADN y 5 ul de buffer de carga 2X.
4. Colocar los 10 ul de la mezcla en los pozos del gel, evitando que las muestras de un pocillo se mezclen con las del otro, siempre se debe dejar un pocillo libre para colocar el marcador de peso molecular, que se escoge de acuerdo al tamaño de las bandas que nos interesa.
5. Cubrir la cámara de electroforesis sin moverla..
6. Correr a un voltaje constante (50 a 100 voltios), hasta que el primer colorante avance aproximadamente unos 2 cms en el gel.
7. Bajar el voltaje y apagar la cámara.
8. Utilizando guantes retirar el gel y visualizar las bandas en un transiluminador.
9. Fotografiar el gel.
RESULTADOS
Muestra de sangre con solución de lisis nuclear.
Agitando en el vortex la muestra de sangre.
Centrifugando las muestras de sangre,
Aplicando la solución de precipitación de proteínas.
Sobrenadante obtenido donde se encuentra el ADN.
Observación en detalle del resultado de la electroforesis
Resultados de la corrida de la electroforesis.
DISCUSIÓN
El método aplicado para obtener ADN humano es una técnica relativamente sencilla, pero que requiere que todos los pasos sean realizados con estricto orden, cuidando que la muestra no se contamine, adicionando la cantidad exacta de reactivos, realizando todos los procesos estrictamente como dice la guia, ya que, no seguir las instrucciones puede ocasionar que se produzcan errores en los resultados, que al momento de observar el ADN en la electroforesis podría dar resultados negativos.
El kit utilizado para el aislamiento de ADN humano de las muestras de sangre, llamado Wizard Genomic de Promega, es un kit muy bueno que da unos excelentes resultados y es ampliamente usado por toda la comunidad científica.
Nosotros en general al realizar el aislamiento de ADN, obtuvimos buenos resultados, ya que seguimos las indicaciones del profesor, añadiendo la cantidad necesaria de los reactivos y siguiendo los procesos correspondientes, con la bioseguridad necesaria.
Al momento de realizar la electroforesis también tuvimos resultados muy satisfactorios, ya que, cuando se corrieron las muestras en la cámara de electroforesis y posterior observación en el transiluminador, las únicas muestras que se evidencio que corrieron fueron las de nuestro grupo, ya que era la única muestra que contenía ADN.
Para obtener buenos resultados al realizar la electroforesis, es necesario tener mucho cuidado al momento de depositar la muestra en los pozos de la cámara, debido a que si hay algún error como que se salga la muestra o no se le adicione la cantidad necesaria, estos podrían dar error y no observarse nada.
CONCLUSIÓN
A modo de conclusión podemos decir que la realización de estas prácticas fue de gran provecho para el estudio de la genética mendeliana y de poblaciones, porque nos permite identificar el ADN de los organismos, en este caso el humano, para su posterior análisis.
El estudio del ADN es muy importante hoy en día porque nos permite conocer las características genéticas de un individuo, que es algo totalmente único para queda organismos, nos permite identificar enfermedades genéticas hereditarias o producidas por algún tipo de mutación o aislar microorganismos que causan enfermedades a partir de muestras de ADN. Nos permite conocer que tanto material genético se comparte con las familias. Estudiar los genes también es importante porque se sigue explorando en este campo que están grande y que todavía tiene muchas cosas por descubrir.
La importancia de la electroforesis radica en conocer el tamaño de los fragmentos de ADN, aplicando los marcadores de peso molecular, en nuestro caso, no utilizamos marcadores de pesos molecular antes de realizar la electroforesis, por eso no podemos decir con claridad el tamaño exacto de los fragmentos de ADN que obtuvimos en nuestra muestra,
BIBLIOGRAFÍA
http://scielo.isciii.es/scielo.php?pid=S0212-71992007000500016&script=sci_arttext
http://www.ehowenespanol.com/fuentes-error-geles-electroforesis-lista_131949/
http://javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/electroforesis.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Enfermedad_gen%C3%A9tica
ANEXOS
1.	Demuestre con un ejemplo de genética mendeliana la deducción probabilística del riesgo de padecimiento de una patología genética humana.
Un buen ejemplo de enfermedad autosómica recesiva es la Fibrosis Quística del Páncreas, enfermedad debida a mutaciones en el gen CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator), localizado en 7q31. La enfermedad afecta a 1 de cada 2.500 nacidos vivos de raza caucásica, lo que significa una frecuencia alélica del 0,02 (2% de los alelos presentes en la población están mutados) y una frecuencia de portadores del 0,04 (1 decada 25 individuos de la población general son heterocigotos). La enfermedad surge por el mal funcionamiento de un canal de cloro, lo que provoca una mucoviscidosis (secreciones mucosas muy viscosas) que poco a poco conduce a la destrucción del tejido pulmonar y pancreático, además de provocar obstrucción intestinal en algunos neonatos. Se conocen alrededor de 400 mutaciones diferentes en el gen CFTR, pero en poblaciones europeas un 70% de los casos se deben a la deleción F508del, que deleciona 3 bases sin cambiar el marco de lectura. Además de F508del, hay otras mutaciones que causan Fibrosis Quística y que se encuentran con frecuencia alélica mayor a 1%, de modo que el análisis de 8 mutaciones (incluyendo F508del) puede detectar hasta un 85-90% de los casos en poblaciones de origen europeo.
2.	Cuáles estructuras se deben romper en una célula procariotica y en una célula eucariótica para extraer el DNA.
En las células procariotas, el ADN es una molécula única, generalmente circular y de doble filamento, que se encuentra ubicada en un sector de la célula que se conoce con el nombre de nucleoide, que no implica la presencia de membrana nuclear. Dentro del nucleoide pueden existir varias copias de la molécula de ADN.
El núcleo celular es un orgánulo membranoso que se encuentra en el centro de las células eucariotas. Contiene la mayor parte del material genético celular, organizado en múltiples moléculas lineales de ADN de gran longitud formando complejos con una gran variedad de proteínas como las histonas para formar los cromosomas. 
3.	Qué tipo de microorganismos se pueden aislar de las siguientes muestras para extracción de ADN: líquido cefalorraquídeo, secreciones faríngeas, materias fecales y sangre.
LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO: Frecuencia de microorganismos según el grupo etario:
En recién nacidos
Streptococcus agalactiae
Escherichia coli
Enterobacterias
Cocos Gram positivos
Listeria monocytógenes
Menores de dos meses
Streptococcus agalactiae
HSANGaemophilus influenzae
Streptococcus pneumoniae
Neisseria meningitidis
Escherichia coli
Listeria monocytógenes
Menores de 15 años
Haemophilus influenzae b
Streptococcus pneumoniae
Neisseria meningitidis
Mayores de 15 años
Streptococcus pneumoniae
Neisseria meningitidis
Enterobacterias
Staphylococcus spp
Listeria monocytógenes
FLORA NORMAL DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR 
 	Streptococcus spp (alfa, beta, no hemolíticos) -Veillonella spp. 
Neisseria spp. -Peptostreptococcus spp. 
Haemophilus spp. -Actynomyces spp. 
Corynebacterium spp. -Mycoplasma spp. 
Staphylococcus spp -Bacteroides spp. 
Micrococcus spp. -Fusobacterium spp. 
Candida spp. 
MATERIA FECAL:
Salmonelas.
Shigella.
Campylobacter.
Ciertos Escherichia coli.
Vibrio cholerae.
SANGRE:
	Estafilococo coagulasa
	Staphilococcus epidermidis
Staphilococcus hominis
E. coli
4.	Para que se empleó cada reactivo en esta práctica.
	- Separar linfocitos de eritrocitos
	- Rompimiento de la membrana celular
	- Precipitar proteínas
	- Purificación de ADN
	- Rehidratación de ADN
5.	Como se puede evidenciar el ADN que supuestamente obtuvo. Justifique su respuesta.
	Para evidenciar que si se obtuvo ADN hay que realizar la electroforesis para poder observar las bandas de ADN que se aislaron.
6.	Consulte el nombre de cinco enfermedades genéticas que sean producidas por un gen, en cual cromosoma se encuentra dicho gen y cuáles son las características más importantes de esta enfermedad.
SÍNDROME DE CHARCOT–MARIE–TOOTH: Genéticamente, el síndrome aparece debido a alteraciones en determinados genes como PMP22, en el 80% de los casos, que se debe a una repetición en tándem del gen dando lugar a una trisomía principalmente. También, puede deberse a una mutación en el gen MPZ que representa el 5-10% de los casos. Presente en el cromosoma 19. comienzo gradual con progresión lenta, deformidad del pie que produce arco alto (cavo) y dedos en martillo, atrofia de las piernas que origina un aspecto de patas de cigüeña, agrandamiento de los nervios, pérdida sensorial u otros signos neurológicos, escoliosis, división de la propiocepción, que muchas veces interfiere en el equilibrio y la marcha, parestesis dolorosas, (en casos avanzados), posible afectación de las manos, ausencia de reflejos tendinosos profundos en muchos pacientes, úlceras de los pies,la cual puede tardar 1 año en volver a regenerarse,debido al débil tejido de la planta del pie, con escasa tendencia a la cicatrización en algunos casos.
FENILCETONURIA: La causa de la enfermedad es la carencia de la enzima fenilalanina hidroxilasa (FAOH) o de la dihidropterina reductasa (DHPR) (también llamada tirosina hidroxilasa). Ambas enzimas son responsables de la hidroxilación del aminoácido fenilalanina en la reacción que produce tirosina. Por ello, el defecto o falta de alguna de ellas determina un incremento de la concentración sanguínea de fenilalanina al impedirse su transformación en tirosina. También se aumenta la transaminación de la fenilalanina como vía metabólica alternativa, y asimismo se acumulan los metabolitos fenilpiruvato, fenilactato y fenilacetato. El defecto en la síntesis de FAOH se debe a una anomalía génica localizada en el cromosoma 12, y el de la DHPR en el cromosoma 4. Lo que se traduce en la incapacidad de metabolizar el aminoácido tirosina a partir de fenilalanina en el hígado. Es una enfermedad congénita con un patrón de herencia recesivo. Es un tipo de hiperfenilalaninemia.
FIBROSIS QUÍSTICA: Es una enfermedad genética de herencia autosómica recesiva que afecta principalmente a los pulmones, y en menor medida al páncreas, hígado e intestino, provocando la acumulación de moco espeso y pegajoso en estas zonas. Es uno de los tipos de enfermedad pulmonar crónica más común en niños y adultos jóvenes, y es un trastorno potencialmente mortal; los pacientes suelen fallecer por infecciones pulmonares debido a Pseudomonas o Staphylococcus. Se trata de una enfermedad autosómica recesiva. En su forma más común, una mutación de un aminoácido (falta una fenilalanina en la posición 508) conduce a un fallo del transporte celular y localización en la membrana celular de la proteína CFTR. Se han descrito más de 1.800 mutaciones, siendo la mayoría de ellas pequeñas deleciones, aunque con diferentes efectos, como cambios en el marco de lectura, cambios de aminoácidos, terminación prematura de la proteína o alteraciones en el splicing. El gen CFTR está localizado en el brazo largo del cromosoma 7, en la posición 7q31.2, ocupando 180.000 pares de bases: más precisamente, desde el par 116.907.252 al 117.095.950 del cromosoma. Es un gen de gran tamaño, que posee 250 kb y que incluye 27 exones. Fue localizado y secuenciado por mapeo genético.
ENFERMEDAD DE TAY-SACHS: es una enfermedad rara que afecta al sistema nervioso central y es de carácter hereditario, autosómico recesivo (más común en descendientes de hebreos). Generalmente los recién nacidos parecen no tener síntomas, sin embargo al pasar el tiempo estos síntomas se desarrollan. Se trata de una enfermedad de almacenamiento lisosómico. Los individuos que la padecen son incapaces de producir una enzima lisosómica llamada hexosaminidasa-A que participa en la degradación de los gangliósidos, un tipo de esfingolípido, que se acumulan y degeneran al sistema nervioso central. Se incluye dentro de las lipidosis o enfermedades por almacenamiento de lípidos. El gen responsable de la enfermedad de Tay-Sachs se encuentra en el cromosoma 15 y codifica para la subunidad alfa de la enzima Hex-A. Desde que se aisló el gen en 1985, se han identificado más de 50 mutaciones distintas que dan lugar a la TSD.
SÍNDROME DE JOUBERT: es una rara anomalía de carácter genético que puede ser confundida con otras afecciones mentales, como el autismo. Aparece por la ausencia o el bajo grado de desarrollo del vermis del cerebelo (en este caso, los cilios de la membrana plasmática de sus células, que mueven el líquido cefálico) debido a factores de carácter genético, por lo que se le ha atribuido a esta afección la categoría de enfermedadgenética. Se sabe muy poco acerca de cuál o cuáles son los genes que desencadenan la aparición del síndrome. Por el momento, la anomalía se ha ligado a una deleción del cromosoma 9q 34 el cromosoma se coloca más pequeño o es más algunas veces desaparece y del cromosoma 17p 12. Aun así, los investigadores no se han puesto de acuerdo en la consecución de genes y locis asociados al síndrome de Joubert. Últimos estudios asocian el gen Arl13b, que sintetiza una proteína implicada en la formación (y probablemente función) de los cilios primarios de las células del cerebelo. La proteína es necesaria para el correcto funcionamiento de un sistema de transporte de proteínas en los cilios primarios. Otros genes causantes de esta enfermedad son el NPHP1, AHI1, CEP2905 e INPP5E.
7.	Mencione algunos casos específicos en los que es indispensable obtener ADN humano.
	
· Huella genética: Los exámenes de huellas genéticas utilizan las cadenas de ADN de una persona para propósitos legales. A diferencia de los exámenes descriptos previamente, las pruebas de huellas no se usan para detectar mutaciones asociadas con enfermedades. Este tipo de tests pueden identificar a las víctimas de un crimen o de una catástrofe, aclarar o implicar a un sospechoso, o establecer relaciones biológicas entre las personas (por ejemplo, la paternidad).
· Exámenes de investigación: Los exámenes de investigación incluye la búsqueda de genes desconocidos, el aprendizaje de cómo trabajan los genes o el mejoramiento de la comprensión de las enfermedades genéticas. Los resultados de esta prueba, hechos como parte de un estudio de investigación, no suelen estar disponibles para los pacientes o sus médicos.
· Examen de diagnóstico: utilizado para confirmar o desechar un diagnóstico cuando, debido a unos determinados síntomas, se sospecha de un desorden determinado.
· Examen forense: usa secuencias de ADN para identificar un individuo por motivos legales. A diferencia de los anteriores, no se usa para detectar mutaciones asociadas a enfermedades. Este tipo de test puede identificar víctimas de crímenes o catástrofes, descarta o implica a sospechosos de un crimen o establece relaciones biológicas entre personas (paternidad por ejemplo).
· Examen de búsqueda: incluye encontrar genes desconocidos, aprender cómo trabajan y avanzar el conocimiento de las condiciones genéticas. No están a la disposición de pacientes.
8. Mencione otros dos tipos de electroforesis empleados en procedimientos de biología molecular.
ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL: La electroforesis bidimensional se basa en separar las proteínas en una mezcla según sus dos propiedades moleculares, una en cada dimensión. El procedimiento más usado se basa en la separación en una primera dimensión mediante isoelectroenfoque y la segunda dimensión según peso molecular mediante electroforesis en poliacrilamida.
ISOELECTROENFOQUE: Esta técnica, habitualmente denominada electroenfoque se basa en el desplazamiento de las moléculas en un gradiente de pH. Las moléculas amfotéricas, como los aminoácidos, se separan en un medio en el que existe una diferencia de potencial y un gradiente de pH. La región del ánodo es Ácida y la del cátodo es alcalina. Entre ambos se establece un gradiente de pH tal que las moléculas que se han de separar tenga su punto isoeléctrico dentro del rango. Las sustancias que inicialmente se encuentran en regiones de pH inferior a su punto isoeléctrico estarán cargadas positivamente y migraran hacia el cátodo, mientras aquellas que se encuentran en medios con pH más bajos que su punto isoeléctrico tendrán carga negativa y migraran hacia el ánodo. La migración les conducirá a una región dónde el pH coincidirá con su punto isoléctrico, tendrán una carga neta nula y se detendrán. De esta forma las moléculas amfotéricas se sitúan en estrechas bandas donde coincide su punto isoeléctrico con el pH.
ELECTROFORESIS CAPILAR: La electroforesis capilar se basa en los mismos principios de las técnicas electroforeticas convencionales, pero utiliza condiciones y tecnología distinta que nos permiten obtener una serie de ventajas al respecto, Esta separación de péptidos realizada sobre un capilar de silica fundida a potenciales elevados 20 a 30 Kv en un campo de 400 a 500 v/cm refrigerados por aire. 
La corriente electroendosmótica (FEO) generada por los grupos silanol de la superficie interna del capilar da como resultado una corriente plana del frente del líquido que contrasta con el frente parabólico de la cromatografía líquida de alta resolución. La ventaja de esta técnica es que el capilar de silica fundida que generalmente se cubre con una capa de polimina para darle mayor rigidez y resistencia, tiene una ventaja a través de ella que permite el pasaje de la luz UV de tal manera que la visualización es on-line. Con esta técnica descripta es posible separar cationes, aniones, proteínas, macromoléculas y sustancias no cargadas en forma simultánea.
9. Cuál es la estructura química y el nombre de los componentes de la agarosa y de la poliacrilamida.
Desde el punto de vista químico se denomina poliacrilamida, a un polímero conformado por varias subunidades de monómeros de acrilamida.
Estructura de la poliacrilamida.
10. Consulte tres marcadores de peso molecular y el número de fragmentos que contiene al igual que el número de pares de bases.
Pasos de Escalera de ADN son escalas de tamaños definidos con pasos graduales exactas entre bandas. Las escaleras no son para uso en el análisis cuantitativo.
10pb DNA Escalera: Diez fragmentos de ADN de extremos romos que van desde 10 pb a 100 pb en exactamente 10 pb incrementos. Todas las bandas son de aproximadamente igual intensidad con la excepción de la banda de 10 pb, que puede aparecer ligeramente menos intenso.
Las escaleras de ADN son escaleras con tamaños definidos. Las escaleras no son para uso en el análisis cuantitativo
ADN de 100 pb Ladder: Once fragmentos que varían en tamaño desde 100 pb a 1000 pb 100 pb incrementos con una banda adicional de 1.500 pb. El fragmento de 500 pb está presente en mayor intensidad para una fácil identificación. La escalera es desfosforilado y listo para 5 ' de fin de etiquetado con radioisótopos utilizando T4 polinucleótido quinasa, lo que permite la visualización por autorradiografía.
11. Cuáles son los cuidados que se deben tener cuando se hace una electroforesis de agarosa.
	- Evitar contaminar la muestra.
	- Preparar correctamente el gel y las soluciones.
	- Cargar el tamaño correcto de las muestras.
12. Redacte un informe de los resultados obtenidos en la práctica.
Al realizar esta práctica obtuvimos los resultados esperados que era el Aislamiento del ADN para luego ser observado en la electroforesis.
Seguimos todos los pasos como lo indico el profesor y la guia, y a medida que realizábamos los procesos íbamos observando cómo iba cambiando la muestra, pudimos evidenciar cada uno de los pasos: la separación de los linfocitos de los eritrocitos, el rompimiento de los eritrocitos que era donde se encontraba el material genético, y como se iba obteniendo un precipitado transparente que fue donde se hallaba el material genético, luego aplicando colorantes, se realizó la electroforesis y se evidencio que el proceso de aislamiento si tuvo los resultados esperados que era obtener el ADN.