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Alumna: Diana María Becerril García 
CUESTIONARIO GUÍA PARA EXAMEN PQI 3P 
Los siguientes enunciados son Principios; Descripciones; Fundamentos; Instrumentación; Metodologías; Clasificación o 
Conceptos de las siguientes Técnicas Instrumentales: 
Cromatografía en capa fina 
Cromatografía de intercambio iónico 
Espectroscopía de Absorción Atómica 
Espectrometría o Espectroscopía 
Cromatografía de afinidad 
Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) 
Espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear 
Cromatografía 
Cromatografía de gases 
Cromatografía de adsorción 
Cromatografía de permeación en gel 
Espectrometría de Masas 
Cromatografía de partición 
Espectrometría de Infrarrojo 
Cromatografía covalente 
Cromatografía en papel 
Cromatografía de exclusión 
Espectrofotometría de Absorción 
Principio de…. RESPUESTA: Espectrometría de masas 
Técnica microanalítica para identificar compuestos desconocidos, cuantificar compuestos conocidos, y elucidar la 
estructura y propiedades químicas de moléculas. Alguna forma de energía es transferida a las moléculas a analizar para 
afectar la ionización. En la técnica de impacto electrónico, algunas de las moléculas ionizadas del analito “explotan” en 
una variedad de fragmentos ionizados, el patrón de fragmentación resultante así como los iones residuales constituyen 
este espectro. En principio, puede ser usado como su “huella química” para caracterizar el analito. Después de producir 
los iones, estos se analizan en el analizador de iones de acuerdo a su relación masa/carga (m/z). Los iones tienen una 
carga eléctrica que les permite ser controlados por campos eléctricos; son separados por su valor m/z en el analizador 
de masas. 
Instrumentación de…. RESPUESTA: Espectrometría de masas 
Es un instrumento que mide las masas de moléculas individuales que han sido convertidas en iones. Este equipo no 
mide la masa molecular directamente, pero mide la relación masa/carga de los iones formados de las moléculas. Tienen 
siete componentes mayores: un sistema de entrada, una fuente de iones, un analizador de masas, un detector, un 
sistema de vacío, un sistema de control y un sistema de datos. 
Descripción de…. RESPUESTA: Espectroscopia de absorción atómica 
Método instrumental basado en la atomización del analito que utiliza un nebulizador para crear una niebla de la muestra 
y un quemador que da una llama con una longitud de trayecto más larga. La niebla atómica es expuesta a una energía 
de longitud de onda emitida por una Lámpara de Cátodo hueco del mismo analito a determinar o una Lámpara de 
Descarga de Electrones. La excitación de los átomos del analito es hecha por el uso de lámparas que brillan a través de 
la llama a diversas longitudes de onda para cada tipo de analito. La cantidad de luz absorbida después de pasar a 
través de la llama determina la cantidad de analito existente en la muestra. La mayor parte de la información útil se 
obtiene operando en las regiones UV, visible y rayos X. 
Instrumentación de…. RESPUESTA: Espectroscopia de absorción atómica 
Los aparatos que hacen estos trabajos se componen de: a) Una fuente de radiación que emite la línea espectral del 
elemento de interés. b) Un sistema de atomización para suministrar energía suficiente para disociar al analito y formar 
átomos libres. c) Un monocromador para aislar la línea espectral medida. d) Un detector acoplado con un sistema 
medidor o de registro de los datos obtenidos. 
Fundamento de…. RESPUESTA: Espectrofotometría de absorción 
La propiedad de la interacción de la luz con una gran cantidad de especies químicas nos permitirá identificar y 
cuantificar analitos, dando lugar a una rama de la química analítica que estudia los fenómenos de interacción de la luz 
con la materia. En general, cuando una lámpara ilumina cualquier objeto, pueden suceder algunos fenómenos: La luz 
puede ser emitida, reflejada, transmitida o absorbida. La energía no puede ser destruida, y la cantidad total de luz debe 
conservarse; por lo tanto, cuando un objeto es iluminado, se puede medir cuánta radiación ha sido reflejada o 
transmitida y cuánta fue absorbida, y cuál es la cantidad que ha interactuado con el objeto. Está relacionada con el 
hecho de que una sustancia absorbe la luz, provocando que los electrones “salten” de un nivel de energía a otro mayor; 
este fenómeno permite explicar por qué algunas sustancias son coloreadas mientras que otras no. Es usualmente usada 
con moléculas disueltas en un solvente transparente. La absorbancia de un soluto depende linealmente de la 
concentración y por consiguiente esta técnica es ideal para hacer mediciones cuantitativas. La longitud de absorción y la 
fuerza de absorbancia de una molécula no sólo depende de la naturaleza química, si no del ambiente molecular en 
donde se encuentre el cromóforo. Es una excelente técnica para seguir reacciones de unión a ligando, catálisis 
enzimáticas y transiciones conformacionales en proteínas y ácidos nucleicos. Las mediciones son muy sensibles y se 
requieren pequeñas muestras de material para el análisis. 
Instrumentación de…. RESPUESTA: espectrofotometría de absorción 
Fuentes: Las fuentes de radiación son generalmente lámparas de tungsteno o tungsteno-halógeno para proveer de una 
radiación continua adecuada del espectro visible al infrarrojo cercano. Selector de longitud: Una porción de la radiación 
emitida por la fuente es colectada y dirigida al selector de longitud o a la muestra con algunos lentes o espejos. 
Compartimiento de la muestra y celdas para la muestra: El compartimiento de la muestra es un compartimiento ajustado 
a la luz con una tapa que da seguridad sosteniendo una o más celdas con la muestra. Detectores: Fototubos de vacío, 
fotodiodos, detectores fotónicos, fotomultiplicadores, arreglos lineares de fotodiodos y sistemas de transferencia de 
carga son utilizados como detectores en muchos fotómetros y espectrofotómetros de amplio espectro. Procesamiento 
de la señal y lectura: El detector da una señal que contiene información sobre el poder de radiación trasmitido por una 
solución de muestras o referencia. 
Metodología de…. RESPUESTA: Espectrometría de infrarrojo 
Las muestras líquidas son prensadas entre dos planchas de una sal de alta pureza. Estas placas deben ser 
transparentes a esta longitud de onda para no introducir ninguna línea en el espectro de la muestra. Las placas son 
solubles en agua, por lo que la muestra, los reactivos de lavado y el medio deben ser anhidros. Las muestras sólidas se 
preparan mezclando una cierta cantidad de muestra con una sal altamente purificada. Esta mezcla se tritura y se prensa 
con el fin de formar una pastilla por la que pueda pasar la luz (translúcida). Un haz de luz característico a esta técnica es 
generado y dividido en dos rayos. Uno pasa por la muestra, y el otro por una referencia que suele ser la sustancia en la 
que está disuelta o mezclada la muestra. Ambos rayos se reflejan de vuelta al detector, pero primero pasan a través del 
separador, que alterna rápidamente cuál de los dos entra en el detector. Las dos señales se comparan y, a 
continuación, se registran los datos. 
Fundamento de…. RESPUESTA: espectrometría de infrarrojo 
Puede ser utilizada para identificar un compuesto o investigar la composición de una muestra. Se basa en el hecho de 
que los enlaces químicos de las sustancias tienen frecuencias de vibración específicas, que corresponden a los niveles 
de energía de la molécula. Estas frecuencias dependen de la forma de la superficie de energía potencial de la molécula, 
la geometría molecular, las masas atómicas y, posiblemente, el acoplamiento vibracional. Si la molécula recibe luz con 
la misma energía de esa vibración, entonces la luz será absorbida si se dan ciertas condiciones. Para que una vibración 
aparezca en el espectro de interés, la molécula debe someterse a un cambio en su momento dipolar durante la 
vibración. 
Instrumentación de…. RESPUESTA: espectrometría de infrarrojo 
Va equipado con unafuente de emisión de radiación de la onda, que normalmente es una barra de un material 
cerámico. La radiación emitida por esta fuente se divide en dos haces al atravesar una serie de espejos. De los dos 
rayos uno de ellos pasa por una celda que contiene una disolución del compuesto orgánico (haz de la muestra) que se 
desea estudiar, mientras que el otro haz atraviesa una celda que sólo contiene el disolvente empleado (haz de 
referencia). Los dos haces se dirigen luego hacia un dispositivo que permite el pase alternativamente de un haz y luego 
del otro (interruptor rotatorio). El haz se dirige a la rejilla de difracción donde se separa en las longitudes de onda que lo 
componen. Estas radiaciones, separadas por su valor de longitud de onda, pasan a través de una ranura y llegan al 
detector. El detector es una bobina de alambre cuya resistencia aumenta debido al calentamiento que produce la 
radiación incidente. 
Fundamento de…. RESPUESTA: espectroscopia de absorción atómica 
Los espectros están constituidos por picos estrechos y bien definidos que se originan por transiciones entre los 
diferentes niveles de energía electrónica, estas líneas de resonancia tienen origen en el estado basal y un destino en 
diferentes estados excitados. Es el proceso que ocurre cuando átomos de un elemento en estado fundamental absorben 
energía radiante a una longitud de onda específica. La cantidad de radiación absorbida aumenta al incrementar el 
número de átomos del elemento presentes en el “camino óptico”, esto permite utilizar a la técnica con fines cuantitativos. 
Este método puede detectar cantidades tan bajas como picogramos. 
Fundamento de…. RESPUESTA: espectroscopia de resonancia magnética nuclear 
Es una técnica de investigación que, con una preparación de muestra mínima, ofrece la posibilidad de obtener 
información cuantitativa y estructural de cualquier molécula. La espectroscopía aborda el estudio de la interacción 
entre la materia (átomos o moléculas) con la radiación electromagnética. Es una técnica espectroscópica que estudia tal 
interacción basándose en las propiedades magnéticas intrínsecas de los núcleos atómicos. 
Estudia la absorción y emisión de radiación electromagnética por los núcleos de ciertos átomos bajo la influencia de un 
campo magnético. Los núcleos atómicos son entidades cargadas que poseen un movimiento de espín y como 
consecuencia, originan un campo magnético, dependiente de la dotación nuclear, que se puede caracterizar por un 
vector momento magnético cuya dirección es aleatoria. Se trata pues de un sistema con niveles de energía 
degenerados independientes de la orientación del vector. Al aplicar un campo magnético con cierta intensidad en una 
determinada dirección, la interacción con el núcleo en movimiento (espín) da lugar a que el momento magnético efectúe 
un movimiento de precesión. 
Instrumentación de…. RESPUESTA: espectroscopia de resonancia magnética nuclear 
Consta de tres bobinas que se colocan perpendicularmente entre sí alrededor de la muestra. Una es la bobina 
generadora del campo magnético. Otra bobina, perpendicular a la anterior, es la bobina emisora, que irradia a la 
muestra con una frecuencia del orden de las ondas de radio (también llamadas radiofrecuencias). Y una tercera bobina, 
la bobina receptora, perpendicular a las dos anteriores, que registra señales de radiofrecuencia y es capaz de detectar 
cuándo la muestra está absorbiendo. Conectado a la bobina receptora hay un amplificador, encargado de acrecentar la 
señal para una mejor detección, que se encuentra a su vez conectado a un registrador, que usualmente es una 
computadora que almacena los datos. 
Clasificación de…. RESPUESTA: cromatografía de adsorción 
La fase estacionaria es un sólido en el que los componentes de la muestra son adsorbidos. La fase móvil puede ser un 
líquido (cromatografía líquido-sólido) o un gas (cromatografía gas-sólido); los componentes se distribuyen entre dos 
fases a través de la combinación de los procesos de adsorción y desorción. La cromatografía de capa fina (TLC) es un 
ejemplo especial de este tipo de cromatografía en la cual la fase estacionaria es un plano, en la forma de un soporte 
sólido en un plato inerte. 
Clasificación de…. RESPUESTA: cromatografía de partición 
La fase estacionaria de este tipo de cromatografía es un líquido soportado en un sólido inerte. Otra vez, la fase móvil 
puede ser un líquido (cromatografía líquido-líquido) o un gas (cromatografía gas-líquido, GLC). La cromatografía en 
papel es un tipo de esta cromatografía en la cual la fase estacionaria es una capa de agua adsorbida en una hoja de 
papel. 
Clasificación de…. RESPUESTA: cromatografía de intercambio iónico 
La separación de este tipo de cromatografía depende de la adsorción reversible de moléculas de soluto cargadas, a una 
resina con grupos iónicos de carga opuesta. El mecanismo de separación se basa en un equilibrio de cambio de iones. 
Muchos de estos experimentos se llevan a cabo en cinco etapas. 
Método de…. RESPUESTA: cromatografía de intercambio iónico 
La primera etapa es un equilibrio en el cual el sistema se encuentra en las condiciones apropiadas de pH y fuerza 
iónica, lo que permitirá la unión de las moléculas de soluto. En este estado inicial, los grupos que se cambiarán están 
asociados con sus respectivos contra-iones (usualmente aniones o cationes simples, como cloruro o sodio). En una 
segunda etapa se encuentra la aplicación de la muestra y su adsorción, en la cual las moléculas del soluto llevan a cabo 
el apropiado desplazamiento de carga de los contra-iones y se unen reversiblemente al gel. Las substancias que no se 
unen son eluídas de la cama usando el buffer inicial. En la tercera etapa, se lleva a cabo la desorción de la muestra 
cambiando las condiciones de elusión, al desfavorecer la formación del enlace iónico de las moléculas de la muestra y la 
cama. Esto se logra aumentando la fuerza iónica del buffer de elusión o cambiando su pH. En la cuarta y quinta etapas 
corresponden a la remoción de sustancia no eluídas bajo las condiciones experimentales previas y regresar al equilibrio 
de las condiciones iniciales para la siguiente purificación. 
Clasificación de…. RESPUESTA: cromatografía de exclusión 
Con esta técnica se puede separar moléculas solvatadas de acuerdo a su tamaño o magnitud y a su habilidad de 
penetrar los poros de una estructura tamiz, que corresponde a la fase estacionaria. Esta cromatografía se usa 
extensivamente para las separaciones preparativas de macromoléculas de origen biológico, así como para la 
purificación de polímeros orgánicos sintéticos. 
Clasificación de…. RESPUESTA: cromatografía de afinidad 
Este tipo de cromatografía utiliza interacciones altamente específicas entre un tipo de moléculas de soluto y una 
segunda molécula unida covalentemente (inmovilizada) a la fase estacionaria. Por ejemplo, la molécula inmovilizada 
podría ser un anticuerpo específico para una proteína particular. Cuando una mezcla cruda que contiene miles de 
proteínas se pasa a través de una columna, sólo una proteína reacciona con el anticuerpo que está unido a la columna. 
Después de lavar todos los otros solutos de la columna, la proteína deseada es desplazada del anticuerpo cambiando el 
pH, la fuerza iónica o la polaridad. 
Fundamento de…. RESPUESTA: cromatografía 
Las interacciones entre las moléculas del ligando y blanco pueden ser el resultado de interacciones hidrofóbicas o 
interacciones electrostáticas, fuerzas de van der Waals y/o puentes de hidrógeno. La purificación por afinidad requiere 
un ligando bioespecífico que puede ser unido covalentemente a una matriz cromatográfica. El ligando acoplado debe 
retener su afinidad específica de enlace hacia las moléculas blanco, y después de lavar el material no unido, la unión 
entre la molécula blanco y el ligando debe ser reversible y permitir que las moléculas blanco sean removidas en forma 
activa. Cualquier componente puede ser usado como un ligando parapurificar a su compañero respectivo. 
Concepto de…. RESPUESTA: cromatografía 
La característica que distingue a este método físico y químico de separación de los demás, es que se ponen en contacto 
dos fases mutuamente inmiscibles. La fase estacionaria y la móvil. Una muestra que se introduce en la fase móvil es 
transportada a lo largo de la columna que contiene una fase estacionaria distribuida. Las especies de la muestra 
experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la fase móvil y la fase estacionaria. Cuando ambas fases se han 
escogido en forma apropiada los componentes de la muestra se separan gradualmente en bandas en la fase móvil. Al 
final del proceso los componentes separados emergen en orden creciente de interacción con la fase estacionaria. El 
componente menos retardado emerge primero, el retenido más fuertemente eluye al último. El reparto entre las fases 
aprovecha las diferencias entre las propiedades físicas y/o químicas de los componentes de la muestra. 
Concepto de…. RESPUESTA: espectroscopía o espectrometría 
Surgió con el estudio de la interacción entre la radiación y la materia como función de la longitud de onda (λ). En un 
principio se refería al uso de la luz visible dispersada según su longitud de onda, por ejemplo por un prisma. Más tarde 
el concepto se amplió enormemente para comprender cualquier medida en función de la longitud de onda o de la 
frecuencia. Por tanto, puede referirse a interacciones con partículas de radiación o a una respuesta a un campo 
alternante o frecuencia variante (ν). Una extensión adicional del alcance de la definición añadió la energía (E) como 
variable, al establecerse la relación E=hν para los fotones. Como respuesta se genera un gráfico específico en el 
análisis de la muestra como función de la longitud de onda o la frecuencia. 
Fundamento de…. RESPUESTA: cromatografía en papel 
Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos. La fase estacionaria está constituida 
simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la 
disolución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. 
La separación se realiza en función de la afinidad de los solutos con las dos fases, las más solubles en agua se 
quedarán cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más solubles en el disolvente 
llegarán más lejos. 
Fundamento de…. RESPUESTA: cromatografía en capa fina 
Se basa en la preparación de una capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. 
Los requisitos son un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro 
para aplicar la capa de adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Las placas preparadas 
se activan con temperatura en una estufa. La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase 
estacionaria será un componente polar y el eluyente será menos polar que la fase estacionaria, de forma que los 
componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares. 
Fundamento de…. RESPUESTA: cromatografía en permeación de gel 
Consiste en una columna cromatográfica empacada de tal manera que las partículas de dicho empacamiento tienen 
redes de poros con el fin de que las moléculas de soluto sean retenidas o excluidas basándose en su forma y tamaño y 
no en el peso molecular. Bajo este entendido, las moléculas de mayor tamaño no caben dentro de los poros y son 
arrastrados alrededor de la fase estacionaria, por lo que son excluidas y eluyen en el volumen de “cama de vacío” de la 
fase móvil. Por el contrario, las partículas de menor tamaño eluyen hasta el final porque tiene más espacio de columna 
que recorrer debido a un fenómeno de difusión hacía los poros que tienen accesibles. Las moléculas de tamaños 
intermedios tardan diferentes tiempos en eluir, debido a la cantidad de poros por los que puedan pasar. 
Fundamento de…. RESPUESTA: cromatografía covalente 
Es un sistema especial de cromatografía, el cual es altamente selectiva la fase estacionaria, en el que se forma un 
enlace fuerte reversible entre la fase estacionaria y la biomolécula a separar, las separaciones se basan en el 
acoplamiento “llave-cerradura” típico de la biología molecular; por lo cual es muy utilizado en esta área, además 
de tener un pequeño inconveniente de que al ser tan selectiva, solo se puede separar un solo analito. 
Fundamento de…. RESPUESTA: cromatografía de gases 
Esta técnica permite el análisis rápido y exacto de fluidos y vapores líquidos; permite identificar los componentes 
individuales de mezclas volátiles de puntos de ebullición de hasta 350-400°C. El método tiene las ventajas de ser 
sensible, rápido y sencillo, y suministra información cuantitativa exacta con cantidades muy pequeñas de muestra. La 
muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una 
fase móvil de un gas inerte a diferencia de los otros tipo de cromatografía, la fase móvil no interaccionan con la 
moléculas del analito; su única función es la de transreversibportar el analito a través de la columna. Existen dos tipos 
de cromatografía de este tipo, la sólida y la líquida. Tiene gran aplicación en todos los campos de la ciencia. 
Instrumentación de…. RESPUESTA: cromatografía de gases 
Gas portador: Entre los gases portadores deben ser químicamente inertes, se encuentran el helio, nitrógeno y el 
hidrogeno, con el suministro de gas se encuentran asociados los reguladores de presión, manómetros y medidores de 
caudal. Sistema de inyección de muestra: La eficacia de la columna requiere que la muestra sea de un tamaño 
adecuado y que sea introducida como un <tapón> de vapor. El método más común de inyección de muestra implica el 
uso de una micro jeringa para inyectar una muestra liquida o gaseosa a través de un diafragma o <septum> de goma de 
silicona en una cámara de vaporización instantánea situada en la cabeza de la columna. Configuración de la columna y 
del horno para la columna: En cromatografía de gases se usan dos tipos generales de columnas, las rellenas, y las 
abiertas o capilares. Las columnas cromatográficas varían desde menos de 2 hasta 50m de longitud o más. Están 
construidas con acero inoxidable, vidrio, sílice fundida o teflón. Sistemas de detección: El detector ideal para 
cromatografía de gases tiene las siguientes características. 1.- adecuada sensibilidad 2.- buena estabilidad y 
reproducibilidad 3.- respuesta lineal para los solutos 4.-intervalo amplio de temperaturas de trabajo 5.- tiempos de 
respuesta cortos 6.-alta fiabilidad y manejo sencillo 7.-respuesta semejante para todos los solutos o respuesta selectiva 
y altamente predecible 8.- no destructivo de la muestra. 
Fundamento de…. RESPUESTA: HPLC 
La cromatografía es un método físico de separación, basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre 
dos fases inmiscibles, una estacionaria y otra móvil. En este tipo de cromatografía, la fase móvil es un líquido que fluye 
a través de una columna que contiene a la fase estacionaria. Se lleva a cabo en una columna de vidrio. Después se 
coloca la muestra por la parte superior y se hace fluir la fase móvil a través de la columna por efecto de la gravedad. 
Para aumentar la eficiencia en las separaciones de este tipo de cromatografía el tamaño de las partículas de fase fija se 
disminuye hasta los micrones, usando altas presiones para lograr que la fase móvil pueda fluir. 
Instrumentación de…. RESPUESTA: HPLC 
La fase móvil puede ser un disolvente puro o una mezcla de disolventes; esto implica un 99% o más de pureza para 
evitar contaminantes que puedan interferir en la elución de la muestra o bien que contengan algunas pequeñas 
partículas que puedan tapar la columna; por lo que es necesario filtrarlos antes de que entrena la columna. Cuando se 
trata de una mezcla de disolventes; se puede o no programar la bomba para que tome las cantidades adecuadas de 
cada disolvente. Cuando durante toda la separación se usa el mismo disolvente, se denomina isocrática. La bomba 
envía el disolvente hacia la válvula inyectora que es una válvula de seis vías que permite introducir al disolvente, la 
muestra contenida en el loop de volumen calibrado. Luego de que se produzca la separación en la columna, los 
componentes de la mezcla pasan al detector. El cual da una señal eléctrica proporcional a la cantidad de materia; esta 
señal es enviada al registrador que a su vez da un cromatograma de intensidad en función del tiempo; en el cual, lo 
ideal es obtener picos gaussianos los cuales corresponden cada uno a un componente diferente de la muestra. 
 
Nota: Algunas de las Técnicas Instrumentales pueden estar presentes en más de una ocasión en los enunciados de esta 
guía, porque se estará mencionando su Fundamento y también su Concepto o, incluso su Metodología como también su 
Instrumentación, etc.