Reporte 7 - equipo 5

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UNIVERSIDAD DE SONORA
DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA SALUD
CAMPUS CAJEME
LICENCIATURA EN MEDICINA
Laboratorio Bioquímica Médica
Martes 9:00- 11:00
Práctica #7
“DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SUERO”
Equipo 5
Padilla Benitez DIego Joel
Parra Cota Daniel
Ramirez Encinas Eduardo
17 de marzo del 2021 cd. Obregon Sonora
Antecedentes
En nuestro país no existen estudios de este tipo que hayan sido concluidos sobre
determinación de colesterol total en individuos como parte de un programa de medicina
preventiva en los diferentes grupos poblacionales considerados sanos. La colesterolemia y
la incidencia de EC son altas en las poblaciones que consumen dietas ricas en grasas y
colesterol. Por ejemplo, el importante estudio sobre siete países iniciado en las década del
50, comprobó que el consumo de grasas saturadas, la colesterolemia y mortalidad por EC
eran mayores en Estados Unidos y ciertas regiones de Europa .El estudio cardiológico de
Framinhan, iniciado en 1948, demostró que la hipercolesterolemia aumenta
progresivamente el riesgo de Enfermedad Coronaria (EC). Los datos del Estudio Framinhan
demuestra que el riesgo a los 5 años de un episodio de EC para ambos sexos es de 3 a 5
veces mayor, según la edad, con colesterol total de 200 mg/dl.
El ensayo de intervención sobre múltiples factores de riesgo (MRFIT), demostró que la
mortalidad fue 4 veces mayor con colesterol total 264 mg/dl que la más baja medición de
colesterol total de 167mg/dl.Las diferencias entre países persiste. En 1992 según datos de
la Organización Mundial de la Salud y la Asociación Estadounidense de Cardiología (AHA),
publicados en Heart and Stroke Facts, una publicación de la AHA sobre la mortalidad por
enfermedad cardiovascular de cada 100,000 individuos era de 312 para hombres y 145 para
mujeres en España; de 651 para hombres y 302 para mujeres en Argentina y de 244 para
hombres y 206 para mujeres en México.206 para mujeres en México. Para analizar la
relación entre lípidos y riesgos cardiovasculares en diferentes países sobre todo en los de
economías en rápida expansión hay que considerar los cambios de hábito de vida
(sedentarismo, estrés, tabaquismo,etc.) , así como el abandono de las dietas. 12 3.1 EL
El colesterol es una de las biomoléculas más estudiadas. Muchos de los más famosos
científicos de este siglo han estudiado su biosíntesis. El colesterol endógeno deriva del
acetato a través de una etapa intermedia limitante de la velocidad de síntesis (en la que la
3-hidroxi-3-metil-glutaril coenzima A reductasa convierte a la HMG-CoA en ácido
mevalónico). El hígado y el intestino delgado son las fuentes principales de colesterol
lipoprotéico endógeno. La dieta puede aportar una cantidad variable de colesterol. En
personas normales,ese colesterol determina una disminución en la biosíntesis endógena.
En general, el organismo puede fabricar todo el colesterol que necesita, pero en la mayoría
de los individuos entre el 20% y el 40% del colesterol proviene de los alimentos. Tanto el
colesterol endógeno como el dietético intervienen en varios procesos importantes:
biosíntesis de la membrana celular, producción de hormonas asteroideas y síntesis de
ácidos biliares. Las lipoproteínas plasmáticas son complejos de lípidos y de proteínas que
circulan en el plasma sanguíneo. Mediante el ensamble en las lipoproteínas los lípidos
pueden ser transportados a través del plasma, un medio fundamentalmente acuoso. Cada
lipoproteína es una esfera con un núcleo formado por diferentes cantidades de triglicéridos y
ésteres de colesterol, rodeado de una monocapa de colesterol no esterificado (o “libre”),
fosfolípidos y proteínas especializadas llamadas apolipoproteínas. Las lipoproteínas se
clasifican de acuerdo con su densidad y con su movilidad electroforética . Las lipoproteinas
plasmáticas más importantes, en orden ascendente de densidad y descendente de tamaño,
son: quilomicrones, lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), lipoproteínas de densidad
intermedia (IDL), lipoproteína de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta densidad
(HDL).
Resumen del video
La prueba de colesterol es muy usado para detectar dislipidemias que son trastornos en los
lípidos en sangres, caracterizados por un aumento de los niveles de colesterol o también
llamado hipercolesterolemia, el valor normal que esperamos en la prueba es de menos de
200 miligramos sobre decilitro. Para realizar la prueba se usa una máquina llamada
espectrofotómetro, reactivo y estándar para cuantificación de colesterol, pipetas
automáticas, una de 1000 microlitros y otra de 10, tambíen se necesitan puntas azules y
amarillas para las micropipetas, gradilla, tubos de ensayo y una muestra del suero del
paciente.
Primero se marcan 3 tubos de ensayo como: Blanco, estándar y muestra. Al tubo de
muestra se le agregan 10 microlitros de suero del paciente, al tubo estándar se le agregan
10 microlitros de reactivo estándar, posteriormente se le agregan 1000 microlitros de
reactivo de colesterol a cada tubo, se agitan los tubos y esperamos 10 minutos a 37 grados
celsius para ver la reacción. Se calibra el espectrofotómetro y se escoge una longitud de
onda de 535 nanómetros que es la usada para las pruebas de colesterol, pasados los 10
minutos se realiza la lectura en el equipo, el primero es el blanco para que el equipo tenga
el valor 0, el siguiente en leer es el tubo estándar que se estabiliza en 0.176, por último se
lee el tubo muestra que nos da un valor de 0.125. Ahora se realizan los cálculos con la
fórmula de: Absorbancia de la muestra, sobre absorbancia del estándar, y esto multiplicarlo
por 200 que es el valor normal de colesterol, en nuestro caso nos da un resultado de 142
miligramos sobre decilitro, por lo que está en un rango óptimo.
El fundamento del método es que el colesterol es un compuesto muy importante en los
tejidos ya que forma parte de las membranas celulares y es un precursor de varias
biomoléculas esenciales para la vida como las hormonas, esteroides y ácidos biliares. El
colesterol viene de la dieta y de la biosíntesis de las células, el exceso de esta molécula se
desecha o se excreta a través de descamaciones en la piel e intestinos y también por
secreciones gástricas pancreáticas e intestinales, apareciendo en el tracto gastrointestinal y
la orina. Los niveles óptimos de colesterol en sangre dependen de un equilibrio entre la
ingesta y la síntesis y de la excreción de esta biomolécula. Si el equilibrio se rompe puede
presentarse un aumento del nivel óptimo y en consecuencia puede haber problemas como
la arteriosclerosis que finalmente van a generar accidentes cardiocirculatorios como infarto
al miocardio o hemorragias cerebrales. El colesterol en sangre puede ser de dos tipos,
esterificado con ácidos grasos y libre o sin esterificar, la suma de estos dos tipos se llama
colesterol total y la intensidad del color se determina en el espectrofotómetro o colorímetro a
una longitud de onda de 540 nanómetros. (Padilla Benítez)
La prueba de colesterol es utilizada para averiguar dislipidemias, los valores normales son
menores de 200 mg/dl. para la prueba se necesita un espectrofotómetro, reactivo y estándar
para cuantificación de colesterol, pipetas automáticas de mil y diez microlitros, pipetas
amarillas y azules, gradillas con tubo de ensayo y suero de paciente.
Primero se marca el tubo de ensayo con “B” (blanco) el segundo con “ST” (estándar) y el
tercero se marca con una “M” (muestra). tomamos 10 microlitros de la muestra y lo
agregamos en el tubo “M”, luego tomamos el reactivo estándar para tomar 10 microlitros
para agregarlos al tubo “ST”, de aquí agregaremos mil microlitos de reactivo de colesterol a
los 3 tubos, esperamos 10 minutos a 37 grados celsius. luego se usará el
espectrofotómetro, (se calibra a 540 nanómetros para pruebas de colesterol), para después
introducir el línea base (el tubo “B”), pasados los 10 minutos realizamos la lectura en el
equipo, para que el equipo calibre y de “0”, se descarta y pasamos a leer el tubo estándar,
en estaprueba se estabilizó en 0.176, y ya por último leeremos el tubo muestra, que dio
0.125.
Ya teniendo los valores procederemos a comparar y a hacer cálculos, para sacar el
colesterol hay que dividir ABS(muestra)/ABS((ST) x 200mg/dl. en nuestro caso
reemplazando los datos es .125/.176 x 200 = “142 mg/dl” teniendo un rango óptimo.
el colesterol es un compuesto fundamental en los tejidos, forma parte de las membranas
celulares (esto hace que sean impermeables y tengan un mejor uso), es un precursor
inmediato de varias moléculas esenciales para la vida, así como las hormonas, ácidos
biliares (este nos ayuda a digerir grasas en el intestino), pero el exceso es malo (como todo
en exceso es malo). Los niveles óptimos dependen del equilibrio en ingesta, síntesis y
excreción de esta molécula, si el equilibrio se rompe puede producirse un aumento de nivel
y en consecuencia problemas como aterosclerosis (endurecimiento de las arterias) que van
a generar problemas cardíacos como infarto, angina de pecho o hemorragias cerebrales.
el colesterol en sangre puede existir de dos maneras, una es esterificado con ácidos grasos
y la otra libre, la suma de estas dos se denomina “colesterol total”. La intensidad de color se
determina con el espectofotometro o colorimetro a una longitud de onda de 540
nanometros. (Parra Cota Daniel)
La base de este método es que el colesterol es un compuesto muy importante en los tejidos
porque forma parte de la membrana celular y es precursor de varias moléculas (como hormonas,
esteroides y ácidos biliares) que son esenciales en la vida. El colesterol proviene de la dieta y la
biosíntesis celular, el exceso de esta molécula se desecha o excreta por descamación en la piel e
intestinos, así como por las secreciones gástricas pancreáticas e intestinales en el tracto
gastrointestinal y la orina. El nivel óptimo de colesterol en sangre depende del equilibrio entre la
ingesta, la síntesis y la excreción de la biomolécula. Si se interrumpe el equilibrio, el nivel óptimo
puede elevarse, por lo que pueden ocurrir problemas como la arteriosclerosis, que
eventualmente conducen a accidentes circulatorios cardíacos como infarto cardiovascular o
hemorragia cerebral
La prueba de colesterol se usa ampliamente para detectar dislipidemia. La dislipidemia es un
lípido anormal en la sangre, que se caracteriza por niveles elevados de colesterol o también
conocida como hipercolesterolemia. Esperamos que el valor normal en la prueba sea menor de
200 mg por decilitro. Para la prueba se utilizó una máquina denominada espectrofotómetro,
reactivos y estándares para la cuantificación de colesterol, pipetas automáticas, micropipetas,
racks, tubos de ensayo y uno de 1.000 microlitros, además de 10 puntas azules y amarillas.
Muestra de suero del paciente. Los primeros tres tubos de ensayo están etiquetados: blanco,
estándar y muestra. Agregue 10 microlitros de suero del paciente al tubo de muestra, agregue 10
microlitros de reactivo estándar al tubo estándar y luego agregue 1000 microlitros de reactivo de
colesterol a cada tubo, agitar el tubo y espere 10 minutos a 37 grados Celsius. reacción. El
espectrofotómetro ha sido calibrado y seleccionado la longitud de onda de 535 nm para la
prueba de colesterol. Después de leer en el dispositivo durante 10 minutos, el primero está en
blanco, por lo que el valor del dispositivo es 0, el siguiente es el tubo estándar estabilizado en
0,176 y finalmente se lee la muestra Tuvo, el valor obtenido es 0,125. Ahora, puede usar la
siguiente fórmula para calcular: la absorbancia de la muestra excede la absorbancia del
estándar. (Ramirez Encinas Eduardo)
Actividad complementaria
1.- Explica las diferentes clases de lipoproteínas así como su origen y su función
Las lipoproteínas plasmáticas constituyen un sistema polidisperso y heterogéneo de
partículas de morfología casi esférica, que tienen un núcleo o core hidrófobo formado por
lípidos no polares, y por una capa superficial hidrófila que contiene colesterol no
esterificado, fosfolípidos (FL) y unas proteínas específicas denominadas apoproteínas
(Apo). Actualmente son conocidas las Apo: A, B, C, D, E, F y G. Algunas de estas presentan
isoformas (que se indican con números romanos) y se diferencian por su contenido
glucídico. Las partículas lipoproteicas se diferencian entre sí por la distinta proporción de
colesterol, TAG y FL que contienen, así como por las distintas apoproteínas integradas en
su estructura. (Brandan, 2006)
en la actualidad, las lipoproteínas plasmáticas se clasifican en:
Quilomicrones (Q): que sólo se encuentran en el plasma normal después de una comida
grasa. Se sintetizan en el intestino. Son las lipoproteínas más grandes, con un diámetro
superior a los 100 nm. El 90 por ciento de su contenido son triglicéridos dietarios, el resto
colesterol y fosfolípidos. El contenido apoproteico del quilomicrón naciente o recién
sintetizado consiste en apo B-48, A-I, A-II, A-IV y A-V. Ya en la circulación, el quilomicrón
recibe apo C-I, C-II, C-III y E de las HDL, y pierde parte de las apo A. Sus funciones son:
Activa la LCAT, Estimula el transporte inverso del colesterol, Actúa en SNC como
anorexígeno y Facilita la formación y secreción del QM
Lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL, del inglés very low density lipoproteins).
Son sintetizadas y secretadas por el hígado. Tienen un diámetro variable de 30 a 100 nm.
Por ultracentrifugación, pueden separarse en el rango de densidades de 0,95 a 1,006 g/ml y
en la electroforesis tienen movilidad de pre-beta o alfa-2-globulinas. Contiene 60 % de
triglicéridos, 20 % de colesterol y el resto son fosfolípidos. Sus constituyentes apoproteicos
son la apo B100, A-V, C-I, C-II, C-III y E. Cabe destacar que existe un solo mol de apo B100
por mol de VLDL. Tiene como función transportar los triglicéridos sintetizados en el
hígado a partir de los azúcares, hasta el lugar de almacenamiento del tejido
adiposo.
Lipoproteínas de densidad intermedia (IDL, intermediate density lipoproteins).
Son el producto del catabolismo parcial de las VLDL. Estas lipoproteínas son más pequeñas
que sus precursoras (25 a 30 nm), tienen una densidad comprendida entre 1,006 y 1,019
g/ml y su movilidad electroforética coincide con las beta globulinas. Las IDL tienen
aproximadamente igual proporción de colesterol y triglicéridos. Su contenido apoproteico
consiste en apo B100 y E. Son originadas en hígado y su función es intervenir en la
estructura y unirse al receptor B:E.
Lipoproteínas de baja densidad (LDL, low density lipoproteins).
La degradación final de la IDL en el plasma, origina una lipoproteína más pequeña
(aproximadamente 20 nm), muy rica en colesterol esterificado, con un contenido
apoproteico exclusivo de apo B100 proveniente de la IDL que es su precursora. Estas
lipoproteínas flotan en un rango de densidades de 1,019 a 1,063 g/ml y poseen una
movilidad electroforética de beta globulinas. Las LDL distribuyen colesterol a los tejidos que
lo requieren, para la reposición de sus componentes de membranas celulares o para la
síntesis de hormonas esteroideas, y, en condiciones normales, conducen parte del exceso
de colesterol de regreso al hígado. Cabe destacar la participación de esta lipoproteína en la
regulación de la biosíntesis del colesterol a través de su unión a receptores específicos,
como se verá más adelante.
Lipoproteínas de alta densidad (HDL, high density lipoproteins).
Tienen diferentes orígenes: pueden provenir de la síntesis hepática, intestinal o resultar del
catabolismo de las lipoproteínas ricas en triglicéridos (Quilomicrones y/o VLDL) en la
circulación plasmática.
Por ultracentrifugación, se pueden separar en el rango de densidades de 1,063 a 1,210
g/ml. Migran con movilidad de alfa-1-globulinas en la electroforesis y tienen un diámetro de
8 a 12 nm. Prácticamente, el 50 % de la partícula son apoproteínas, las principales son A-I y
A-II, aunque también pueden transportar apo A-V, C-I, C-II, C-III y algunas HDL también apo
E. Alrededor del 20 % es colesterol, casi el 60% son fosfolípidos y el resto son escasos
triglicéridos. La función más conocida de las HDL es vehiculizar el colesterol, desde los
tejidos periféricos hacia el hígado, para su reciclaje o catabolismo de ácidos biliares. Este
proceso se denomina transporte inverso del colesterol. (Brites, 2010)
2.- Explica cuáles son los lípidos séricos.
Los lípidos séricos (denominación que engloba el colesterol sérico y sus fracciones, y los
triglicéridos) han sido objeto de atención constante desde que en los 1980s apareció el
Informe Framingham que vinculaba la morbimortalidad por infarto del miocardio con cifras
elevadas del colesterol total sérico.
Colesterol sérico: El colesterol es una sustancia cerosa que se encuentra en la sangre. El
cuerpo necesita colesterol para formar células sanas, pero tener altos niveles de colesterol
puede aumentar el riesgo de sufrir una enfermedad cardíaca. Con el colesterol alto, es
posible que se formen depósitos grasos en los vasos sanguíneos.
Triglicéridos: Los triglicéridos son un tipo de grasa (lípidos) que se encuentran en la sangre.
Los triglicéridos se almacenan en las células grasas, para que, más tarde, las hormonas los
liberen para obtener energía entre las comidas. Si una persona ingiere regularmente más
calorías de las que quema, en particular de alimentos ricos en carbohidratos, puede tener
triglicéridos altos (hipertrigliceridemia).Cruz Gilarte (2018).
CONCLUSIÓN
Con esta práctica sobre la determinación de colesterol en suero, reforzamos lo aprendido en
la materia de bioquímica donde se nos enseñó lo que es el colesterol, su estructura y
demás, sabemos que niveles altos de colesterol en sangre son bastante malos, estos
excesos pueden provocar problemas como la arteriosclerosis y ésta a su vez provocar
hemorragias cerebrales e infartos al miocardio, es por esto que hay que detectar estos
niveles anormales a tiempo para tratarlos y evitar todos los daños posibles. Este diagnóstico
se va a dar con el procedimiento que se realizó en esta ocasión en laboratorio virtual, por
medio de la determinación del colesterol en suero, utilizando un espectrofotómetro con una
longitud de onda de 535 nanómetros, es importante saber configurar esta máquina para no
tener ningún tipo de error en los resultados. Después de que se obtienen los resultados del
espectrofotómetro, somos nosotros quienes debemos calcular el colesterol presente por
medio de la fórmula: Absorbancia de la muestra, entre absorbancia estándar, y esto
multiplicarlo por el valor normal de colesterol en sangre que es de 200 miligramos por
decilitro, es muy importante rectificar el resultado, ver que todos los números estén bien y
que los cálculos se hayan realizado de manera correcta, para no diagnosticar mal a ningún
paciente. (Padilla Benítez).
Con esta práctica de laboratorio virtual, se adquirieron los conocimientos de como sacar el
valor del colesterol, que como vimos se ocupaban tres tubos de ensayo, en el cual se hacía
una mezcla y se ocupaba de un equipo al que se le denomina “espectrofotómetro” el cual
primero se tiene que utilizar primero el tubo base para “calibrar” y que de cero, para
después ya poder usar la muestra real, los niveles de colesterol son óptimos debajo de
200mg/dl, esto nos dará resultados para que nosotros podamos calcular cuánto colesterol
en sangre tiene la persona. Es importante saber este dato, ya que si es importante tener el
colesterol en nuestro organismo porque funciona con las membranas celulares, entre otras
funciones importantes que tiene, pero un exceso puede provocar enfermedades como
endurecimiento de las arterias principalmente, y esto va a producir otros problemas como
infarto (falta de oxígeno en órganos o tejido), hemorragias, entre otras cosas. por otro lado
vimos que hay varios tipos de lipoproteínas, mencionare la que más se me hace interesante
que es la lipoproteína de alta densidad “HDL” que transportan el colesterol desde los tejidos
del cuerpo al hígado, este órgano es de vital importancia ya que está implicado en la
desintoxicación de fármacos, el metabolismo de los carbohidratos, todo lo que tenga que
ver referente a glucosa (formación, degradación, etc). Y con esto concluimos que es
interactivo ver videos para tener una “experiencia virtual”. (Parra Cota Daniel)
A través de esta práctica de laboratorio virtual logramos el conocimiento de cómo obtener el
valor de colesterol, como podemos ver, tomó tres probetas, hizo la mezcla en ellas y usó un
equipo llamado “espectrofotómetro”. Primero usa el tubo base "calibración", y luego "calibra"
desde cero, y luego puedes usar la muestra real, el nivel de colesterol está preferiblemente por
debajo de 200 mg / dl, lo que nos proporcionará los resultados para que podamos calcular el
colesterol contenido en él. La sangre que posee la persona. Es importante conocer esta
información, porque el colesterol tiene un papel importante en el organismo, porque el colesterol
trabaja con las membranas celulares, lo cual es muy importante en el cuerpo humano, pero
demasiado colesterol puede provocar enfermedades como la arteriosclerosis.
El método consiste en utilizar un espectrofotómetro con una longitud de onda de 535
nanómetros para determinar el colesterol en el suero. Es importante saber configurar esta
máquina para que los resultados no estén libres de errores. Una vez obtenido el resultado del
espectrofotómetro, debemos utilizar la siguiente fórmula para calcular el colesterol existente: la
absorbancia de la muestra, que se encuentra entre la absorbancia estándar, y luego multiplicar
por el valor normal de colesterol en sangre, que es de 200 miligramos decilitros. El resultado de
la calibración es muy importante. Asegúrese de que todos los números sean correctos y que los
cálculos sean correctos para evitar un diagnóstico erróneo de los pacientes. (Ramirez Encinas
Eduardo)
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Brandan, N., Llanos, C., Barrios, B. I., Escalante Marassi, A. P., & Ruíz Díaz, D. A. (2006).
Cátedra de bioquímica. Facultad de Medicina. UNNE Aguirre, María Victoria Profesora
Adjunta. Cátedra de Bioquímica. Facultad de Medicina.
Brites, F. D., Rosso, L. A. G., Meroño, T., & Menafra, M.(2010) Lípidos y Lipoproteínas
Características, Fisiología y Acciones Biológicas.
Cruz Gilarte. (2018). SOBRE LAS ASOCIACIONES ENTRE LOS LÍPIDOS SÉRICOS Y EL
RIESGO CARDIOVASCULAR. Medigraphic.
https://www.medigraphic.com/pdfs/revcubalnut/can-2018/can181k.pdf
Chacón O.. (2008). DETERMINACIÒN DE NIVELES DE COLESTEROL TOTAL EN
INDIVIDUOS APARENTEMENTE SANOS PERTENECIENTES A UN SEGMENTO DE LA
POBLACIÒN GUATEMALTECA, RESIDENTES EN LA CIUDAD CAPITAL.. 24 de enero del
2021, de UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS
QUÍMICAS Y FARMACIA Sitio web: http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_2753.pdf
https://www.medigraphic.com/pdfs/revcubalnut/can-2018/can181k.pdf
http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_2753.pdf