Practico_1_2020 - Valentina Tapia

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Medios de Cultivo y Siembra bacteriana 
Ayudantes: Constanza Hidalgo
	 Valentina Tapia
Profesora: Migdalia Arazo
Contenidos
Autoclave
Medios de cultivo
Siembra bacteriana
Introducción a la Microbiología - IWQ261
14-10-2020
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	Autoclave
14-10-2020
Introducción a la Microbiología - IWQ261
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¿Qué es?
Equipo utilizado para esterilizar.
Vapor de agua a alta presión y temperatura ("1,5 bar y 121,1 °C")
Tipos
Laboratorios
Industrial
Consideraciones
Agua Destilada.
Materiales compuestos 
Riesgo de explosión.
Capacitación acreditada por SEREMI de salud.
Operación entre 15 y 20 minutos
¿Qué es?
 
 
Tipos
Laboratorios
Industrial
Consideraciones
Agua Destilada.
Materiales compuestos 
Riesgo de explosión.
Capacitación acreditada por SEREMI de salud.
 
OPERACIÓN DEL AUTOCLAVE
14-10-2020
Introducción a la Microbiología - IWQ261
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PREPARACIÓN
Abastecer con agua hasta cubrir descanso del cesto, usando agua destilada o desmineralizada.
OPERACIÓN
Disponer el material a esterilizar en el cesto.
LIMPIEZA
La limpieza es extremadamente importante. La superficie brillante ayudara a prevenir la corrosión.
Se recomienda la utilización de productos apropiados para la limpieza, como jabón neutro, detergente neutro y paño humedecido. Después del enjuague, seque la cámara y pase un paño empapado con alcohol para la desinfección de la cámara.
Observar si el registro de descarga de la reserva está debidamente cerrado. 
Observe si el interruptor del automático se encuentra en la posición correcta Su ubicación, costado izquierdo del equipo.
Cerrar la tapa apretando los manípulos (1)
Presionar el interruptor (3) para ajustar temperatura y tiempo.
Presionar “Start/Stop” para empezar el ciclo.
Cuando termine el ciclo, presionar el interruptor (3) y abrir suavemente la válvula (2). ESPERAR HASTA QUE EL MANOMETRO DEL EQUIPO LLEGUE A CERO, PARA ABRIR.
La válvula (2), debe estar abierta hasta que se alcancen los 100-102 °C, luego cerrar.
Terminada la operación del equipo, abrir registro de descarga para eliminar agua utilizada.
Medios de cultivo
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Sustrato que permita el crecimiento, desarrollo y mantención de microorganismos.
Cualquier medio que otorgue nutrientes y agua.
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Medios de cultivo 
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Introducción a la Microbiología - IWQ261
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Medios de cultivo
Según su origen
Según sus nutrientes 
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Según su origen
Preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal.
Extractos de tejidos o infusiones, composición química inexacta.
Naturales
Medios de composición química definida cuali y cuantitativamente.
Resultados reproducibles.
Sintéticos
Sintéticos + factores de crecimiento (extracto orgánico complejo)
Semi-sintéticos
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Medios de cultivo
Según su origen
Según sus nutrientes 
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Según sus nutrientes 
MEDIOS BÁSICOS
Pobres en nutrientes, no satisfacen ninguna necesidad especial.
Base para otros medios
MEDIOS BÁSICOS MEJORADOS
Medio básico con una sustancia enriquecedora como suero, sangre o leche.
Aislamiento bacteriano
MEDIOS SELECTIVOS
Permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros.
Seleccionar y aislar a partir de poblaciones mixtas
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Según sus nutrientes 
MEDIOS ESPECÍFICOS
Capaces de satisfacer requerimientos de una especie determinada (sólo en ese medio pueden desarrollarse)
MEDIOS ENRIQUECIMIENTO
Potencian el crecimiento de un determinado microorganismo
Inhiben el crecimiento de microorganismos que no son de interés.
MEDIOS DIFERENCIALES
Permiten distinguir entre varios géneros y especies de microorganismos mesófilos.
Poseen un carbohidrato determinado y un indicador de pH
MEDIOS DIFERENCIALES
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Agar Citrato de Simmons
Medio sólido
Diferenciación de enterobacterias.
Citrato como única fuente de carbono y energía
Siembra en superficie
Indicador de pH → Azul de bromotimol (viraje a azul en medio alcalino)
BASE
MEDIOS DIFERENCIALES
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Agar Urea de Christensen
Medio sólido
Diferenciar bacterias que hidrolizan urea (Enterobacterias y Estafilococos), liberando amoníaco y 
Tripteína y glucosa como nutrientes.
Siembra en superficie
Indicador de pH → Rojo de fenol (viraje fucsia en medio alcalino)
BASE
MEDIOS DIFERENCIALES
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Agar TSI
Medio sólido
Diferenciar enterobacterias en base a fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y 
Extracto de carne y pluripeptona como nutrientes.
Tíosulfato de sodio para producción de 
Siembra en superficie y por picadura
Indicador de pH → Rojo de fenol (viraje a amarillo en medio ácido)
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Agar TSI
Fermentación de lactosa y sacarosa es anaerobia.
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MEDIOS DIFERENCIALES
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Agar LIA
Medio sólido
Diferenciar si el MO descarboxila, desamina o no altera la lisina. Además, evalúa la producción de y gas.
Nutrientes: glucosa y lisina.
Citrato de hierro y amonio, tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. 
Indicador de pH -> Púrpura de Bromocresol (Amarillo en pH ; Violeta en pH
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MEDIOS DIFERENCIALES
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Agar MIO
Medio semisólido
Se compone de: tripteina (precursor de indol), clorohidrato de L-Ornitina y otros.
Reacciona a:
Descarboxilación de L-Ornitina
Movilidad
Producción de Indol
Contiene el reactivo Kovac 
-> Rosado en presencia de indol
-> Amarillo sin presencia de indol
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Siembra bacteriana
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Siembra bacteriana
Introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, para iniciar un cultivo microbiano.
Tras esto, se debe incubar a una temperatura adecuada.
Puede realizarse en medio líquido, sólido o semi-sólido, usando asa en punta, loop, hisopo o pipeta estéril.
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Utensilios usados para siembra
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Micropipeta
Hisopos
Asa en punta
Asa loop
Rastrillo
Cultivo en medio líquido
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Realizado en tubos o matraces
Enturbiamiento, sedimento, formación de película o grumos.
Cultivo en medio sólido
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Tubos con agar inclinado
Siembra sobre la superficie del agar, desde el fondo hasta la parte superior.
Medio TSI*, LIA* , Citrato y Urea.
(*) En estos medios también se puede sembrar por picadura.
Cultivo en medio sólido
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Tubos sin inclinar
Siembra por picadura, en el centro del agar.
Medio MIO
Cultivo en medio sólido
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Siembra en superficie
0,1 𝑚𝐿 de muestra, usando micropipeta, y distribución.
Extrayendo directamente de una superficie o tejido, y esparciendo con hisopo.
Siembra incorporada
1 𝑚𝐿 de muestra sobre la placa vacía, luego se agregan 20 𝑚𝐿 de medio de cultivo fundido y calentado a 45°𝐶. Posterior agitación
Siembra en superficie
 
 
Siembra incorporada
 
Medios de Cultivo y Siembra bacteriana 
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