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Aplicaciones de la microscopía confocal in vivo en el manejo de la queratitis infecciosa en oftalmología veterinaria 1 | PRINCIPIOS BÁSICOS DE IN Eric C. Ledbetter MICROSCOPIA CONFOCAL VIVO Correo electrónico: ecl32@cornell.edu wileyonlinelibrary.com/journal/vop | 1 © 2021 Colegio Americano de Oftalmólogos Veterinarios DOI: 10.1111/vop.12928 Oftalmología Veterinaria. 2021;00:1–12. Recibido: 17 junio 2021 | Revisado: 6 de agosto de 2021 | Aceptado: 23 de agosto de 2021 REVISAR Departamento de Ciencias Clínicas, Universidad, Ithaca, Nueva York, EE. UU. Eric C. Ledbetter, Facultad de Medicina Veterinaria, Hospital para Animales, Universidad de Cornell, VMC Box 24, Ithaca, NY 148536401, EE. UU. Correspondencia PALABRAS CLAVE Facultad de Medicina Veterinaria, Cornell Esta revisión resume el conocimiento actual y las aplicaciones de IVCM en el manejo de la queratitis infecciosa en oftalmología veterinaria, incluido su uso en animales con queratitis bacteriana, fúngica, parasitaria y viral. La microscopía confocal in vivo (IVCM) es una técnica de imagen relativamente nueva en oftalmología clínica que permite el análisis morfológico y cuantitativo de la córnea viva a nivel celular. Los principios básicos de No se requiere la viabilidad de los microorganismos para su detección y no son necesarios procedimientos de ensayo de laboratorio de diagnóstico especializados. Muchos agentes infecciosos más grandes pueden identificarse directamente dentro de las lesiones corneales mediante IVCM, incluidos hongos y parásitos como Acanthamoeba spp. En otras situaciones, como la queratopatía cristalina infecciosa bacteriana, los sistemas biológicos asociados con el microorganismo pueden detectarse dentro de la córnea. La resolución actual de IVCM es inadecuada para visualizar directamente algunos agentes infecciosos de la córnea, como los virus del herpes, pero se pueden identificar las respuestas del huésped y las células epiteliales infectadas por virus. El microscopio confocal se desarrolló por primera vez a fines de la década de 1950, pero las primeras descripciones publicadas de imágenes oculares in vivo que utilizan estas técnicas no aparecieron hasta la década de 1990.1–3 Todos los microscopios confocales in vivo utilizan pequeñas aberturas y vías de iluminación y observación con un punto focal común.4,5 La luz reflejada que no está enfocada y se origina fuera del campo de observación, es Abstracto La microscopía confocal in vivo (IVCM) es una técnica de imagen ocular relativamente nueva que permite la evaluación morfológica y cuantitativa de la córnea viva a nivel celular. Las aplicaciones de IVCM en oftalmología clínica son numerosas y diversas. Hay varias ventajas inherentes a la IVCM sobre las técnicas de diagnóstico estándar utilizadas actualmente para confirmar un diagnóstico de queratitis infecciosa en oftalmología veterinaria. Con IVCM, las imágenes se pueden ver en tiempo real proporcionando información de diagnóstico inmediata. Se evitan las técnicas traumáticas de muestreo corneal y el procedimiento se puede repetir con la frecuencia que esté clínicamente indicada sin riesgo de daño al tejido corneal. Tanto las lesiones corneales superficiales como las profundas pueden evaluarse mediante IVCM de forma atraumática. acanthamoeba, bacterias, córnea, hongos, herpesvirus, microscopía confocal in vivo Machine Translated by Google mailto:ecl32@cornell.edu www.wileyonlinelibrary.com/journal/vop En la mayoría de las condiciones, los microscopios confocales in vivo actuales tienen aumento y resolución insuficientes para permitir la identificación de bacterias individuales dentro de cor La microscopía confocal in vivo proporciona varias ventajas sobre las técnicas estándar de diagnóstico citológico, histopatológico, molecular y microbiológico que se utilizan actualmente para confirmar un diagnóstico de queratitis infecciosa en oftalmología veterinaria. Con IVCM, las imágenes microscópicas de la córnea se pueden ver en tiempo real y le brindan al médico información diagnóstica inmediata. Se evitan las técnicas traumáticas de toma de muestras de la córnea, como los raspados y las biopsias, lo que evita el daño tisular innecesario y permite que el procedimiento se repita con la frecuencia clínicamente indicada. , y manera de bajo riesgo. No se requiere la viabilidad de los microorganismos para la detección, lo que evita los problemas que pueden surgir cuando se recolectan muestras para cultivo después de la administración de antimicrobianos, cuando hay microorganismos exigentes o cuando se pierde la viabilidad de los microorganismos durante el transporte de muestras de córnea a laboratorios de diagnóstico.7 Técnicas de diagnóstico especializadas, como como cultivo para amebas patógenas, que no están ampliamente disponibles en algunos laboratorios de diagnóstico veterinario, también se evitan. en córneas de conejo, estructuras nucleoides de 10 µm eran visibles con IVCM y se especuló que representaban bacilos intraestromales.13 suprimido para que sólo la luz reflejada desde el plano focal contribuya a la formación de la imagen final. Los sistemas de microscopía confocal mejoran drásticamente la resolución axial y lateral y permiten el uso de mayor aumento que el que se logra con la microscopía óptica.4,5 El ajuste óptico del plano focal del microscopio confocal permite obtener imágenes a diferentes profundidades de tejidos ópticamente transparentes, como la córnea Para compensar el pequeño campo de visión inherente a estos instrumentos, el punto focal se escanea rápidamente repetidamente y la imagen se reconstruye digitalmente para verla en tiempo real. Un pequeño número de informes humanos y experimentales tempranos describen la identificación presuntiva de bacterias por IVCM. En una serie de casos de dos pacientes con queratitis bacteriana relacionada con lentes de contacto, se identificaron estructuras hiperreflectantes de 1,5 a 2,0 µm de diámetro en el estroma subepitelial con un microscopio confocal in vivo de luz blanca hecho a medida que se suponía que representaban cocos bacterianos . Se cultivaron Staphylococcus y Streptococcus spp., a partir de muestras de córnea de los pacientes).12 Después de la inyección intraestromal experimental de Bacillus cereus Este manuscrito resume el conocimiento actual y las aplicaciones de IVCM en el manejo de la queratitis infecciosa en oftalmología veterinaria. Para los fines de esta revisión, la queratitis infecciosa se organiza en las siguientes categorías clínicas generales basadas en los agentes etiológicos: queratitis bacteriana, queratitis fúngica, queratitis parasitaria y queratitis viral. También se discuten brevemente los aspectos comparativos de la IVCM en oftalmología humana, con un énfasis particular en la identificación visual de agentes infecciosos dentro de la córnea mediante la IVCM y los procesos de enfermedades de queratitis infecciosa donde la IVCM podría aplicarse en la oftalmologíaveterinaria en el futuro. Las limitaciones de IVCM incluyen el campo de visión relativamente pequeño incluido en los escaneos de microscopio individuales y la dependencia de la técnica en el nivel de experiencia del examinador. El área de la córnea que se evalúa en un Nocardia spp. Son bacterias aeróbicas, grampositivas, delgadas, ramificadas y filamentosas. Aunque típicamente <1,5 µm de diámetro, la morfología filamentosa y ampliamente ramificada de Nocardia spp. puede permitir su identificación por IVCM en pacientes humanos con queratitis.14,15 Durante IVCM Muchas de las limitaciones potenciales asociadas con el uso de IVCM en la medicina clínica se pueden eludir mediante la selección cuidadosa de pruebas de diagnóstico tradicionales complementarias para la superficie ocular para emparejar con el examen de IVCM. La información proporcionada por IVCM se puede utilizar para guiar la selección de ensayos de diagnóstico complementarios o confirmatorios adicionales y hacerlos más directamente relevantes para casos clínicos específicos. De esta manera, IVCM puede aumentar la precisión diagnóstica y el rendimiento de los ensayos de laboratorio tradicionales. La experiencia y el nivel de habilidad del examinador también son críticos tanto para el desempeño como para la interpretación de la IVCM en la medicina clínica.8 Varios estudios han demostrado que la precisión diagnóstica de la IVCM depende directamente del nivel de experiencia del microscopista confocal, particularmente para diagnosticar correctamente la queratitis microbiana y distinguir proteger las células huésped de los microorganismos patógenos.9–11 tejidos finos. Hay varias excepciones notables en las que la IVCM permite la visualización de bacterias o sus sistemas biológicos, incluidas las bacterias filamentosas, las espiroquetas y la queratopatía cristalina infecciosa. El escaneo individual varía según el modelo de microscopio y el sistema de lentes que se utilice, pero en general el campo de visión está en el rango de aproximadamente 300–400 µm x 300–400 µm. Cuando se considera que el escaneo también se ubica con precisión en una profundidad corneal específica, se pueden pasar por alto cambios patológicos distantes al área examinada, o a diferentes profundidades. Se debe seguir un enfoque minucioso y metódico al realizar IVCM para minimizar las posibilidades de pasar por alto patologías remotas al área de la córnea examinada. El IVCM tampoco proporciona información sobre la identificación taxonómica y la susceptibilidad a los antimicrobianos. LEDMEJOR2 | 2 | QUERATITIS BACTERIANA Machine Translated by Google En el examen, las Nocardia aparecen como estructuras delgadas, cortas, en forma de perlas, filamentosas, hiperreflectantes, ramificadas o entrelazadas, con ramificación en ángulo recto.16 Estas bacterias filamentosas pueden tener una longitud de hasta 9,0 µm y normalmente se organizan en grupos dentro del tejido corneal.17 Aunque la resolución actual de IVCM es inadecuada para visualizar directamente la mayoría de las bacterias que causan queratitis en escenarios clínicos, IVCM permite la evaluación y el seguimiento de las respuestas inflamatorias y curativas de la córnea a la infección bacteriana. Además, la IVCM permite la exclusión de otros patógenos corneales potenciales que son más fácilmente detectables (p. ej., infección fúngica o parasitaria) de modo que se pueda instituir una terapia específica para el agente etiológico mientras se esperan los resultados de otros ensayos de diagnóstico confirmatorios. Los hallazgos de IVCM de animales con infecciones corneales por espiroqueta o queratitis bacteriana filamentosa no son La queratopatía cristalina infecciosa es una infección corneal única que se caracteriza por opacidades del estroma corneal cristalino, blancas, ramificadas y lentamente progresivas.23 son bacterias filamentosas relacionadas con Nocardia que podrían ser detectables, con una morfología básica similar, por IVCM. Se detectó un objeto hiperreflectante, lineal, de 36 µm de largo que se cree que representa una espiroqueta de Borrelia . La morfología única en forma de sacacorchos de las espiroquetas, junto con longitudes de hasta 500 µm, hacen que estas bacterias únicas sean potencialmente detectables con IVCM. Nocardia y Actinomyces spp. se han aislado de casos de enfermedad de la superficie ocular en una variedad de especies animales, incluidos perros, caballos y animales salvajes.19–22 Actinomyces visible. La apariencia clínica y de IVCM de la queratopatía cristalina infecciosa es el resultado de la colonización crónica de los espacios estromales interlaminares por poblaciones de bacterias que depositan glicocálix. El IVCM describe la detección de la espiroqueta Borrelia burg dorferi transmitida por garrapatas dentro de la córnea de un paciente humano con queratitis intersticial y endotelitis.18 Las características de IVCM de perros y gatos con queratopatía cristalina infecciosa son similares a las descritas para pacientes humanos con esta queratopatía. Los depósitos estromales de moderada a altamente reflectantes están presentes en las regiones corneales que contienen las estructuras cristalinas clínicamente aparentes.26 Los depósitos aparecen más comúnmente como descrito; sin embargo, las bacterias filamentosas se reportan como patógenos infrecuentes de la superficie ocular en animales. Generalmente ocurre con inflamación corneal asociada mínima o ausente y con frecuencia un epitelio corneal intacto. La queratopatía cristalina infecciosa se asocia más comúnmente con la infección corneal por estreptococos alfahemolíticos del grupo viridans, pero otros organismos bacterianos y fúngicos de baja virulencia también pueden producir esta lesión corneal distinta . incluyen dos patrones de lesiones reconocibles.24,25 El primero consiste en opacidades claras en forma de aguja o cristalinas dentro del estroma corneal que varían en tamaño, orientación, distribución y reflectividad. Alternativamente, los depósitos estromales amorfos pueden ser observados por IVCM en casos humanos de queratopatía cristalina infecciosa. Las bacterias individuales no son Un Yorkshire terrier macho de 11 años de edad, castrado, se presentó con opacidades del estroma anterior cristalinas blancas finas, en forma de aguja y ramificadas (A). Durante el examen IVCM, estaban presentes estructuras ramificadas lineales altamente reflectantes dentro del estroma corneal (B) asociadas con una clara falta de cambios inflamatorios asociados. Barra = 50 µm FIGURA 1 Fotografía digital clínica (A) y fotomicrografía IVCM (B) de queratopatía cristalina infecciosa canina. (B) (A) | 2.1 | Queratopatía cristalina infecciosa 3LEDMEJOR Machine Translated by Google En los caballos con queratitis por hongos filamentosos, incluidas las infecciones por Aspergillus y Fusarium spp., se observaron estructuras fúngicas lineales, ramificadas o entrelazadas e hiperreflectantes de 2 a 6 μm de ancho y de 200 a >400μm de largo dentro de las córneas. . El informe también describió hallazgos en un solo caballo con queratitis por hongos (Candida albicans se cultivó a partir de muestras de córnea). Se detectaron estructuras hiperreflectantes redondas a ovaladas de 2 a 8 μm de diámetro en el caballo con queratitis fúngica por levaduras.32 Todos los caballos incluidos en este informe tenían el diagnóstico de queratomicosis confirmado por cultivo positivo o histopatología. Además, los aislamientos fúngicos clínicos de los caballos fueron examinados por IVCM en En oftalmología veterinaria, se reporta la IVCM para la detección de queratitis fúngica en perros, caballos y alpacas; sin embargo, esta tecnología es fácilmente adaptable a diferentes y diversas especies animales.32–36 La capacidad de lograr un diagnóstico etiológico definitivo con relativa rapidez en contraste con muchos otros ensayos de diagnóstico para la queratitis fúngica (p. ej., cultivo fúngico) y la capacidad de evaluar enfermedades no ulcerosas , las lesiones profundas del estroma corneal resaltan algunas de las ventajas proporcionadas por la IVCM en animales con queratitis fúngica.37 in vitro en placas de cultivo de agar y ex vivo utilizando córneas equinas infectadas experimentalmente para confirmar la morfología de los hongos. La apariencia microscópica confocal in vivo de los hongos fue consistente con las morfologías del organismo observadas durante el examen confocal de cultivos in vitro y las córneas equinas infectadas ex vivo.32 estructuras cristalinas ramificadas finas, en forma de aguja, que a menudo asumen patrones estrellados (Figura 1). Con menos frecuencia, los depósitos son más grandes y adoptan la apariencia de estructuras ramificadas lineales gruesas, formas geométricas aleatorias o son amorfos. En contraste con las descripciones de casos humanos, tanto las estructuras cristalinas en forma de aguja como las estructuras amorfas o geométricas más grandes a menudo están presentes simultáneamente en la misma córnea de perros y gatos con queratopatía cristalina infecciosa.26 Una clara falta de núcleos de queratocitos, nervios, vasos , y leucocitos en la región corneal en la vecindad inmediata de la lesión de queratopatía cristalina infecciosa también es típico tanto en perros como en gatos con queratopatía cristalina infecciosa.26 Un estudio más reciente35 evaluó caballos específicamente con queratomicosis no ulcerosa epitelial y subepitelial por IVCM. Se cultivaron hongos filamentosos de muchos de los caballos, incluidos Aspergillus, Fusarium y Penicillium spp. Usando IVCM, queratomicosis epitelial La queratitis fúngica es una de las aplicaciones más prácticas y beneficiosas de la IVCM en el entorno clínico. Las formas filamentosas multicelulares de los mohos son estructuras biológicas relativamente grandes y las hifas son fácilmente discernibles durante la IVCM (Figura 2). Aunque es más difícil distinguirlas de las células huésped, la levadura también se puede reconocer durante el examen IVCM (Figura 3). Se han publicado numerosas descripciones del uso de IVCM en el tratamiento de la queratomía cosis en pacientes humanos.27–31 En un informe32 de caballos con queratomicosis, incluidos caballos con queratitis ulcerosa y abscesos estromales profundos, los hallazgos inespecíficos de IVCM en las córneas incluyeron infiltrados de leucocitos, queratocitos activados, infiltrados de células dendríticas del estroma anterior y vascularización. 3 | QUERATITIS FÚNGICA LEDMEJOR4 | (A) (B) FIGURA 2 Fotografía digital clínica (A) y fotomicrografía IVCM (B) de un caballo con queratitis fúngica estromal profunda. Un Paint Horse americano de 20 años de edad, macho castrado, se presentó con un infiltrado leucocitario estromal profundo adyacente a la membrana de Descemet (flecha) (A). Durante el examen IVCM, hifas fúngicas lineales, ramificadas e hiperreflectantes están presentes dentro de la lesión (B). Barra = 50 µm Machine Translated by Google |LEDMEJOR 5 (A) (B) FIGURA 3 Fotografía digital clínica (A) y fotomicrografía IVCM (B) de un perro con queratitis fúngica ulcerosa del estroma superficial. Una hembra bulldog francés intacta de 3 meses de edad se presentó con una úlcera corneal del estroma anterior asociada con un denso infiltrado leucocitario perilesional, edema y vascularización periférica (A). Durante el examen IVCM, se mezclaron estructuras fúngicas altamente reflectantes, lineales, ramificadas y bifurcadas (hifas y pseudohifas) con estructuras circulares y ovaladas hiperreflectantes (levadura) dentro del estroma corneal (B). El hongo pleiomorfo Candida albicans se cultivó a partir de muestras de córnea. Barra = 50 µm La morfología de estos hongos parecía similar a lo informado en caballos con queratomicosis.32,34–36 La apariencia morfológica de los hongos por IVCM también se confirmó mediante el examen de córneas caninas ex vivo inoculadas experimentalmente con aislamientos clínicos. En un estudio, también se realizaron exámenes microscópicos confocales en serie en los perros durante varias semanas para guiar su tratamiento con terapias antimicóticas . acortamiento y fractura de las hifas), disminución del número de leucocitos, restauración de las capas epiteliales de la córnea y aumento del número de núcleos de queratocitos visibles. Ningún perro tuvo una recurrencia de la queratitis fúngica después de la interrupción del medicamento cuando la duración del tratamiento estuvo directamente guiada por los hallazgos de la IVCM.34 El uso de la IVCM para monitorear la respuesta terapéutica y la duración en casos de queratitis fúngica también se describe en pacientes humanos.31,38 ,39 Este enfoque clínico El examen de caballos con queratomicosis subepitelial por IVCM reveló que la morfología y organización de las células epiteliales corneales eran relativamente normales.35 No había hifas fúngicas en el epitelio corneal y solo había unos pocos leucocitos dispersos. Acumulaciones densas numerosas y multifocales de hifas, con cantidades moderadas de leucocitos circundantes, estaban presentes en el estroma subepitelial. Los núcleos de queratocitos estaban ausentes en el estroma en la vecindad inmediata de las hifas. También estaban presentes acumulaciones discretas multifocales de material altamente reflectante en el estroma subepitelial inmediato. La densidad y la reflectividad de estos materiales impidieron una evaluación detallada de la composición de la mayoría de estas acumulaciones; sin embargo, fue evidente en los caballos examinados que estaban compuestos al menos parcialmente de hifas.35 se caracterizó por un epitelio corneal desorganizado y displásico. El desprendimiento de las células epiteliales superficiales y los defectos epiteliales de espesor parcial estaban comúnmente presentes en los caballos. Los defectos epiteliales de espesor parcial aparecían como hoyos o depresiones en el epitelio que estaban revestidos lateral y posteriormente por capas de célulasepiteliales.35 Hifas raras y leucocitos ocasionales Se describen hallazgos similares de IVCM en perros con queratitis fúngica.34,36 La IVCM evaluó la queratitis ulcerosa fúngica y los abscesos del estroma profundo en los perros. Se describieron infecciones corneales por una mezcla de hongos filamentosos (es decir, Fusarium spp. y hongos dematiáceos) y levaduras (es decir, Candida, Malassezia y Rhodotorula spp.).34,36 estaban presentes en las capas epiteliales superficiales de los caballos con queratomicosis epitelial. Las hifas a menudo parecían diseccionar y migrar entre las células epiteliales de la córnea y los filamentos de las hifas eran visibles extendiéndose entre múltiples células . defectos Muchas hifas estaban presentes, con una distribución difusa, en las capas epiteliales más profundas adyacentes a la membrana basal. El estroma anterior parecía normal con una distribución normal de núcleos de queratocitos y ausencia de hifas o leucocitos en todos los caballos descritos.35 Machine Translated by Google LEDMEJOR6 | (A) (D) (C) (B) 3.1 | Diagnóstico diferencial de objetos corneales lineales durante microscopía confocal in vivo FIGURA 4 Fotomicrografías IVCM (A, B, C, D) de estructuras corneales lineales que pueden confundirse con hifas fúngicas. Barras = 50 µm Estas estructuras incluyen nervios corneales (A: plexo nervioso subbasal felino), vasos sanguíneos corneales (B: vascularización corneal equina), cuerpos extraños corneales microscópicos (C: cerdas de vilano de bardana en la córnea equina) y artefactos de compresión (flechas) que resultan de una presión de aplanación excesiva en la córnea (D – artefactos de compresión en una córnea canina). Cada una de estas estructuras corneales se puede distinguir de los elementos fúngicos mediante la evaluación de su forma, reflectividad, tamaño, patrón de ramificación y ubicación dentro de la córnea. Aunque la aparición de hifas fúngicas con IVCM es relativamente distinta, otras estructuras corneales lineales pueden ser detectado en la córnea sana y enferma por IVCM que debe distinguirse de los elementos fúngicos. Estas estructuras incluyen nervios corneales, vasos sanguíneos, cuerpos extraños microscópicos y artefactos de compresión que resultan de una presión de aplanación excesiva sobre la córnea por el objetivo del microscopio confocal (Figura 4).40 Evaluación crítica de la reflectividad, tamaño, patrón de ramificación y La ubicación de estas estructuras permite la diferenciación de las hifas fúngicas en la mayoría de los casos.41 Con IVCM, todos los nervios corneales aparecen como estructuras ramificadas, lineales y reflectantes.42– 44 El plexo nervioso subbasal está ubicado inmediatamente posterior al epitelio basal y es com compuesto de fibras nerviosas paralelas orientadas oblicuamente que tienen numerosas ramas interconectadas.43,44 El plexo nervioso subepitelial está ubicado en el estroma anterior inmediatamente posterior a la lámina basal y está compuesto por fibras nerviosas que forman una red densa de ramas interconectadas dispuestas irregularmente. . Los nervios del estroma se detectan con frecuencia en la parte anterior y en la parte media del arma , tienen una distribución radial, muestran diámetros relativamente grandes y se ramifican a intervalos irregulares. lumen.45 En la mayoría de los casos, los eritrocitos y leucocitos se detectan fluyendo dentro de los lúmenes de los vasos durante las imágenes en tiempo real.46,47 Estas características morfológicas ayudan a distinguir proporciona un método directo para determinar la eficacia del tratamiento y es más preciso que el uso de características clínicas o hallazgos biomicroscópicos con lámpara de hendidura. La IVCM no solo ayuda a garantizar una duración adecuada del tratamiento médico, sino que también puede ayudar a evitar duraciones de tratamiento innecesariamente prolongadas. los pacientes responderán a la terapia médica y qué pacientes finalmente fallarán la terapia médica y requerirán una intervención quirúrgica.39 Se informa el uso de IVCM para confirmar el diagnóstico clínico de queratomicosis en alpacas con úlceras del estroma corneal infectadas con Aspergillus fumigatus . 2– 6 μm de ancho y 50–400 μm de largo. Las morfologías de las hifas observadas fueron consistentes con lo encontrado en la histopatología corneal en los camélidos.33 Machine Translated by Google |LEDMEJOR 7 4 | QUERATITIS PARASITARIA Onchocerca spp. y otros parásitos microfilariales pueden inducir queratitis en una variedad de especies huésped, incluidos humanos, caballos y perros.66–68 Se cree que la migración de microfilarias hacia la córnea y la respuesta inflamatoria subsiguiente inducida por su muerte producen la queratitis en la mayoría de las situaciones. El uso de IVCM para detectar hifas de nervios y vasos corneales; sin embargo, dado que la mala interpretación de los hallazgos de la IVCM puede conducir a un diagnóstico clínico erróneo, siempre es recomendable utilizar múltiples modalidades de diagnóstico para la confirmación.48 Los artefactos de compresión corneal ocurren cuando el objetivo del microscopio ejerce una presión de aplanación excesiva sobre la córnea durante la IVCM. Esto puede producir lesiones lineales hiporreflectantes transitorias durante la CMIV que a menudo tienen una forma ligeramente curva.40 Los artefactos de compresión se resuelven rápidamente cuando se reduce la presión de aplanación. oftalmología. Cuando se ve con IVCM, Acanthamoeba queratitis mal (el diagnóstico finalmente se confirmó en el gato mediante cultivo amebiano, ensayo PCR, histopatología e inmunohistoquímica), se detectaron amebas en la córnea del gato con IVCM. Durante el examen IVCM de la córnea del gato, las amebas aparecieron como numerosas estructuras redondas y ovales de alto contraste de 15 a 30 µm de diámetro, algunas con una pared doble distinta, que se detectaron multifocalmente en grupos dentro del epitelio basal y el estroma en el primer Examen IVCM.64,65 Durante el examen IVCM repetido realizado después de 4 semanas de una terapia tiamebiana (es decir, aplicación ocular tópica de solución de biguanida de polihexametileno al 0,2 %), el número de estructuras compatibles con quistes de ameba en el estroma corneal del gato aumentó subjetivamente y el cliente eligió la enucleación.64 Los microsporidios son un grupo único de parásitos unicelulares en intracelulares que históricamente se consideraban protozoos, pero recientemente se reclasificaron como parientes de los hongos. Las esporas microsporidiales de las especies de hormigas médicamente importantes de estos parásitos fúngicos miden generalmente de 1 a 5 µm de largo y se pueden detectar mediante IVCM en algunos pacientes humanos con queratitis microsporidial. cuerpos celulares dentro de las células epiteliales de la córnea o alineados a lo largo de los queratocitos.74–76 Se informa queratitis estromal microsporidial en perros y gatos, perono se describe el uso de IVCM en animales con estas infecciones.77–79 La evaluación de pacientes con queratitis por Acanthamoeba es uno de los usos clínicos más comunes de la IVCM en humanos. e infección escleral asociada con stro no ulcerosa En el perro descrito con masas subconjuntivales, el centro de los nódulos conjuntivales contenía nemátodos adultos que se reconocieron por su característica morfología cuticular hiperreflectante y rugosa. Se repitió el examen conjuntival de IVCM del perro después de la citorreducción quirúrgica y 1 año de tratamiento médico sin nematodos visibles.69 También se informa queratitis por protozoos en perros, incluidas infecciones de la córnea con amebas no identificadas, Toxoplasma gondii y Leishmania spp.; sin embargo, las características de IVCM de estas condiciones no han sido descritas.70–72 La queratitis por Acanthamoeba se describió recientemente en gatos domésticos, incluido el uso de IVCM para detectar las amebas dentro de los tejidos corneales (Figura 5).64,65 En la descripción de un caso64 de un gato que desarrolló una ameba corneal no se describen microfilarias dentro de la córnea de estas especies huésped; sin embargo, se reporta la detección por IVCM de Onchocerca lupi en el espacio subconjuntival de un perro.69 los quistes y trofozoítos aparecen como estructuras redondas, ovales o hexagonales de alto contraste de 10 a 40 µm de diámetro, a menudo con una pared doble distintiva.56–58 Estos quistes y trofozoítos se organizan con frecuencia dentro del estroma corneal en distribuciones de agrupamiento o cadena.59 Cuando están disponibles , la IVCM a menudo se considera el método de primera línea para confirmar el diagnóstico de nuevos casos de queratitis por Acanthamoeba , ya que es rápido y tiene una alta especificidad y sensibilidad para la detección de amebas.60,61 Además de su utilidad clínica para establecer, o excluyendo el diagnóstico de queratitis por Acanthamoeba en medicina humana, la IVCM se está utilizando más recientemente para monitorear las respuestas terapéuticas.62,63 Durante el curso de una terapia médica antiamebiana exitosa, la densidad del quiste dentro de la córnea disminuye gradualmente y el núcleo de los quistes se disuelve gradualmente. a una configuración hueca.62,63 El tratamiento médico de la queratitis por Acanthamoeba , si a menudo se prolonga, dura varios meses, y el uso de IVCM para guiar la duración del tratamiento puede mejorar los resultados clínicos y evitar el sobretratamiento innecesario con estos medicamentos potencialmente tóxicos. Los cuerpos extraños microscópicos corneales también pueden confundirse con queratitis fúngica por IVCM. Los ejemplos incluyen oftalmía nodosa asociada con pelos de insectos, espinas de cactus y cerdas de bardana.49–52 Excepto en los casos más extremos, se espera que el número y la distribución de cuerpos extraños microscópicos en la córnea sean menores que las hifas en casos de queratitis infecciosa. Además, la evaluación cuidadosa de la forma, la longitud y otras características distintivas únicas a menudo pueden ayudar a diferenciar las hifas fúngicas de muchos cuerpos extraños. Por ejemplo, aunque los pelos de la oruga procesionaria del pino parecen similares a las hifas fúngicas por IVCM, se puede usar un examen minucioso de los pelos en busca de las pequeñas protuberancias de espículas características orientadas hacia las puntas para distinguir estas entidades.53–55 Machine Translated by Google y herpes zoster oftálmico se han centrado en gran medida en los cambios crónicos en la inervación corneal y otras características morfológicas de la córnea que se desarrollan durante la queratitis no epitelial por HSV1 (p. ej., endotelitis) o después de la resolución de la queratitis herpética activa.80–89 Estas investigaciones han contribuido a una mejor comprensión de la fisiopatología de muchas de las condiciones metaherpéticas crónicas que se desarrollan en humanos después de la resolución de la queratitis viral activa. Los episodios recurrentes de queratitis por HSV se asocian con alteraciones morfológicas en los plexos nerviosos tanto subbasales corneales como subepiteliales que son detectados por IVCM. Estos cambios están asociados con la pérdida de la sensibilidad corneal e incluyen reducciones En pacientes con queratitis dendrítica por el virus del herpes simple, se observaron regiones oscuras centrales que representaban el defecto epitelial cuando se examinaron mediante IVCM. Los bordes epiteliales de las úlceras consistían en células epiteliales irregulares hiperreflectantes y células epiteliales distorsionadas y alargadas. Depósitos hiperreflectantes a veces estaban presentes Las descripciones de las características de la IVCM de la queratitis herpética epitelial activa en pacientes humanos son limitadas.92,93 Publicaciones que describen el uso de IVCM para la evaluación de pacientes humanos con queratitis por el virus del herpes simple Se identificaron alteraciones en los plexos nerviosos subbasales y subepiteliales mediante IVCM, histopatología e inmunohistoquímica en un perro con queratitis neurotrófica y deficiencia de células madre limbares que se desarrolló después de la recuperación de una queratitis ulcerosa dendrítica grave por herpesvirus canino1 (CHV1).90 La sensibilidad corneal medida con un estesiómetro CochetBonnet se redujo drásticamente en el perro después de la infección por CHV1, y el plexo nervioso subbasal estuvo completamente ausente o notablemente disminuido durante el examen con IVCM. La conjuntivalización corneal, un rasgo característico de la deficiencia de células madre limbares, fue evidente durante el examen de IVCM y el epitelio corneal superficial era delgado, desorganizado y compuesto por células epiteliales hiperreflectantes. Las células caliciformes y las células de Langerhans también fueron detectadas con frecuencia en la córnea del perro por IVCM.90 Como resultado de los desafíos técnicos, en el estudio solo se analizaron los nervios del estroma corneal. Aunque no se detectaron diferencias estadísticas en los dos grupos de estudio, una variedad de parámetros nerviosos (p. ej., número de troncos nerviosos, ramas, grosor, longitud, reflectividad y tortuosidad) se redujeron en los gatos expuestos al FHV1.91 Un estudio intentó evaluar los nervios de la córnea en gatos con o sin exposición previa al herpesvirus felino1 (FHV 1) (basado en información histórica y serología) utilizando microscopía confocal realizada postmortem.91 En oftalmología veterinaria, nuestra comprensión y reconocimiento de las infecciones corneales parasitarias son actualmente limitados y la IVCM podría ayudar a avanzar en esta área de la medicina veterinaria. en la densidad nerviosa, el número total de nervios y la densidad de las ramas nerviosas.80,85,86 Las poblaciones de células madre del limbo se reducen, la densidad de células endotelialesde la córnea es más baja y hay numerosos cambios microanatómicos que se pueden detectar en las células epiteliales corneales superficiales de los humanos. después de la recuperación de la queratitis herpética.80,83–86 FIGURA 5 Fotografía clínica digital (A) y fotomicrografía IVCM (B) de un gato con queratitis por Acanthamoeba . Una gata doméstica de pelo corto, hembra intacta, de 6 meses de edad, se presentó con una úlcera corneal del estroma anterior asociada con una densa Infiltrado leucocitario corneal axial y vascularización periférica (A). Durante el examen IVCM, se detectaron grupos y cadenas de numerosas estructuras redondas y ovales de alto contraste de 15–30 µm de diámetro dentro del estroma anterior (B). Barra = 50 µm LEDMEJOR8 | (A) (B) 5 | QUERATITIS VIRAL Machine Translated by Google LEDMEJOR 9 comparado en este estudio con perros y gatos libres de patógenos específicos (es decir, libres de herpesvirus), no afectados con exámenes oftalmológicos normales. Los cambios en la córnea asociados con su queratitis pética que fueron identificados por IVCM fueron similares tanto para perros como para gatos con infección por CHV1 y FHV1, respectivamente. Se identificaron alteraciones morfológicas en el epitelio corneal de animales con queratitis herpética, pero no en los grupos no afectados (Figura 6). Los cambios epiteliales incluían morfologías celulares anormales caracterizadas por células hiperreflectantes de forma irregular inmediatamente adyacentes a las úlceras.94 Estas morfologías celulares anormales incluían células redondas, relativamente pequeñas, hiperreflectantes entremezcladas con células alargadas, agrandadas e hiperreflectantes. Había opacidades puntiformes hiperreflectantes y células inflamatorias ocasionales en todas las capas epiteliales. Las células de Langerhans y las células dendríticas del estroma anterior estaban frecuentemente presentes en las córneas de perros y gatos con queratitis herpética, pero no en los grupos no afectados . células en el estroma anterior y morfologías nerviosas corneales anormales dentro de los plexos nerviosos subbasales y subepiteliales. Se creía que estas alteraciones morfológicas en las córneas de perros y gatos con queratitis ulcerosa dendrítica herpética se debían a la presencia de células epiteliales infectadas por virus, necrosis de células epiteliales y la respuesta inflamatoria resultante.94 Los cambios en los usos de los plexos nerviosos que se identificaron por IVCM se especuló que eran precursores potenciales del desarrollo de alteraciones nerviosas más crónicas que pueden ocurrir después de la queratitis herpética en individuos que finalmente progresan a queratitis neurotrófica.90,94 Ninguno. CONFLICTO DE INTERESES La queratitis por CHV1 y los gatos con queratitis por FHV1 fueron comunes. Una publicación reciente describió las características de IVCM del epitelio corneal y el estroma en perros y gatos con queratitis ulcerosa dendrítica herpética.94 Perros con en la línea media de las lesiones y se especuló que representaban células epiteliales anormales necróticas.92,93 Las células inflamatorias se detectaron escasamente entre las células epiteliales. En el epitelio corneal posterior, se detectaron numerosos leucocitos, incluyendo lo que se creía que eran células de Langerhans. Cambios morfológicos en el nervio subbasal La microscopía confocal in vivo ha contribuido a una mejor comprensión de la queratitis infecciosa tanto en medicina humana como veterinaria. Las aplicaciones clínicas de IVCM en oftalmología veterinaria son numerosas y se justifica una mayor investigación sobre los usos de esta poderosa tecnología. plexo nervioso, incluidas áreas hiperreflectantes y formaciones en forma de cuentas a lo largo de las fibras nerviosas, también se detectaron en algunos individuos.92,93 | (B) (A) FIGURA 6 Fotografía digital clínica (A) y fotomicrografía IVCM (B) de un gato con queratitis ulcerativa dendrítica por herpesvirus1 felino. Una gata doméstica de pelo corto esterilizada de 13 años de edad se presentó con una única úlcera corneal dendrítica grande en la córnea axial que se tiñó con rosa de bengala (A). Durante el examen IVCM, grupos de células epiteliales corneales con morfologías anormales (flechas) están presentes en las regiones corneales inmediatamente adyacentes al área de ulceración dendrítica. Estas células epiteliales anormales incluyen células redondas, pequeñas e hiperreflectantes entremezcladas con células alargadas, agrandadas e hiperreflectantes (B). Barra = 50 µm 6 | CONCLUSIONES Machine Translated by Google Eric C. Ledbetter https://orcid. REFERENCIAS ORCIDO org/0000000318948839 10 | LEDMEJOR 11. Sabour S, Ghassemi F. Sensibilidad y especificidad de la microscopía confocal in vivo de barrido láser para la queratitis por hongos filamentosos gal: papel de la experiencia del observador. Soy J Ophthalmol. 2017;182:201202. 24. Sutphin JE, Kantor AL, Mathers WD, Mehaffey MG. Evaluación de la queratitis cristalina infecciosa con microscopía confocal en una serie de casos. Córnea. 1997; 16:2126. 20. Muñoz Gutiérrez JF, Sondgeroth KS, Williams ES, Montgomery DL, Creekmore TE, Miller MM. Queratoconjuntivitis infecciosa en venado bura en libertad en Wyoming: un estudio retrospectivo e identificación de un nuevo alfaherpesvirus. J Vet Diag Invest. 2018;30:663670. 2. 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